Upload
others
View
16
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
i
UJI ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN MATOA (Pometia pinnata) TERHADAP BAKTERI Klebsiella pneumoniae
KARYA TULIS ILMIAH
DIAJUKAN SEBAGAI PERSYARATAN MENYELESAIKAN JENJANG
PENDIDIKAN DIPLOMA III FARMASI
OLEH
MITA VITRIANA
NIM. 2172063
PROGRAM STUDI DIII FARMASI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN NASIONAL
SURAKARTA
2020
ii
UJI ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN MATOA (Pometia pinnata) TERHADAP BAKTERI Klebsiella pneumoniae
ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF MATOA LEAF ((Pometia pinnata) ETHANOLIC EXTRACT AGAINST Klebsiella pneumoniae
KARYA TULIS ILMIAH
DIAJUKAN SEBAGAI PERSYARATAN MENYELESAIKAN JENJANG
PENDIDIKAN DIPLOMA III FARMASI
OLEH
MITA VITRIANA
NIM. 2172063
PROGRAM STUDI DIII FARMASI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN NASIONAL
SURAKARTA
2020
iii
iv
v
PERSEMBAHAN
Karya Tulis Ilmiah ini saya persembahkan kepada:
1. Ibu, bapak, dan adik saya tercinta yang telah memberikan kasih sayang,
dukungan, perhatian, dan doa yang selalu mengalir untuk penulis.
2. Almamater tercinta
vi
PRAKATA
Segala puji bagi ALLAH SWT atas rahmat dan hidayah sehingga penulis
dapat menyelesaikan karya tulis ilmiah yang berjudul “UJI AKTIBAKTERI
EKSTRAK ETANOL DAUN MATOA (Pometia pinnata) TERHADAP
BAKTERI Klebsiella pneumoniae”. Penyusunan karya tulis ini bertujuan
memenuhi salah satu syarat untuk mendapatkan gelar Ahli Madya Farmasi (A.Md
Farm) di Program Studi DIII Farmasi STIKES Nasional.
Selama masa perkuliahan, penelitian dan penyusunan karya tulis ilmiah,
penulis banyak mendapatkan bantuan dari berbagai pihak baik berupa bimbingan,
perhatian, doa, dorongan, nasehat dan prasarana. Pada kesempatan ini penulis ingin
menyampaikan ucapan terima kasih sebesar-besarnya kepada:
1. Kedua orang tua saya dan adik perempuan saya, yang senantiasa memberikan
dukungan dan doa sehingga dapat menyelesaikan karya tulis ilmiah.
2. Bapak Hartono, M.Si., Apt selaku ketua Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan
Nasional.
3. Ibu Aulia Nur Rahmawati, M.Si sebagai pembimbing utama yang telah
meluangakan waktunya untuk membimbing, memberikan arahan, nasihat, saran
yang telah diberikan kepada penulis.
4. Bapak Didik Wahyudi, M.Si selaku dosen penguji atas segala arahan, masukan,
kritikan, dan saran yang telah diberikan kepada penulis.
vii
5. Bapak Ardy Prian Nirwana, M.Si selaku dosen penguji atas segala arahan,
masukan, kritikan, dan saran yang telah diberikan kepada penulis.
6. Ibu Susi Rahmawati, A.Md selaku instruktur yang telah memberikan arahan dan
telah meluangkan waktunya dalam melaksanakan penelitian.
7. Bapak Wibowo, A.md, Bapak Verry, A.md, Ibu Luluk, A.md selaku laborat yang
telah meluangkan waktunya dalam melakukan penelitian ini.
8. Sahabat-sahabatku dan teman-teman Sukma Sekar, Putri Afiani, Yulia Sendy,
Alya alfat, Ryan Sigit, Imam Al firdaus, Alifah, Alvi, Ega, Mas Rian, Ulil, Mas
Rizky yang telah memberikan semangat dan dukungan kepada saya.
Penulis berharap semoga karya Tulis Ilmiah ini dapat bermanfaat bagi penulis,
pembaca, dan semua pihak. Penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun
dari semua pihak demi kemajuan penelitian yang akan datang.
