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TÉCNICAS AVANZADAS EN BIOLOGÍADepartamento de Ciencias AmbientalesÁrea de Biología Celular

Curso 2003-04

PROFESORES:

ANTONIO ARROYO LUQUEJOSÉ A. SÁNCHEZ ALCÁZAR 

CLAUDIO ASENCIO SALCEDO

GLORIA BREA CALVO

La licenciatura de ciencias ambientales,

debido a sus carácter técnico, forma a

profesionales capacitados para adoptar las

soluciones tecnológicas e integradas a la

problemática ambiental derivada de las

actividades humanas y productivas, así como de

evaluar y asesorar en cualquier área del Medio

Ambiente.

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CAMPO OCUPACIONAL:

• Tendrá la responsabilidad de la toma de decisiones para el mejoramiento de lacalidad de vida en nuestro planeta.

• Planificar sobre la factibilidad de proyectos de parques industriales,

infraestructuras turísticas, asentamientos humanos, complejos hidroeléctricos,

trazados de vías de comunicación, explotaciones mineras, perforaciones

 petrolíferas, etc, que pueden producir desequilibrios ambientales.

• Participar en el asesoramiento o dirección de organismos estatales y privados,

destinados a las políticas y administración del medio ambiente (ej: industrias,

empresas varias, obras públicas, transporte, comercio, inversiones).

• Asesorar en la administración y manejo de materias primas.

• Participar en la evaluación de los efectos que producen los impactos ambientales

y así poder planificar los medios de prevención, protección y conservación de

diferentes ecosistemas.

• Integrar unidades ambientales en las empresas para adecuar su acción a los

requerimientos exigibles en ese campo.

• Enseñar la problemática ambiental en todos los niveles del Sistema Educativo.

• Investigación medio ambiental y toxicológica

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Malformed Amphibians

© 1998 Minnesota Pollution Control Agency

Headlines in two Minnesota (US) Newspapers told the story:"Deformed frogs prompt investigation--Students found largenumbers of them in Henderson" (Minneapolis Star/Tribune,9/1/95) and "Leap in Frog Mutations Startles Scientists" (St.Paul Pioneer Press, 9/1/95). In 1995, students in Minnesota

alerted the world to the problem of frogs with unusually highnumbers of malformations. Some frogs had up to five hind legs,some had unusual webbing or missing legs, and some weremissing eyes. These trends have continued with some moreextreme malformations even being found.

Because frogs may act as bio-indicators of thehealth of our environment, scientists began toworry. As with global amphibian declines,suggested causes for these malformationsinclude increased exposure to UV light,chemical contamination (both have beenrelated to human activities) and parasites.

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Environmental Health Perspectives Volume 106, Number 12, December 1998[ Citation in PubMed ] [ Related Articles ]

Induction of Mortality and Malformation in Xenopus laevis Embryos byWater Sources Associated with Field Frog DeformitiesJames G. Burkhart,1 Judy C. Helgen,2 Douglas J. Fort,3 Kathryn Gallagher,1

Dorothy Bowers,4 Timothy L. Propst,3 Mark Gernes,2 Joe Magner,2 MichaelD. Shelby,1 and George Lucier11National Institute of Environmental Health Sciences, Research Triangle Park, NC 27709 USA2Minnesota Pollution Control Agency, St. Paul, MN 75155 USA3Stover Group, Stillwater, OK 74075 USA4Department of Fisheries and Wildlife, University of Minnesota, St. Paul, MN 55108 USA

AbstractWater samples from several ponds in Minnesota were evaluated for their capacity to induce malformationsin embryos of Xenopus laevis. The FETAX assay was used to assess the occurrence of malformationsfollowing a 96-hr period of exposure to water samples. These studies were conducted following reports ofhigh incidences of malformation in natural populations of frogs in Minnesota wetlands. The purpose ofthese studies was to determine if a biologically active agent(s) was present in the waters and could bedetected using the FETAX assay. Water samples from ponds with high incidences of frog malformations(affected sites), along with water samples from ponds with unaffected frog populations (reference sites),were studied. Initial experiments clearly showed that water from affected sites induced mortality andmalformation in Xenopus embryos, while water from reference sites had little or no effect. Induction of

