Shigella spp. : diagnóstico y caracterización

María Rosa Viñas

Servicio EnterobacteriasINEI-ANLIS “C.G.Malbrán”

Especialización en Bacteriología Clínica – UNNE12-13 de junio 2015

Familia Enterobacteriaceae. Género: Escherichia

Escherichia coli

Escherichia fergusonii

Escherichia hermannii

Escherichia vulneris

Escherichia blattaeEscherichia blattae

Género: Shigella

Shigella dysenteriae

Shigella flexneri

Shigella boydii

Shigella sonnei

GÉNERO SHIGELLA* Gram negativos, anaerobios facultativos, no esporulados, no móviles de la

familia ENTEROBACTERIACEAE, no produce gas a partir de carbohidratos .

El género se diferencia en cuatro especies y esta separación se basa en caracteres bioquímicos y antigénicos.

Shigella dysenteriae, serogrupo A: 13 serotipos.(*)

Shigella flexneri, serogrupo B: 8 serotipos. (*)Shigella flexneri, serogrupo B: 8 serotipos. (*)

Shigella boydii, serogrupo C: 20 serotipos. (*)

Shigella sonnei, serogrupo D: 1 serotipo.

(*) La cantidad de serotipos por grupo cambia cuando se definen nuevos serotipos.

(*) En el marco de un grupo de trabajo a nivel internacional se estáconsensuado la nomenclatura de la nueva variante emergente de S. flexneri

Infección por Shigella spp.

� La shigellosis está distribuída en todo el mundo, endémica en países tropicales y de clima templado incidencia en verano.

� Riesgo para viajeros que se trasladan hacia áreas endémicas .

� Brotes en condiciones de hacinamiento y falta de saneamiento en cárceles, hospitales psiquiátricos, geriátricos, campamentos y a bordo de embarcaciones.

� Shigella: único huésped el ser humano y a los primates.

� Se transmite de persona a persona por la vía fecal-oral o por alimentos contaminados, el vector de transmisión son las moscas y/ o aguas estancadas.

� Altamente infecciosa por la ruta oral, la ingestión de 10 a 100 organismos.

� Shigella no es de notificación obligatoria pero a través del SNVS de Argentina, módulo laboratorio SIVILA, permite una vigilancia del mo.

La mayor parte de los casos positivos para diarreas bacterianas se debieron a Shigella

(4116) con predominio de S. flexneri , seguido por Salmonella , Escherichia coli . SIVILA

2014

SHIGELLOSIS – PRESENTACION CLINICA

� Diarrea acuosa asociada con vómitos y deshidratación leve a moderada.

� Disentería caracterizada por pequeños volúmenes de materia fecal con sangre, mucus y dolor abdominal.

Disentería: consecuencia de la invasión de la mucosa colónica, multiplicación y muerte celular, inflamación y ulceración de la mucosa con la consiguiente y muerte celular, inflamación y ulceración de la mucosa con la consiguiente aparición de sangre en materia fecal.

� Complicaciones posteriores a una Shigellosis : bacteriemia, convulsiones y problemas neurológicos, artritis reactiva

( pacientes inmunocomprometidos, niños y ancianos) .

� Infección por Sh. dysenteriae serotipo 1: tasa de letalidad del 20% causando las más severas disenterías debido a su potente toxina Shiga , exotoxina termolábil que afecta el intestino y el SNC, y contribuir a la gravedad extrema de la infección.

INVASION POR SHIGELLA

GENE GLOBE PATHWAYS

U1

Diapositiva 7

U1 Usuario, 28/08/2014

FLUJOGRAMA PARA EL AISLAMIENTO DE Shigella (Muestra clínica)

MUESTRA (Hisopo enCary Blair)

Suspensión salina

Coloración de Gram

Observación en fresco

MacConkey, EMB, SS, Hektoen, XLDMacConkey, EMB, SS, Hektoen, XLD

Colonias típicas

TSA TSI LIA

P. Bioquímicas Serotipificación

• El género Shigella es un género bioquimicamente poco reactivo; presenta las propiedades indicadas en

TABLA IV. Las placas de medio selectivos y diferenciales : agar McConkey y agar EMB a 37ºC, 18 a 24 horas.

Las colonias características, se siembran en estría de TSA , TSI y LIA, a 37ºC , 18 a 24 hs. •TSI: -K/A, LIA: -K/A pruebas mínimas

Prueba Bioquimica Shigella spp.