Surakarta, Febuari 2020
Mita vitriana
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL..................................................................................... i
HALAMAN JUDUL ........................................................................................ ii
HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................... iii
HALAMAN PERNYATAAN ........................................................................ iv
MOTTO ........................................................................................................... v
PERSEMBAHAN ........................................................................................... vi
PRAKATA ...................................................................................................... vii
DAFTAR ISI ................................................................................................... ix
INTISARI ........................................................................................................ xiii
ABSTRACT .................................................................................................... xiv
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................... 1 A. LATAR BELAKANG .......................................................................... 1
B. RUMUSAN MASALAH ..................................................................... 3 C. TUJUAN PENELITIAN ...................................................................... 3 D. MANFAAT PENELITIAN .................................................................. 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................... 5 A. LANDASAN TEORI ........ ................................................................... 5
` 1. Klebsiella pneumonia ................................................................... 5 2. Matoa ............................................................................................ 7 3. Ekstraksi ........... ............. .............................................................. 12
4. Pengujian Potensi Senyawa .......................................................... 14 5. Penelitian Sebelumnya ................................................................. 17
B. KERANGKA PIKIR .......... .................................................................. 19 C. HIPOTESIS ........................ .................................................................. 20
BAB III METODE PENELITIAN .................................................................. 21
A. DESAIN PENELITIAN .......... ............................................................. 21 B. TEMPAT DAN WAKTU PENELITIAN ............................................ 21
1. Tempat ......................................................................................... 21 2. Waktu ........................... ............................................................... 21
C. INSTRUMEN PENELITIAN ............................................................... 22
1. Bahan ........................................................................................... 22
ix
2. Alat ........................... ................................................................... 22
D. IDENTIFIKASI VARIABEL PENELITIAN ...................................... 23 1. Variabel bebas ........................... .................................................. 23 2. Variabel terikat ........................... ................................................. 23
E. IDENTIFIKASI OPERASIONALVARIABEL PENELITIAN ........... 23 1. Variabel bebas ........................... .................................................. 23
2. Variabel terikat ........................... ................................................. 23 F. ALUR PENELITIAN ........................... ................................................ 25 1. Bagan penelitian ........................... .............................................. 24
2. Cara Kerja ................ ................................................................... 26 G. ANALISIS DATA ................................................................................ 35
H. JADWAL PERENCANAAN PENELITIAN ...................................... 36
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................... 37 A. PREPARASI SAMPEL .............................................................. 38
B. EKSTRASI DAUN MATOA ............................................................... 38 C. ANALISIS PENDAHULUAN ............................................................ 42
1. Uji Alkaloid ........................... ...................................................... 42 2. Uji Flavonoid........................... ....................................................... 44 3. Uji Saponin .................................................................................. 45
4. Uji Tanin ........................... ........................................................... 46 D. HASIL KONFIRMASI BAKTERI ...................................................... 46
1. Pengecatan Gram ......................................................................... 46 2. Pengamatan morfologi koloni pada media MC........................... . 47 E. UJI BIOKIMIA ..................................................................................... 47
F. UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI ....................................................... 48
BAB V SIMPULAN DAN SARAN ............................................................... 59
A. SIMPULAN ......................................................................................... 59 B. SARAN ................................................................................................. 59 DAFTAR PUSTAKA ........................... .......................................................... 60
LAMPIRAN ........................................... ......................................................... 60
x
DAFTAR TABEL
Tabel 3.1. Zona kepekaan antibiotik Ciprofloxacin...... .................................... .... 28
Tabel 3.2 Rencana jadwal penelitian ................................................................ .... 35 Tabel 4.1. Hasil Randemen...... ......................................................................... .... 38
Tabel 4.2 Hasil Skrining Fitokimia .................................................................. .... 40 Tabel 4.3. Mikroskopis Klebsiella pneumoniae...... ......................................... .... 46 Tabel 4.4 Morfologi Klebsiella pneumoniae................................................... .... 47
Tabel 4.5 Hasil uji biokimia Klebsiella pneumoniae ...................................... .... 48 Tabel 4.6 Hasil Pengukuran Daya Hambat Ekstrak Etanol Daun Matoa........ .... 54
xi
DAFTAR TABEL
Gambar 2.1. Bakteri Klebsiella pneumoniae.................................................... 5 Gambar 2.2. Tumbuhan Matoa (Pometia pinnata) .......................................... 8
Gambar 2.3. Kerangka pikir.............................................................................. 19 Gambar 3.4. Bagan penelitian ........................................................................... 26
Gambar 4.1. Ekstrak etanol daun matoa.. ......................................................... 39 Gambar 4.2. Uji alkaloid Mayer ....................................................................... 41 Gambar 4.3. Uji alkaloid Wagner ..................................................................... 42
Gambar 4.4. Uji alkaloid Dragendroff ............................................................ 43 Gambar 4.5. Uji Flavonoid .............................................................................. 44
Gambar 4.6. Uji Saponin ................................................................................... 45 Gambar 4.7. Uji Tanin ..................................................................................... 45 Gambar 4.8. Mikroskopis Klebsiella pneumoniae ........................................... 46
Gambar 4.9. Morfologi Klebsiella pneumoniae ............................................... 47 Gambar 4.10. Hasil uji biokimia Klebsiella pneumoniae ................................ 49
Gambar 4.11.Hasil Penelitian ............................................................................ 54 Gambar 4.12.Diagram zona hambat ................................................................. 57
xii
INTISARI
Klebsiella pneumoniae adalah bakteri yang mampu menyebabkan infeksi pada saluran urin, paru paru, saluran pernafasan, luka-luka, septiksemin, saluran
pencernaan dan hati. Penggunaan antibiotik yang kurang tepat dalam dosis yang tidak sesuai mampu menyebabkan resistensi terhadap antibiotik. Tujuan penelitian
ini adalah untuk mengetahui kemampuan ekstrak etanol daun matoa (Pometia pinnata) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Klebsiella pneumoniae dan konsentrasi yang menghasilkan zona hambat paling besar pada pertumbuhan
bakteri Klebsiella pneumoniae. Metode yang digunakan adalah Kirby-Bauer dengan variasi konsentrasi 100%, 75%, 50% dan 25%. Hasil data yang diperoleh
di analisis menggunakan microsoft excel untuk memperoleh bar chart pertumbuhan Klebsiella pneumoniae. Hasil zona hambat yang terbentuk dari masing-masing ekstrak pada konsentrasi 100%, 75%, 50% dan 25% berturut-turut
adalah 16,4; 15,6; 9,63; dan 6,35mm. Ekstrak etanol daun matoa mampu menghambat pertumbuhan Klebsiella pneumoniae dan konsentrasi 100% adalah
konsentrasi yang membentuk zona hambat paling besar terhadap pertumbuhan bakteri Klebsiella pneumoniae dengan menghasilkan zona hambat sebesar 16,4 mm.
Kata kunci : Antibakteri, Daun Matoa, Ekstrak Etanol, Klebsiella
pneumoniae
xiii
ABSTRACT
Klebsiella pneumoniae is a bacterium that is capable of causing
infections in the urinary tract, lungs, respiratory tract, injuries, septiksemin, digestive tract and liver. Inappropriate use of antibiotics in inappropriate dosages
can cause resistance to antibiotics. The purpose of this study was to determine the ability of ethanol extract of matoa leaf (Pometia pinnata) in inhibiting the growth of Klebsiella pneumoniae bacteria and the concentration that produced the biggest
inhibition zone in the growth of Klebsiella pneumoniae. The method used is Kirby-Bauer with variations in the concentration of 100%, 75%, 50% and 25%.
