Tipe Infeksi Virus Penyakit Kerdil ((IHHNV, MBV, dan HPV) pada Benih Udang Windu (Penaeus monodon) pada Musim Berbeda

Di Sulawesi Selatan

Sriwulan1, Akbar Tahir2, Baharuddin3, Alexander Rantetondok1 dan Hilal Anshary1 1. Jurusan Perikanan Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan UNHAS

2. Jurusan Ilmu Kelautan Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan UNHAS 3. Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan Fakultas Pertanian UNHAS

Kontak person: Sriwulan (sriwulancinga@yahoo.com)

Abstrak

Virus IHHNV, MBV, dan HPV dikenal sebagai virus penyebab penyakit kerdil udang windu atau Monodon Slow Growth Syndrome (MSGS). Tipe infeksi virus pada satu organism/inang terdiri atas dua yaitu ko-infeksi yang ditandai dengan keberadaan dua atau lebih virus pada satu inang dan menginfeksi sel atau jaringan yang sama dan interferens adalah hubungan antara virus yang terjadi ketika suatu populasi sel yang telah terinfeksi virus akan menjadi resisten terhadap virus yang sama atau virus yang lain. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis prevalensi tipe infeksi virus IHHNV, MBV dan HPV yaitu secara tunggal, ganda dan tripel atau tidak terinfeksi pada benih udang windu di Sulawesi Selatan pada musim berbeda. Sampel benih/PL pada musim berbeda diperoleh dari kabupaten Pinrang, Barru, dan Takalar. Ekstraksi DNA menggunakan kit komersil. DNA ketiga virus diamplifikasi bersamaan menggunakan 3 pasang primer spesifik pada multipleks PCR (MPCR) yang ditandai oleh jumlah pita yang muncul (satu, dua, tiga atau tidak ada). Data prevalensi dianalisis dengan Chi-square, data hasil MPCR dan kualitas air dianalisis secara deskriptif. Hasil penelitian menunjukkan pada musim hujan dan musim kemarau ketiga virus tersebut menginfeksi benih udang windu secara tunggal, ganda, tripel dan tidak terinfeksi. HPV tidak pernah menginfeksi secara tunggal begitu pula infeksi ganda MBV+HPV. Prevalensi tipe infeksi virus pada benih antara musim hujan dan kemarau tidak berbeda nyata (P>0.05), namun prevalensi tidak terinfeksi berbeda dengan tipe terinfeksi baik pada musim hujan maupun musim kemarau (P

pertumbuhan hariannya sekitar 0.2 g/hari dengan berat badan sekitar 24 g/ekor setelah

dipelihara selama 4 bulan (Chayaburakul et al., 2004).

Penyakit kerdil udang windu yang telah dilaporkan di beberapa negara disebabkan

oleh beberapa jenis patogen seperti virus dan parasit. Jenis virus yang berasosiasi dengan

penyakit kerdil adalah virus Monodon baculovirus (MBV), Hepatopancreatic parvovirus

(HPV), Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis vrius (IHHNV), serta Laem-sing

necrosis virus (LSNV) (Chayaburakul et al., 2004; Sritunyalucksana et al., 2006). Jenis

parasit yang berasosiasi dengan penyakit kerdil adalah microsporidian dan gregarine yang

terdapat pada usus udang yang pada infeksi berat menyebabkan penurunan laju

pertumbuhan, perubahan warna menjadi kuning dan terjadi perforasi dan hiperflasia pada

epitelium usus tengah/midgut (Poulpanich and Withyachumnarnkul, 2009).

