ISOLASI MIKROBATanggal Praktikum : Rabu 26 november 2014Tempat:
Lab Pendidikan biologiTujuan Praktikum : Mempelajari cara-cara
mengisolasi mikroba dari alam ataupun dari substrat organic
tertentu sampai mendapat kultur murni. A. Landasan
teoriMikroorganisme terdapat dimana-mana didalam lingkungan kita
mereka ada pada tubuh kita, didalam tubuh kita, dan disekeliling
kita. Mereka merupakan komponen penting dalam ekosistem. Dihabitat
alamiahnya, mereka hidup dalam suatu komunitas yang terdiri dari
berbagai jenis mokroorganisme, bersama spesies-spesies biologi
lainnya. Didalam komunitas ini, satu spesies mikroba dapat
mempengaruhi spesies lain denganberbagai cara-cara beberapa
bersifat menguntungkan beberapa merugikan ( Pelezar, 1988
).Mikroorganisme dapat diperoleh dari lingkungan air, tanah,
danudara, substrat yang berupa bahan pangan, tanaman dan hewan.
Jenis mikroorganismenya sangat berupa bakteri, kamir, kapang, dan
sebagainya. Populasi dari mikroba yang ada di lingkungan ini
sangatlah beranekaragam sehingga dalam mengisolasi diperlukan
beberapa tahap penanaman sehingga berhasil diperoleh koloni mikroba
yang tunggal. Koloni yang tunggal ini kemudian yang akan
diperbanyak untuk suatu tujuan penelitian misalnya untuk
mengisolasi DNA mikroba yang dapat mendeteksi mikrobatelah resisten
terhadap suatu antibiotik, atau untuk mengetahui mikroba yang
dipakai untuk bioremediasi holokarbon. (Ferdiaz,1992).Ada berbagai
cara untuk mengisolasi bakteri dalam biakan murni yaitu, cara
pengenceran, cara penuanagan, cara penggesekan, atau penggoresan,
cara penyebaran, cara pengucilan 1 sel, dan cara inokulasi pada
hewan. Masing-masing mempunyai kelebihan dan kekurangan.
(Waluyi,2007).Untuk metode streak plate misalnya, mikrobia
diletakkan dalam pada ujung plate menggunakan ose,lalu digoreskan
pada permukaan medium agar tersebut dengan pola tertentu yang khas.
Ada pula metode pour plate atau penuangan. Metode ini dapat
digunakan untuk penghitungan bakteri secara langsung. Karena
sebelum dituang bakteri tersebut diencerkan terlebih dahulu.
Sehingga syarat penghitungan langsung yaitu dalam 1 media terdapat
30-300 koloni dapat terpenuhi (Prescott et.al.2008).Metode
pengenceran yaitu dengan mengencerkan misalnya 1 ose bakteri dengan
air. Lalu hasil pengenceran tersebut diencerkan lagi dengan
beberapa ketentuan. Hal ini bertujuan untuk mengurangi konsentrasi
bakteri (Barazandeh,2008).Isolasi mikroorganisme mengandung arti
proses pengambilan mikroorganisme dari lingkungannya untuk kemudian
ditumbuhkan dalam suatu medium di laboratorium. Proses isolasi ini
menjadi penting dalam mempelajari identifikasi mikrobia, uji
morfologi, fisiologi, dan serologi. Sedangkan pengujian sifat-sifat
tersebut di alam terbuka sangat mustahill untuk dilakukan. Prinsip
kerja isolasi bakteri cukup sederhana yakni dengan menginokulasikan
sejumlah kecil bakteri pada suatu medium tertentu yang dapat
menyusung kehidupan bakteria (Pelczar,1986).Istilah pertumbuhan
umumnya dipergunakan bakteri dan mikroorganisme yang lainnya dan
biasanya lebih mengacu pada perubahan di dalam hasil panen sel dan
bukanlah dilihat dari pertambahan jumlah individu mikroorganisme
tersebut. Suatu proses pertumbuhan menyatakan pertambahan jumlah