The results of the data obtained were analyzed using Microsoft Excel to obtain a bar chart of the growth of Klebsiella pneumoniae. The results of inhibition zones formed from each extract at a concentration of 100%, 75%, 50% and 25%
respectively were 16.4; 15.6; 9.63; and 6.35mm. The ethanol extract of matoa leaf is able to inhibit the growth of Klebsiella pneumoniae and the concentration of
100% is the concentration that forms the largest inhibitory zone to the growth of the Klebsiella pneumoniae by producing an inhibition zone of 16.4 mm.
Keywords: Antibacterial, Matoa Leaf, Ethanol Extract, Klebsiella
pneumoniae
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. LATAR BELAKANG
Klebsiella pneumoniae adalah bakteri yang termasuk ke dalam
kelompok enterobacteriaceae yang dapat ditemukan di traktus
gastrointestinal dan respiratori. Klebsiella pneumoniaee mampu
menyebabkan infeksi pada saluran urin, paru paru, saluran pernafasan,
luka-luka, septiksemin, saluran pencernaan dan hati (Baharutan., dkk
2015).
Pengobatan utama yang diberikan pada infeksi yang disebabkan
oleh Klebsiella pneumoniae dengan pemberian antibiotik betalaktam.
Antibiotik tersebut, di antaranya adalah meropenem, kloramfenikol,
siprofloksasin, dan ampisilin. Penggunaan antibiotik yang kurang tepat
dalam dosis yang tidak sesuai mampu menyebabkan resistensi bakteri
sehingga dapat mengakibatkan sulitnya proses penyembuhan penyakit.
Untuk mengatasi resistensi bakteri perlu dilakukan penelitian untuk
menemukan pengobatan alternatif yang aman dan efek samping yang
rendah salah satunya dengan pengobatan tradisional (Nimas dan Sri.,
2017).
Indonesia memiliki keanekaragaman hayati yang melimpah untuk
jenis tanaman yang berkhasiat sebagai obat dimana tanaman tersebut
2
mampu dijadikan alternatif dalam pengobatan dan mengurangi kasus
resistensi antibiotik. Salah satu tanaman yang berkhasiat sebagai obat
adalah tanaman matoa (Pometia pinnata). Matoa merupakan salah satu
tanaman dari famili Sapindaceae yang tersebar di daerah tropis, termasuk
Indonesia. Matoa telah dimanfaatkan oleh Bangsa Asia (Papua, Malaysia
dan Indonesia) sebagai salah satu obat-obatan tradisional. Sejauh ini, yang
terkenal dari tanaman ini adalah buahnya dengan rasa yang khas yang
biasanya langsung dikonsumsi. Tanaman matoa mempunyai khasiat lain
yang layak untuk dikembangkan salah satunya pada daun matoa
(Ngajow., dkk 2013, Martiningsih dkk., 2016).
Penelitian sebelumnya yang pernah dilakukan Martiningsih dkk.,
(2016) menunjukan bahwa daun matoa mengandung senyawa tanin dan
flavonoid, sementara flavonoid dan tanin merupakan komponen yang
berperan sebagai antibakteri. Penelitian pada batang matoa sebagai
antibakteri juga telah dilakukan Ngajow., dkk (2013) yang menunjukan
bahwa ekstrak Daun matoa mampu menghambat bakteri Staphylococcus
aureus. Penelitian Daun matoa sebagai antibakteri juga telah dilakukan
oleh Kuspradini., dkk (2016) yang menunjukan bahwa ekstrak daun matoa
mampu menghambat bakteri Streptococcus mutans, Streptococcus
subrinus, Escherichia coli. Berdasarkan latar belakang tersebut dilakukan
penelitian tentang uji antibakteri ekstrak etanol daun matoa (Pometia
pinnata) terhadap bakteri Klebsiella pneumoniea.
3
B. RUMUSAN MASALAH
Berdasarkan latar belakang di atas, mampu dirumuskan masalah sebagai
berikut :
1. Apakah ekstrak etanol daun matoa (Pometia pinnata) mampu
menghambat pertumbuhan Klebsiella pneumoniae?
2. Berapa konsentrasi ekstrak etanol daun matoa (Pometia pinnata) yang
menghasilkan zona hambat paling besar pada pertumbuhan bakteri
Klebsiella pneumoniae?
C. TUJUAN PENELITIAN
Tujuan dari penelitian ini adalah :
1. Mengetahui kemampuan ekstrak etanol daun matoa (Pometia pinnata)
dalam menghambat pertumbuhan bakteri Klebsiella pneumoniae.
3. Mengetahui konsentrasi ekstrak etanol daun matoa (Pometia pinnata)
yang menghasilkan zona hambat paling besar pada pertumbuhan
bakteri Klebsiella pneumoniae.
4
D. MANFAAT PENELITIAN
1. Manfaat Teoritis
Untuk memberikan informasi kepada masyarakat bahwa ekstrak
etanol daun matoa (Pometia pinnata) mampu digunakan sebagai
antibakteri Klebsiella pneumoniae.
2. Manfaat praktis
Mampu digunakan masyarakat sebagai alternatif lain dari penyakit
yang disebabkan oleh Klebsiella pneumoniae.
21
BAB III
METODE PENELITIAN
A. DESAIN PENELITIAN
Karya Tulis Ilmiah ini merupakan jenis penelitian eksperimental
deskreptif untuk mengetahui uji aktivitas ekstrak etanol daun matoa
(Pometia pinnata) terhadap Klebsiella pneumoniae. Penelitian ini
menggunakan ekstrak etanol 96% dengan konsentrasi 100%, 75%, 50%,
25%.