Tipe infeksi virus pada satu organisme terdiri atas dua yaitu ko-infeksi dan

interferens. Ko-infeksi ditandai dengan keberadaan dua atau lebih virus pada satu inang

dan menginfeksi sel, jaringan, atau individu yang sama (Harper, 1986 dalam Melena, 2006),

sedangkan interferens adalah hubungan yang aneh antara virus yang terjadi ketika suatu

populasi sel yang telah terinfeksi virus akan menjadi resisten terhadap virus yang sama atau

virus yang lain (Fenner et al., 1993 dalam Melena, 2006). Tipe infeksi yang dimaksud pada

penelitian ini adalah model/tipe virus menginfeksi udang windu yaitu secara sendiri, berdua

atau bertiga dan seterusnya. Tipe infeksi tunggal yaitu jika infeksi oleh satu jenis virus, tipe

infeksi ganda jika dua jenis virus menginfeksi, dan tipe infeksi tripel jika tiga jenis virus

menginfeksi satu individu udang windu. Di Thailand, udang windu diinfeksi oleh virus MBV,

IHHNV dan HPV, baik secara tunggal, ganda maupun tripel (Chayaburakul et al., 2004;

Flegel et al., 2004). Untuk mendeteksi beberapa jenis virus pada satu individu udang secara

molekuler dan simultan adalah dengan multipleks PCR (MPCR). Metode ini sangat efisien

dalam hal penggunaan bahan serta tenaga, dan juga mengurangi kontaminasi akibat

pemipetan jika dibandingkan dengan PCR tunggal sehingga dapat digunakan sebagai

metode deteksi dini dan cepat. Sriwulan dan Anshary (2011) telah mendeteksi MBV,

IHHNV, dan HPV pada benih udang windu dengan MPCR.

Keberadaan agen penyakit pada kondisi budidaya dipengaruhi oleh banyak faktor.

Kualitas media pemeliharaan merupakan hal yang sangat berpengaruh terhadap populasi

patogen. Multiplikasi virus IHHNV pada L. vannamei yang dipelihara pada air hangat

(32.8oC dan 31.1oC) memperlihatkan tingkat replikasi yang lebih rendah dibanding dengan

yang dipelihara pada suhu dingin (24.4-26.3oC) (Montgomery-Brock et al., 2007).

Begitupula dengan WSSV dan taura syndrome virus (TSV), tidak bisa bereplikasi pada

udang yang dipelihara dalam air hangat (32oC) dibanding pada udang yang dipelihara pada

suhu dingin (25oC) (Montgomery-Brock et al., 2004). Pada musim hujan populasi virus

WSSV pada udang windu meningkat karena kekeruhan yang tinggi dan salinitas yang

rendah (Karunasagar and Karunsagar 1997). Hal ini memperlihatkan bahwa dinamika

perkembangan virus sangat dipengaruhi oleh kondisi lingkungan. Oleh sebab itu, penelitian

ini akan melihat perbedaan musim yang mempengaruhi parameter kualitas air media

budidaya terhadap keberadaan virus-virus penyebab udang kerdil.

Di Indonesia penelitian tentang penyakit udang kerdil belum banyak dipublikasi baik

pada pembenihan maupun pada tambak di dua musim yang berbeda yaitu musim hujan dan

kemarau khususnya mengenai model/tipe infeksi virus penyakit kerdil terhadap udang

windu. Oleh sebab itu, penelitian ini bertujuan untuk menganalisis prevalensi tipe infeksi

ketiga virus penyakit kerdil udang windu pada musim berbeda pada benih yang terdeteksi

dengan MPCR. Hasil penelitian ini diharapkan memberikan informasi awal dalam

penanggulangan penyakit kerdil udang windu.

Bahan dan Metode

Waktu dan Lokasi

Penelitian dilaksanakan pada bulan Maret Mei 2012 di Laboratorium Parasit dan

Penyakit Ikan, Jurusan Perikanan, Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan UNHAS.

Sampel

Sampel berupa benih udang windu berukuran pascalarva PL 8-12 berjumlah 90 ekor/musim dari 9 pembenihan di 3 kabupaten di Sulawesi Selatan yaitu Pinrang, Barru, dan Takalar.

Ekstraksi DNA

Prosedur ekstraksi DNA mengikuti petunjuk pabrikan (Qiagen). Untuk mendapatkan ekstrak DNA virus dari benih, organ yang dipakai adalah seluruh tubuh udang.

Amplifikasi DNA dengan MPCR

Primer yang diigunakan untuk amplifikasi DNA ketiga virus penyakit kerdil secara simultan adalah:

HPV 2F/2R 5-GGAAGCCTGTGTTCCTGACT-3, 5-CGTCTCCGGATTGCTCTGAT-3 (595 bp) (Tang et al., 2008)

MBV 261F/R 5-AATCCTAGGCGATCTTACCA-3 5-CGTTCGTTGATGAACATCTC-3 (261bp) (Surachetpong et al., 2005)

IHHNV F/R 5-ATTTCTCCAAGCCTTCTCACC-3 5-TGATGTAAGTAATTCCTCTCTGT-3 (302bp) (Khawsak et al., 2008).

Kondisi MPCR adalah predenaturasi 95oC selama 15 menit, denaturasi 94oC selama 30

detik, annealing 59oC selama 1 menit 30 detik, ekstension 72oC selama 1 menit 30 detik dan

final ekstension 72oC selama 10 menit dengan komposisi MPCR adalah Master Mix 12.5 L,

Primer mix 2.5 L, kQ-solution 2.5 L, RNA-ase free water 5.5 L dan Template 2.0 L

(Sriwulan, 2012).

Parameter

- Tipe Infeksi Hasil MPCR

Hasil MPCR untuk tipe infeksi tunggal ditandai oleh kemunculan pita DNA secara

tunggal (IHHNV, MBV atau HPV), tipe infeksi ganda ditandai oleh dua pita

(IHHNV+MBV, IHHNV+HPV atau MBV+HPV), dan tipe infeksi tripel ditandai oleh tiga

pita (IHHNV+MBV+HPV), tipe tidak terinfeksi ditandai tidak ada pita. Tipe infeksi

pada penelitian ini teridiri atas tipe infeksi tunggal, ganda, dan tripel. Tipe teriinfeksi

adalah total udang yang terinfeksi tunggal, ganda, dan tripel sementara tipe tidak

terinfeksi adalah total udang yang bebas dari infeksi virus MSGS. Hasil MPCR

dikonfirmasi dengan uji histology.

- Prevalensi Tipe Infeksi

Prevalensi tipe infeksi adalah persentase jumlah udang windu yang terinfeksi setiap

tipe infeksi dalam setiap populasi udang pada musim kemarau dan hujan.

- Kualitas Air

Data kualitas air pada pembenihan dan tambak meliputi suhu, salinitas, dan pH yang

diukur secara in situ untuk membantu dalam pembahasan tentang keberadaan virus

pada musim berbeda.

Analisis Data

Data hasil MPCR dan data kualitas air dianalisis secara deskriptif. Analisis data

prevalensi tipe infeksi anatara musim hujan dan kemarau secara statistic yaitu dengan Chi

Square.

Hasil dan Pembahasan

Hasil

Tipe Infeksi Hasil MPCR

Hasil MPCR menggunakan tiga pasang primer spesifik memperlihatkan adanya tipe

infeksi tunggal, ganda, dan tripel virus MSGS baik pada benih udang windu di Sulawesi

Selatan (Gambar 1). Hasil MPCR ini dikonfirmasi dengan histology terbukti bahwa virus