SH2 -

Glucosa (gas) -

Glucosa (ácido) +

Movilidad -

Citrato Simmons -

Adonita (fermentación) -

Malonato (utilización) -

Voges-Proskauer -Voges-Proskauer -

Arginina dehidrolasa -

Lisina decarboxilasa -

Ornitina decarboxilasa - ó + (S. sonnei)

Salicina (fermentación) -

Lactosa (fermentación) -

Urea (hidrólisis) -

Sacarosa (fermentación) -

Xilosa (fermentación) -

Fenilalanina deaminasa -

Inosita (fermentación) -

Rojo de metilo +

+ 90% o más en 1-2 días; - + 90% o más en 1-2 días

� TSI alcalino/ácido sin gas, LIA alcalino/ácido, SIM (- v -), acetato negativo, urea negativa.

Serología para Shigella: pobre o negativa; estos cultivos se deben calentar a 100º C.

� TSI alcalino/ácido con gas, LIA alcalino/ácido,

ATIPIAS

� TSI alcalino/ácido con gas, LIA alcalino/ácido, SIM (- - -), acetato negativo, urea negativa.

Se debe realizar serología para Shigella, porque hay ciertos serotipos de Sh. dysenteriae,

Sh flexneri y Sh. boydii que pueden producir gas a partir de glucosa.

� Shigella sonnei ONPG negativas, lactosa -

Especie D-Manitol ONPGOrnitina

decarboxilasa

*Sh. dysenteriae - - -

TABLA . Caracteres Bioquímicos Diferenciales entre especies de Shigella

**Sh. flexneri + - -

***Sh. sonnei + + +

Sh. boydii + - -

Utilización de Azúcares, pruebas orientativas para la diferenciación a nivel de especie de Shigella :

Dulcita, Xilosa, Ramnosa, Rafinosa y Glicerol (Tabla con % ) Ej. S. boydii utiliza xilosa ó ducitol, glicerol ,

S sonnei utiliza rafinosa , rhamnosa, permite diferenciar de otros subgrupos ó especies

• S. dysenteriae 1 son ONPG +, ** S. flexneri fermenta manitol, excepciones:• S. flexneri 4 y 6 variedades S. flexneri manitol-negativo , *** S. sonnei ONPG –

Prueba Bioquímica Shigella Escherichia

coli

Indol - o + +

Lisina decarboxilasa - +, (+), -

Ornitina decarboxilasa - o + +, (+), -

Arginina dehidrolasa - , +, (+) (+), +, -

Mucato (utilización) - +

Acetato (utilización) - + , (+)

Citrato Christensen - +, (+), -

TABLA . Caracteres Bioquímicos Diferenciales entre Shigella y E. coli.

Citrato Christensen - +, (+), -

Glucosa (gas) - +

Lactosa (fermentación) - , (+) +

Sacarosa

(fermentación)

- , (+) +, (+), -

Salicina (fermentación) - +, (+), -

Movilidad - + ó -

+ 90% o más en 1-2 días; (+) luego de 3 o más días; - 90% o más, + o – mayoría de cepas positiva, - o + mayoría de cepas

negativa

Edwards and Ewing´s Identification of Enterobacteriaceae”, 4th. Edition

* Las pruebas del acetato y mucato tienen considerable valor para

diferenciar ambos géneros:

Prueba Bioquímica *Shigella Escherichia

coli

**Escherichia

coli inmóvil

Acetato (utilización) - + + ó -

Mucato (utilización) - + + ó -

Glucosa c/gas - + -

SIM -, -, - -,+, + - ,+, - ó -, -, -

Citrato Christensen - - ó + + ó -

*S. flexneri 4: suele utilizar acetato como fuente de carbono positivo 2-7 días reacción

débil (confirmar por PCR)

** biotipos E.coli no móviles anaerógenos, lactosa - en TSI : K/A similar a Shigella

+ : 90% o más en 1-2 días; - : 90% o más, + o – mayoría de cepas

positiva, - o + mayoría de cepas negativa

FIGURA Flujograma de Serotipificación para Shigella spp.

