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Retour d’expérience sur l’utilisation d’une sonde FISH MYC « maison »
Intérêt de la FISH MYC pour le diagnostic de lymphome de Burkitt et le lymphome B diffus à grandes cellules
D.Bordas,1 L.Larcher,1 F.Poulain, 1 S.Kaltenbach,1 T.Molina,2 I.Radford1
1Service d’Histo-Embryo-Cytogénétique, hôpital Necker-Enfants malades, Paris,2Service d’Anatomie et Cytologie Pathologiques, hôpital Necker-Enfants malades, Paris.
• Cancer du système lymphatique
• Touche les lymphocytes de la lignée B ou T
• Localisation : organe lymphoïde secondaire
– Ganglion lymphatique
– Extra ganglionnaire (rate, tube digestif…)
– Peut être leucémisé : présence de lymphocytes pathologiques dans le sang
Qu’est-ce qu’un lymphome?
CaractéristiquesGénétiques
Caryotype
BiologieMoléculaire
FISH
CaractéristiquesImmunologiques
CD19
CD
22
Diagnostic d’un lymphome au laboratoire
CaractéristiquesMorphologiques
Ex.macroscopique
Ex.m
icro
sco
piq
ue
s
Avant tout traitement
Lymphome de Burkitt Lymphome B diffus à grandes
cellules (DLBCL)
Age : Enfants>>Adultes
Morphologie : cellules de taille moyenne
monomorphes, aspect en ciel étoilé
Phénotype : CD20+,BCL6+,BCL2-,CD138-
Index de prolifération : Ki67+++
Age : Adultes>>Enfants
Morphologie : cellules de grande taille, plus
polymorphes
Phénotype : CD20+,BCL6-,BCL2+,CD138-
Index de prolifération : Ki67+
Lymphome B de
cytologie intermédiaire
Lymphomes B matures
Lymphome de Burkitt Lymphome B diffus à grandes
cellules (DLBCL)
Cytogénétique :
Caryotype simple
Réarrangement de MYC-IG 100%
Cytogénétique :
Caryotype complexe
Réarrangements de BCL2 et/ou
BCL6 et/ou MYC 10 à 15%
Lymphome B de
cytologie intermédiaire
Cytogénétique :
Aide pour le diagnostic
Réarrangement de MYC 35 à 50%
Lymphomes B matures
Cytogénétique et lymphomes
Nature du prélèvement : biopsie à l’aiguille le plus souvent
Prélèvement souvent trop petit pour permettre une mise en culture pour un caryotype standard.
Apposition tissu frais
Coupe congelée
Coupe formolée 3mm
Intérêt de la FISH pour chercher un réarrangement MYC
24.1 MYC
C’est un proto-oncogène impliqué dans certains lymphomes de la lignée B.Le gène MYC code pour un facteur de transcription ayant un rôle très important dans la régulation de la croissance cellulaire, l'apoptose, la différenciation cellulaire.
Enhancer
de IgH
8 14 der(8) der(14)
Chr 8
Gène MYC
Diagnostic du réarrangement MYC : FISH
Muñoz-Màrmol et al.,Histopathology, 2013
: Points de cassures décrits dans la littérature
Difficile en Biologie Moléculaire car points de cassure éparpillés
Sondes FISH MYC : sondes break-apart
Sondes FISH MYC commerciales
- Sonde MYC break-apart Vysis ne montre pas les réarrangements en 5’ éloignés du gène MYC
- Sonde MYC break-apart Dako ne montre pas les réarrangements 5’ et 3’ éloignés du gène MYC
Muñoz-Màrmol et al.,Histopathology, 2013
548kb
2Mb
432kb
MYC
Maison
3 BACs 3 BACs
Création d’une sonde FISH MYC maison
Muñoz-Màrmol et al.,Histopathology, 2013
GUE.Fa
2F+1 petit R Dako
FER.Ro
2F+1 petit R Dako
MYCM remanié
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432kb
MYC
Maison
MYC maisonMYC Dako
MYC Dako
548kb
2Mb
432kb
MYC
Maison
HER.An
MYC M remanié
MYC maison
KAS.Jo
MYC M remanié
MYC maison
548kb
2Mb
432kb
MYC
Maison
GIR.Ey
MYC M remanié
MYC maison
Conclusion
Depuis novembre 2016: technique de routine avec la sonde maison
140 examens FISH MYC maison
Stratégie:
FISH MYC
MYC remanié MYC non remanié
STOPLymphome de Burkitt :
confirmation diagnosticDLBCL :
FISH BCL2/BCL6 :
aide au pronostic
RemerciementsService d’Histo-Embryologie et Cytogénétique, Pr.S.Romana
• S.Fontaine
• S.Kaltenbach
• L.Larcher
• M.Le Lorc’h
• J.F.Ponceau
• F.Poulain
• I.Radford
Service d’Anatomie et Cytologie Pathologiques, Pr.T.Molina
• J.Bruneau
• D.Canioni
• J.Moraly