MBV, IHHNV, dan HPV menginfeksi udang windu secara bersamaan dalam satu individu

udang windu (Gambar 2). Hasil histology memperlihatkan infeksi IHHNV ditandai dengan

adanya occlusion body yang bersifat eosinofilik berwarna merah jambu dan terjadi

hypertrophied nucleus, dimana nukleus lebih ke pinggir dan badan inklusi dikelilingi oleh

kromatin

pewarna

inclusion

hypetrop

Gambar

Gambar

Prevalen

H

tambak t

tripel pa

Sulawesi

tunggal H

yang bers

an dan terlih

body berbe

phied nucleus

1. Hasil Mnegatiflane 7

2. FotografIHHNV

nsi Tipe Infe

Hasil peneliti

telah terinfek

da musim h

i Selatan an

HPV dan infe

sifat basofili

hat berwarna

entuk seper

s yang bersi

MPCR benihf, lane 3 (M(IHHNV), La

f jaringan hedan MBV. H

eksi Virus M

ian memper

ksi virus IHH

hujan dan

ntara musim

eksi ganda

ik, infeksi M

a merah jam

rti anggur, s

ifat basofilik

h udang winBV+IHHNV+ane 8 dan 11

epatopankreaH&E (100x).

MSGS pada

rlihatkan ba

HNV, MBV d

kemarau.

m hujan dan

MBV+HPV t

MBV ditand

mbu dengan

sedangkan in

dan terjadi

ndu. M ada+HPV), lane1 (MBV + IH

as benih uda

a Benih Uda

ahwa benih

dan HPV den

Prevalensi

kemarau ti

tidak pernah

dai oleh rea

ciri terjadi hy

nfeksi HPV

occlusion bo

alah Marker e 4 (MBV), 5HHNV).

ang windu y

ang Windu

udang wind

ngan tipe inf

tipe infeksi

dak berbeda

h muncul se

aksi eosinof

ypertrophied

ditandai de

ody (Flegel,

100 bp. La5 dan 6 (IHH

yang terinfek

du yang ak

feksi tungga

virus di pe

a nyata (P>

panjang mu

filik terhada

d nucleus da

engan adany

2006).

ane 1 kontrHNV + HPV

ksi virus HPV

kan ditebar

al, ganda, da

embenihan

>0.05), infek

sim. Namu

ap

an

ya

rol V),

V,

di

an

di

ksi

n,

pada prevalensi tipe terinfeksi berbeda nyata dengan tipe tidak terinfeksi pada musim hujan

dan kemarau (P0.05).

Kualitas Air

Nilai parameter kualitas air pembenihan dan tambak pada musim hujan dan kemarau

terlihat berbeda (Tabel 2). Pada musim hujan nilai parameter kualitas air yang diamati lebih

rendah dari kebutuhan optimum udang.

Tabel 2. Nilai kualitas air pada pembenihan

Parameter Nilai Kualitas Air

Kebutuhan Optimum Musim Hujan Musim Kemarau

Suhu (oC) 25 29 31 - 33 26 - 31oC (Poernomo, 1979). 281oC (Wardoyo dan Djokosetyanto, 1988)

Salinitas (ppt) 24 - 27 30 - 35 28-30 ppt (Cholik, 1986)

pH 6.41 7.39 6.72 7.67 7,5 - 8,5 (Chie, 1992)

Pembahasan

Hasil MPCR memperlihatkan virus MSGS di benih udang windu diinfeksi oleh ketiga

virus tersebut dengan model/tipe infeksi tunggal, ganda dan tripel. Hal ini menunjukkan

bahwa ketiga virus ini dapat menginfeksi secara bersama-sama pada satu individu udang

windu atau disebut dengan ko-infeksi atau ketiga virus tersebut tidak saling menghalangi,

walaupun HPV dan MBV+HPV tidak pernah terdeteksi dengan MPCR. Infeksi virus pada

udang windu dapat terjadi secara sendiri atau tunggal, ganda, tripel infeksi maupun multi

infeksi (Khawsak et al., 2008). Tang and Lightner (2011), MBV dan HPV adalah dua jenis

virus yang melakukan replikasi secara independen pada satu individu udang. HPV lebih

menyukai menginfeksi sel E (Embryonic) hepatopankreas, juga tidak mengkode DNA

polymerase sehingga replikasinya tergantung pada aktifitas replikasi sel inang. MBV adalah

baculovirus yang memiliki DNA polymerase dan dapat bereplikasi di dalam sel B

(Blisterlike), F (Fibrilar) dan R (Resorptive). Hal itu membuktikan bahwa kedua virus

tersebut kemungkinan tidak berinteraksi satu sama lain. Sementara IHHNV juga adalah