malformation was dose dependent and highly reproducible, both with stored samples and with samplestaken at different times throughout the summer. The biological activity of the samples was reduced oreliminated when samples were passed through activated carbon. Limited evidence from these samplesindicates that the causal factor(s) is not an infectious organism nor are ion concentrations or metalsresponsible for the effects observed. Results do indicate that the water matrix has a significant effect onthe severity of toxicity. Based on the FETAX results and the occurrence of frog malformations observed inthe field, these studies suggest that water in the affected sites contains one or more unknown agents thatinduce developmental abnormalities in Xenopus. These same factors may contribute to the increasedincidence of malformation in native species. Key words: amphibian malformations, environmentalsentinels, FETAX, teratogenesis. Environ Health Perspect 106:841-848 (1998). [Online 18 November1998]

AGENTE TÓXICO DESARROLLO EMBRIONARIO

AFECTA A PROTEÍNAS (ENZIMAS)AFECTA A DNA O RNA

AFECTA A LÍPIDOS

¿Cómo estudiamos los efectos deltóxico sobre estas macromoléculas?

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Duke University Marine LaboratoryNicholas School of the Environment

135 Duke Marine Lab RoadBeaufort, NC 28516-9721, USA

Telephone: 252-504-7503FAX: 252-504-7648

Internet : www.env.duke.edu/marinelab/

Marine Laboratory faculty represent a gamut of disciplines ranging fromcoastal environmental management and integrated marine conservation tooceanography, marine biology, marine biomedicine and mar inebiotechnology. Scientific programs include both basic and appliedresearch. For an indepth look, click on faculty names.

•Richard T. BarberPh.D., Stanford, 1967. Thermal dynamics and oceanbasin productivity.•Celia BonaventuraPh.D., Texas, 1968. Structure-function relationships ofmacromolecules; biotechnology.

•Joseph BonaventuraPh.D., Texas, 1968. Marine biomedicine, proteinstructure-function relationships.•Larry B. CrowderPh.D., Michigan State, 1978. Marine ecology andfisheries oceanography.•Richard B. Forward, Jr.Ph.D., California, Santa Barbara, 1969. Physiologicalecology of marine animals.•William W. Kirby-SmithPh.D., Duke, 1970. Ecology of marine-freshwatersystems.•Patricia D. McClellan-GreenPh.D., North Carolina State, 1989. Molecular toxicologyand xenobiotic metabolism by marine organisms.•Michael K. OrbachPh.D., California, San Diego, 1975. Application of socialand policy sciences to coastal and ocean policy andmanagement.•Joseph S. RamusPh.D., Berkeley, 1968. Algal ecological physiology;estuarine dynamics; biotechnology.•Andrew J. ReadPh.D., Guelph, 1989. Biology and conservation of smallcetaceans.•Daniel RittschofPh.D., Michigan, 1975. Chemical ecology of marine 

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Celia Bonaventura, Ph.D.Professor of Cell Biology B.A., Zoology, San Diego State University; Ph.D.,Biochemistry, University of Texas, Austin

Structure/function relationships of oxygen and electron-transport proteins continueto be Dr. Celia Bonaventura's primary area of research, with an increasing focus on

environmental perturbation of structure and function. Her research makes use ofstructural assyas and complementary measurements of rapid reaction kinetcis and

equilibria of red cells and hemoglobin, using UV/VIS and fluorescence

spectroscopy and novel methods of spectroelectrochemistry. Her work h as led to

an increased understanding of molecular adaptations in the respiratory proteins.

She is currently gathering baseline data on arthropod and molluscan hemocyanins

and on hemoglobins isolated from finfish (bluefish, spot and trout) and from

marine mammals (manatees and bottlenose dolphins). Her comparative studies

with hemoglobins, hemocyanins and cytochrome c oxidase isolatedfrom marine organisms illustrate aspects of environmental toxicity

associated with exposure to free radicals and metals.R epresentative publications:

•Bonaventura, C., J. Bonaventura, D.T. Shih, E.T. Iben, and J. Friedman.