B. TEMPAT DAN WAKTU PENELITIAN
1. Tempat Penelitian
Pengambilan sampel daun matoa dilakukan di wilayah
kelurahan Cemani, Sukoharja. Bakteri Klebsiella pneumoniea
diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi STIKES Nasional.
Pembuatan ekstrak dilakukan di Laboratorium Teknologi Farmasi
Bahan Alam dan Sintesis Obat STIKES Nasional dan pembuatan
konsentrasi ekstrak etanol Daun matoa serta uji aktivitas ekstrak etanol
daun matoa dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi dan Parasitologi
STIKES Nasional.
2. Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan pada tanggal November 2019 - Januari 2020.
22
C. INSTRUMEN PENELITIAN
1. Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun matoa ,
Bakteri Klebsiella pneumoniae, DMSO 10%, Etanol 96%, Cat gram A
(Crystal violet), Cat gram B (iodine), Cat gram C (alkohol 70%), Cat
gram D (safranin), Media Mac Conkey, Media NA Plate, Media NA
miring, Media BHI, Media TSIA, Media SIM, Media Urea, Media
Citrat, Media MR, Media VP, Media PAD, Media gula gula (Glukosa,
Maltosa, Manitol, Laktosa, sakarosa), Reagen Kovac, Barried, KOH
40%, feCl3 10%, Methyl Red, NaCl 0,9% steril , Minyak emersi,
Alkohol mikroskop, Standar Mc Farland 0,5, Blankdisk Ciprofloxacin.
2. Alat
Alat yang diperlukan dalam penelitian ini adalah APD (Sarung
tangan, jas lab, masker), oven, blender, nampan, timbangan, beker
glass 500 ml, batang pengaduk, kain flanel, kertas saring biasa, cawan
porselen, petri dish, inkubator, tabung reaksi 5 dan 10ml, Ohse bulat,
Ohse lurus, timbangan, pinset, spuit 5 ml, jangka sorong, pembakar
spirtus, cawan petri, autoklaf, rotary evapator, inkubator.
23
D. IDENTIFIKASI VARIABEL PENELITIAN
1. Variabel Bebas
Variabel bebas pada penelitian ini adalah ekstrak daun matoa
(Pometia pinnata) dengan variasi konsentrasi.
2. Variabel Terikat
Variabel terikat pada penelitian ini adalah diameter zona hambat
dari ekstrak etanol daun matoa (Pometia pinnata) terhadap
pertumbuhan Klebsiella pneumoniae.
E. DEFINISI OPERASIONAL VARIABEL PENELITIAN
1. Variabel Bebas
Variasi konsentrasi ekstrak etanol daun matoa (Pometia pinnata)
yang digunakan dalam penelitian ini adalah 100%, 75%, 50%, 25%
dengan kriteria daun yang berwarna hijau, tidak berjamur, sehat
kisaran daun berukuran panjang 30 – 40 cm dengan lebar 8 – 15 cm.
Daun matoa yang digunakan diperoleh dari desa Gambiran RT 03 RW
02, Cemani Grogol, Sukoharjo (Garuda dan Kadir., 2014; Oktavia.,
2015).
2. Variabel Terikat
Penelitian ini ditentukan oleh zona radikal / zona bening di sekitar
disk dan diukur menggunakan alat jangka sorong dalam satuan (mm)
replikasi dilakukan sebanyak 3 kali. Bakteri Klebsiella pneumoniae
didapatkan dari Laboratorium Mikrobiologi STIKES Nasional.
24
F. ALUR PENELITIAN
1. Bagan penelitian
Gambar 3.1 Bagan Penelitian
Uji antibakteri ekstrak etanol daun matoa
(Pometia pinnata) terhadap bakteri Klebsiella
pneumoniae
Analisis Data
Kesimpulan
25
2. Cara Kerja
a. Penyiapan sampel ekstrak
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun matoa
(Pometia pinnata). Daun matoa yang sudah matang dicuci terlebih
dahulu dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang
menempel, kemudian ditiriskan. Kemudian daun matoa yang sudah
ditiriskan di keringkan dibawah sinar matahari yang di tutupi kain
hitam sampai kering. Ditandai dengan daun yang mudah diremas.
Daun matoa yang sudah kering diserbuk dengan cara di blender
dan diayak selanjutnya di lakukan maserasi.
Serbuk daun matoa yang sudah dibuat ditimbang sebanyak 200
gram kemudian di rendam di dalam pelarut etanol 96% sebanyak
7,5 bagian yaitu 1500 ml. Ditutup dan dibiarkan selama 5 hari pada
suhu kamar dengan pengocokan berulang. Setelah 5 hari disaring
dan diperoleh filtrat serta ampas. Ampas yang diperoleh dilarutkan
dengan 2,5 bagian yaitu 500 ml. Kemudian didiamkan selama 2
hari dengan tetap dilakukan pengadukan. Setelah dua hari disaring
hingga diperoleh maserat (Anief., 1997).
Maserat yang diperoleh ditampung pada cawan porselen
ditampung jadi satu dan di uapkan dengan evaporator dengan suhu
40˚ pada kecepatan 200 rpm sampai diperoleh ekstrak kental
(Suryani., dkk 2015).
26
b. Uji fitokimia
Uji fitokimia dilakukan secara kualitatif, meliputi uji alkaloid,
flavonoid, saponin, dan tanin.
1) Uji alkaloid
Sebanyak 2 ml ekstrak daun matoa ditambah 1-2 tetes
reagen Mayer, jika terbentuk endapan putih menunjukan hasil
positif. Ditambahkan reagen Dragendorff terbentuk endapan
jingga menandakan adanya senyawa alkaloid. Ditambahkan
reagen wagner terbentuk endapan coklat menandakan adanya
senyawa alkaloid (Ngajow dkk., 2013).