atau massa yang melebihi dari yang ada di dalam inokulum asalnya
(Volk, 1993).Di dalam suatu populasi bakteri, tidak semua sel mampu
hidup terus. Yang dianggap sebagai sel hidup ialah sel yang mampu
membentuk koloni di dalam agar biak atau membentuk suspensi dalam
larutan biak. Sel-sel yang mampu hidup terus inilah yang dihitung
dengan berbagai metode untuk menetapkan jumlah sel hidup. Pada
jumlah total sel ikut dihitung semua sel yang nampak atau yang
dapat dihitung dengan cara lain, sehingga dengan demikian sel-sel
mati dan cacat ikut dihitung. Cara apapun yang digunakan, jumlah
koloni dihitung sesudah inkubasi (Gaman,1994).Populasi mikroba di
alam sekitar kita sangat besar dan sangat komplek. Beratus-beratus
spesies berbagai mikroba biasanya menghuni bermacam-macam bagian
tubuh kita, termasuk mulut, saluran pencernaan dan kulit. Sebagai
contoh, sekali bersin dapat menyebarkan beribu-ribu mikroorganisme
(pelzar, 1986).Oleh karena itu yang melatar belakangi percobaan
isolasi dan morfologi koloni mikroba ialah untuk memelihara suatu
mikroorganisme yaitu bakteri dan jamur dari media yang ada serta
membedakan bahwa setiap mikroorganisme memiliki bentuk, tepi serta
permukaan koloni yang berbeda beda. B. Alat dan bahan Alat
bahan
Tusuk gigi Medium Na
Incubator Bakteri yang terdapat pada uang kertas, mesin ATM,
Gigi dan Bakteri yang terdapat di ruangan kamar, lemari, dan kamar
mandi
C. Prosedur kerja
Untuk bakteri yang gigi diambil dari gigi, uang kertas dan mesin
ATM
Goresan tusuk gigi pada uang kertas, mesin ATM dan gigi
Lalu tusuk gigi goreskan pada cawan peti yang berisi medium
NA
Tutup cawan peti dan simpan pada incubator selama 2 x 24 jam
Setelah 2 x 24 jam amati koloni yang terbentuk
D. Hasil
PengamatanNOBakteriWarnaBanyak/sedikitTeksturBentukGambar
1Bakteri di ruang kamarKuning Banyak (pling banyak)Kasar
Bulat
2Bakteri di dalam lemariPutih, kuning kecoklatan, putihSedikit,
banyak, banyakHalus, halus, halusBulat titik hitam ditengah, bulat,
bulat, berbentuk bunga
3Bakteri di kamar mandiPutih, kuning kecoklatanBanyak, banyak
Halus, halus Bulat, bulat
4Bakteri di mesin ATMPutih Sedikit Halus Bulat
5Bakteri di Uang 1Kuning kemesan, putih, kuning Sedikit,
sedikit, sedikitHalus, halus, halus Bulat, bulat tengah hitam,
bulat
6Baketri di uang 2Putih, kuning, kecoklatanSedikit, sedikit,
sedikit Halus, halus , halusBulat, bulat, berbentuk bunga
7Bakteri di gigiKuning, putih kecoklatanBanyak, banyakHalus,
kasarBulat, tidak beraturan
E. Pembahasan Bakteri adalah kelompok besar Prokariota, selain
Archaea, yang berukuran sangat kecil serta memiliki peran besar
dalam kehidupan di bumi. Mereka sangatlah kecil (mikroskopik) dan
kebanyakan uniselular (bersel tunggal), dengan struktur sel yang
relatif sederhana tanpa nukleus/inti sel, kerangka sel, dan organ -
organ lain seperti mitokondria dan kloroplas. Struktur sel bakteri
memiliki sel lebih kompleks, yang disebut eukariota. Seperti
prokariota (organisme yang tidak memiliki membran inti) pada
umumnya, semua bakteri memiliki struktur sel yang relatif
sederhana. Struktur bakteri yang paling penting adalah dinding sel.
Bakteri dapat digolongkan menjadi dua kelompok yaitu Gram positif
dan Gram negatif didasarkan pada perbedaan struktur dinding sel.
Bakteri Gram positif memiliki dinding sel yang tersusun dari
lapisan peptidoglikan yang tebal dan asam teikoat. Sementara
bakteri Gram negatif memiliki lapisan luar dari lipopolisakarida:
terdiri dari membran dan lapisan peptidoglikan yang tipis dan
terletak pada periplasma (di antara lapisan luar dan membran
sitoplasma).Berdasarkan berntuknya, bakteri dibagi menjadi tiga
golongan besar, yaitu:1. Kokus (Coccus) dalah bakteri yang
berbentuk bulat seperti bola, dan mempunyai beberapa variasi
sebagai berikut: Mikrococcus jika kecil dan tunggal, Diplococcus
jka bergandanya dua-dua, Tetracoccus jika bergandengan empat dan
membentuk bujursangkar, Sarcina jika bergerombol membentuk kubus,
Staphylococcus jika bergerombol, Streptococcus jika bergandengan
membentuk rantai2. Basil (Bacillus) adalah kelompok bakteri yang
berbentuk batang atau silinder, dan mempunyai variasi sebagai
berikut: Diplobacillus jika bergandengan dua-dua, Streptobacillus
jika bergandengan membentuk rantai. 3. Spiril (Spirilum) adalah
bakteri yang berbentuk lengkung dan mempunyai variasi sebagai
berikut: Vibrio (bentuk koma) jika lengkung kurang dari setengah
lingkaran, Spiral jika lengkung lebih dari setengah lingkaran
(Gandjar, 2006)Percobaan kali ini membahas tentang salah satu
teknik yang biasa digunakan dalam mengisolasi mikroba dari habitat
alaminya. Teknik isolasi mikroorganisme adalah suatu usaha untuk
menumbuhkan mikroba di luar lingkungan alamiahnya. Pemisahan
mikroorganisme dari lingkungannya ini bertujuan untuk memperoleh
biakan bakteri yang sudah tidak bercampur lagi dengan bakteri
lainnya atau yang disebut biakan murni. Di kehidupan normalnya atau
di habitat alamiahnya mikroba sulit ditemukan dalam bentuk koloni
sendiri. Mikroba ini pasti ditemukan dalam bentuk koloni yang hidup
bersama-sama dengan koloni mikroba yang lainnya. Percobaan ini
diawali dengan tahap pengenceran, dalam hal ini, medium agar atau
NA berfungsi untuk membiakan berbagai macam mikroorganisme serta
kultur bakteri yang kemudian diencerkan terlebih dahulu selama 15
menit pada suhu yang tinggi. Hal ini bertujuan agar medium yang
digunakan dapat mencair, kemudian disterilkan dalam autokalap dan
disimpan selama beberapa hari di beberapa tempat yang berbeda
sampai medium ini pun siap untuk digunakan. Setelah dibiarkan di
beberapa tempat tertentu selama 48 jam diperoleh hasil pertumbuhan
mikroba pada medium NA. Pada cawan petri yang di simpan di dapur
jumlah koloni yang tumbuh ada dua bentuk koloni yakni bulat yang
berjumlah 90 permukaan koloni mencembung, tepi koloni berombak,
berwarna kuning, berukuran besar dan kecil sedangkan bentuk tidak
beraturan berjumlah 120, permukaan koloni timbul datar, tepi koloni
berbenang, bewarna putih, berukuran besar dan kecil. Di tempat
sampah jumlah koloni adalah 71 bentuk koloni seperti akar dan
berwarna kuning. Di kamar tidur jumlah koloni adalah 338 serupa
akar, titik-titik berwarna kuning dan kecil. Di kamar mandi/ WC
jumlah koloni adalah 1500 berbentuk titik-titik, bulat, bergerigi,
kumparan, bulat tasbih, tak teratur, berbenang berwarna kuning dan
makro. Di ruang tamu jumlah koloni adalah 50 berbentuk dipoblas
berwarna kuning dan kecil. Di lemari jumlah koloni adalah 135
berbentuk bulat, tak teratur , titik titik, berwarna kuning pucat
berukuran besar dan kecil. Dari percobaan tersebut ternyata di
temukan banyak sekali berbagai macam jenis bakteri dengan berbagai
bentuk, ukuran, dan warna, dan bakteri yang ditemikan pun
berbeda-beda. Dari percobaan tersebut jumlah bakteri terbanyak
adalah di kamar mandi/WC, kemudian kamar tidur, lemari, dapur,
tempat sampah, dan yang paling sedikit adalah ruang tamu.
