11
The signi®cance of the Golgi complex in envelopment of bovine herpesvirus 1 BHV-1) as revealed by cryobased electron microscopy Peter Wild a, * , Elisabeth M. Schraner a , Daniel Cantieni a , Eva Loepfe b , Paul Walther c , Martin Mu Èller d , Monika Engels b a Electron Microscopy, Institute of Veterinary Anatomy, Winterthurerstrasse 266a University of Zu Èrich, CH-8057 Zu Èrich, Switzerland b Electron Microscopy, Institute of Virology, Winterthurerstrasse 260, University of Zu Èrich, CH-8057 Zu Èrich, Switzerland c Central Electron Microscopy Facility, University of Ulm, Albert-Einstein-Allee, D-89069 Ulm, Germany, d Electron Microscopy, Institute of Biochemistry, Swiss Federal Institute of Technology Zu Èrich, Schmelzbergstrasse 7, CH-8092 Zu Èrich, Switzerland Received 6 April 2001; revised 28 June 2001; accepted 29 June 2001 Abstract Nucleocapsids of herpesviruses originate in the nucleus of host cells and bud through the inner nuclear membrane acquiring tegument and envelope. The release of the enveloped virus particle from the perinuclear space is unknown. Cryobased electron microscopic imaging revealed enveloped virus particles within cisterns associated with the perinuclear space, a pre-Golgi compartment connecting Golgi cisterns to the perinuclear space, and enveloped virus particles in Golgi cisterns where they are packaged into transport vacuoles by membrane ®ssion. To our knowledge, our images show for the ®rst time the connectivity from the perinuclear space to Golgi cisterns. The data strongly indicate an intracisternal transport of enveloped virus particles from the budding site to the packaging site. Budding starts by condensation at the inner membrane. Condensation involving the viral envelope and peripheral tegument was persistent in virus particles within perinuclear space and associated cisterns. Virus particles within Golgi cisterns and transport vacuoles originating by Golgi membrane ®ssion, however, lacked condensation. Instead, spikes were clearly evident. The phenomenon of condensation is considered likely to be responsible for preventing fusion of the viral envelope with cisternal membranes and/or for driving virions from the perinuclear space to Golgi cisterns. Glycoprotein K is discussed to likely play a role in the intracisternal transportation of virions. In addition to the pathway including intracisternal transport and packaging, there were clear indications for the well-known pathway involving wrapping of cytoplasmic nucleo- capsids by Golgi membranes. The origin of the cytoplasmic nucleocapsids, however, remains obscure. Lack of evidence for release of nucleocapsids at the outer nuclear membrane suggests that the process is very rapid, or that nucleocapsids pass the nucleocytoplasmic barrier via an alternative route. q 2002 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. Keywords: Bovine herpesvirus; Budding; Envelopment; Fission; Fusion; Intracisternal pathway; Packaging; Pre-Golgi compartment; High-pressure freezing; Freeze-substitution 1. Introduction Herpesvirus capsids originating within the host cell nucleus bud through the inner nuclear membrane into the perinuclear space acquiring tegument proteins and an envel- ope reviews: Grif®ths and Rottier, 1992; Rixon, 1993; Roizman and Sears, 1996; Steven and Spear, 1997). The route from the perinuclear space to the plasma membrane is poorly understood. The primary envelope of herpes simplex virus HSV) Browne et al., 1996; Church and Wilson, 1997), pseudorabies virus Card et al., 1993; Granzow et al., 1997; Klupp et al., 1998; Whealy et al., 1991), varizella-zoster virus Gershon et al., 1994; Zhu et al., 1995), Epstein±Barr virus Gong and Kieff, 1990) and of human herpesvirus 6 Torrisi et al., 1999) is assumed to fuse with the outer nuclear membrane releasing nucleocapsids into the cytoplasmic matrix. Cytoplasmic nucleocapsids are then transported to the Golgi complex where they acquire the secondary envelope through wrapping by Golgi membranes. Alternatively, herpes simplex virus 1 Campadelli-Fiume et al., 1991; Di Lazzaro et al., 1995; Granzow et al., 1997; Johnson and Spear, 1982; Torrisi et al., 1992; Ward et al., 1994), varicella-zoster virus Gershon et al., 1973) and Epstein±Barr virus Torrisi et al., 1989) are suggested to leave the perinuclear space via vesicles formed by the outer nuclear membrane. The vesicles transport virions to the Golgi complex for further maturation Di Lazzaro et al., 1995; Gershon et al., 1973; Lee et al., 1987; Morgan et al., 1954; Poliquin et al., 1985; Torrisi et Micron 33 2002) 327±337 PERGAMON 0968±4328/02/$ - see front matter q 2002 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. PII: S0968-432801)00037-3 www.elsevier.com/locate/micron * Corresponding author. Tel.: 141-1-635-87-84; fax: 141-1-635-89-11. E-mail address: [email protected] P. Wild).

The significance of the Golgi complex in envelopment of bovine herpesvirus 1 (BHV-1) as revealed by cryobased electron microscopy

Embed Size (px)

Citation preview

��� �������� �� �� ����� ������ �� ���������� �� ����������������� � ������� � ������� �� ������� ��� ��� ��������

� �� !���"#" $����� � %& '�����" (���� )� ����" $� *������" �� !� ���"%� �� %�+�����" %���, $������

�������� ������� � �������� �� �������� ������ � ������������������ ���� ������� �� ������� �� !"#$ ������� %&�'�����(��������� ������� � �������� �� �����) � ������������������ ��"� ������� �� ������� �� !"#$ ������� %&�'�����(

������� �������� ������� *���� � ������� �� ���� ��+��� ������ ������ , !-"�- ���� .����� ���������� ������� � �������� �� /�������� � %&�� *�(���� �������� �� 0�������) ������� %�����'+��)������� $� �� !"-� ������� %&�'�����(

-������ . /���� 011�2 ������� 03 4��� 011�2 �� �� 05 4��� 011�

��������

6��������� �� ������������� ������ � �� �� ������ �� ��� ���� �� ��� ������ �� ����� ����� ������� 7������ ������ ��

��������& ��� ������ �� �� ��������� ����� �� ��� ���� �� ��������� ��� �� ��,��8�& )������� ��� ��� �������� ������

������� ��������� ����� �� ���� 8� ��� �� ���� ���� �� 8� � �� ��������� ���" ��������� ���� ��� ���� ��� ����� �� ����

� �� ��������� ���" �� ��������� ����� �� ���� �� ����� �� ���� 8���� ��� �� �,��� �� � ������ ������ �� �������

������& �� ��� ,��8�����" ��� ����� ���8 ��� �� ��� ��� �� ���� ��� � ���� �� ��������� ��� � ����� �� ����& ��� � � ������

���� � � �� ��� ���� ������ �� ��������� ����� �� ���� ���� �� ������� �� � � �� �,���� �� �& ������� � � � �� ������ ���

�� ����� �������& )������ ��� ��������� �� ���� �������� �� ��������� ������ 8� ������ �� �� ����� �� ���� 8� ��� ���������

��� �� ���� �� �� ����& ����� �� ���� 8� ��� ����� �� ���� �� ������ ������ ������ ��� �� ����� ������� ������" ��8����"

�,�� ������ ���& 9�� ��" ���,�� 8��� ����� ������ & ��� ���������� �� ������ ��� �� ��������� ��,��� � �� ����������� ���

������ ��� ������ �� �� ���� �������� 8� � �� ���� �������� ��:�� ��� ������� ������� ���� �� ��������� ��� � ����� �� ����&

������� ��� ; �� �������� � ��,��� ��� ���� �� �� �� ��� ���� ������ ��� �� �������& 9� ��� ��� � �� � �8� ��������

�� ��� ���� ������ �� �,����" ���� 8��� ��� ���� ���� ��� �� 8����,��8� � �8� ��������� 8������ �� � ������ ������

����� �� ����� ��������& ��� ������ �� �� � ������ ����������" ��8����" ������ ������& *, �� ������� ��� ������ ��

���������� �� �� �� ����� ������� ������ � � �� ������ �� ���� ����" �� � ���������� ��� �� ������ ������ ������

�� � � ��� ��� ��� �& � 0110 $������� '���� * �& /�� ���� � ��������&

1� &��(�< ������ �����������2 �������2 $��������� 2 =������2 =�����2 9� ��� ���� � �8�2 ,����2 �������� ���� ��� 2 ������������� ����>���2

=���>������ � � ���

� ���� ������

����������� ����� ������ ��� 8� ��� �� ��� ���

������ ��� ������ �� ����� ����� ������� �� � ��

��������� ��� 7������ ������ ��� ���� �� � ������

��� ������8�< ����� �� �� -� ���" �5502 -����" �55?2

-��>�� �� '���" �55.2 ' ���� �� '���" �55@�& ���

��� � ���� �� ��������� ��� � �� ���� �������

�� ������ ������ ���& ��� ������ �������� �� ������

������� ����� ��'�� ����8�� � �&" �55.2 )���� ��

!�����" �55@�" ����������� ����� �)�� � �&" �55?2

���>�8 � �&" �55@2 ;���� � �&" �5532 !���� � �&"

�55��" ���>����>�� �� ����� �������� � �&" �55A2 B�� �

�&" �55C�" $�� ���D��� ����� ����� �� ;����" �551� �� ��

���� ����������� . �������� � �&" �555� �� ������ � ����

8� � �� �� �� ����� ������� �������� ����������

�� � �� � ������ � ���& )� ������ ����������

�� ��� ������ �� � �� ����� ������ 8���� ���

7���� �� ������� �������� ������ 8������ ��

����� ��������& /� ��� �����" ������ ������� ����� �

�)��������=���� � �&" �55�2 (� *>>�� � �&" �55C2

���>�8 � �&" �55@2 4������ �� '���" �5302 ������� �

�&" �5502 !�� � �&" �55A�" �������>�� �� ����� ��������

� �&" �5@?� �� $�� ���D��� ����� �������� � �&" �535� ��

������ �� � ���� �� ��������� ��� �� ������� ������

�� �� �� �� ����� �������& ��� ������� ������

������� � �� ����� ������ ��� ��� ��� � �� ��� �(�

*>>�� � �&" �55C2 ������� � �&" �5@?2 *�� � �&"

�53@2 %���� � �&" �5CA2 ���7��� � �&" �53C2 ������� �

%���� ?? �0110� ?0@D??@��������

15.3DA?03:10:E � ��� ���� � �� � 0110 $������� '���� * �& /�� ���� � ��������&

99< '15.3�A?03�1��111?@�?

888&��������&��:�� �:�����

# )������������ � ���& ���&< �A����.?C�3@�3A2 ��< �A����.?C�35���&

� ��� �((����2 ��8���F�� � &���>�&� � & !����&

�&" �5502 !�� � �&" �55A� �� ���� �� � �� ����

������� ��� ���� � � ������ �(����� �� �� %���"

�5.32 *�� � �&" �53@�&

�� ��� ,��8����� ��� ��� �� ���� �������� ��� ����

���� ������ � ,� ���& ��� ����� ��� � ���� �� ��� �

�� ����� � �� �� ������ �� ������� ������ ��

������� ������& =�� ������" ������ �� ��G���> �����

8� � ��������� �� ����� �� 8� ��� ��� ���� � �%�� �

�&" �53�2 ' ����� � �&" �5512 !�� � � �&" �530�&

/�� ��� ����� ��� ���� �� � ����� �� ���� ,� �������

�� ��� �� ���� �� ��������� ��� �� � �� � �����

�� �� ������ �� ������ ���� ���& ��� ������ ��� ��

��������� ������� 8� ��� �-$-���� ���� ��� � �� �����

���� � ������� �� ������ �� ���� �� ��������� ���

� �� ��� ��������� �� ����� ��� �� �'�8� > ��

-��>��" �5.5� �� �� -$- �� ���� �*�� � �&" �53@�&

��� � � ���������� 7���� �� � ������ �-�����

� �&" �5512 �� (����� *� ����� ��� ���, � �&" �55C�

�� � �������� �� ����� ������� ���� ������� ��

�����" �55?2 ������ � �&" �55A2 ������� � �&" �550� ��

�� ������ �� ����� � ���������� �� ������������

�� ������ �� �� ������ �������� 8� � �� �� �� �����

������� ��� ������������� �� ����� ��������& ���

��� �� �� ����� �� ������ ���� ��� �� �� � � �� �������

������ �����& ��� ������� ������� 8���� �� ��� ��� �

���� 8� � ����� �������� � ������ ����� �� ���� �� �

����� �� ���� 8��� 8��� ����� � �� �� �'��� �� ����

� ���7��� � �&" �53C� �� ����. �������� � �&" �555�&

/� ��� �����" � 8���� ��� � ���� 8� � �� ���� ��������

��� �������� �� � ���������� �� ������ �� � ��

� ������ � ��� ����>�8 � �&" �55@�&

)����� ���� �� ��� ����� ����� ��� �� �����8

�� ��������� ����� �� ���� � �� ���� �� ������ �)��� ��

!������" �5.52 !������ � �&" �53?�& ��� ���� �

��������� �� �����" �&�& �� ��� �� ��" �� �� �����

������ �;��� �� !���" �5502 !��� � �&" �535� ��

�������� �� ��� ���� � � �� ���� �������� �� �� ���

�� �� ����� �� ����� ��� ��� ��� ��� �������� ������

�� ���& ��� ����� ������ �� ������� ����� ���� ��

���� �,���� ��� 8��� ����� ����� ����� 8���

���H� �� � ����8�� ������ �� ��� �!��� � �&"

�535�& %������� �� ������ ������� ?1I ����� �����

�� �� -$- ��������� ��� ��� ��� ������ �� �� �������

���� ��������� ����8�� �������� ������ �

�� ������� ���� �� ��������� �!��� �� '�����"

�535�& *����� �� �� ���� � ���� � �� �� �� �� ������

������> ��� �����8�� �� ����>� ���� � � ��� �!������ ��

)���� ������" �53.�& =�� ���" ��� �������� �� ,�� ��

��� ������ ����>� ���� � � ��� �� � ���� ��������� ���

�����,�� ���,��8� �� �������� � �� � ����� �!��� �

�&" �55@�& �������� � �� ����� ��������" ��8����" �� �� ��

����& !� ��� �� ������� ����>� ���� � � ��� ��� ��� �

������� ��� �������� � �� ��� �������� ���� ������ ���&

9����� � ���� ��� �����8�� �� ����>� ���� � � ��� � ��

���� � ����� �� � ������� ����� �������� � ���8�"

�&�& ��� ���� ���� �� 3�������� ���� �;���� � �&" �55��&

9� �� ������ � ���" 8� ������ �� �������������

����>��� ����7�� �%��� � �&" �5312 %������" �550� �

���� ��� � �� ���� �� ��� �� ����& ��� ������ �������

��� �� �� ������������� ����>��� ����7�� �� �� �� ����� ��

A1 �� �-����� �� ������" �5@?� ������ � ��� �1 ��

�� ���� �� � ��� ����>��� ����7���& 9 " ��8����" �� ��

� �� �� ������� �� �� �� � �� ���� ���������

����� ���� �� ��� ��� ���� �-����� �� '��� �"

�53C�& ��� ��� ��� �� �� � �� � � �� �������

����>��� 7��� � �� ����" �� � ���� ��� �" 8��� ��

������ � ����>� ��,� �� ������ �-����� �� '��� �"

�53C�" � �� ���>�� 8� � ������ ���� ��� �� ���� ��

��� ��& )�����������> ��� �����8�� �� ����>� ���� � ��

��� ������8�< J��� �" �55A2 ��� '�, � �&" �55?�

�� �����7��� ��������� �� ����� ����� ���8�� �� �

����� ����� 8� � ���� �� �� ������ ��� �� ��� �������

�� � �� �� ������� ������� �!���" 011�2 !��� � �&"

