1

Técnicas De Identificación De Muerte Celular

Introducción a La Terapia GénicaCurso 2003-2004

2

3

4

5

Adaptador

OH-OH-

-OH-OH

P-HO- -P

-OH5’

3’ 5’

3’OH-

-OH-OH

OH-

Fragmento de DNA genómico

ApoAlert LM-PCR (Clontech)

T4 DNA Ligasa

72ºC 3 min

Taq DNA polimerasa

PCR

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

http://www.stratagene.com/cellbio/apoptosis/rt_pcr.htmhttp://www.clontech.com/archive/JUL01UPD/pdf/Apoptosis.pdfhttp://www.maximbio.com/mbi65.htmhttp://www.biocompare.com/molbio.asp?catid=1460http://www.biosite.se/kunder/biosite/

Análisis de los mecanismos moleculares de la apoptosis mediante RT-PCR

Medida de la apoptosis a nivel de mRNA

Principles of Amplifluor™ Apoptosis Gene Systems

http://www.intergenco.com/body_apoptosis_amplifluor.html

reporter

quencher

Real-time DetectionInstruments

Endpoint DetectionInstruments

Fluorescence Plate Reader

Spectrofluorometer

UV transilluminator/camera

Fluoroimaging gel systems

22

Identificación y estudio de los mecanismos moleculares de la

apoptosis:

- Debida a daño tóxico (DBC en hígado)- Asociada a la neurodegeneración en

enfermedades priónicas (scrapie ovino)