1999. Altered ligand rebinding kinetics due to distal-side effects in

Hemoglobin Chico [Lys66(E10)Thr]. J. Biol. Chem. 274(13):8686-8693.

•Bonaventura, C., G. Godette, S. Tesh, D.E. Holm, J. Bonaventura, A.L.

Crumbliss, L.L. Pearce, and J. Peterson. 1999. Internal electron transfer 

 between hemes and Cu(II) bound at Cysteine 93 promotes methemoglobin

reduction by carbon monoxide. J. Biol. Chem. 247(9):5499-5507.

•Bonaventura, C., S. Tesh, K.M. Faulkner, D. Kraiter and A.L. Crumbliss.

1998. Conformational fluctuations in deoxy hemoglobin revealed as a

major contributor to anionic modulation of function through studies of the

oxygenation and oxidation of hemoglobin AO

and Hemoglobin Deer Lodge

 b2(NA2)His®Arg). Biochemistry 37:496-506.

Biomarcadores: A biomarker is defined as "a change induced by a contaminantin the biochemical or cellular components of a process, structure or function, that canbe measured in a biological system" (NRC 1989).

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BIOMARKERS

The bacterium Deinococcus radiodurans is capable ofreducing radioactive waste to less harmful substances.

BIORREMEDIACIÓN: utilizar organismos biológicospara resolver un problema medioambiental

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The potato with P4501A1 was still green and viable after being sprayed

with the herbicides chlorotoluron

BIORREMEDATION

Tema 1.- Introducción a la asignatura de Técnicas Avanzadas en Biología. Laaplicación de técnicas biológicas en el estudio del Medio Ambiente.

Introducción al Laboratorio de Biología Celular, Bioquímica y Biología Molecular.Normas básicas de Seguridad e Higiene en el Laboratorio.

Tema 2.- Metodología para la observación de células y tejidos. Microscopía óptica:campo claro, campo oscuro, contraste de fases, Nomarsky, luz polarizada. Microscopíaelectrónica: transmisión y barrido. Uso de anticuerpos para el estudio de moléculas yactividades en células y tejidos: inmunocitoquímica. Inmunofluorescencia: microscopíade fluorescencia, microscopía confocal, citometría de flujo. Otras técnicas deobservación.

Tema 3.- Preparación y obtención de muestras biológicas. Cultivos celulares:cultivos primarios y cultivo de líneas celulares. Fraccionamiento celular: métodos parala homogeneización de tejidos y lisis celular. Centrifugación diferencial. Gradientesde centrifugación. Análisis de gradientes. Métodos de partición en dos fases.

Tema 4.- Purificación de proteínas. Precipitación selectiva. Solubilización deproteínas de membranas celulares: tipos y uso de detergentes. Separación deproteínas por cromatografía: de exclusión molecular, intercambio iónico, afinidad(His-tag, GST).

PROGRAMA TEÓRICO:

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Tema 5.- Cuantificación y detección de proteínas. Espectrofotometría UV-visible:cuantificación directa y métodos colorimétricos. Separación de proteínas medianteelectroforesis en gel de poliacrilamida: tipos (SDS-PAGE, electroforesis no

desnaturalizante, isoelectroenfoque, geles bidimen-sionales). Visualización de las proteínasseparadas: tinción de Coomassie y tinción de plata. Western-blotting(electrotransferencia e inmunotinción).

Tema 5.- Proteómica. Comparación de muestras biológicas en geles bidimensionales depoliacrilamida. DIGE (electroforesis diferencial en gel). Espectrometría de masas aplicadaal estudio de proteínas: detección (MALDI-TOF), identificación de péptidos (Peptide MassFingerprinting mediante MALDI-MS/MS, MALDI-PSD). Análisis de interacciones entreproteínas: ensayo doble híbrido, cross-linking y FRET/BRET.

Tema 6.- Enzimología. Actividad enzimática: análisis mediante espectrofotometría yespectrofluorometría. Parámetros enzimáticos básicos: Km, Vmax, Kcat, etc. Mecanismos deacción enzimática. Tipos de inhibición enzimática.