�553�&

��� ����� � �� ���� ����� ��� �� ������� �� �����

�� ���� 8� ��� �� � ����� �� ���� � ��� ���� ��

%(�; ���� ��� �� � ������ � ����� �� ���� ��

��������� �� ������ �� �� 8� ��� �� � �8��& K��

������� ���������� �� ����� ����� ������� ������

������� �� �� ��������� �� � �� ��������� ���"

�� ��� ���� ������ ��� �� � �� ����� ������" ��

�,���� �� � ������ ������& ��� � ��� � �8�

������� ���������� �� 8������ �� � ������ ������

����� �� ����� �������� 8������ ���� ������

������ ������ �& ��� ������ �� �� � ������ ������

����� ������ �����& !� 8��� ���� �� �� L�,����

� �8�M&

� �������� �� ����� �

�454 ����� ��( ������

%���D(��� ������ ,����� �%(�;� ���� 8��� ���8�

�� ������� ����� �� ������ �����" �� ����" %("

N'/� �� ����� ��,M� �� � �� @I �� � �� �����

������& ������ ����������� � ������� 8� ����� �� ��

%(�; ����&

�4�4 ����+���� ��( �������� ��������

%(�; ���� 8��� ���8� ��� 0 ��� �� ������� ���,� 8� �

���� �� �� ? �� �� ��,���� �� ?1 �� ���������"

%������" '8� >������ ������ 8� � 5D�1 �� ��, ����

�� ���� �$�����������$������ � �&" �55@�& )���� 8���

����� �� 8� � ����� ��� ����� � �� ���� ��� �%K9�

�� C" �1 �� C1" �� ,�� A�) ��� � � � ��� ����� ���&

/� �� ���� ��� ?@�) ��� 0D5 �" �� ������� ���,� 8���

������ ��������� � � ������� ����� 8� � �� ��

�� � ������ �11 ��" ���� �� 0 ���" ���� �� ��

������ �� ������������� ����>�� �� %1�1" �/*��$)

9�&" ��>���" *��� ��� ���� �� ���>��& ��� ����

8��� ������ 8� � ������� �' ���� � �&" �535� �����

34 ��( �� ��4 6 ���� 77 8�""�9 7�$:77$?03

� ������ �� ����� �� ������ � ����>���& �������

�� �� ������� 8� � 8 ��& ��� ���� 8���" ��������" �8��

������ 8� � ��� 7����� ����& ��� ��� ������ �� 8���

������ �� �� ���,� ���� �� ������ �� ����>��� 8� ����

�� �C �& ��� ���>�� ���� 8��� ���� � � �� 8� � � ��� ��

�� ������� �� 1&0CI ��� �������� �� 1&CI ������

� ������ �51�) ��� . �& ������ ��� 8� ���8�� �����

�C�:�� � 1�) �� ,�� 1�) ��� � �& /� �� 8� ���� 8���

���� 8� � ���� � ��� A�)" �� ���� 8��� �������� ��

���� A�) 8� ��� . � �� ��������>�� .1�) ��� 0 ���&

N� � ��� �� ���� 8��� � ������ � �� ��������

�����" ���� �� �� ����� ����� �@C:?11 ���� ��� ����"

� ���� 8� � ����� � � �� ��� � � � �� ��� �� ��

��� ������� �� ������ )%�0 ���������� ��� ���

�������� �$��������" ��� 6� ��������& 9���� 8���

������� 8� � ���8 �� ))( ��� �� �" ���� ��"

)/" N'/�& �� �� � ��� ��� �� ���7���� �� ������� ��

�� �������� � ������ ���� ��� �" 8� ��� �� ��

������ �� ����� �� ���� �� ?1 ������� �� ���� ���� ��

8� � � %K9 �� C �� ���� �� ��� C �� @ �" ����� �����"

���� ���� ��������� �& ��� � 8��� ������ ��

' ���� M� �� �� &

� �������

��� ������ ����7�� ����� �� �� ���� ������� ��� ��

�� �� �� ��� �� ��� �������� �� � ������ ���� �

��� � �� ����� �� ���� �� � �� �� �������������&

��� ������" ��8����" 8� �� �� ��� ����� �� �� ���� ���

�� ���� �� ��� ��&

��� ��� ���� ���� �� ����� ����� ��� 8��� �� ����

���� �� �� ������ ���������� A � �� ���� ���&

������ ��" �� ����� �� ������������� 8��� ����� ��

����� ���& ��� ������ �� ���������� �������� �� ������

����� �� �� ������� ������ 8� ��� ������ �� ����

���� �� � %K9 �� C1 ������ � ���� ���� �� 8� � �

%K9 �� �1 �� C& '����� � �� �� ���� ������ � ���� �

@ � � �� ���� ��� 8� � � %K9 �� C1&

6��������� ����� ������ �� � ��� ��� ����� ���

�� ���� ����� ����& ��� ���� �� �� �� ��� 8�

�11 ��" �� �� ��� ���� �� �� �� ���� 8� �01 ��&

������ �� ����� ��������� ����� �� ���� 8��� ����� ���8�

��� ���" ����" ������ " �� �� ������ �� �� ��������&

��� ��� ���� �� 8� �51 ��&

$���� ��� �� ����� ����� �� ���� �� ���� � �8�

���� �� ������ � �� ��� ��������� ������� ���� �H��

�������& =��� " �� ����� ����� ������� ����

�������� �� �� � �� ������� ��������� �=��& �/�&

)������ ��� �������� ������ �� ������� ������ ������

���� �� 8���� ���� ���������& ������� 8� ������ ��

����� �� ���������� �=��& ���&

'����" ����� ��� �� ������� ����� �� �� ����� ������

���� ����� �� ��� 8� � �������� ��������� �� �� �����

����� ��� �=���& �) �� 0)�& =���� ��������� �����

�� ���� 8��� �� ���� ������ �� �� ��������� ���O

�������� �� ���� �� � ���� �� -$- �� ���

�=��& �)�O ��� 8��� ��� 8� ��� ���� �� -$- �� ����

�=��& �(�&

�����" ��������� ����� �� ���� 8��� ���7��� �� ��������

8� ��� ����� �� ���� �=��& �$�& 9��� ���� �� �������

������ ����� � ��������� ����� �� ���� �� �,���

�� � ������ ������ �=��& �=� �� ������ ��>� �=��& ?�"

) �� $�& ���� �� ���� �� � ���� ������� �� ���� � ���

������ ����� �������� �� � �� ��� � ����& ���

������� 8��� ����� �� ���� �� 8� � �� �����

�������&

=��� �" ����� �������� ��������� �� ���� ����� � ��

�� ������& ��� ����� �������� 8��� ���� � �� ���� ��

�� 8� � �� �� �� ����� ������� �=��& 0/ ��

)D$�& ��� �� �� ����� ������� �� �� � �� ���������

����� �� ���� 8� ����� � �� �� ���� ����� ��� 8� �

�� ���� ������� �� �� ����� ������ �=��& 0)�&

$�������� ����� �� ���� 8��� ��� ������ �� ����� �� ����

8���� �������� �� �� �� 8� � �� �� �� �����

������� �=��& 0( �� $�&

=�� �" -$- �� ���� ���� �� 8� � �� ��������� ���

8��� ���� �� �� ��� � � ��� ����� �� ���� �=��& 0�� ��

� �� �� ������� �� �� ����� ������ �=��& 0=�&

'�� �" ����� �������� 8��� ���� ������ �� ��� ? � ��

���� ��� �=��& ?/�& ���� ���� ��� ���� �������

AD@ � �� ���� ��� �=���& 0$ �� ?�D(�& * � �� ���� ���"