2) Uji flavonoid
Sebanyak 2 ml ekstrak daun matoa ditambah beberapa
tetes HCl pekat kemudian ditambah bubuk Mg. Adanya
senyawa flavonoid ditandai dengan terbentuknya warna merah
(Ngajow dkk., 2013).
3) Uji saponin
Sebanyak 2 ml ekstrak daun matoa di tambah 1
aquades, kemudian kocok kuat kuat selama 10 menit. Adanya
senyawa saponin ditandai dengan terbentuknya Buih selama 5
menit (Ngajow dkk., 2013).
4) Uji tanin
27
Sebanyak 2 ml ekstrak daun matoa di tambah dengan
larutan gelatin. Adanya senyawa tanin ditandai dengan
terbentuknya endapan putih kekuningan (Puspita dkk., 2015).
c. Pembuatan Larutan Uji
Penelitian menggunakan konsentrasi ekstrak etanol daun
matoa dalam beberapa varian konsentrasi 100%, 75%, 50% dan
25% dengan menggunakan pelarut DMSO, serta kontrol negatif
(DMSO). Perhitungan penimbangan ekstrak untuk pembuatan
larutan uji :
1) Konsentrasi 100%
5 gram ekstrak etanol Daun matoa diencerkan dengan
DMSO sebanyak 5 ml dalam labu ukur 5 ml.
2) Konsentrasi 75%
3,75 gram ekstrak etanol Daun matoa diencerkan dengan
DMSO sebanyak 5 ml dalam labu ukur 5 ml.
3) Konsentrasi 50%
2,5 gram ekstrak etanol Daun matoa diencerkan dengan
DMSO sebanyak 5 ml dalam labu ukur 5 ml.
4) Konsentrasi 25%
1,25 gram ekstrak etanol Daun matoa diencerkan dengan
DMSO sebanyak 5 ml dalam labu ukur 5 ml.
28
d. Larutan Kontrol Positif dan Negatif
Kontrol negatif yang digunakan adalah DMSO dan kontrol
positif yang digunakan adalah disk Ciprofloxacin. Diameter zona
kepekaan antibiotik Ciprofloxacin dinyatakan dalam milimeter
(mm), menurut CLSI 2019:
Tabel 3.1 Zona kepekaan antibiotik Ciprofloxacin (CLSI.,
2
0
1
9
)
e. Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat alat yang digunakan disterilkan terlebih dahulu. Di
cuci dengan sabun yang mengandung bahan antiseptik kemudian
dikeringkan. Alat-alat yang terbuat dari gelas disterilkan di dalam
oven pada suhu 170°C selama 1 jam. Media disterilkan dalam
autoklaf pada suhu 121 °C selama 15 menit. Jarum ohse dan pinset
disterilkan dengan melakukan pemijaran di atas api Bunsen
Sterilisasi alat dan bahan (Makalew., dkk 2016).
Ciprofloxacin
Resisten Intermediet Sensitif
≤21 22-25 ≥26
29
f. Persiapan Sampel Klebsiella pneumoniae
1. Pembuatan stok bakteri Klebsiella pneumoniae
Kultur murni Klebsiella pneumoniae diambil 2 ohse
menggunakan ohse bulat, lalu dimasukkan 3ml media BHI
secara aseptis. Selanjutnya di inkubasi pada suhu 37°C selama
24 jam (Makalew., dkk 2016).
2. Pengecatan Gram
Obyek glass di bersihkan dengan alkohol terlebih dahulu
dan difiksasi diatas nyala api bunsen sehingga kering dan bebas
lemak. Diambil 1-2 tetes NaCl kemudian diletakan pada objek
glass. Sampel diambil 1-2 ohse secara aseptis dengan ohse
bulat dan dicampurkan pada NaCl di obyek glass. Obyek glass
dikering anginkan dan difiksasi diatas nyala api bunsen.
Selanjutan dilakukan pengecatan bakteri (Cut., dkk 2018).
Preparat yang sudah kering diberi cat gram A (Crystal
violet) dan dibiarkan satu menit, setelah itu dicuci dengan air
mengalir. Preparat diberi larutan cat gram B (iodium) dan
dibiarkan 3 menit. Dicuci dengan air mengalir, decolorisasi
preparat dengan gram C (alkohol 70%) hingga air yang
menetes jernih. Preparat ditetesi cat gram D (Safranin) dan
dibiarkan 1-2 menit, selanjutnya dicuci dengan air mengalir
dan dikeringkan. Preparat diamati menggunakan mikroskop
30
dengan perbesaran 1000x dengan penambahan minyak emersi
(Cut., dkk 2018).
g. Pemurnian Bakteri Klebsiella pneumoniae
Mengambil bakteri Klebsiella pneumoniae dari media BHI
menggunakan ohse lurus sebanyak 1 ohse kemudian
diinokulasikan ke dalam media Mac conkey secara aseptis.
Kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37oC selama 24
jam (Makalew., dkk 2016).
h. Pengamatan pada Media Mac conkey
Menginokulasikan dari media Mac conkey ke media
pengujian biokimia menggunakan koloni tunggal dan di inkubasi
selama 24 jam pada suhu 37° (Makalew., dkk 2016).
i. Uji Biokimia
1) TSIA/KIA
Sebanyak 1 ohse bakteri diinokulasikan ke dalam Na
miring dengan ohse lurus sampai dasar, kemudian digoreskan
secara zig zag pada kemiringan media kemudian di inkubasi
pada suhu 37°C selama 24 jam. Diamati bagian yang miring
terlebih dahulu kemudian bagian yang tegak untuk membaca
asam dan basa. Positif asam apabila media berubah menajadi
kuning dan positif basa apabila media berubah menjadi merah.
Gas positif ditandai dengan adanya bagian yang kosong pada
31
media. Terbentuknya warna hitam pada media menandakan
positif H2S (Sulviana dkk., 2017).