Tema 7.- Análisis de ácidos nucleicos. Obtención de ácidos nucleicos: DNA y RNA.Cuantificación de ácidos nucleicos. Fundamentos de la PCR. Secuenciación. Clonación:genotecas, screening , complementación, clonación de productos de PCR (ligación directa,asas T y uso de topoisomerasas). Transformación en distintos organismos.

Tema 8.- Genómica. Expresión génica: northern-blotting, differential display,microarrays . Interacciones DNA-proteínas: análisis de los promotores,fingerprinting , EMSA, transcripción-traducción in vitro.

Tema 9.- Caracterización de lípidos y otras moléculas de carácter lipofílico.Métodos de extracción: solventes orgánicos, saponificación y extracción enfluidos supercríticos. Técnicas cromatográficas empleadas en la separación decompuestos lipofílicos: HPLC y TLC. Detección, cuantificación e identificaciónde los compuestos separados.

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ROGRAMA PRÁCTICO:Práctica 1.- Subfracionamiento celular. Purificación de mitocondrias de levaduras.

Cultivo, Digestión de la pared celular, Lisis osmótica, Centrifugación diferencial

Práctica 2.- Cuantificación proteica y actividad enzimática.

Método de Bradford para la cuantificación de proteínas

Determinación de la actividad del complejo IV mitocondrial mediante espectrofotometría

Práctica 3.- Detección de proteínas mitocondriales: citocromo c  y porina.

SDS-PAGE y Western-blotting (electrotransferencia)

Práctica 4.- Purificación de DNA genómico y PCR.

Cultivo de levaduras silvestres y mutantes (crecidas en YPD) en placas de YPD e YPG

Extracción fenólica de DNA nuclear de levadura. Cuantificación mediante espectrofotometría.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

 Saccharomyces cerevisiae(inóculo)

Cultivoen mediolíquido

Subfraccionamientocelular

(purificación demitocondrias)

Medición deactividadesenzimáticas

Detección deproteínas

mitocondriales

Purificación delDNA nuclear

Amplificación deFragmentos de DNA

(PCR)

Transformaciónde levaduras

Siembra enplaca

1 4

2 3

5

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PRÁCTICAS: TÉCNICAS AVANZADAS EN BIOLOGÍA

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COENZYME Q

DEMETHOXY Q(DMQ)

PPi Hn 

COO-

OH

PP i

H

COO-

OH

n

  Hn

 

COO-

OH

OH

Hn

 

COO-

OH

Me OH

n

 

OH

Me OHn

 

OH

Me O

OH

Hn

 

OH

Me O

OH

CH 3

Hn

 

OH

Me O

OH

CH3OH

Hn 

OH

Me O

OH

CH3

Me O

O2

SA M

SA H

CO 2O2

SA M

SA H

O2

SA M

SA H

COQ2COQ?

COQ3

COQ?COQ6

COQ5

COQ7 COQ3

Proposed

Biosynthesis

Pathway

for

COENZYMEQ

COQ3

METHYLTRANFERASE

Coenzyme Q is well defined as a crucial component of theoxidative phosphorylation process in mitochondria whichconverts the energy in carbohydrates and fatty acids into ATPto drive cellular machinery and synthesis.

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EVALUACIÓN DE LA ASIGNATURA

4 PUNTOS..........EXAMEN

4 PUNTOS..........MEMORIA DE PRÁCTICAS

2 PUNTOS..........PREGUNTAS PRÁCTICAS

HASTA 1 PUNTO EXTRA...............SEMINARIOS VOLUNTARIOS

Ejemplos de títulos de seminarios:• Obtención y usos de anticuerpos policlonales/monoclonales

• Estudio de interacción de proteínas mediante el ensayo del doble híbrido

• Cromatografía líquida de adsorción en lecho expandido

• Aplicaciones avanzadas de la técnica de PCR 

Comentarios sobre la asignatura:

¿Qué entendéis por Técnicas Avanzadas en Biología?

¿Qué esperáis de la asignatura?

¿Cómo puede ayudar a vuestro desarrollo profesional?

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PARA CUALQUIER DUDA O CONSULTAESTAMOS EN EL CABD – 1ª PLANTA

TELÉFONO: 954 34 9381 CORREO ELECTRÓNICO: jasanalc@dex.upo.esaarrluq@dex.upo.es

Tutorías: Edificio 2, 4ª planta..........Lunes por la tarde (previa cita)

GRACIAS

Trabaja, pero seguro!

Tema 1.- Introducción al Laboratorio de Biología Celular, Bioquímica yBiología Molecular. Normas básicas de Seguridad e Higiene en elLaboratorio. (1 clase)

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El trabajo en el Laboratorio requiere la observación de

una serie de normas de de seguridad que eviten

posibles accidentes debido a desconocimiento de lo quese está haciendo, o a una posible negligencia de las

personas que estén en un momento dado trabajando en

el Laboratorio.

1.Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona

de trabajo y de su material.

2.Es conveniente la utilización de bata, ya que evita queposibles proyecciones de sustancias químicas lleguen a

la piel. Por supuesto además, evitarás posibles deterioros

en tus prendas de vestir.

3.Si tienes el pelo largo, es conveniente que lo lleves

recogido.

Y no haría falta decir ésto; pero por supuesto en el laboratorio estáterminantemente prohibido fumar, tomar bebidas o comidas.

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1. Cuando se determinan masas de productos

químicos con balanza, se colocará papel de filtrosobre los platos de la misma y si es necesario

porque el producto a pesar fuera corrosivo, se

utilizará un vidrio de reloj.

2. Se debe evitar cualquier perturbación que

conduzca a un error, como vibraciones debidas a

golpes, aparatos en funcionamiento, soplar sobre

los platos de la balanza, etc.

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PICTOGRAMAS PARA TRANSPORTE DE SUSTANCIAS PELIGROSASPICTOGRAMAS PARA TRANSPORTE DE SUSTANCIAS PELIGROSASPICTOGRAMAS PARA TRANSPORTE DE SUSTANCIAS PELIGROSASPICTOGRAMAS PARA TRANSPORTE DE SUSTANCIAS PELIGROSAS

PICTOGRAMAS DE SUSTANCIAS PELIGROSASPICTOGRAMAS DE SUSTANCIAS PELIGROSAS

Producto peligroso por ser oxidante fuerte, esto implicaque en contacto con sustancias reductoras o combustiblesproduce reacciones violentas o fuego.

Sustancia orgánica peróxido inestable que puede entrar en combustión.

Producto que por un contacto prolongado con piel y/o mucosas puedeprovocar una reacción inflamatoria.

Es una sustancia venenosa o tóxica

Producto que produce acción destructiva sobre los tejidos vivosal entrar en contacto con ellos.

Es una sustancia radiactiva, o sea que emite radiación Alfa, Beta,Gama, Rayos X, etc. (nociva sin protección adecuada)

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Identifica a aquellas sustancias que se inflaman por un contactobreve con una fuente de ignición y después de haberse separado

de dicha fuente de ignición continúan quemándose.

Identifica a aquellas sustancias que a temperatura ambiente y encontacto con el aire arden espontáneamente.

Identifica a aquellas sustancias que pueden hacer explosión por efectode una llama, choque o fricción.

Identifica a aquellas sustancias que producen una fuerte reacciónexotérmica especialmente en contacto con sustancias inflamables.

Identifica a aquellas sustancias que por inhalación, ingestión o

penetración cutánea pueden entrañar graves riesgos para lasalud e incluso la muerte si no se las manipula con las adecuadasmedidas de seguridad

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Diferenciamos las sustancias MUY TÓXICAS, TÓXICAS y NOCIVAS, según el siguiente criterio:

DL50

DL50

CL50

ORAL EN RATA CUTÁNEA EN RATA INHALACIÓN EN RATA

mg/kg mg/kg mg/dm3

MUY TÓXICAS menos de 25 menos de 50 menos de 0,50

TÓXICAS 25 a 200 50 a 400 0,50 a 2

NOCIVAS 200 a 2000 400 a 2000 2 a 20

DL50: significa DOSIS LETAL 50. Es la cantidad de una sustancia que provoca la muerte del 50% de losanimales que ha sido sometido a dicha sustancia.CL50: significa CONCENTRACIÓN LETAL 50. Concentración de una sustancia en el aire que por inhalacióprovoca la muerte del 50% de los animales.

Identifica a aquellas sustancias que producen acción destructivasobre los tejidos vivos al entrar en contacto con ellos.

Identifica a aquellas sustancias que por un contacto prolongado conpiel y/o mucosas pueden provocar una reacción inflamatoria.

Identifica a aquellas sustancias que afectan de manerairreversible nuestro medio ambiente.

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Cilindros o envases que contienen oxígeno, muy peligroso si entra en

contacto con grasas o combustibles.

El Cloro es un gas muy tóxico. Se está indicando que lo rotulado coneste pictograma lo contiene en alguna forma, y lo hace peligroso.

Cilindro o envase que contiene gas inflamable.

Cilindro o envase que contiene gas no inflamable.

Lo rotulado contiene un líquido inflamable de tercer grado.

Indica sólidos inflamables

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Producto combustible.

Lo rotulado tiene sustancias que en contacto conhumedad, producen reacciones exotérmicas y fuego.

Producto biopeligroso.

 

ISOPROPANOL N°- CEE: 200-661-7  F

Fácilmente inflamable

RIESGOS ESPECÍFICOS:R-11 Fácilmente inflamable

CONSEJOS DE PRUDENCIA: S-2 Manténgase fuera del alcance de losniños.S-7 Manténgase el recipiente biencerrado.

S-16 Conservar alejado de toda llamafuente de o chispas. No fumar.

FABRICANTE: BROC, S.A. Av. Uno 0123 EL MART.: 900 71 71 71 Paises Unidos

DIAMANTE DE PELIGRO O ROMBO NFPA-704  CÓDIGO DE IDENTIFICACIÓN DEL PELIGROCÓDIGO DE RIESGO PARA LA SALUD 

0 Como material corriente

1 Ligeramente peligroso

2 Peligroso. Utilizar aparato para respirar

3  Extremadamente peligroso. Usar vestimenta totalmenteprotectora

4 Demasiado peligroso que penetre vapor o l íquido.

CÓDIGO DE RIESGO DE INFLAMABILIDAD 

0 Materiales que no arden

1 Deben precalentarse para arder

2 Entra en i gnición al calentarse moderada mente

3 Entra en i gnición a temperaturas normales

4 Extremadamente inflamable.

CÓDIGO RIESGO DE REACTIVIDAD 

0 Estable totalmente

1 Inestable si se calienta. Tome precauciones normales

2  Posibilidad de cambio químico violento. Utilice mangueras adistancia

3 Puede detonar por fuerte golpe o calor. Utilice monitores detrásde las barreras resistentes a la explosión

4 Puede detonar. Evacue la zona si los materiales están expuestosal fuego.

CÓDIGO RIESGO INFORMACIÓN ESPECIAL 

W Sustancia reactiva con el agua

OXY Sustancia peligrosa por ser muy oxidante.

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FireFire is the most potentially devastating emergency in the modern biology

laboratory. It is imperative that you know how to prevent fires and be

 prepared to respond should a fire occur.

Preventing fires. Use of flammable solvents is a primary cause of lab fires.Always follow these prudent practices:

Use the smallest quantities of flammable solvents

 practicable.

Store stock quantities in flammables storage cabinets.

Separate flammable solvents from sources of ignition.

 Never use a Bunsen burner in any area whereflammable solvents are handled.

Clothing fire! Help!

Your colleague just dropped a 250 ml beaker of alcohol that splashed on the bench top and the front ofhis lab coat. A nearby Bunsen burner caused thealcohol to burst into flame. What is the first thing you

should do?

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Spray with a fire extinguisher.

Pour water onto the flame to extinguish it

Help him drop to the floor and roll .

Get him to an emergency shower

Stop, drop, and roll is the fastestmethod to smother an alcohol fire.

Never use water on a solvent firebecause this will spread, rather thanextinguish, the fire.

Quemadura: inmersión en agua fría

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Minor Chemical Spill

1.Alert people in immediate area of spill.

2.Wear protective equipment, including safety goggles, gloves, and long-sleeve labcoat.

3.Avoid breathing vapors from spill.

4.Confine spill to small area.

5.Use appropriate kit to neutralize and absorb inorganic acids and bases. Collect

residue, place in container, and dispose as chemical waste.

6.For other chemicals, use appropriate kit or absorb spill with vermiculite, dry sand, or

diatomaceous earth. Collect residue, place in container and dispose as chemical waste.

7.Clean spill area with water.

Major Chemical Spill

1.Attend to injured or contaminated persons and remove them from exposure.

2.Alert people in the laboratory to evacuate.

3.If spilled material is flammable, turn off ignition and heat sources.

4.Call Chemical Spill Emergency Response number.5.Close doors to affected area.6.Have person knowledgeable of incident and laboratory assist emergency personnel

Preparation of polyacrylamide gels

• polyacrylamide gels contain highly toxic and unstable

chemicals in liquid form. Preparation and pouring of gels

should therefore be done with extreme care.

• gloves should be worn at all times when preparing

 polyacrylamide gels

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ULTRAVIOLET LIGHTExposure to ultraviolet light can cause acute eye irritation. Since the retina cannot detect

UV light, you can have serious eye damage and not realize it until 30 min to 24 hours after

exposure. Therefore, always wear appropriate eye protection when using UV lamps.

Hazards of Ultraviolet LightUV or ultraviolet lamps are used in biological safety cabinets, light boxes, and crosslinkers in many

University laboratories and in some patient care rooms. One of the problems in working with UV radiation is

that the symptoms of overexposure are not immediately felt so that persons exposed do not realize the hazard

until after the damage is done.

UV radiation is that radiation just outside the visible range, or under 400 nanometers (nm). There are three

ranges of UV (see table below).

*Early "black lights" emitted in the range of 360-390 nm.

** Increased risk of some types of skin cancer 

Region Also known as *Range in nm Hazard Potential Damage Mechanism (High Exposures)

UV-A near UV 320-400 lowest cataracts

UV-B mid UV 290-320 mid to high **skin or eye burns

UV-C far UV 190-290 highest skin or eye burns

UV exposure is not immediately felt . . . the user may not realize a hazard until after thedamage is done.

The eyes are also susceptibleto UV damage. Like the skin, the covering of the eye or the cornea, is epithelial tissue, too. The danger to the eye is

enhanced by the fact that light can enter from all angles around the eye and not only in the direction you are looking. The lens can also be

damaged, but since the cornea acts as a filter, the chances are reduced. This should not lessen the concern over lens damage however, because

cataracts are the direct result of lens damage.

Burns to the eyes are usually more painful and serious than a burn to the skin. Make sure your eye protection is appropriate for this work. There

are specially-made safety glasses for the different UV ranges. NORMAL EYEGLASSES OR CONTACTS OFFER YOU VERY LIMITED

PROTECTION!!

You must not forget to protect the rest of your face, too. Severe skin burnscan happen in a very short time, especially under your chin (where

most people forget to cover). Full-face shields are really the only appropriate protection when working with UV light boxes for more than a few

seconds.

Be sure to protect your arms and handsby wearinga long-sleeve lab coat and gloves.

Health EffectsThe biological effects of the 3 regions vary greatly as implied by the "hazard potential" column in the table. Thehealth effects of exposure to UV light are familiar to anyone who has had a sunburn. However, the UV light levelsaround some UV equipment greatly exceeds the levels found in nature. Acute (short-term) effects include redness orulceration of the skin. At high levels of exposure, these burns can be serious. For chronic exposures, there is also acumulative risk of harm. This risk depends upon the amount of exposure during your lifetime. The long-term risk forlarge cumulative exposure includes premature aging of the skin and even skin cancer.

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 polycarbonates, glass or plastic can claim to block 

100% of the UV rays.

[What makes Ethidium Bromide an excellent stain, also makesit toxic and mutagenic and should never be used withoutgloves!]

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http://www.mtas.es/insht/information/index.htm