Rukovanje laboratorijskim životinjamaRukovanje laboratorijskim životinjama

Doc. dr. sc. Vesna BenkovićZavod za animalnu fiziologijug j

Biološki odsjekPrirodoslovno-matematički fakultet

Rooseveltov trg 6g10000 Zagreb

• Smanjenje napetosti životinja i istraživača te opuštena atmosfera u laboratoriju d j t j h i t k l b t ij ki ži ti jpreduvjet je za humani postupak prema laboratorijskim životinjama.

• značajne razlike pri rukovanju i obuzdavanju različitih vrsta životinja u laboratorijulaboratoriju

• Principi: - nježno ali čvrsto rukovanje životinjom, - polagan ali odlučan pristup životinji bez naglih pokreta,

k š k d k b k l - korištenje rukavica za jednokratnu uporabu, pranje ruku prije i poslije rukovanja, čista zaštitna odjeća

- korištenje odgovarajuće tehnike

• često rukovanje čini ih poslušnijima

• veliki broj uređaja i pomagala za manipulaciju laboratorijskim životinjama ( l k i l ili d i fl k ibil t t ći k blik i d )(pleksiglas cilindari, fleksibilna transparentana vrećica konusnog oblika i dr.)

Štakori

• pozitivno reagiraju na blago rukovanje. • sklonost za skrivanje i uvlačenje u male prostore • nije potrebno koristi kožne ili slične teške rukavice – smanjena spretnost nije potrebno koristi kožne ili slične teške rukavice smanjena spretnost

(nervozna ili agresivna životinja može se uhvatiti uz pomoć ručnika ili tkanine)

Postupak

1. podizanje hvatanjem baze repa

2. hvatanje štakora u području prsnog koša 2. hvatanje štakora u području prsnog koša i sprečavanje okretanja glave i ugriza (životinje ne bi trebalo prečvrsto držati kako bi mogle nesmetano disati)

Miševi

1. hvatanje za rep blizu baze repa 2. stavljanje na čvrstu površinu 3. prihvaćanje za višak kože na vratu i leđima palcem i kažiprstomp j p p4. prihvaćanje repa životinje malim prstom 5. rotacijom ruke životinja leži u dlanu imobilizirana za pregled ili

manipulaciju

Zamorčić

Kunić

Metode identifikacije životinjaMetode identifikacije životinja

• Metode:1 i bilj ž j dij l tij l t i k i • 1. privremeno obilježavanje dijelova tijela - permanentnim markerima, brijanjem dlake na pojedinim dijelovima tijela

2. trajno

– tetoviranje, ušne markice i dr. - uobičajeno se koristi kod glodavaca (štakori uši i rep; kunići uši) i svinja.

- Lokalna anestezija (pilokain-lidokain krema) uz mogućnost sedacije ili opće anestezije

Tetoviranje - prednost kod neonatalnih životinja- smještanje boje u dermalni dio kože

Bušenje ili zarezivanje uška

– glodavci štakori miševi kunići

- svinje (neonatalne)

Ugradnja mikročipova - subkutano

Određivanje spola – na temelju udaljenosti spolnog i analnog otvora

AdministracijaAdministracija anestetikaanestetika ii ispitivanihispitivanih tvaritvariAdministracijaAdministracija anestetikaanestetika ii ispitivanihispitivanih tvaritvari

• Aplikacija tvari - injekcija (parenteralno) anestetici i analgetici te testirane tvari

- sonda per os

- preduvjet pravilno obuzdavanje

- Doziranje i volumen tvari obzirom na vrstu životinje koja se koristi, vrstu i svojstvaj j j , jtvari koje se daju, mjesto aplikacije i dr.

- Veličinu šprica i igla treba pažljivo odrediti kako bi smanjilo i spriječilo oštećenje tkiva iosigurala točna primjena neke tvariosigurala točna primjena neke tvari.

PARENTERALNA PRIMJENA

I t d l (i t t )Intradermalno (intracutano)

- Mjesto aplikacije mora biti obrijanoPotrebna lokalna ili generalna anestezija - Potrebna lokalna ili generalna anestezija

Postupak: 1 Kožu primiti prstima i nježno uvesti iglu u dermis1. Kožu primiti prstima i nježno uvesti iglu u dermis2. Na mjestu injektiranja nastaje mjehurić

SubkutanoSubkutano

- Količina tekućine ograničena na količine koje neoštećuju kožu

t tik ili t k ći l ž j tij k k- anestetik ili tekućina za vlaženje tijekom oporavkaiz anestezije.

Postupak: p1. Podigniti kožu Umetniti iglu i držati je paralelno s tijelom životinje kako bi se izbjeglo i probijanje temeljne strukture.

2. Aspirirajti ksko bi se osiguralo da igla nije ušla u krvnu žilu.

3. Ubrizgati punu količinu tekućine umjerenom brzinom

4 Izvući iglu i pritisniti kožu kako bi spriječili izlazak4. Izvući iglu i pritisniti kožu kako bi spriječili izlazak tekućine

plik - mjehur tekućinep j

Višestruka aplikacija

Intramuskularno

- mala količina tvarić št ć j išić- moguće oštećenje mišića

Intramuskularna injekcija u lumbalni mišić kunića

Intravenski

• Glavna funkcija vena je termoregulacija pa će primjena topline na cijelu životinju ili lokalno na rep uzrokovati venodilataciju i olakšati pristup krvnoj žili i aplikaciju tvari.

• Aplicirati bi trebalo polako kako bi se izbjeglo preopterećenje cirkulacije ili ruptura vene. Aplicirati bi trebalo polako kako bi se izbjeglo preopterećenje cirkulacije ili ruptura vene. • Primjena ove tehnike kod štakora može biti otežana ljuškavošću repa.

Postupak:Postupak

1. Ugrijati životinju (paziti na pregrijavanje) ili samo rep

2 Od h k ij j ži ti j j titi t l k2. Odmah nakon zagrijavanja životinju smjestiti u stalak

3. Obrisati rep akoholom (70%)

4. Iglom uči u repnu venu (oko 3 mm) negdje na polovini repaNE ASPIRIRATI dovodi do kolapsa vene

5 P l i ji i ti5. Polagano injicirati

Ako injiciranje ide teško ili se stvara oteklina j jponoviti postupak neposredno iznad prvog pokušaja

Injekcija u bočnu ušnu venu

Intraperitonealno

• u prostor oko abdominalnih organa (treba izbjegavati injekciju izravno u organ)u prostor oko abdominalnih organa (treba izbjegavati injekciju izravno u organ)

Postupak:1. dobro obuzdati životinju – ne može se kretati tijekom postupka. (izbjegavanje

t ti i j k d j j d i l j šl t b h)traumatiziranja organa kada je jednom igla je ušla u trbuh).

2. Umetniti iglu u trbuh pod kutem 30 stupnjeva.Vrh igle treba ući na dubini od oko pola centimetra.Vrh igle treba ući na dubini od oko pola centimetra.

3. Aspirirati kako bi bili sigurni da igla nije prodrla u krvnu žilu, crijeva, ili mokraćni mjehur.

4. Ubrizgati.5 I ći i l i titi iš 5. Izvući iglu i vratiti miša

u kavez.

ORALNA PRIMJENA

iglu odabrati prema veličini miša iglu odabrati prema veličini miša.

Postupak:1 Izmjeriti dužinu igle do zadnjeg rebra miša 1. Izmjeriti dužinu igle do zadnjeg rebra miša,

što ukazuje na poziciju želucu. Označi mjesto na igli.

2. anestezirati miša inhalacijskim anestetikom u 2. anestezirati miša inhalacijskim anestetikom u indukcijskoj komori (budan miš mogućnost traume jednjaka).

3. primiti miša čvrsto, povlačenjem opuštene p , p j pkože prema gore. Držati mu glavu u ravnini s jednjakom.

4. Umetnuti iglu iza sjekutića i usmjeriti prema j j pstražnjem dijelu grla i niz jednjak. Igla mora prolaziti lagano. Tijekom postupka, pratiti boju miša na sluznici. Ako miš postaje

č k kl bl k d cijanotičan opstrukcija grkljana i blokada disanja.

5. Ubrizgavati polako.6 I ći i l 6. Izvući iglu ravno prema van.

.

volumen tvari i mjesto aplikacije obzirom na vrstu životinje

Vrsta Subkutano Intraperitonealno Intramuskularno Intravenski Oralno(ml)

p(ml) (ml) (ml) (ml)

Miš (25g)

0,25 0,5 0,05 0,125 (25ml/kg*)

0,25

ŠŠtakor (200g)

1 2,0 0,1 1 (20ml/kg*) 2

Zamorčić(200g)

1 2 0,1 40 (10ml/kg*)

2(200g) (10ml/kg )Kunić (4 kg)

4 20 1 40 (10ml/kg*)

15

Svinja 25 25 6,25 125 150Svinja(25 kg)

25 25 6,25 125(25ml/kg*)

150

UZIMANJE UZORAKA KRVI

neophodno za određivanje: hematoloških i biokemijskih parametara farmakokinetike neophodno za određivanje: hematoloških i biokemijskih parametara, farmakokinetike, imunološkog statusa organizma, kliničke patologije itd.

metode: iz vena, iz arterija, iz orbitalnog sinusa, iz srca i dr. j g

Izbor metode ovisi o: svrsi prikupljanja krvi, potrebe za arterijskim ili venskim uzorkom krvi, učestalosti uzimanja uzoraka, te je li eksperiment terminalan za životinje životinje.

pod anestezijom - imobilizacija i smanjenje boli

metode za uzimanje uzoraka krvi u svjesnih životinja - mogućnost za stres-inducirane učinke na biokemijske parametara.