2) SIM
Sebanyak 1 ohse bakteri diinokulasikan ke dalam Na
miring dengan ohse lurus sampai dasar, kemudian goreskan
secara zig zag pada kemiringan media kemudian di inkubasi
pada suhu 37°C selama 24 jam. Terbentuknya warna hitam
pada media menandakan positif H2S, terbentunya pertumbuhan
yang menyebar disekitar tusukan / media menjadi keruh
menandakan positif Motil dan positif Indol ditandai dengan
terbentuknya warna merah setelah penambahan 5 tetes reagen
Erlich/Kovac (Ulfa dkk., 2016).
3) UREA
Sebanyak 1 ohse bakteri diinokulasikan ke dalam media
urea dengan ohse lurus sampai dasar media kemudian di
inkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Adanya perubahan
media menjadi merah menandakan positif Urea (Ulfa dkk.,
2016).
4) Citrat
Sebanyak 1 ohse bakteri diinokulasikan ke dalam Na
miring dengan ohse lurus sampai dasar, kemudian goreskan
secara zig zag pada kemiringan media kemudian di inkubasi
pada suhu 37°C selama 24 jam. Adanya perubahan warna
32
menjadi biru pada media menandakan positif citrat (Ulfa dkk.,
2016).
5) MR/VP
Sebanyak 1 ohse bakteri diinokulasikan ke dalam media
kemudian di inkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Adanya
perubahan warna menjadi merah setelah penambahkan 10 tetes
reagen Barried dan 4 tetes reagen KOH 40% dan ditunggu
selama 10 menit pada media menandakan positif Acetoin (VP).
Adanya perubahan warna menjadi merah setelah penambahkan
5 tetes reagen Methyl Red ke dalam media dan ditunggu selama
10 menit menandakan positif asam (MR) (Ulfa dkk., 2016).
6) PAD
Sebanyak 1 ohse bakteri diinokulasikan ke dalam media
kemudian di inkubasi pada suhu 37˚C selama 24 jam.
Dilakukan pengamatan terbentukan Phenyl pyruvat/deaminase
Phenyl Alanin pada media selanjutnya ditambahkan HCl 0,1 N
sampai media berwarna kuning. Ditetesi dengan FeCl3 10% 5
tetes. Phenyl alanin pada media akan dideaminasi oleh bakteri
menjadi phenyl pyruvat yang akan bereaksi dengan FeCl3 10%
sehingga positif apabila terjadi perubahan warna menjadi hijau
(Ulfa dkk., 2016).
33
7) Gula-gula
Diinokulasikan ke dalam media (Glukosa, Maltosa,
Manitol, Laktosa, sakarosa) kemudian di inkubasi pada suhu
37˚C selama 24 jam. Gula-gula positif dengan ditandai media
berwarna kuning. Karbohidrat atau gula yang termampu pada
media akan difermentasikan bakteri menjadi asam dan gas.
Adanya indikator Phenyl Red akan mengubah media menjadi
kuning. Gas positif ditandai dengan kosongnya tabung durham
(Shinta dkk., 2013).
j. Inokulasi ke NA Miring
Sampel bakteri kemudian ditanam di media Na miring.
Setelah itu diinkubasi pada suhu 37˚C selama 24 jam (Makalew.,
dkk, 2016).
k. Pembuatan Suspensi Bakteri
Larutan standar McFarland 0,5 ekuivalen dengan suspensi
sel bakteri dengan konsentrasi 1,5 x 108 CFU/ml. McFarland 0,5
dibuat dari campuran Asam sulfat 1% sebanyak 9,95ml.
Kekeruhan ini yang dipakai sebagai standar suspensi bakteri uji.
Bakteri yang dikultur pada media NA miring diambil
menggunakan ohse kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi
yang berisi NaCl 0,9% inkubasi hingga kekeruhan sama dengan
standar McFarland (Makalew., dkk 2016).
34
l. Uji Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daun matoa (Pometia
pinnata)
Metode pengujian daya antibakteri yang digunakan dalam
penelitian ini yaitu metode Kirby-Bauer. Media yang digunakan
untuk penelitian ini adalah media NA Plate sebanyak tiga cawan
petri, tiga buah disk Ciprofloxacin. Bagian belakang petri diberi
tanda dengan spidol. Kemudian di inokulasikan bakteri dari
suspensi yang sudah setara dengan Larutan standar McFarland 0,5
dengan menggunakan kapas lidi steril lalu digoreskan secara
merata pada media NA Miring dan inkubasi pada suhu 37° selama
15 menit. Blank disk direndam dalam larutan ekstrak daun matoa
Pada masing-masing konsentrasi 100%, 75%, 50% dan 25%
kemudian ditanam di permukaan media NA Plat. Cakram
Ciprofloxacin ditanam di permukaan media NA Plat dengan
memperhatikan jarak yang sesuai. Kemudian diinkubasi pada suhu
37°C selama 24 jam. Zona bening disekitar kertas cakram
menunjukan hasil positif yang mampu menghambat pertumbuhan
bakteri. Diameter zona bening / zona radikal yaitu disekitar disk
dimana sama sekali tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri,
kemudian dilakukan pengukuran diameter zona radikal / zona
bening di sekitar disk dengan jangka sorong dan diklasifikasikan
menurut sensifitasnya (Makalew., dkk 2016).
35
G. ANALISIS DATA
Hasil yang diperoleh dari penelitian uji antibakteri ekstrak etanol
daun matoa (Pometia pinnata) terhadap Klebsiella pneumoniae dianalisis
dengan dengan microsoft excel untuk memperoleh bar chart pertumbuhan
Klebsiella pneumoniae.