Cepa con características bioquímicas de Shigella

Estria en TSA

Aglutinación con solución fisiológica

Negativa Positiva

Aglutinación con OShB Cepa rugosa

Negativa Positiva Sh. flexneri(se prueban serotipos 1 a 6)

PCR Múltiple para S. flexneri

Aglutinación con OShD

Negativa Positiva Sh. sonnei

Aglutinación con OShC

Negativa Positiva Sh. boydii(se prueban serotipos indol + y --

Aglutinación con OShA

Negativa Positiva Sh. dysenteriae(se prueban serotipos indol + y -Calentar (ver pág.13)

� Shigella spp.: primer agente de origen bacteriano por SIVILA y asociado a brotes comunitarios.

� Mejorar la detección de fuente de infección con técnicas sensibles y/ó medidas oportunas .

�En el marco de la RND* Uso del antisuero AA479 como screening de este nuevo subserotipo de S. flexneri cuya sero -prevalencia aumentó en el país en los últimos años.

200

300

400

Distribución de serotipos de S. flexneri LNR, Enero 2007 a Diciembre 2010

S. flexneri atípicas

S. flexneri 2

S. flexneri 3

N Aislamientos de Shigella flexneri Serotipos de S. flexneri

Vigilancia desde el LRN: S. flexneri atípicas (no tipables): 1,7% en 2008 y 16% en 2009, reconocidos por 1ra vez en tres provincias (N, RN y La Pampa) y luego en el resto del país alcanzando un 30,4% en 2010.

� Caracterizar feno-genotípicamente una selección de aislamientos de S.flexneri atípicos emergentes en Argentina y estudiar el comportamiento epidemiológico de esta variante desde su reconocimiento en el país.

0

100 S. flexneri 1

S. flexneri 6

S. flexneri 4, 5, X e Y2007 2008 2009 2010

S. flexneri atípicas – análisis PFGE

PFGE- NotI: relación genética de aislamientos de S. flexneri atípicos y cepas de

serotipos variantes X, Y and tipo 4.

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-NotI

100

90

80

70

PFGE-NotI

SF461/10

SF478/09

SF564/09

SF66/10

SF1241/10

SF412/09

SF1460/10

SF612/10

Jujuy

Neuquén

Neuquén

Jujuy

Salta

Neuquén

Río Negro

Río Negro

2010-01-04

2009-07-01

2009

2009-11-20

2010

2009

2010-04-10

2010-02-09

ARJZXN11.0019

ARJZXN11.0019

ARJZXN11.0019

ARJZXN11.0019

ARJZXN11.0022

ARJZXN11.0012

ARJZXN11.0028

ARJZXN11.0028

Atypical

Atypical

Atypical

Atypical

Atypical

Atypical

Atypical

Atypical

Isolate State Isolate Date NotI-PFGE pattern S. flexneri

serotype

SF617/10

SF493/09

SF479/09

SF571/09

SF2080/09

SF730/09

SFB67X-1

SF1004/09

SF465/10

SF294/09

SF743/09

SFB4a-1

SF472/09

SFB69Y-1

SF2029/09

SFB4a-6

SF1944/06 .

Río Negro

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Río Negro

ND

Tucumán

Jujuy

Buenos Aires

La Pampa

ND

La Pampa

ND

Río Negro

ND

CABA

2010-02-13

2009-07-01

2009

2009

2009

2009-07-01

ND

2009-07-01

2010-05-05

2009

2009-07-01

ND

ND

ND

2006

ARJZXN11.0028

ARJZXN11.0010

ARJZXN11.0006

ARJZXN11.0007

ARJZXN11.0033

ARJZXN11.0026

ARJZXN11.0084

ARJZXN11.0045

ARJZXN11.0024

ARJZXN11.0080

ARJZXN11.0039

ARJZXN11.0054

ARJZXN11.0046

ARJZXN11.0072

ARJZXN11.0133

ARJZXN11.0044

ARJZXN11.0136

Atypical

Atypical

Atypical

Atypical

Atypical

X variant

X variant

Atypical

Atypical

Atypical

Atypical

4a

Y variant

Y variant

Y variant

4a

4a

* Shigella flexneri nomenclature updated.August, 2014

Caracterización feno-genotípica de una selección de S. flexneri atípicas?

Study of agglutination assay with:

Biochemical assays:

Acetate / mannitol / Indol

Resistant to:

AMP-SXT

Results of PCR a ssays

S.

flexneri Serotype

Typing S.

flexneri IV sera (INPB)

Typing S.

flexneri IV sera

(DS)

Grouping

3,4 sera

(INPB &

DS)

Grouping 6 sera

(INPB & DS)

Grouping 7,8 sera (INPB &

DS)

AA479 antisera

MASF IV-1

antisera

gtrIV gtrX set1-B sen

4a + + + - - - - - / + / - S / S + - - -

4a + + + - - - - - / + / - S / S + - - +

4a + + + - - - - + / - / + R / R + - - +

Y - - + - - - - - / + / - S / S - - + +

Y - - + - - - NR - / + / - S / R - - + +

Y - - + - - - - - / + / - S / S - + - -

X - - - - + - - - / + / - R / R - + - +

X - - - - + - - - / + / - R / R - + - +

Caracterización fenotípica Car. genotípica PCR

X - - - - + - - - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - -

“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + NR - / + / + R / R - + - +

“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + + - / + / + R / R - + - +

“atypical” - + - - + + + - / + / + R / R - + - -

“atypical” - + - - + + NR - / + / - S / S - + - +

“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + + - / + / - R / R - + - +

“atypical” - + - - + + NR - / + / - R / R - + - +

NR: no determinado Mab MASF IV-1, Dr Kaisar Talukder, icddr,Bangladesh

m5m6

Diapositiva 18

m5 mpichel, 03/06/2013

m6 mpichel, 03/06/2013

� La adición de residuos

glucosil, acetil o fosfoetanolamina a

los ázúcares del antígeno-O resulta

en determinantes antigénicos:

� de “tipo” (I, II, III, IV, V,VI) específicos de un serotipo

Bases de la seroconversión en S. flexneripara diseño de PCR

específicos de un serotipo

� de “grupo” (3,4; 6; 7,8; E1037) pueden estar presentes en mas

de un serotipo.

* En su conjunto definen un serotipo y subserotipo

Gwen E. Allison and Naresh K. Verma, 2000, Trends in Microbiology

Serotipificación molecular:*Validación PCR Múltiple, con grupo colaborativo de trabajo compuesto por

5 laboratorios de referencia (USA, Inglaterra, Bangladesh, China, Hong Kong y

Argentina). Set de muestras ensayadas incluyó aislamientos de distintas regiones y

autóctonos de cada país.

PCR múltiple para la identificación de todos los serotipos descriptos al 2014, incluyendo la variante de S. flexneri X (AA479)

Ye et al, JCM, 2012

Target gene Amplicon size (bp)

Contentración

en la Mix de primers

Concentración en la

reacción Serotype specificity

wzx1-5 782 2 µM 0.2 µM Todos excepto 6

gtrI 1122 2 µM 0.2 µM 1a, 1b, 1c

gtrII 1272 2 µM 0.2 µM 2a, 2b

oac 604 2 µM 0.2 µM 1b, 3a, 3b, 4b

gtrIV 378 2 µM 0.2 µM 4a, 4av, 4b

Desde el LRN: Flujograma de PCR múltiple para serotipos de Sh. flexneri( en desarrollo y validación )PCR 1: a) Primer MIX 1:

Target gene Amplicon

size (bp)

Contentración

en la Mix de primers

Concentración en la

reacción Serotype specificity

gtrX 425 2 µM 0.2 µM 2b, 3a, 5b, X, Xv

gtrIC 518 2 µM 0.2 µM 1C (propuesto como serotipo

7)

lpt-O 1098 4 µM 0.4 µM Xv,Yv,4av

PCR 2: b) Primer MIX 2:

gtrIV 378 2 µM 0.2 µM 4a, 4av, 4b

gtrV 905 2 µM 0.2 µM 5a, 5b

� PCR como técnica alternativa al flujograma

diagnóstico de Shigella flexneri

Validación intralaboratorio con cepas controles y autóctonas recibidas en el LRN

PCR 1Wzx 1-5 782 pb

oac 604 pb

gtrII 1272 pb gtrI 1122 pb

gtrIV 378 pb

gtrV 905 pb

Implementación de PCR Múltiple para Shigellaflexneri

PCR 2lpt-O 1098 pb

gtrX 425 pbgtrIC 518 pb

M marcador de peso molecular 100 pb

Cepas control para PCR Múltiple para S. flexneri (validación interlaboratorio)

PCR 1 (arriba) y PCR 2 (abajo)

Calle Strain Controles Genes

Amplicons sizes

(bp)

2 S. flexneri 1b CDC_China 45 gtrI, wzx1-5, oac 1222, 782, 604

3 S. flexneri 2b CDC_China 46 gtrII, wzx1-5, gtrX 1272, 782, 425

4 S. flexneri 4b CDC_China 47 wzx1-5, gtrIV, oac 782, 604, 378 4 S. flexneri 4b CDC_China 47 wzx1-5, gtrIV, oac 782, 604, 378

5 S. flexneri 5a CDC_China 48 gtrV, wzx1-5, oac 905, 782, 604

7 S. flexneri

Xv CDC_China 49 lpt-O, wzx1-5, gtrX, 1098, 782, 425

8 S. flexneri Ic HPA, UK_1C gtrI, wzx1-5, gtrIC 1122, 782, 518

9 S. flexneri 6 CDC_China 50 wzx6 739

� Estudios epidemiológicos señalan al agua como fuente de infección, vegetales crudos, frutas, mariscos , manipulador de alimentos, etc.

Sobrevida en el agua es limitada (horas a días) , depende de la cantidad de contaminación, temperatura del agua (susceptible a clorinación, luz UV )

Requerimiento de Técnicas sensibles para la

detección en muestras de agua

Métodos rápidos: Ensayos de PCR estandarizados para Shigella spp. para muestras

Nombre de la

TécnicaBlanco Método Tipo de muestra Requerimientos.

Tiempo de

procesamiento

Especificidad /

Sensibilidad

ipaH ( Antígeno

PCR simple

Prueba de tamizaje

Muestras de agua y

cepa aislada

Detección en

muestras de agua a

partir de caldo de

enriquecimiento GN,

E: Shigella spp.

/EIEC

PCR Shigella spp. /

EIEC

(E. coli

enteroinvasivo)

ipaH ( Antígeno

plasmídico de

invasión)

(Hartman et al,1990)

enriquecimiento GN,

luego de 18 h de

incubación a 37°C

Detección preliminar

del aislamiento a

partir de TSA, luego

de 24 h de incubación

a 37°C

� PCR a partir de caldo GN el gen ipaH

* codifica una proteína involucrada en el proceso de invasión de las células epiteliales y está presente en varias copias en el plásmido de 140 MDa de Shigella spp. y a nivel cromosomal, presente en aislamientos de E. coli enteroinvasivo (EIEC)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 M

ipaH 619 pb

Fig 1. Gel de electroforesis de PCR ipaH a partir de caldo de enriquecimiento de muestras de agua inoculadas experimentalmente.Calle 1: agua sin inocular, Calle 2: 1- 10UFC (fallo amplificación, pero en este punto tuvimos problemas con el filtro

y perdimos muestra), Calle 3: 10-100 UFC, Calle 4: 100-1000 UFC, Calle 5: Shigella flexneri 4a (1944/06), cepa

Control positivo , Calle 6: agua sin inocular , Calle 7: 1- 10UFC con tritón (fallo amplificación), Calle 8: 10-100

UFC con tritón, Calle 9: 100-1000 UFC con tritón, Calle 10: Shigella flexneri 4a (1944/06), cepa Control positivo.,

Calle 11: Shigella flexneri, cepa control positivo, Calle12: Shigella flexneri, cepa Control positivo, Calle13: Shigella

flexneri, cepa control positivo, Calle 14: Control de reactivos

ipaH 619 pb

* Se notificaron al LRN 2009 al 2014:

• Brotes: 17 de Shigella sonnei y

14 de Shigella flexneri

• De los brotes estudiados se recuperó de:• De los brotes estudiados se recuperó de:

crema de almendras y se sospechó de agua dered, verdura entre otros.

• 2009 Se implementó un estudio prospectivo para

detección temprana de brotes en colaboración con la

Univ de Harvard, USA (Proyecto MIDAS) en seis

provincias de la región centro-sur.

* En Desarrollo y proyectos futuros

� La transferencia en el marco de la RND de una PCR validada para serotipificación molecular de Shigella flexneri

( 2, 1, 3, 4, 5 y 6 ,variante X e Y ;inclusive plásmido gen lpt-O;

S. flexneri AA479).

� Incorporación de S. flexneri atípica en la taxonomía con una nueva nomenclatura según consenso a nivel internacional:nueva nomenclatura según consenso a nivel internacional:Shigella flexneri nomenclature updated. Scheme for serotypes

designation based on the use of monoclonal and polyclonal antisera and PCR.

Proposals of Dr. Kaisar, Dr. Xu and Dr. Sun to be discussed by the working group

Aug, 2014

Shigella flexneri Xb?

� Secuenciación de nuevas variantes emergentes

PFGE-XbaI

100

90

PFGE-XbaI

SS418/13

SS419/13

SS200/13

SS202/13

SS206/13

SS207/13

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Human

Human

Human

Human

Human

Human

2 013-03- 03

2 013-03- 04

2 013-03- 16

2 013-02- 13

2 013-02- 17

2 013-02- 19

MAL E

MAL E

FEMALE

MAL E

MAL E

MAL E

3

2

2

2

4

7

ARJ16 X01.0078

ARJ16 X01.0078

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

Nº aislamiento Origen Fecha aislamiento Sexo Nº patrón Tipificación

Shigella sonnei, recuperados de Febrero y Marzo del 2013 en la ciudad de Trelew, provincia de Chubut.

� Los aislamientos presentaron un perfil fenotípico atípico para S. sonnei,negativos para la prueba de ONPG (o-nitrofenil-β-D-galactopiranósido)

SS207/13

SS413/13

SS414/13

SS415/13

SS416/13

SS417/13

SS424/13

SS425/13

SS426/13

SS420/13

SS204/13

SS423/13

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

2 013-02- 19

2 013-02- 25

2 013-02- 27

2 013-02- 28

2 013-02- 28

2 013-03- 01

2 013-03- 12

2 013-03- 13

2 013-03- 16

2 013-03- 04

2 013-02- 15

2 013-03- 09

MAL E

MAL E

MAL E

MAL E

MAL E

MAL E

FEMALE

MAL E

FEMALE

FEMALE

FEMALE

MAL E

7

4

8

5

7

8

8

6

12

5

4

11

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0047

ARJ16 X01.0406

ARJ16 X01.0408

ARJ16 X01.0407

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

B gal (-)

Figura 1. Dendograma de relación genética de aislamientos de S. sonnei ONPG (neg) deorigen humano recuperados en Trelew en febrero y marzo de 2013. Se recuadran los

aislamientos con el mismo patrón de PFGE. PFGE con XbaI.

� El patrón ARJ16XO1.0047, 14% de frecuencia en la BDN, subtipo genético que incluyó aisl. de distintas

provincias del país y de distintos años, entre ellas Catamarca 2012; Buenos Aires 2008,2011 y 2012; Córdoba 2010 y

2012; La Pampa 2009; Neuquén 2009; Salta 2005; Jujuy 2011 y Río Negro 2009.

PFGE-B lnIPFG E-Xba I

SS1392 /12

SS1393 /12

SS1394 /12

Lu jan

Lu jan

Lu jan

Human

Human

Human

2012-07-09

2012-07-09

2012-07-12

ARJ16X 01.0370

ARJ16X 01.0370

ARJ16X 01.0370

Nº aislamiento Ciudad Origen F. aislamiento Patrón XbaI

� S. sonnei asociados a un brote familiar:� PFGE demostró la relación genética entre los aislamientos, confirmó el

estudio epidemiológico que evidenció la exposición de los pacientes a una

misma fuente de infección:

� Aislamiento de la cubierta de crema de almendras(una rosca vienesa de elaboración artesanal)

SS1395 /12

SS1396 /12

SS1397 /12

Lu jan

Lu jan

Lu jan

Human

Human

Food

2012-07-12

2012-07-12

2012-07-08

ARJ16X 01.0370

ARJ16X 01.0370

ARJ16X 01.0370

Figura 1. Dendograma de relación genética de aislamientos de S. sonnei recuperados en Luján en juliode 2012 con XbaI. Todos los aislamientos mostraron 100% de similitud.

Esto fue posible por la oportunidad en la investigación del brote y en la toma de muestras

Figure . Dendrogram showing the genetic relatedness of S. sonnei SXT resistant isolates included in the Event 7.

Figure 3. Dendrogram showing the genetic relatedness of S. sonnei SXT resistant isolates included in the Event 7.Isolates recovered in Santa Rosa, La Pampa in January – February 2010. The rectangle highlights the 7 S. sonnei isolates with an indistinguishable PFGE pattern which had not previously been recorded in the National Data Base (NDB). The remaining 7 isolates identified statistically and epidemiologically as part of Event 7, exhibited high genetic relatedness (from 91.4 to 97.4% similarity, 1 to 3 bands of difference) to the most frequent pattern within the event, confirming the relation of the cases.http://www.plosntd.org/article/info:doi/10.1371/journal.pntd.0002521

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