Volumen prikupljene krvi od životinja koje moraju preživjeti postupak je ograničen kako bi Volumen prikupljene krvi od životinja koje moraju preživjeti postupak je ograničen kako bi se spriječilo stanje anemije i hipovolemija.

Volumen krvi procjenjuje se na temelju tjelesne težine.

pravilo 1-3-6 prosječni volumen krvi 6% tjelesne težine (60 ml/kg), najveći volumen krvi iz žrtvovanih životinja je 3% tjelesne težine (30 ml/kg) najveći volumen krvi iz žrtvovanih životinja je 3% tjelesne težine (30 ml/kg), najviše 1% tjelesne težine (10 ml/kg) može biti prikupljeni tijekom bilo kojeg razdoblja od dva tjedna kod životinja koje prežive eksperimentalne postupke.

Uzimanje uzoraka iz repne vene

ć d l ć č š k k l h k l č k - općenito zadovoljavajući način za višekratno prikupljanje manjih količina krvi.

Repne vene korisne su za prikupljanje male količine (<0,1 ml) krvi.

Tehnika venepunkcije slična je tehnici i.v. injekcije jer mali volumen krvi uvlačimo u štrcaljku umjesto da ubrizgavamo neku tvar.

Moguće je i korištenje igle bez šprice, a prikupljena krv se skuplja u određeni spremnik (cjevčica za mikrohematokrit ili vacutainer).

Uzimanje uzoraka krvi iz bočne vene saphene

ne zahtijeva anesteziju- ne zahtijeva anesteziju

- vidljivost vena može biti poboljšana perifernom vazodilatacijom (učinak anestetika).

Postupak: 1. obrijati bedro

2 podvezati venu (štrcaljaka i deblji konac) ne prečvrsto niti predugo oštečenje tkiva2. podvezati venu (štrcaljaka i deblji konac) ne prečvrsto niti predugo - oštečenje tkiva zbog ishemije.

3. Venu probušiti perkutano i krv se skupljati na koži.p p p j

Uzimanje uzoraka iz aksilarnog spleta krvnih žila

- Kirurška narkozaKirurška narkoza

Postupak:1 Odvojiti kožu velikog područja oko pazuha oštrim škarama ili skalpelom1. Odvojiti kožu velikog područja oko pazuha oštrim škarama ili skalpelom

2. usjeći duboko u pazuhu - kidanje glavne žile

3. Pomoću kapalice sakupiti krv

3 Na kraju postupka eutanazirati životinju 3. Na kraju postupka eutanazirati životinju cervikalnom dislokacijom

• Punkcija karotide

• odvojiti kožu u velikom području na vratuj p j• Duboko zasjeći škaricama ili skalpelom – presjeći karotidu• Sakupiti krv kapalicom• Eutanazirati životinju

• Punkcija abdominalne aorte• Kirurška narkoza• Izolirati abdominalnu aortu• Iglom punktirati aortu i sakupiti krv (sterilan uzorak krvi)• Eutanazirati životinju• Eutanazirati životinju

Uzimanje uzorka krvi iz mandibularnevene

Punkcija retro-orbitalnog sinusa

- opća anestezija - veća količina krvi iz preživjelih životinja

Postupak:1. Mikrohematokrit kapilarom ući u orbitalni sinus2. Krv sakupiti u vacutainerp

krv ne bi trebao prikupljati iz istog oka više od 3 puta, u razmaku od najmanje 1 tjedan između krvarenja.

Punkcija srca

ik lj j lik k liči k i za prikupljanje velike količine krvi.

opća anestezija, a nakon završetka postupka eutanazija životinje

SRCE

Postupak:1. umetnuti iglu pod kožu lijevo od prsne kosti2. Povući malo klip da se stvori negativan pritisak u šprici.3 G ti i l ij d di k š K d i l d đ d k ć t ći št ljk3. Gurnuti iglu naprijed na sredinu prsnog koša. Kad igla dođe do srca, krv će teći u štrcaljku.4. Držati iglu mirno kako bi se izbjeglo traumatiziranje ili izlazak iz srca. Nježno vući i prikupiti uzorak krvi.

Ritmično pritisnuti prsni koš krv brže ulazi u štrcaljkup p j5. Nakon završenog postupka eutanazirati životinju

Ponavljanje postupka rizik od oštećenja srca, pluća ili iskrvarenja u prsni koš

Uzimanje uzoraka urina i fecesa