3 � �� ���� ���" ����� ��� 8��� ��,���� ������

�=��& 0(� �� ���� ���� �� 8� � %K9 �1 �� C1 ���8���

�� �� ���� ��� �� 8� � ,�&

'���� �" �,�� ���������� 8��� ����� 8� ��� ��

� ������ � ��� �=��& �=�" ���� �� ��� ���� � ��

������ �=��& 0/�" ��� �� ��� ���� � �� ����� ������

�� ������ � ��� �� 8������ �� ����� �������� �=���&

0( �� ?(�& ' ��� �������� �� 8������ 8���< ���� ����

�� ��� �� ���������� � ����� ��������" ������ ��� ��

������ � � ��� �� 8������ ���� " ������� �� ������

���� �8��� �� ������� ������� � ����� ���" ��

����� � ������� �� ������� ����� �� ������ ��

��������� �=��& ?(�& ��� �������� ������ ����� ��

��������� ���� ������� ���� ����� �� �����

������ ������ � �� ���� �� ���� �� ����� �������

�� ����8 ��� ����� 8� � �������� � ���� �=��& 0/�&

��� ����� �� ���� �� ���� �� ����� ������� ��

������ ��� ���8��&

$��� �" ��������� ����� �� ���� 8� ��� �� ���������

��� ������ �� �������� ���� �� ��������� �� ��

���,�� �=���& �) �� 0)�& $�������� ����� �� ���� 8� ���

����� �� ����" ��8����" �,�� ������ ��� �� �����

���8�� ���,�� �=���& �$ �� =" 0( �� $ �� ?(�& �����

8��� ��� ����� �� ���� ������ ���,�� 8� ��� ������

������ �=��& ?$�& ��� ����� ������� 8� ����� �

��� ����� 8� � �� ���� ������� �=��& ?=�&

'���7�� � ��� � �� �� ���7���� �� ����� �� ����

�� ���� ���� �� 8� � %K9 C �� ���8� �� =��& A& ��� ��� ���

�� ��� ��������� � ����� �� 8� ��� �� �� �� ���

������ �� ����� �� ���� ��� ?1 ������ �������& ��� ���

34 ��( �� ��4 6 ���� 77 8�""�9 7�$:77$ ?05

34 ��( �� ��4 6 ���� 77 8�""�9 7�$:77$??1

������ 8� �A�" �� ������� 53" �� �� ������ 0?A

�� ���� ��� ?1 ����" �� �� ����� A&@ �� ���� ��� ���&

��� ������ �� ������� ���������� �7���� � �� �� ��

�� ���� �������& ��� ���7���� ����� �� 8��� � �� AI&

C.I �� ��������� ������� 8��� 8� ��� ����� �� ���� ��

���� ������ ������ C � � �� ���� ���" �� ����

��I � �� @ � �� ���� ���& ��� ������ �� ����������

�������� �� 8������ �� ����� �������� 8� ������ C

�� @ �& ��� ���7���� �� �,�� ���������� �� ��

� ������ � ��� 8� 01 �� @�I" ����� �����" C

�� @ � �� ���� ���&

� ����������

��� �������� ����� ��� ����7�� ������� ����� ��

���� ������ �� �� �� ������ ���& ���� ������ �������

��� �� ������� �� �� ����� �������" ������ �� ������

���� �& ���� �� �� ������ ��� �� ����� �� �� ����

���������,� ����������& ����� �� ���� ���� ����� ������

� �� ��� 8� � ���� �� �� �11 ��" ���� 8� �

���� �� �� �01 ��" ������ " �� � �������� 8� �

��� �� ������� � �� ���" �� ���,��& ��� ��� ����

���� �� 8� �51 ��& ��� � �� ����� �� ������ ��

���� �� ���� �� ������ ��� ��������" ��� �������

��� � ����� �� ��������� � �� CD@ �� ��,

�� ����& =��>������� �� ���� �� ���������� ���

���� ��� �� ��1 �� �0C ��" ����� ����� �' ���� ��

'���" �55@�& ��� ���� �� �� �� ������ ������� �

����� �� ���� 8� 011 �� �B��� � �&" �555�&

� ���� �� ����� ��������� ����" ������ ��

�������� �� ����� ���,�� �� ����� ���8� � �� �������

�� � ������ ������ � ������ ���� ������ �� �����

��������" 8��� ,��8� ������ �� �� ���� ��� � �8�

� ���" �5@C� ���� �,����& ��� 7��� ��� ����� ��8

����� �� ���� �� ������ �� ���� �� �� � �� ������� ��

����� ����� ������� � �� �� � �� �,���� �� �����

�� ����& ' ����� �� ������ ������� ����� �)��������

=���� � �&" �55�2 ������� � �&" �550�" ���>����>�� ��

����� �������� � �&" �5@?� �� ����������� ����� �����

>�8 � �&" �55@� ������ �� ���� ��� �� ������� �� �� ��

����� �������& 9� ����� ����� �� ���� 8��� �������

���� �� ��������� ��� �� ������� ��� �� ������ ��

������� �� �� �� ����� ������� 8���� ��� � ��

������>��& =�� ���" ������� �� �� ��8�� ������ ������

8���� ��� � ���� 8� � ����� �������� ��� ��������

����� �� ���� �� � ����� �� ����&

��� ������ � ����� �� ���� �� �,��� ��

����� �� ���� ����� �� �� � ������� ����� �� � ��

���� � ,��� ��� �� ����� ��������� �� ��

����� ��������& $���� ��� �� ��� 0C11 ���� ��

���� ��� �� ����� �� ���� ���� ��� ������ ���� ���

�� �� �� ����� ������� �� ������ ���� � �� �����

��� �������� 8� � ����� ��������& ��� ������

������ ��� �� �� ������ �� �������� �� �� �� ����� ��

A1 �� �-����� �� ������" �5@?�& !� ��� ��� �����

��� 8���� ��� ����� ���� ���� ��� ������ ���� ���

�� � 8��� ,��� ���" ���� �� �� �������� � �� ��8

����� �� �� ����� � �� ������� ����� ��������&

��� � ��� ������ �� � �8� ������� �� ������ ��

���������� �� � �� � ����� �� ������ �� ��

���� �������� 8� � �� �� �� ����� ������� ��

�'� ����8�� � �&" �55.2 )���� �� !�����" �55@�"

����������� ����� �)�� � �&" �55?2 ���>�8 � �&"

�55@2 ;���� � �&" �5532 !���� � �&" �55��" ����

>����>�� �� ����� �������� � �&" �55A2 B�� � �&"

�55C�" $�� ���D��� ����� ����� �� ;����" �551�&

=����8��� ��� ��� �� 7��� ���� ���� 8� ������

8� � �� �������� �������� �� �� ������ ��� ����"

�� ��8 �� �� �,�� � ������ ����������

����� ��������� ����� �� ���� 8� ��� ����� �� ����&

9 �� �� ������� � � ������ ���������� ��

��������� �� 8������ �� ����� �������� ����>�8

� �&" �55@�& !������" ��8����" ����� � �� ���� ���

�� ���� ������ ������� �� ����� ������ �����

�� ��� �=���& 0/ �� ?(�& ����� �� ���� �� �����

������ �� ����� �� ���� ������ �� ������ �� 8������&

����" �� ���� ��� �� ������ ������ �� �,�

���� �� �� ���� ��� �� ������ ������ �� 8���

���� ����� 8� ��� �� �� �������� � �8�� �� ����

���������� & ��� 8� � �8�� ,� ��� �� ��

��� ��� ���� �� 8� � ����� ��������� ���� ��

��� ����� � , � ���8� �� =��& ?(&

���� �� �� ���7���� �� ���������� �� ��������

�� ��" �,���� ����� � ����� � ���� �� ���� ���& ���

��8 ������ �� ������� ���������� �� �� ������� �� ��

��������� ��� �� ���� �� �� ���� ������ � �

������� �� �� ��� ���� ������ ��� �� ���� ��

��������& ��� �, �� ������� �� ������ �� ����������

�� �� �� ����� ������� ���� �� ��� � �� ����� �

34 ��( �� ��4 6 ���� 77 8�""�9 7�$:77$ ??�

=��& �& ' ��� �� �� � �8� �� ����� ���������� & �/� ����� ���� �� ������� �� ��������� ��� �� ������� �� �� ������ ��� �� �� �����

����� �������& ��� %�,�� ����� ��� �� �� ����� ����� ������� ���� 8���� �� ��������� ���������� 8� � ������ � � �� ������ �� � ��

��������� ���& �)� / ����� ��������� ����� �� ��� ���8��� ������ � � �� ��������� ������ ��� �� 8� ��� �� ��������� ��� ���� � H������

�� ��� ����8�& �(� ����� ����� ��������� ����� �� ���� 8� ��� -$- �� ��� � ���� ����& )���� ��� �� -$- ������� � �� �� �� ����� �������

���� ��" ����� ������" ������>���& �)(� ��� ����� ���8 ������ ���& �$� ����� ������ �� ����� ����� �� ����& 0 ������� � �� ���� �� �� �� ����

8���� �������� �� ��������� � ����� � ������ ������ �� ������ ����8��& 6� � �� ��������� ���� ��� �-$-� � ������ 8� � �����

��������& �8� ����� �� ���� �� �� � ����� �� ����� � ���� ��� �������� � ����7�� �� ��� ������ ����� �� ���& �=� / ����� �� ��� 8� �

���,�� ���� �� ����� ������ ��� �� ������ ����8� ���� �� ��� �� ���� ����� ������& �8� ����� �� ���� �� �� ���� ����� �� ����� �� ��� � ���"

�� ��������� �� ���� �� �� � ����� ����8����& '�� �� ���� �� �11 ��& ��� '��� � ������ ��� �� �� �������� �� ��� ���� � �8�& ���

������� ����� � �� ������&

34 ��( �� ��4 6 ���� 77 8�""�9 7�$:77$??0

�� �� ������ ������ �� �� ������ ���� �������� 8� � ��

�� �� ����� �������" 8��� ���� �� ���� �� �� ��

�������& K� �� � ��� ���" �� ���� ���� ������ �� ������

����� ����� �� �� � ������ � ��� @ � �� ���� ���

7��� ���� �� ����� �� �� ������ �� ���������� ��

������& ����� 8��� ��� �� ���� ���� ��� ������ �����

����& 9 ��" ���" �������� � ����� � � ��� ��� � ��

8�� �� ���� ������ ���� �� ��������� ��� ���� & )����

����� ��� �� �� ����� ��������� ������� ���������

���� ��� � ���� � ����� �� ���� �� �������� ��

�� ����� ��������� �� ����� � �� ��������� ���

�=��& 0� �� =� �������� � �� ��� ���� ������ �� ����

�� ���� ���� �� �� � �� ������� � �� �� � �� �,����&

����� 8��� ��� ���� ���� �� ����� �������� ���� ���

���� �� 8� � �� �� �� ����� ������� �=��& 0( �� $�&

!�� ��� ����� �������� ���� 8� � �� ���������

������� � �� ������ �8��� �� ����� ������ ��

�� ����� �� ��� ������� 8� ��� �� ��������� ���

�=��& 0)� �� � �� �� ����� ���& ��� ��� �� �� ��� ���

�� ������ �� ������ �� �� �� ������� �� ����� �� ����

8� ��� �� ���� ���� �� 8� � �� ��������� ���

�=��& �(�& ����� �� ���� 8� ��� �� ��������� ��� ��

���� �� �� ���� ����� ��� ���� ���8� �� �� ����� ��

���������� �� ������ ������� ����� 0 �*�� � �&" �53@�"

������ ������� ����� � �-����� � �&" 0111� �����������

�����" ����>�8 � �&" �55@2 !���� � �&" �55��" �� ����

����>�� �� ����� �������� � �&" �55A�& ���� �� �� �� ��

��� � �� �� ��������� ��� 8� � -$- �� ���� �� ��

������� �� ����� 8� ��� ���� �� ����" �� ��� �� � �� ��

�� ���� � �8� 8� �������� � ���� � �5.5 ��

'�8� > �� -��>��" �� � �� �� *�� � �& ��53@�& ��

��� ,��8�����" ��� ����� ����� ��� �� ��� ��� ��

���� ��� � ���� �� ��������� ��� � ����� �� ����&

6���� ������" �� ������ ���� �� �������� ��& 9 �� 8���

,��8� � ��� �� ��������� ��� �� ����� �� � -$-

�� ����" ���� �� -$- �� �� ������ ������� ��� ��"

�� ����� �� -$- �� ����� �� � �� ����� ������& ����

�� � �� ������ � �� �$-* ������ ��������� �� �����

��������� � �� ���& )� ������ ������ ������� ��

������� �� ������ ������� �� �'� ���� �� ���� �

�� ������� ���� �$-* � �� ���� �;����� � �&" �535�&

��� ����� ������ ������� ��� ���� �� �����

���� �� ���� �=��& ?� ���� ���� � �� ������& )����������

�� ��� �� �� 8��� �� ��������� ��� �� �� �����

�� ���� � �� ��� ?11 �� �=��& 0=� ����� �� ��� ��

011 �� 8��� ��� ������ � ��� � �� ����� �� ���

��� � �� �� ���� �� ��������� ��� �� �������&

��� �������� �� �� �� ��� ���� ����� ����� �� ����

8� �8�� ����� � �� �� ���� ����� ��� � �� �� ����

���� �� ���� ��������& %������� �� ���� ����� ���

��� � �� � � � ���� �������� �� ������ ������� ��

������ ���� �����8�< %���" �5552 ! ��� �� ������"

�555�& ��� ������ ������� �� ���� �� ��7����� ���

������� ������ �� �� ����� �� ������� �� �����

������ �� ����� ����� ������� � � � � �� �����

����& ������� ���� 8��� ���8� � �� ����� �� �� � �� ����

�������� ��� � �� �� ���������� ������� �� �����"

�55?2 ������ � �&" �55A2 4����� �� 6������" �5532 �������

� �&" �550�& =�� ���� �� ������� ���� ������ ������� ��

�� ���� �������� � �� ��� ����� �� ������ �� �� ����

�������� 8� � �� ���� ������� ������ ��� �� ��

�'���" �55?�& !� �� �� ,��8 8�� ��� ������� ���� ����

� � ������ 8� � �� ���� ��������& 9� ��" �������

��� ���� � ������ ������ �� �� ���� �������� 8� � ��

�H�� �������� ������ ������ ��� ���� �� �������

��� ��� �� -$- �� � ����� �� ����&

������� � � � 8� � ������ ��� �� �������

�������& ���� ������ ��� ������ �� ����� �� ����

������ �� �� ��������� ��� �� �� ���� �� �� ����&

)������ ��� �� �� ��������� �� ����� �� ���� 8� ��� ��

��������� ��� �� ���� �� �� ���� �� ��� ����

���8� ������ �)���� �� !�����" �55@2 ������� � �&"

�5@?2 ������� � �&" �55A2 ���>�8 � �&" �55@2 ;�����

� �&" �5352 !�� � �&" 011��& �������� ������ ���"

��8����" 8� ����� �������� �� ����� �� ���� 8� ���

����� �� ���� �� ������ ������& 9�� ��" ����� �� ��

��� ����� ���8�� ���,�� ���� �� ���� �=���& 0$ ��

?$ �� =�& ��� ���������� �� ������ ��� �� ����

����� �� � ������ ������ �� �� ���� �������� 8� �

�� ���� �������� ��" � ��� �����" � ���� ��� ����

� ����� ����� �� ���� ���� �� ��������� ��� � �����

�� ����& ��� ���� ��� ��� ����� � �� �� ���� ���������

������ � � � �� ��� � ��� ����& ����� �� ������ ��

��� ���� �������� �� �� ������ ���� �� ����� �������

��� ������ �� � �����& 9 �� ���� ���8� � ��

N*?A ��� ���" ������� ��� ���" �� ����� �� ��� �������

�� ����������� ����� �;���� � �&" 0111�& 9������������

���8�� � � �� ������ �� ����� �������� �� �� �����

�� ���� 8� ��� �� ��������� ���& N*��" ����� ��

� �� ������ ��� ���" 8� ���8� �� �'��� ���� �� ����

� �� ���� �� 8� � �� ����� ����� �������" 8� �

� ������ ��������" �� 8� � L���������,� � �� ����M

���������� ��������� ��������� ���� ��� � ���

�� �������� �� ������ ��� �� ����� �� ���� ������

34 ��( �� ��4 6 ���� 77 8�""�9 7�$:77$ ???

=��& 0& -�� ������ �� �� ��������� ��� � ����� �� ����& �/� / ������� �� ����8 ����� �� ��� �� �� ���� ���� ��� ����� � 8� � �� �� �� �����

������� ����& / ����� ��������� ����� �� ��� �� 8� ��� ����" �� ����� ��� ����� ����� � ���� �� ���� ������ �� �� 8������" ��

� ������ ��������� ��� �� ���� � �� ������" 8��� ���8� ������ ���& ��� ��� �� �� ����� ������� ���� �� ����� �� � -$- �� ��� � ������

8� � ����� �� ����& �)� / ����� ��������� ����� �� ��� 8� � �������� ��������� �� 8� ��� �� ��������� ���& ��� �� �� ����� ������� �� �� ����

����� ��� � �� ������� �� ����� �� ��� ����� �& /�� ��� ����� �� ��� �� �� ��,���� ������� ����� �� ���& �(� ��� ������� �� ����� �� ���

������ � ��������� ����� �� ��� �� ���� �� 8� � �� �� �� ����� ������� ����8�" �� � ������ ��������� ��� �� �H�� � �����

�������& 9 �� ��������� � �� �� ���� ���� � �� �� 8������& 6� � �� ���� ����� �� 3 � �� ���� ���& �$� / �� ���" �� ����� ��� ��������� �����

�� ���" �� ���� ����� ������ �� ���� �� 8� � �� �� �� ����� ������� ����& �=� ��� �� �� ����� ������� ���� �� ����� �� � -$- �� ��� �� �

����� ������& '�� �� ���� �� �11 ��&

34 ��( �� ��4 6 ���� 77 8�""�9 7�$:77$??A

�� � ����� ������ � �&" �55C�& ��� � �. ������ �����

������ ��� �� ��7����� ��� �� ���� ������ ��8�� ��� ��

�� ��� �� ���������� �� � �� ����� �������

�%����� � �&" 0111�& ��� ������� ���� $" 9 �� %

�� ��7����� ��� ���������� �� ����������� �����

���, � �&" �555�& ������� ��� ; ���� � ����� ��

���� �� ���������� �=�� �� �� ;�������" �5552

4����� � �&" �55@2 -H�� �� ;������" �555�& 9

�� �� ���� ,��8� ������� ��� 8��� �� ���� ����

� ��� ���� ��� �����& ������� ��� ; ���� ��� �� � �

���� �� �� �� � ����� �� 8��� �� ����� ��

� �� �� ������� ��� �4����� � �&" �55@�&

6��������� �� ������� ��� ; ���� ��� �� � � ��

��� �� �� ������ ������� �������& 9 �� ����

������ �� � �� ����� ������ ������� ������� ����

�� ���� �������� � ����� �� ����� ������" 8���� ��

�� �� ������ ������� ������ � ������ � ���� �� �� ��

����� ������� �=�� �� �� ;�������" �555�& !� ���

������� ������� ��� ; � �� ��,��� ���� � ��������

�� �� ������ �� �� ����� ���� �� ��������� ��� �� �

����� �� ���� ��� ������� �� ���� 8� � � ��� �������

��� ����&

9� ��������" ��������� �� ������� ��� ���

�������� ����7��� ������� ���� ���� �� �

�� ��� ���� � �8� �� ����� �� ���������

���� ��� ���� �� ��������� ��� � �����

�� ���� ��� �,���� �� � ������ ������& ��������

��� �� ��������� ��,��� � �� ����� �� �� ��������

��� ; �� ���� 8� � � ��� ������� ��� ����& ���

�������� �� ��� ���� � �8�" ��8����" ���� ��

������ �� ������� �� ���������� �� �� � �����

�� � ���" 8��� ����� ��������� �� 8������ ��

����� ��������& �� ������ �� �� ������ �� ����

���������� ��� ��� ����� �� ���� ��� �� ����&

����� �� !������

!� ��, %& /,����� �� -& !���� ��� �������

����������& ��� � ��� 8� ������ �� �� ' �� ��� ��+�

!�������� ���� =������� � ��� N������� + B�+���&

��"�������

�����" 4&(&" 4��" -&4&" '�������" *&" -��>��" �&" �55C& ��� ������

������� ����� � N*�� ��� ���� �� ���� �� 8� � � ������ ��

����� �������� �� 8� � ����� ������ �� ���� �� ����& 4& �����&

.5" 30CD3??&

��," /&-&" (�H,� �" 4&%&" ���>�8" �&" ;����" �&�&" %� ����� ��" �&)&"

�555& 9����� ��� �� ������ � �� ��� �� ����� ����� ���� ��� �� �����

��� ���� $" 9" �� % �� ����������� �����& 4& �����& @?" C?.ADC?@0&

���8��" �&" ����" '&" %�����" �&" !�����" (&!&" �55.& /� ���������

�� �������� ���� ������ ������� ����� ������� ��� � �� ���� ����

���� �� �������< ������� ��� ������������ ������ ������& 4& �����& @1"

A?��DA?�.&

)��������=����" �&" =�������" =&" (� �� " '&" -��>��" �&" �55�&

K����� �� ����������� ����� �� �� � ����� �� ���� ���� �� 8� �

������ ������� ����� �& 4& �����& .C" �C35D�C5C&

)��" 4& &" -����" *&" *���" -&�&" *��" �&�&" %���" -& &" %������" -&-&"

$�7��� " *&!&" �55?& ���������� ����� ���� ��� �� �� � �� ��

������� ��� ��< �� �� �� ��� �� ���> ��� �� ���� ����� ���"

������ " �� � ���������& 4& 6������& �?" 0C�CD0C?5&

)����" �&/&" !�����" (&!&" �55@& ' ��� �� ������ ������� �����

� �� ��� ������ ���������� 8�� �� �������& 4& �����& @�"

?.1?D?.�0&

)���" �&�&" !������" %&/&" �5.5& J�� � ��� � ����� �� �� ������� ���

�� ������ �� � �������� ������ ���� ������ ����� ����� ��� ���

��� ��� ��������& 9& ��� ��������" ������ � ������" /���� �

�� ����& 4& %����& 51" ?�DA.&

(����� ��" -&!&" %���" *&�&(&" �5.3& ����������� ���������� & 4& �����&

0" A3DCC&

34 ��( �� ��4 6 ���� 77 8�""�9 7�$:77$ ??C

=��& ?& 9��������� �� �� ����� ������ �� ����� ���������� & �/� / ���� ����� ���� �� %(�; ��� ��� 1 �� ���� ���& �8� ����� �� ���� �� ��

�� �� ������� ���& ��� / ���� ����� ������ 8� � ���� �� ���� �� ����� ������ ����� �� ���� C � �� ���� ���& K�� �� �� ����� �� ���� ����

� ����8�& �)� / ���� ����� ������ . � �� ���� ��� 8� � ���� �� ���� ��������� ������ ����� �� ��� �� 8� ���������� 8� ��� ��� ��������

����8�& �8� �� �� ������ ���� � �� ���� �� 8� � �� ����� ������& �(� ��� �� ��� �� ���� ����� ������ �. � �� ���� ���� ���� � �� ������

�� ��� � ��������� ����� �� ��� 8����� ��������� ��� �� �� � �� ������ � � �� �� 8������ �� �� �� ���� �������& �$� / ������ �����

������� ���� ��� �� �� ������� ����� ���� ���� �� ����� ����� �� ���� ������ ���,��& �=� / ������ ����� ������� ����� �� ���� �� � �� �� �������

��� �� ������ �� �� ����� ������� 8� � �� ���� ������� ����& '�� �� ���� �� �11 ��&