Parpovirus seperti HPV, tidak mengkode suatu DNA polymerase dan tergantung pada sel

inang dalam ketersediaan mesin replikasi DNA.Walaupun virus HPV dan IHHNV ini secara

struktural sama, namun jaringan target infeksi berbeda, HPV menginfeksi sel-sel epithelial

hepatopankreas sedangkan IHHNV pada dasarnya menginfeksi semua jaringan non enterik

(Lightner et al., 1983; Lightner & Redman, 1985).

Tipe infeksi tunggal virus HPV pada penelitian ini tidak pernah terdeteksi. Hal ini

terlihat juga pada udang dewasa di Sulawei Selatan dimana virus HPV sebagai penginfeksi

tunggal juga tidak terdeteksi (Sriwulan dkk., 2012). Hal serupa dijelaskan oleh Lightner

(1996), HPV jarang ditemukan dalam kondisi infeksi tunggal sehingga gejala umum untuk

HPV sulit ditentukan dan serangan HPV dengan agen-agen penyakit lainnya dan

menyebabkan kematian tinggi pada tahap juvenil dalam 4 minggu dapat mencapai 50-100%.

Hal ini juga ditemukan oleh Chayaburakul et al. (2004) dan Umesha et al. (2006), HPV tidak

pernah ditemukan sebagai penginfeksi tunggal selalu menginfeksi dalam bentuk tipe infeksi

ganda (MBV+HPV dan HPV+WSSV) atau infeksi tripel (HPV+MBV+WSSV). Pada

penelitian ini tipe infeksi ganda MBV+HPV juga tidak ditemukan, baik di musim kemarau

maupun hujan. Hal ini berbeda dengan hasil penelitian Flegel et al. (1999), Mannivan et al.

(2002), Umesha et al. (2003), Chayaburakul et al. (2004), Tang and Lightner (2011) dimana

kedua virus tersebut ditemukan menginfeksi bersamaan pada udang windu di India dan

Thailand. Begitupula Sriwulan dkk. (2012) dengan menggunakan MPCR menemukan infeksi

ganda MBV+HPV pada udang dewasa di tambak di Sulawesi Selatan, Indonesia

Prevalensi tipe terinfeksi virus lebih tinggi daripada prevalensi tidak terinfeksi virus

baik pada musim hujan maupun kemarau sehingga dapat dikatakan bahwa benih udang

windu rentan terinfeksi virus MSGS pada musim hujan dibanding musim kemarau. Hal ini

kemungkinan disebabkan oleh perubahan kualitas media seperti suhu, salinitas dan pH

yang pada musim hujan nilainya menjauh dari kisaran optimal kebutuhan hidup udang

windu. Perubahan ini menyebabkan udang stress sehingga daya tahan tubuh udang

menurun. Kondisi lingkungan yang berada di luar kebutuhan optimal organisme akan

menyebabkan stress dimana pada kondisi ini sistem imun untuk melawan patogen menurun.

Beberapa hasil penelitian menunjukkan bahwa pada kondisi stress Total Haemocyte Count

(THC) krustase menurun, aktifitas enzim yang berhubungan dengan resinstensi terhadap

penyakit menurun dan sensitifitas terhadap patogen meningkat (Truscott & White, 1990;

Vargas-Albores et al., 1998; Le Moullac & Haffner, 2000). Sementara You et al. (2010),

sistem imun udang untuk melawan virus akibat perlakuan suhu menunjukkan bahwa THC

dan aktifitas Phenoloksidase (PO) M. japonicus dewasa pada kontrol (tanpa WSSV) tidak

berbeda nyata antara udang yang dipelihara pada suhu 27oC dengan 31C, tetapi THC dan

aktifitas PO udang yang dipelihara dan diinfeksi WSSV pada suhu 27oC dan 31C berbeda

sangat nyata lebih tinggi daripada THC dan PO udang yang dipelihara pada suhu 24oC

selama 72 jam dan suhu 12oC selama 72 jam. Hal ini menunjukkan bahwa suhu air yang

tinggi mencegah terjadinya infeksi dan secara nyata mengurangi mortalitas udang yang

terinfeksi WSSV serta menunjukkan bahwa suhu air yang tinggi menghambat replikasi

WSSV disebabkan oleh peningkatan aktifitas respon imun inang. Pengaruh salinitas dan pH

terhadap immunokompetensi udang telah diteliti oleh Pan and Jiang (2002), selama

perubahan singkat salinitas 10 jam dari 30 ke 15, begitupula dengan fluktuasi pH dari

8,5 ke 7.0 atau ke 9.5 aktifitas bakteriolitik dan aktifitas antibakteri dari dua udang

(Fenneropenaeus chinensis dan L. vannamei) secara bertahap berkurang, sementara

aktivitas PO (Phenoloksidase) meningkat.

Kesimpulan

1. Hasil multipleks PCR memperlihatkan benih udang windu di Sulawesi Selatan

terinfeksi oleh 3 jenis virus penyakit kerdil dengan model/tipe infeksi tunggal MBV

dan IHHNV saja, ganda IHHNV+MBV dan IHHNV+HPV serta tripel

IHHNV+MBV+HPV, dan tipe infeksi tunggal virus HPV serta tipe infeksi ganda

MBV+HPV tidak pernah muncul. MBV, IHHNV, dan HPV pada benih udang windu

bersifat ko-infeksi.

2. Prevalensi tipe infeksi tunggal, ganda, dan tripel virus penyakit kerdil pada benih

udang windu tidak berbeda berdasarkan musim, sementara prevalensi tipe terinfeksi

lebih tinggi dari tipe tidak terinfeksi baik pada musim hujan maupun kemarau.

3. Kualitas air pembenihan pada musim hujan cenderung lebih rendah dari kebutuhan

optimal udang windu.

Daftar Pustaka

Chayaburakul, K., Nash, G., Pratanpipat, P., Sriurairatana, S. and Withyachumnarnkul, B. 2004. Multiple pathogens found in growth-retarded black tiger shrimp Penaeus monodon cultivated in Thailand. Dis Aquat Org., 60: 8996.

Chien, Y.H. 1992. Water Quality Requirements and Management for Shrimp Culture. In Wyban, J. (ed.): Proceedings of Special Session on Shrimp Farming. World Aquaculture Society Baton Rouge, L.A., USA.

Cholik, F. 1986. Pokok-pokok Perawatan Larva Udang Penaeid. Direktorat Jenderal Perikanan. Jakarta.

Flegel, T. W. 2006. The special danger of viral pathogens in shrimp translocated for aquaculture. Science Asia, 32: 215 221.

Flegel, T. W., Thamavit, V., Pasharawipas, T. and Alday-Sanz, V. 1999. Statistical correlation between severity of hepatopancreatic parvovirus (HPV) infection and stunting of farmed black tiger shrimp (Penaeus monodon). Aquaculture. 174: 197206.

Karunasagar, I., Otta, S.K. and Karunasagar, I. 1998. Monodo Baculovirus and bacterial septicemia associated with mass mortality of cultivated shrimp (P. monodon) from the east coast of India. Indian J. Virol. 14: 27-20.

Khawsak, P., Deesukon, W., Chaivisuthangkura, P. and Sukhumsirichart, W. 2008. Multiplex RT- PCR assay for simultaneous detection of six viruses of penaeid shrimp. Molecular and Cellular Probes. 22:177-183.

