Tcnica para bsqueda de clulasLE

materiales:Tubos de macro-hematocritoLaminas PortaobjetosFrasquito con 4-8 perlas de vidrio y 1 gota de heparinaJeringa con aguja gruesa, de 15cm de largoEmbudo

Introduccin

El Lupus Eritematoso Sistmico es una enfermedad autoinmune que afecta a muchos tejidos y rganos como articulaciones, piel, sistema nervioso, rin, corazn, pulmn, sangre, hgado, bazo y ojos. Las clulas LE son polimorfonucleares que fagocitaron restos nucleares alterado, proveniente de la destruccin del ncleo de otros leucocitos, por el llamado Factor LE (factor nuclear). Este es Ig G-anti ADN que se fija a la superficie del ncleo y determina alteraciones en la cromatina; y entonces al ser recubierto por anticuerpos, es fagocitado por los neutrfilos. El objetivo es hallar neutrfilos que tengan adherido a su superficie restos nucleares, o bien que los restos estn en su interior. Existen 2 mtodos (entre otros)

A) Mtodo sin Coagulo

1- Sacar sangre al paciente, y colocar en frasquito con las perlas que posean 1 gota de heparina. 2- Dejarlo rotar en el agitador por 30 minutos, o bien agitar vigorosamente por 5a 10 minutos para generarla lisis de leucocitos.3- Llevar la muestra a estufa de 37 C entre 1 a 4 horas, para darle tiempo a los leucocitos enteros a fagocitar los restos de los lisados y que decanten los glbulos del plasma. 4- Con la jeringa de aguja larga aspirar la capa de leucocitos, en lainterface plasma-glbulos rojos y descargar dentro de 2 a 4tubos de macrohematocrito. 5- Centrifugar amuy bajavelocidad (500-1000 rpm), por 5minutos. 6- Aspirar nuevamente con la jeringa la capa de leucocitos de los tubos, y descargar en los portas, y realizar los extendido con extensor.7- Colorear por el mtodo de May Grunwald - Giemsa y ver con objetivo de inmersin.

B) Mtodo con cogulo:

1- Se sacan unos 5 a 10 ml de sangre y se la deja coagular durante2 horas a 37 C.2- Centrifugar a 3500 rpm por 10 minutos.3- Eliminar el suero y depositar el coagulo sobre varias capas de gasa, y stas sobre un embudo.4- Aplastar el coagulo con una varilla y recoger el producto en un tubo de ensayo.5- Pasar el liquido obtenido a un tubo de macrohematocrito con la jeringa con aguja larga, y centrifugar 15 minutos a 2000 rpm.6- Usando la misma jeringa, eliminar primero el suero, y luego tomar la capa de leucocitos y depositar en portas para hacer extendidos.7- Colorear por el mtodo de May Grunwald - Giemsa y ver con objetivo de inmersin.

Observacin einterpretacin:

Buscar los campos bien coloreados y con las clulas bien separadas, evitando la observacin de clulas "pegoteadas" por efecto de la lisis y la extensin. La prueba es positiva cuando se hallan leucocitos que fagocitaron restos nucleares de los lisados, o bien los tenga adheridos en su superficie, que se notara por la diferencia de color entre el resto nuclear y el ncleo de leucocito entero, y se informara "Se observan clulas LEEl "Fenmeno de Roseta" se debe a la adhesin de 2 o mas neutrfilos a un resto nuclear. Es raro de observar, y se debe diferenciar de las clulas "pegoteadas" propias de extendido. La presencia de leucocitos vacuolados no indica necesariamente la presencia de clulas LE, ya que fagocitaron cualquier resto celular. La prueba no es totalmente especifica, debido a que enfermedades autoinmunes tambin generan clulas LE, y no tiene gran sensibilidad, ya que es negativa en 30% de pacientes con lupus. Esto se explica por el tratamiento con corticoides en estos enfermos que inhibe la formacin de este fenmeno, por lo actualmente no tiene valor diagnostico y es necesario realizar otras pruebas,

tal como la bsqueda de anticuerpos, que son mas sensibles y especificas. Algunos laboratorios sugieren que se confirme la presencia de anticuerpos antinucleares (FAN/ANA) antes de buscar e informar las celulas LE, ya que es una tcnica con alto error. Adems no es especifica para Lupus, y esta cayendo en desuso. Sin embargo, para diagnosticar LES, es uno de los 10-15 parmetros a considerar para confirmar la enfermedad.

Imagenes de Celulas LE: