8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 1/12

Sistem ProduksiInterferon beta 1-a

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 2/12

Tahapan• Penyiapan sel inang

• Produksi Protein

• Isolasi Protein

• Puri kasi Protein

• Karakterisasi Protein

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 3/12

Penyiapan sel inang

(1)• Preparasi D !

• D ! sisipan" wild-type human I# $-1a

(berupa % !& dilakukan transkripsi balik)• 'ektor" p S expression vector

•

Sel inang" Chinese Hamster Ovary (*+,)

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 4/12

Penyiapan Sel Inang

( )• .igasi

• /n0im restriksi" he I ot I 2glII +pa I atau 3ho I

• /n0im ligase

• Transformasi

• Presipitasi kalsium fosfatase

• /lektroporasi

• .ipofeksi

• Transfeksi retro4iral

Gambar xx. pMSG vektor (Patent#. US20040038394A1) yang digunakan u ntuk pembuatan vektorrekombinan IFN β-1a (sumber:http://www.google.com/patents/US20040038394 )

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 5/12

Penyiapan Sel Inang

(5)• Seleksi Transforman

• Sistem dihidrofolatreduktase (D+#%)

dengan resistanmetotreksat ( T3)

• Sistem glutaminsintetase ( S) denganresistan metioninsulfoksamin ( S3)

• Deteksi D !

• P*% se6uen7ing D ! Gambar xx. Ilustrasi proses s eleksi dan amplikasi

transforman (Tingfeng Lai et. al., 2013)

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 6/12

Produksi Protein• enggunakan bioreaktor

• Parameter utama" suhu (58 o*) p+ (8 9)

2at7h #ed-bat7h Perfusi

(Strotbek 915)

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 7/12

Isolasi dan Puri kasi• /ksositosis& tidak memerlukan proses lisis sel

• Pemekatan dan isolasi" ltrasi menggunakan

sistem aliran tangensial cut-of membrane 19kDa

• Puri kasi" kromatogra ltrasi gel

(menggunakan kolom Sepha7ryl 199+%)

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 8/12

Karakterisasi Protein• !nalisis protein hasil ekspresi" u:i SDS-P! /

dan western blotting& menggunakan antibodi

primer anti-rhI# -b• Penentuan pI" gel I/# (p+ 5 9-19 9)

• Kuanti kasi protein" kit /.IS! rhI# -b

• Identi kasi situs glikosilasi spesi k"sequencing dengan .*- S; S

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 9/12

2

Pemisahan sampel yang telah dimurnikan dilakukan

dengan melalui u:i SDS-P! / (!) dan <estern blot (2)

!

(Kyoung Song et al= 91>)

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 10/12

Penentuan pI dilakukan dengan analisis I/# yang

dilakukan pada rentang p+ 5-19

(Kyoung Song et al= 91>)

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 11/12

(Kyoung Song et al= 91>)

Identi kasi situs glikosilasi spesi k melaluisequencing dengan .*- S; S

8/17/2019 Sistem Produksi IFN B1A

http://slidepdf.com/reader/full/sistem-produksi-ifn-b1a 12/12

Daftar PustakaJayapal, Karthik P. et. al. 2007. Recombinant Protein Therapeutics from CHO Cells - 20 Years and Counting.

CHO Consortium, SBE Special E ition. Halaman !0"!7

Son#, Kyoun# et. al. 20$!. Gl coengineering of !nterferon-b "a !mpro#es !ts $ioph sical and Pharmaco%inetic

Properties . Plos One, %olume &, 'ssue (.

)ai, *in# +en#. et. al. 20$ . &d#ances in 'ammalian Cell (ine )e#elopment Technologies for Recombinant

Protein Production . Pharmaceuticals Journal, %olume -. Halaman (7&"-0

Camire, Joseph. 2000. Chinese Hamster O#ar Cells for the Production of Recombinant Gl coproteins . rt to

Science, %olume $&, /o. $.

Strot ek, 1ichaela. 20$ . 'icroR*&s to $oost the Producti#it of Chinese Hamster O#ar Producer Cells

https344555.research#ate.net4pu lication427&6 -7 1icro8/ s to oost the pro ucti9ity o: Chinese hamster

o9ary pro ucer cells

, iakses ( pril 20$- pukul $6.07 ;'B<.