E Pertanyaan dan jawaban 1. Jelaskan tujuan dari isolasi mikroba
yang dilakukan oleh anda ?Jawab : Untuk mengetahui bagaimana
cara-cara mengisolasi mikroba dari alam ataupun dari substrat
organic yaitu memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lain
yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba, untuk memperoleh
biakan murni dari suatu biakan campuran, untuk mengidentifikasi
mikroba, untuk mengamati cirri-ciri dan jenis-jenis mikroba. 2.
Dimana saja anda melakukan isolasi mikroba ?Jawab : Dapur, Tempat
Sampah, Kamar Mandi/ WC, Kamar Tidur, Ruang tamu, lemari. 3.
Apabila anda bandingkan dimana mikroba yang anda dapatkan paling
banyak ?Jawab : kamar mandi/ WC dengan jumlah mikroba 1500 koloni.
4. Apa yang bisa anda simpulkan dari pengamatan isolasi mikroba ini
? Jawab : Kesimpulannya adalah teknik isolasi mikroorganisme adalah
suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba diluar dari lingkungan
alaminya. Percobaan ini dilakukan untuk memperoleh biakan murni dan
medium yang digunakan adalah medium NA untuk biakan bakteri, jumlah
bakteri terbanyak sampai paling sedikit yaitu yang paling banyak di
kamar mandi/WC, kamar tidur, lemari, dapur, tempat sampah, dan yang
paling sedikit ruang tamu. Bentuk bakteripun bermacam-macam ada
yang bulat, tidak teratur, seperti akar, titik-titik, bulat
bergerigi, kumparan, bulat tasbih, berbenang, diplobasi,
diplokokus.
F KesimpulanIsolasi mikroorganisme mengandung arti proses
pengambilan mikroorganisme dari lingkungannya untuk kemudian
ditumbuhkan dalam suatu medium di laboratorium. Proses isolasi ini
menjadi penting dalam mempelajari identifikasi mikrobia, uji
morfologi, fisiologi, dan serologi. Sedangkan pengujian sifat-sifat
tersebut di alam terbuka sangat mustahill untuk dilakukan. Prinsip
kerja isolasi bakteri cukup sederhana yakni dengan menginokulasikan
sejumlah kecil bakteri pada suatu medium tertentu yang dapat
menyusung kehidupan bacteriaKesimpulannya adalah teknik isolasi
mikroorganisme adalah suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba diluar
dari lingkungan alaminya. Percobaan ini dilakukan untuk memperoleh
biakan murni dan medium yang digunakan adalah medium NA untuk
biakan bakteri, jumlah bakteri terbanyak sampai paling sedikit
yaitu yang paling banyak di kamar mandi/WC, kamar tidur, lemari,
dapur, tempat sampah, dan yang paling sedikit ruang tamu. Bentuk
bakteripun bermacam-macam ada yang bulat, tidak teratur, seperti
akar, titik-titik, bulat bergerigi, kumparan, bulat tasbih,
berbenang, diplobasi, diplokokus.
G Daftar PustakaPelczar, M.J dan E.C.S Chan, 1986. Dasar-Dasar
Mikrobiologi. Terjemahan R.S. Volk, Wesley A. Dan Margaret F.
Wheeler. 1993. Mikrobiologi Dasar. Erlangga.Jakarta.Waluyo, L.
2007. Mikrobiologi Umum. UMM Press. Malang, p: 61-67.Gaman, P.M.
dan Shernington, K.B. 1994. Ilmu Pangan dan Pengantar Ilmu Pangan
Nutrisi dan Mikrobiologi. Jakarta : UGM-PressAni Murniati, 2002.
Buku Penuntun Praktikum Mikrobiologi.Bogor: IPB Press.Sutedjo.
1991.Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta: Jakarta.Sutedjo, Mul
Mulyani. 1996. Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta : Jakarta