Le Moullac, G. and P. Haffner. 2000. Environmental factors affecting immune responses in Crustacea. Aquaculture. 191:121131.

Lightner, D.V., Redman, R.M. and Bell, T.A. 1983. Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis, a newly recognized virus disease of penaeid shrimp. J. Invertebr. Pathol. 42, 62 80.

Lightner, D.V. and Redman, R.M. 1985. A parvo-like virus disease of penaeid shrimp. J. Invertebr. Pathol. 45: 4753.

Lightner, D. V. 1996. Epizootiology, distribution and the impact on international trade of two penaeid shrimp viruses in the Americas. Rev. Sci. Tech. - Off. Int. Epizoot. 15: 579601.

Lo, C.-F., Leu, J.-H., Ho, C.-H., Chen, C.-H., Peng, S.-E., Chen, Y.-T., Chou, C.M., Yeh, P.Y.,Huang, C.J., Chou, H.Y., Wang, C.-H., and Kou, G.-H., 1996. Detection of baculovirus associated with white spot syndrome (WSBV) in penaeid shrimps using polymerase chain reaction. Dis. Aquat. Org. 25: 133141.

Manivannan, S., Otta, S.K., Karunasagar, I. and Karunasagar, I. 2002. Multiple viral infection in Penaeus monodon shrimp postlarvae in an Indian hatchery. Dis Aquat Org. 48:233236.

Melena, J., Bayot, B., Betancourt, I., Amano, Y., Panchana, F., Alday, V., Calder, J., Stern, S., Roch, Ph. and Bonami, J-R. 2006. Pre-exposure to infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus or to inactivated white spot syndrome virus (WSSV) confers protection against WSSV in Penaeus vannamei (Boone) post-larvae. J. Fish Dis. 29: 589600

Montgomery-Brock, D.R., Tacon, A.G.J., Poulos, B. and Lightner, D. V. 2007. Reduced replication of infectious hypodermal and hematopietic necrosis virus (IHHNV) in Litopnennaeus vannamei held in warm water. Aquaculture, 265:41-48.

Montgomery-Brock, D. R, Shimojo, R. Y., Cochran, K., Bouthillette, L., Poulos, B. T., Navarro, S. and Lightner, D. V. 2004. Significant reduction in the replication rate of Taura Syndrome Virus in Litopenaeus vannamei held in hyperthermic conditions. World Aquaculture Society, Honolulu, Hawaii, USA.

Pan, L. Q. and. Jiang, L. X. 2002. Effect of sudden changes in salinity and pH on the immune activity of two species of shrimp. Journal of Ocean University of Qingdao. 32:903910.

Pan, L. Q., Jiang, L. X. and Miao, J. J. 2005. Effects of salinity and pH on immune parameters of the white shrimp Litopenaeus vannamei. Journal of Shellfish Research. 24:12231227.

Peng, S.E., Lo, C. F., Ho, C. H., Chang, C. F. and Kou, G. H. 1998. Detection of White Spot Baculovirus (WSBV) in Giant Freshwater Prawn, Macrobranchium rosenbergii, Using Polymerase Chain Reaction. Aquaculture. 164: 253-262.

Poulpanich, N., and Withyachumnarnkul, B. 2009. Fine structure of a septate gregarine trophozoite in the black tiger shrimp Penaeus monodon. Dis Aquat Org, 86: 5763.

Ramasamy, P., Brennan, G. P. and Jayakumar, R. 1995. A record and prevalence of Monodon baculovirus from post-larval Penaeus monodon in Madras, India. Aquaculture. 130: 129-135.

Ramasamy, P., Rajan, P. R., Purushothaman, V. and Brennan, G. P. 2000. Ultrastructure and pathogenesis of Monodon baculovirus (Pm SNPV) in cultured larvae and natural brooders of Penaeus monodon. Aquaculture. 184: 45-66.