H. JADWAL PERENCANAAN PENELITIAN
Tabel 3.1. Rencana jadwal penelitian
Tahap Kegiatan Waktu Pelaksanaan
Persiapan 1. Seminar Proposal
2. Studi Pustaka
3. Validasi alat
4. Pengambilan data
Oktober – November
2019
Pelaksanaan 1. Orientasi
2. Pengambilan data
Desember 2019 –
Januari 2020
Penyelesaian 1. Analisis data
2. Penyusunan
laporan
3. Ujian tertutup
4. Seminar terbuka
Januari – Mei 2020
59
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
A. SIMPULAN
1. Ekstrak etanol daun matoa mempu menghambat pertumbuhan Klebsiella
pneumoniae pada konsentrasi 100%, 75%,50% dan 25% dengan rata-rata
diameter zona hambat berturut-turut 16,4; 15,6; 9,63; dan 6,35mm.
2. Ekstrak etanol Daun matoa (Pometia pinnata) konsentrasi 100%
menghasilkan zona hambat paling besar pada pertumbuhan Klebsiella
pneumoniea
B. SARAN
1. Perlu diperhatikan pada proses pembuatan suspensi bakteri sesuai standar
Mc Farland 0,5, karena ada keterbatasan pembacaan kekeruhan secara
visual.
2. Dilakukan penelitian lanjutan dengan metode yang lain, misalnya
fraksinasi
60
DAFTAR PUSTAKA
Anief., 1997, Ilmu Meracik Obat.Yogyakarta,Gadjah Mada University Press.
Ansel, H.C., 2005, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, edisi IV, Universitas Indonesia, Jakarta.
Baharutan, A., Rares F.E., dan Soeliongan, Pola Bakteri Penyebab Infeksi Nosokial pada Ruang Perawatan Intensif Anak di BLU RS Prof.R.D.Kandou
Manado,Jurnal e-Biomedik (eBm), 3(1). Brander, G.C., D.M. Pugh., R.J. Bywater., R.J, dan W.L. Jenkins, 1991,Veterinary
Applied Pharmacology and Therapeutics, ELBS, Bailliere Tindall.
Clinicel and Laboratory Standards Institute (CLSI)., 2019, Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-Second Informational Supplement.
Cut, A.R., Ismail., Mahdi, A., Erina., Restina., dan Yudha., F., 2018, Isolasi dan
Identifikasi Bakteri Pseudomonas sp Pada Ikan Asin di Tempat Pelelangan Ikan Labuhan Haji Aceh Selatan, JIMVET E-ISSN 2540-9492, 2(4): 493-502.
Darlian, L., Imran, G., dan Fachruddin, 2011, Skrining Bioaktivitas Ekstrak Kulit Akar Bakau Merah (Rhizophora apiculata bl.) Terhadap Bakteri Streptococcus
sp. Jurnal Kimia, 1(2): 73-82. Darwis, D., Arja, F.S., dan Santini, A, 2013, Isolasi Identifikasi dan uji Antioksidan
Senyawa Antosianin Dari Buah Senduduk (Melastoma malabathricum L.) serta Aplikasinya sebagai Pewarna Alami, Jurnal Kimia Unand, 2(1).
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1989, Materia Medika Indonesia Jilid 1,
Jakarta.
Dwi, A.U., Sri, W.R., dan Asrining, B.D, 2009, Pengaruh Beberapa Metode
Pengeringan terhadap Kadar Flavonoid Total Herbal Sambiloto, Pharmacy, (ISSN 1693-3591), 6(1).
61
Elfidasari, D., Nita, N., Anita, M., Aishah, F., dan Siti F.C., 2013, Deteksi Bakteri
Klebsiella pneumoniae pada Beberapa jenis Rokok Konsumsi Masyarakat, Jurnal Al-Azhar Indonesia Seri Sains dan Teknologi, 2(1): 41-47.
Eltario, M., Lillah., dan Prihandani, T, 2018, Pola Kuman dan Uji Sensitivitas Terhadap Antibiotik pada Infeksi Pleura di RSUP. Dr. M. Djamil Padang,
Jurnal Kesehatan Andalas, 7(4). Fitri, K.S.A., Agung, M.U.K., dan Meika, J., 2015, Skrining Antibakteri Produk
Ekstrasel Eksosimbion Bakteri Laut pada Makroalga Terhadap Biofilm Staphylococcus aureus ATCC 25923, Jurnal Akuatika, 5(2): 128-139.
Garuda, S.R., Kadir, S., 2014, Buku Seri Matoa, Balai Pengkajian Teknologi
Pertanian Papua, Papua.
Handajani., dan Purwoko, 2008, Aktivitas Ekstrak Lengkuas Terhadap pertumbuhan
jamur Aspergillus spp, penghasil aflatoksin dan Fusarium moniliforme. Biodivesitas. 9(3):161-164.
Harbone, J.B., 1987, Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan, Terjemahan Padmawinata, K., Edisi II, ITB,Bandung.
Harbone, J.B., 1987, Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa
Tumbuhan, Terjemahan Padmawinata, K., Edisi II, ITB Press, Bandung.
Herman, B. P., dan Rahma, M.N., 2019, Deteksi Bakteri Klebsiella pneumoniae,
Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran, Jawa Barat. Ikrom., Asih T, R.D., Wira A, R., Perkasa B, B., Tiara N, R, dan Wasito., 2014, Studi
In Vitro Ekstrak Etanol Daun Kamboja (Plumeria alba) sebagai Anti Aeromonas hydrophila, Jurnal Sain Veteriner, 32(1): 105-116.
Jawetz, E., Melnick, J.L., dan Adelberg, E.A., 2001, Mikroba
Kedokteran,Diterjemahkan oleh Mudihardi, E., Kuntaman, W.E.B.,
Mertaniasih, N.M., Harsono, S., Alimsardjono, L., Edisi XXII, Penerbit Salemba Medika, Jakarta.
