BAB 1PENDAHULUAN1.1 Latar BelakangSenyawa antioksidan dalam
penggunaannya semakin berkembang untuk pengobatan dan makanan
seiring dengan bertambahnya pengetahuan tentang radikal bebas.
Antioksidan mampu melindungi tubuh terhadap kerusakan yang
disebabkan oksigen reaktif, mampu menghambat terjadinya penyakit
degeneratif seperti diabetes, kanker, inflamasi jaringan, kelainan
imunitas, infark jantung dan penuaan dini (Jacob and Burri, 1996;
Meddleton et al, 2000). Tubuh manusia tidak mempunyai cadangan
antioksidan dalam jumlah berlebih, sehingga jika terjadi paparan
radikal bebas berlebih maka tubuh membutuhkan antioksidan eksogen
(Rohdiana, 2001; Sunarni, 2005). Antioksidan alami antara lain
turunan fenol, koumarin, hidroksi sinamat, tokoferol, difenol,
flavanoid, dihidroflavon, kathekin, asam askorbat (Cahyadi, 2006).
Senyawa antioksidan sangat dibutuhkan oleh sistem tubuh serta dapat
memperpanjang masa simpan makanan. Penggunaan antioksidan alami
cenderung lebih aman daripada antioksidan sintetis karena tidak
menggunakan bahan kimia, mudah didapat, dan tidak diperlukan tes
keamanan oleh pemerintah apabila komponennya tergolong Generally
Recognized As Safe (GRAS) (Heo et al. 2005).Potensi antioksidan
penangkap radikal bebas dapat ditentukan dengan menggunakan metode
peredaman radikal bebas DPPH yaitu suatu radikal yang stabil dalam
larutan metanol dan mampu menerima sebuah elektron atau radikal
hidrogen. Metode peredaman radikal bebas DDPH merupakan metode
pengukuran antioksidan yang sederhana, cepat, peka, memerlukan
sedikit sampel dan tidak membutuhkan banyak pelarut seperti halnya
uji lain (xantin-xantin oksidase, metode tiosianat, antioksidan
total). Hasil pengukuran menunjukkan kemampuan antioksidan sampel
secara umum dalam menghambat radikal bebas (Juniarti, dkk., 2009).
Metode ini banyak digunakan pada beberapa penelitian skrining
aktifitas antioksidan dalam jurnaljurnal ilmiah baru.Acorus sp
dikenal dengan jeringau merah merupakan tumbuhan endemik Kalimantan
Barat yang telah secara turun temurun dimanfaatkan sebagai obat
demam berdarah bagi penderita yang tinggal di pedalaman dan jauh
dari sistem pelayanan kesehatan formal seperti rumah sakit dan
puskesmas (Purwaningsih, dkk., 2006). Data yang ada menunjukkan
bahwa tumbuhan dalam genus Acorus seperti (Acorus calamus) memiliki
efek sedatif dengan mayoritas kandungannya adalah saponin dan
flavonoid (Maheswari,2002). Informasi ilmiah tentang aktivitas,
kandungan kimia dan mekanisme aktivitas jeringau merah belum
ditemukan. Tetapi sebagai famili dari Araceae kemungkinan kandungan
dan aktivitas memiliki kemiripan. Berdasarkan penelitian
selanjutnya yang telah dilakukan oleh Pratiwi, dkk., 2010 bahwa
dari hasil skrining fitokimia menunjukkan adanya flavonoid dalam
rimpang jeringau merah (Acorus sp.), yang mampu menaikkan trombosit
darah pada hewan uji. Flavonoid dalam rimpang jeringau terdapat
dalam bentuk berikatan dengan gula glikosida. Penelitian tentang
pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanol rimpang jeringau
merah (Acorus sp) yang berasal dari Kalimantan Barat belum pernah
dilakukan, untuk itu diperlukan penelitian tentang ini sehingga
dapat memberikan informasi untuk masyarakat luas.1.2 Rumusan
Masalah1. Apakah ekstrak jeringau merah (Acorus sp) memiliki efek
antioksidan yang tinggi ?2. Berapa nilai IC50 ekstrak etanol
jeringau merah ( Acorus sp) ?3.
BAB 2TINJAUAN PUSTAKA2.1 Jeringau Merah (Acorus calamus
sp.)Jeringau merah (Acorus sp.) dari famili Araceae merupakan
jeringau yang tumbuh liar di hutan-hutan tropis Kalimantan Barat,
secara empiris telah digunakan oleh Masyarakat pedalaman suku Dayak
dalam mengobatai berbagai macam penyakit. Seperti tyfus dan demam
berdarah. Pengujian awal infus rimpang jeringau merah menunjukkan
potensi penghambatan pertumbuhan bakteriSalmonella typhosa,yang
dapat menyebabkan penyakit tyfus (Purwaningsih, 2009). Ada beberapa
tempat di wilayah Kalimantan Barat sebagai habitat aslinya seperti
wilayah Sanggau, Ngabang, dan Kapuas Hulu dengan karakteristik
seperti jeringau biasa tetapi memiliki pangkal daun berwarna merah
serta rimpang yang berwarna coklat kemerahan (Purwaningsih, 2009).