Rajan, P. R., Ramasamy, P., Purushothaman, V., Brennan, G. P. 2000. White Spot Baculovirus Syndrome in Indian Shrimp Penaeus monodon and P. indicus. Aquaculture. 184:31-44.

Sritunyalucksana, K., Apisawetakan, S., Boon-nat, A., Withyachumnarnkul, B., and Flegel, T. W. 2006. A new RNA virus found in black tiger shrimp Penaeus monodon from Thailand. Virus Research. 118: 3138.

Sriwulan. 2012. Deteksi molekuler dan analisis jenis-jenis virus penyebab penyakit kerdil pada udang windu (Penaeus monodon) di Sulawesi Selatan. Disertasi. Pascasarjana UNHAS. 190 hal.

Sriwulan, Tahir, A., Rantetondok, A., dan Baharuddin. 2012. Pengembangan Multipleks PCR (MPCR) untuk mendeteksi virus penyakit kerdil udang windu di tambak pada musim berbeda. e-jurnal Pascasarjana UNHAS. 14 hal.

Sriwulan dan Anshary, H. 2011. Deteksi virus penyebab penyakit kerdil pada benih udang windu (Penaeus monodon) dengan multipleks PCR. J. Fish. Sci. XIII (1): 1-7.

Surachetpong, W., Poulos, B. T., Tang, K. F. J. and Lightner, D. V. 2005. Improvement of PCR method for the detection of monodon baculovirus (MBV) in penaeid shrimp. Aquaculture. 249:6975

Tang, K. F. J. and Lightner, D. V. 2011. Duplex real-time PCR for detection and quantification of monodon baculo virus (MBV) and hepatopancreatic parvovirus (HPV) in Penaeus monodon. Dis. Aquat. Org. 93: 191198.

Tang, K. F. J., Pantoja, C. R. and Lightner, D. V. 2008. Nucleotide sequence of a Madagascar hepatopancreatic parvovirus (HPV) and comparison of genetic variation among geographic isolates. Dis. Aquat. Organ. 80: 105112.

Truscott, R. and. White, K. N. 1990. The influence of metal and temperature stress on the immune system of crabs. Funct. Ecol. 4:455461.

Umesha, K. R., Uma, A., Otta, S. K., Karunasagar, I. and Karunasagar, I. 2003. Detection by PCR of hepatopancreatic parvovirus (HPV) and other viruses in hatchery-reared Penaeus monodon postlarvae. Dis. Aquat. Org. 57: 141146.

Umesha, K.R., Dass, B. K. M., Manjanaik, B., Venugopal, M. N., Karunasagar, I. and Karunasagar, I. 2006. High prevalence of dual and triple viral infections in black tiger shrimp ponds in India. Aquaculture. 258 : 9196.

Vargas-Albores, F., Hinojosa-Baltazar, P. and Portillo-Clark, G. 1998. Influence of temperature and salinity on the yellow leg shrimp, Penaeus californiensis Holmes, prophenoloxidase system. Aquaculture Research. 29:549553.

Wardoyo, S T. H dan Djokosetyanto, D. 1988. Pengelolaan Kualitas Air di Tambak Udang. Makalah di Sajikan pada Seminar Memacu Keberhasilan dan Pengembangan Usaha pertambakan Udang. Bogor, 16 - 17 September 1998.

Wickins, J.F. 1976. The Tolerance of Warm Water Prawn to Recirculated Water. Aquaculture 9:19-37.

Withyachumnarnkul, B, Chayaburakul, K., Lao-Aroon, S., Plodpai, P., Sritunyalucksana, K. and Nash, G. 2006. Low impact of infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) on growth and reproductive performance of Penaeus monodon. Dis Aquat Org. 69: 129136.

You, X. X., Su, Y. Q., Mao, Y., Liu, M., Wang, J., Zhang, M., and Wu, C. 2010. Effect of high water temperature on mortality, immune response and viral replication of WSSV-infected Marsupenaeus japonicus juveniles and adults. Aquaculture. 305:133137.