=��& A& -�� ��� ���7���� �� ����� �� ���� �� � ������ ���� ��� �

�� %(�; ���� ���� �� 8� � ����� ��� C �� @ �" ����� �����&

�������< �� ������ �������� �� ��� �� ������� ���������� ��

�� ��� ���� �������& ,����< ��������� ������� 8� ��� ����� �� ����

�� ���� ������ ������& )� ������ ����������< �,�� ������

����� �� �� � ������ � ���& !������< ���������� ����������

8������ �� ������� 8� ��� ���� ������ �� ����� ������ ������ �

�� ���������� �� ���� �� ��� ����� 8� � ��� ��� ����� � ���� �=��&

0/�& ��� ��� ������ 8� �A� �� ���� ��� ?1 ����" �� ������� 53" ��

������ 0?A" ������ ��� �� A&@ ��� ���& � � A& ��� ������ �� �������

�� �� � �� �� �,���� �� �� ������ �� ���������� �� �� � �����

�� � ���" ����� �����" �� ������� �� �������� �� � 1&11�� C � ��

���� ��� ������ � @ � �� ���� ���&

(� *>>��" )&" )��������=����" �&" �������" %&-&" �55C& 9� ������ �

����� �� ������H�� �� �� ������ �� �� �������� �� ������ �������

������� ������ ���� ������ ���� �� ���� � � �8�& �������� 0�A"

.�5D.0?&

$�����������$������ " %&" /�����" '&" (�� �" %&P&" ;����" �&" !� ���"

&" B��������" )&" '���" %&)&" $����������" �&%&" �55@& 9�=�9 ��

�=�= �������� ���� ��G���� ��� � ����� � � �� �� �������� �

����� �� ���������� �� �� ���� ��� ������ � ��� ����� ���

� �������� ��& 4& %��& )��� )�����& 05" 010@D01?5&

=�� ��" �& &" ;�������" ;&�&" �555& ���� � ������ �� �� ���� �� ������

������� ����� ��� � ������� ��� ; �� ���� ���� ����� ����� ��� ��

������& 4& �����& @?" [email protected]&

�������" /&" )����" *&" �������" &/&" �5@?& K����� ���� �� �� ���8 � ��

�������>�� �� ����� �� ���� ������� ����& 4& ���& �����& �3" 0�D?�&

�������" /&/&" '�����" (&*&" B��" B&" ����" )&/&" /�����" -&�&"

�������" %&(&" �55A& 9� ������� ������ �� ��8�� ��� ����>��

�������>�� �� �����< ��� ���������� �� �� ��������� �� 8��,&

4& �����& .3" .?@0D.?51&

������ " -&" �����" �& &" �55?& 9�������� ��� �������� ����> ��� ��

������ ������� ����� ������� ��� �� �� �� ����� �������� ��

���� �� ����& ����� -��& 03" 0�@D0?�&

������ " -&" �����" ;&" -����" *&" �����" �& &" �55A& %������ �������

����� �� ������ ������� ����� ������� ��� �� �� ������� ��� �����

�������� ����> ���& 4& �����& .3" 00@0D003C&

����" %&" ;����" $&" �551& 9� ������� ���,��� �� 8� �H�� $�� ���D

��� ����� ������� ����" ��?C1:001 �� ����1& 4& �����& .A" �C1@D

�C�.&

���>�8" �&" !�����" =&" 4���" /&" ;����" �&�&" ;����" /&" %� ����� ��"

�&)&" �55@& N� �� �� ��� ������ �� �� ����� ��� ��� �� �������

����� ����� �� ��� �� ���< ���������� & 4& �����& @�" 01@0D0130&

����� ��" �&" -� ���" &" �550& )��� ������� �� ������� � ������� ����

�� ������ �� � � �8�& '����& )��� ����& ?" ?.@D?3�&

4�����" '&" �����" /&" ;�������" ;&�&" �55@& ������ ������� �����

��� � ������� ��� ; �� �� ����� �� ��� ���� ���� ����� ����� ��� ��

����� ����� ��� ���� �� �� ��7����� ��� ������ ���������� ��

����� ��� �� ���� ���� ������� ���� �� � ����� � ��

�� ������� ���& 4& �����& @�" C1�0DC10A&

4�����" �&*&" 6������" �&" �553& ������ ������� ����� ��� ������ ��

���� �������� ���� ���� � ����� �� �� ���>�� ����������

����� ��� ��� ��� ��������& 4& ��� ����& )� ����& A."

A3@DA5.&

4������" (&)&" '���" &�&" �530& %������� ������ � �� ��������� ��

������ ������� ����� ������� ����" ���� ������ � �� ��� �����"

�� �� ������ �� ������� ���� ���� �� ����& 4& �����& A?" ��10D���0&

;����" �&�&" ������ ��" 4&" (�� >" &" ���>�8" �&" %� ����� ��" �&)&"

�553& ���������� ����� ������� ��� �; �� ������ � �� ���

������� �������� �� ����� ������ �� �� �� ��7����� ��� �� ��& 4&

�����& @0" �5A5D�5C3&

;����" �&�&" ���>�8" �&" %� ����� ��" �&)&" 0111& ����� ����������

�� ����������� ����� �� ����� ������� ��7����� �� N*?A ����

����� & 4& �����& @A" �11.?D�11@?&

;����" �&" ����" )&" � ���" �&" �55�& J������ G�8 ������ ��

���� ���� �� 3�������� ����< ��� �����" ����� �� �������

� �� ���" �� ���� ��7������� � ������� � �� ���� ������ ��

���� ����>��� �� �� ����& 4& )��� ����& ��?" �05CD�?1A&

;�����" %&" �H��" %&" ; �" ;&" �535& �������� ��� �� �����

������� �� � �� �������� �� ������ ������� ����� �� � � �����

�� �� �� ����& $��& 4& )��� ����& C1" ?53DA1.&

;���" (&" !���" &" �550& ��� ��G���� �� ������� ������ �� ��� �� ��

������ �� ���� � ��������� �� ����� �� ������� ��

��� �� �� �� ����� �� ������������� �� � �& ��� ������ �� 5@"

CD��&

*��" ;&" ��" 4&" !��" 4&" B��" !&" *��" '&" '�" 4&" !��" P&" B���" !&"

4���" 4&" �53@& N� �� �� ��� � ��� �� �� ������������� �� ������

������� ����� ��� 0 �� ���� �� ���� ���� � ����� ����� �� ��

�� �� ���� �� 8��� ����� �� ��� ���& 4& $�� �& %����& ����& @"

@?D3A&

%��" �&" ;8�,�" ;&" K������" '&" �53�& 9� �� ��� �� ��G���> �����

������� ���� 8� � ��� ������� ������ �� ,�� � �� �� ������

������ ��������� �� ������ �� C&0& ��& 6 �& /�& '�& N'/

@3" A�??DA�?@&

%���" /&" �555& 9� ������� ������� ������< '6/-$� ����& )���&

K���& )��� ����& ��" AA@DAC0&

%���" �&" ������" �&" '����" )&" /,�� " ;&" �531& ��� ��G���� �� ����

�������� ����>��� �� ������ ����� �����& )��� ������ -��& 015"

01�D0�.&

%����" )&" $������" '&/&" -���" 4&%&" %����" (&�&" �5CA& ' �� ��� ��

���������� �� ������� � �������� �� �� ��� ��� ��������& 4& $��&

%��& �11" �5CD010&

%�����" ;&*&" '��������" -&" *����" )&" (���" 4&" '�����" 4&-&" 0111&

$������ � ������ ������� ����� � �. �� ��7����� ��� ���� ������

��8�� ��� �� �� ��� �� ���������� ���� & 4& �����& @A" [email protected]&

%������" %&" �550& ��� �� ��� ��� ��8�� �� ����� �������� ��� ���

�������� �� �������& / %����& �" ?@DA.&

���" �&" �5@C& 9� ������� ��� � �� �� ������ �� ��� ��� ��� �����&

'���� �35" ?A@D?C3&

���7���" *&" *�����" �&" '����" �&)&" �53C& 9��������� �� ����� ��� ��

�� ��� �� ���� ����� �������� ������ ���������� �� ������ ��

������ ������� ����� ������� ����& 4& ��� ����& )� ����& ??"

3@CD33?&

J��� �" )&" �55A& )����� ���" ������� � � ���" ������������ ���

�� �� �� ���" ������� ������ �� ������� �� � �����&

%���� 0C" .?D55&

-H��" 4&" ;������" %&" �555& ������� ��� ; �� ������ ������� �����<

���������� ��� ��� ������ �� �� N*C? ���� 8��� ����� ��

������� ������& ����� �����& �3" 3�D51&

-�����" N&" ������" %&" �5@?& ��� ����� �� ����7�� �� �������������

����>���& 9�< ������ �" *&" =���" & �$��&�" =���>��� ����"

�����7��� �� /���� ����& '���Q �Q =����� �� %��������

$�� ����7��" ���" �& ?�&

-����" =&4&" �55?& ' �� ��� �� ������� �� ������������� A" �?CD�AA&

-�����" /&!&" '��� �" N&!&" �53C& *�8 ����� ��� �� ���� �� ��������

��� ��� ��������& 9�< ����� " /&%& �$�&�& � �� %� ���� ��

$�� ��� %�������& $�������" /�� ����" 6�8 P��," K�����&

-�����" $&" /���� " 4& &" ����" 4& &" =���,��" 6&" �551& � ��� �� � ��� ��

7���� ��� �� ���� ����������� . ������ ������ & 4& �����& .A" .?13D

.?�?&

-��>��" �&" '���" /&$&" �55.& ������ ������� ������� �� ����

����� ���& 9�< =�����" $&6&" ;����" (&" ��8��" %& �$��&�" =�����

��������& *����� �-���" ���������" ��& 00?�D005C&

-�����" -&4&" B���" P&" '��� >��" -&" =�������" 4&" (�'���" (&" 0111&

������ ������� ����� ��� � N*?A ���� ����� �� ��7����� ��� ����

���������� & 4& �����& @A" ��@D�05&

'�8� >" 4&" -��>��" �&" �5.5& )�������� �� ������ �� ������ �������

����� ���� ���� �� ����< ��� ��� �� ���� �������� ������ ����&

�������� ?3" A0DA5&

'���" &/&" �55?& $� �� �� ���������������� �� � ����& '����& �����& A"

�.@D�31&

' �����" �&" !�� �" 4&%&" ��������" /&" �551& 9� ������ �� �� ��G���>

������ ������� ������& $%�K 4& 5" A0?�DA0A�&

' ����" /&" '���" &�&" �55@& ����������� ���� ������� ��

���������� & 9�< )���" !&" ����� " -&%&" ���" -&*& �$��&�"

' �� ��� ������� �� �������& K����� N������� � ����" 6�8 P��,"

K�����" ��& ?�0D?C�&

' ����" (&" %����" %&" %�����" %&" �535& ���� �������� ����>��� ���� ��

��& '����� %����& '����& ?" 0C?D0.3&

�������" %&-&" )�����" %&" ��" /&" B���� " )&" �����" �&" =� �" *&"

=������" /&" �535& *���> ��� �� $�� ���D��� ����� ��������

������� ���� �� �� ����� ����� ������� �� ��������������

����& 4& �����& .?" 303D3?0&

�������" %&-&" (� *>>��" )&" ��" /&" �����" *&" )��������=����" �&"

�550& ������ ������� ����� ���������� �� � �� ��� � ����� ��

�� ��� ����& 4& �����& .." CCADC.�&

�������" %&-&" ��� ���" %&" )������" �&" )�����" %&" B���� " )&" *� �"

34 ��( �� ��4 6 ���� 77 8�""�9 7�$:77$??.

*&�&" =� �" *&" =������" /&" �555& 9� ������� ������ �� � ���

��� � �8� �� ���� ����������� .& �������� 0C@" A.1DA@�&

�� (����� *� ����� ��� ���," '&" ��>��" '&" �� ��� ���," 4&�&" ����,"

*&/&" ��H����" &" �55C& ��� ���� �� �� �H�� ������ ��� ��� � 3 ��

������ ������������� �� ���� ��� �� ������ �& �������� 01."

A�?DA0C&

��� '�," %&*&" =,�" '&" ��������" !&" %�����" %&" �55?& )����� ���

�� ������� � � ���< ������ � ��� ��� �� �� ������ �� ������ ���

� �� ���& $��& 4& ��� ����& ?@" CD�3&

!��" B&�&" �������" %&(&" *����" K&" B��" B&*&" %�����" '&" /����"

/&%&" �������" /&/&" 011�& $���� �� ���� ����� �� �� )� ������

����� �� ������� ��� 9 �� ���������� �� �������>�� �� ����� ��

�� ��������� �� 8��,< 9� �� ���� �� ������� ���� 8� � ������ &

4& �����& @C" ?0?D?A1&

!��" &*&" )��������=����" �&" /�� ����" $&" -��>��" �&" �55A&

*���> ��� �� �� ��� ��� ��� �� �� N*01 ������� ��� ��� ��

���� ���� �� 8� � ������ ������� ����� �& 4& �����& .3" @A1.D@A�@&

! ���" %&�&" ������" '&-&" �555& %������ � ������ �� �� �������

������ & )���& K���& )��� ����& ��" AC?DAC5&

!������" )&" )���� ������" /&" �53.& $� � ��� �� ��� ���� �� �������

������ ������ ��8 ����� ��� ��������� �� �������� � ���� ���

��� ��� ��������& 4& %����& �A0" @5D3.&

!������" )&" )���� ������" /&" )������" $&" �53?& $� � ��� ��

������� ������ ������ �� ���" ������ ��� �� ��������� ��

������������ ��(��& ���� ��� ��� ��� ��������& 4& %����&

�05" 01�D01@&

!����" %&$&" )��" 4& &" %���" -& &" -������" /&;&" $�7��� " *&!&"

�55�& $��� �� ��������� / �� �������������� ������� ��� ���

������� ��� �� ����� ������& 4& �����& .C" �1..D�13�&

!�� �" 4&" ;� ����," 4&" ��������" /&" �530& %������ ������ ��� � ��

��G���> �����& $%�K 4& �" 0�@D000&

!���" &" '�����" $&%&" /����" �&" ������" �&" 011�& $����� ������ ���

�� �������� �� �� ���� ���� �� �����������> ��� �� ����>��

���� � � ���& %����& -��& ���& C." ?�?D?0�&

!���" &" �������" /&" '�����" $&%&" ���������" /&" �����" N&" =������,"

&%&" ' �� " %&)&" ��� =���������" -&" �55@& -����� ��� �� �� ����

�� ����>��� �� ��������� ��� ��������� �� ����� ����>���

�����8�� �� ������ ����������� �� ����>� ���� � � ���& %����&

-��& ���& ?5" 05@D?1A&

!���" &" ;��������" %&" '�����" $&%&" �535& � ��� �� ����8��

����� ��� ������ �� ��� ��� ��� ��� ��������& ��� ������ �� 5�"

0�?D001&

!���" &" '�����" $&%&" �535& J�� � ��� �������� �� ������

����� �����,�� �� ����8�� ������ �� ��� �� �� �������&

��� ������ �� 50" .5D@0&

!���" &" '�����" $&%&" � ��" 4&" *�����" $&" $�����" %&" �553& 6����

�� �� � �8� �� ������ ����������� � �� C& 4& �����& @0" 5C.�D5C..&

B���" B&�&" )���" (&�&" 4,�" 4&" -����" =&4&" )���" !&" �555&

������> ��� �� ������ ����� �� �� ���� �� (6/ �� �� ������

������� ����� ��� � �������& 4& �����& @?" ?0�1D?0�3&

B��" B&" �������" %&(&" ��" P&" /�����" -&�&" ����" )&/&" �������"

/&/&" �55C& $��������� �� �������>�� �� �����< ��� ��� �� ����

������� ���� � �� ��������� �� 8��,& 4& �����& .5" @5C�D@5C5&

34 ��( �� ��4 6 ���� 77 8�""�9 7�$:77$ ??@