Kuspradini, H., Whicliffe, F.P., dan Irawan, W.K, 2019, Aktivitas Antioksidan dan
Antibakteri ekstrak Daun matoa (Pometia pinnata), Jurnal Jamu Indonesia 1(1):
26-34.
62
Lely, N., Ayu, A.M., dan Adrimas, 2016, Efektifitas Beberapa Fraksi Daun Matoa
(Pometia pinnata) sebagai Antimikroba, Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi, 1(1): 51-60.
Makalew, M.A.J., Nangoy E., dan Wowor, P.M, 2016, Uji Efek Antibakteri Air Perasan Buah Nanas (Ananas comusus (L) merr) terhadap Bakteri Klebsiella
pneuminiae, Jurnal e-Biomedik (eBm), Volume 4(1). Martiningsih, N.M., Beni, G.A., dan Pratami P.L.K, 2016, Skrining Fitikimia dan Uji
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun matoa (Pometia pinnata) dengan Metode DPPH, Fakultas MIPA Universitas Pendidikan Ganesha Bali.
Mudatsir., Maimunah., dan Fathoni, E, 2012, Pola Kuman Penyebab Infeksi Paru
Non Tuberkulosis dan Kepekaannya Terhadap Beberapa Antibiotik di RSUD
Dr. Zainoel Abidin Aceh, Jurnal Kedokteran Syiah Kuala, 12(3).
Muhtadi., Ria, A., dan Ratna Y.,2012, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol dan Fraksi Kulit Batang Blimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi Linn.) Terhadap Bakteri Klebsiella pneumoniaee dan Staphylococcus epidermis beserta
Bioautografinya, Falkultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Ngajow, M., Abidjulu, J., dan Kamu, V.S., 2013, Pengaruh Antibakteri Ekstrak Batang Matoa (pometia pinnata) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus secara in vitro,jurnal MIPA Unsrat Online, 2(2): 128-132.
Nimas, I.T., dan Sri, A.K.,2014, Deteksi Bakteri Klebsiella pneumoniae, Fakultas
Farmasi Universitas Padjadjaran, Jawa Barat. Oktaviana, A.T.D., 2015, Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol 96% Daun matoa
(Pometia pinnata J.R & G. Forst) terhadap Penurunan Kadar Glucosa Pada Mencit Jantan (Mus musculer) yang Diberi Beban Glukosa, Jurnal Farmasi
ISSN, 1(1): 2548-6667. Pediatri, S., 2005, Abses Hati pada Anak, Vol. 7, Laporan Penelitian, Universitas
Indonesia, Jakarta.
Poetry, M.S., Fatimawali., dan Paulina, V.Y, 2019, Uji Daya Hambat Ekstrak Rimpang Lengkuas Merah (Alpinia purpurata K.Schum) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Klebsiella pneumoniaee Isolat Sputum pada Ppenderita
Pneumoniae Resisten Antibiotik Seftriakson,Jurnal Ilmiah Farmasi 8(1).
Pratiwi, S, T.,2008, Mikrobiologi Farmasi, Erlangga, Jakarta.
63
Puspita, P.S., Susanah, W.R., dan Made N.P., 2015, Identifikasi dan Uji Senyawa
Tanin dari Ekstrak Daun Trembesi Samanea samen sebagai antibakteri Escherichia coli, Jurnal Kimia 9(1): 27-34.
Rahma, 2014 A.Z., efektifitas uji daya hambat bakteri Daun matoa (Pometia pinnata) dalam Berbagai Konsentrasi terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans,
skripsi, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Islam Sultan Agung, Semarang. Razak, A., Djamal, A., dan Revilla, G., 2013, Uji Daya Hambat Air Perasan Buah
Jeruk Nipis (Citrus aurantifolia) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus secara In Vitro, Jurnal Kesehatan Andalas, 2(1): 5-8.
Robinson, T., 1995, Kandungan Senyawa Organik Tumbuhan Tinggi, Diterjemahkan
oleh prof. Dr Kosasih Padmawinata, Bandung: ITB.
Sangi, M., M.R.J, Runtuwene., H.E.I, Simbala, V.M.A, dan Makang, 2008. Analisis
Fitokimia Tumbuhan Obat di Kabupaten Minahasa Utara, Chem Prog. 1(1): 47-53.
Shinta, S.W., Wurlina., dan Budiarto, 2013, Kepekaan Escherichia coli dari susu kambing peranakan etawa terhadap antibiotik, Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Airlangga, Surabaya. Sulvina, W.A., Nony, P., dan Rizal, M.R., 2017, Identifikasi Pseudomonas
aeruginosa dan Uji Sensitivitas terhadap Antibiotik dari Sampel Pus Infeksi Luka Oprasi di RSUD Dr.Moewardi, Falkultas Ilmu Kesehatan, Universitas
Setia Budi, Surakarta. Suharno., dan Tanjung, R.H.R., 2011, Matoa (Pometia sp), Penerbit Pustaka Pelajar
Yogyakarta.
Suryani, N.C., Dewa, G.M., dan Anom J,2015, Pengaruh Jenis Pelarut Terhadap Kandungan Total Flavonoid dan Aktivitas Antioksida Ekstrak Daun matoa (Pometia pinnata),Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi
Pertanian, Universitas Udayana, Bali.
Terina., dan Kusuma, N.T.I, 2017,Deteksi Bakteri Klebsiella,Jurnal Farmaka 15(2). Ulfa, A., Suarsini, Suarsini, E., dan Henie, M.I, 2016, Isolasi dan Uji Sensitivitas
Merkuri pada Bakteri dari Limbah Penambangan Emas di Sekotong Barat Kabupaten Lombok Barat, Proceeding Biology Education Conference (ISSN:
2528-5742), 13(1): 793-799.