Berdasarkan penelitian selanjutnya yang telah dilakukan oleh
Pratiwi, dkk., 2010 bahwa dari hasil skrining fitokimia menunjukkan
adanya flavonoid dalam rimpang jeringau merah (Acorus sp.), yang
mampu menaikkan trombosit darah pada hewan uji. Flavonoid secara
umum telah diketahui memiliki aktivitas sebagai antibakteri,
antiviral, antiinflamasi, antialergi, antimutagenik, antioksidan
dan aktivitas vasodilatasi. Flavonoid merupakan salah satu jenis
senyawa fenol, yaitu bioaktif yang akan mengubah reaksi tubuh
terhadap senyawa lain (Pratiwi, dkk., 2010). Berdasarkan penelitian
Atta-ur-Rahman (2001) senyawa-senyawa yang mempunyai potensi
sebagai antioksidan umumnya merupakan senyawa flavanoid, fenolat,
dan alkaloid.
Gambar 2.1 Jeringau merah (Acorus sp.)
2.2 AntioksidanAntioksidan adalah senyawa yang mampu
menghilangkan, membersihkan, menahan pembentukan oksigen reaktif
dan radikal bebas dalam tubuh. Radikal bebas adalah atom atau
molekul yang tidak stabil karena memiliki elektron yang tidak
berpasangan dalam orbital luarnya sehingga sangat reaktif untuk
mendapatkan pasangan elektron dengan mengikat sel-sel tubuh.
Apabila hal tersebut terjadi secara terus menerus dapat menyebabkan
kerusakan dan kematian sel (Lautan, 1997; Sies, 1993). Antioksidan
menstabilkan radikal bebas dengan melengkapi kekurangan elektron
yang dimiliki radikal bebas, dan menghambat terjadinya reaksi
berantai dari pembentukan radikal bebas yang dapat menimbulkan
oksidative stress (Waji dan Sugrani, 2009). Antioksidan dapat
bersumber dari zat-zat sintesis atau zat-zat alami hasil isolasi.
Antioksidan alami dapat diperoleh dari makanan sehari-hari seperti
sayuran, buah-buahan, kacang-kacangan dan tanaman lainnya yang
mengandung antioksidan bervitamin (seperti vitamin A, C, dan E),
asam-asam fenolat (seperti asam ferulat, asam klorogenat.
Asamelagat, dan asam kafeat) dan senyawa flavanoid seperti
kuersetin, mirisetin, apigenin, luteolin, dan kaemferol (Rohdiana,
2001; Pokorny et al, 2001).
2.3 Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH
(1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)DPPH merupakan radikal bebas yang
stabil pada suhu kamar dan sering digunakan untuk menilai aktivitas
antioksidan beberapa senyawa atau ekstrak bahan alam. Interaksi
antioksidan dengan DPPH baik secara transfer elektron atau radikal
hidrogen pada DPPH akan menetralkan karakter radikal bebas dari
DPPH. Jika semua elektron pada radikal bebas DPPH menjadi
berpasangan maka warna larutan berubah dari ungu tua menjadi kuning
terang dan absorbansi pada panjang gelombang 517 nm akan hilang
(Green, 2004; Gurav et al, 2007). Parameter yang biasa digunakan
untuk menginterpretasikan hasil uji aktivitas antioksidan dengan
peredaman radikal DPPH adalah inhibition concentration (IC50) dan
AEAC (Ascorbic Acid Equivalent Antiokxidant Capacity). Nilai IC50
merupakan bilangan yang menunjukan konsentrasi ekstrak yang mampu
menghambat aktivitas radikal sebesar 50% (Molyneux, 2003).Menurut
Prakash (2001) Metode DPPH digunakan secara luas untuk menguji
kemampuan senyawa yang berperan sebagai pendonor elektron atau
hidrogen. Metode DPPH merupakan metode yang dapat mengukur
aktivitas antioksidan baik dalam pelarut polar maupun non polar.
Beberapa metode lain terbatas mengukur komponen yang terlarut dalam
pelarut yang digunakan dalam analisis. Metode DPPH mengukur semua
komponen antioksidan baik larut dalam lemak maupun dalam air.
Menurut Kubo dkk., (2002) dalam Yulia (2007) bahwa reaksi antara
DPPH dengan senyawa antioksidan dapat dilihat pada gambar 2.2.
Gambar 2.2. Struktur DPPH: (a) DPPH bentuk radikal, (b) DPPH
bentuk tereduksi. Sumber : Molyneux, 2003
BAB 3METODE PENELITIAN3.1 Rancangan PenelitianRancangan
penelitian antioksidan yang dilakukan adalah penelitian
eksperimental laboratoris in vitro yang memiliki tujuan menguji
aktivitas radikal bebas DPPH ekstrak etanol daun jeringau merah
dari Provinsi Kalimantan Barat dibandingkan dengan aktivitas
radikal bebas Vitamin C. Sebagai variabel tergantung adalah
peredaman radikal bebas DPPH dan sebagai variabel bebas adalah
ekstrak daun dan vitamin C dalam berbagai konsentrasi.3.2 Waktu dan
Tempat PenelitianPenelitian dan pengumpulan data dilakukan selama 3
bulan. Ekstraksi daun jeringau merah, penapisan fitokimia, dan
pengujian antioksidan dilakukan di Laboratorium Kimia Fakultas
Kedokteran Universitas Tanjungpura.3.3 Alat dan Bahan
Penelitian3.3.1 AlatAlat yang digunakan adalah blender, peralatan
soxhletasi, rotary evaporator, pipet mikro, botol penampung
berbagai ukuran, spektofotometer UV-Vis, timbangan analitik,
alat-alat gelas, Chamber KLT, botol semprot, dan waterbath 3.3.2
BahanDaun jeringau merah, 2,2-difenil-1-pikrilhidrasil (DPPH),
etanol 70%, metanol, vitamin C, pereaksi Lieberman-Burchad,
pereaksi Dragondorff, pereaksi Mayer, dan aquades.3.4 Analisis
DataMetode yang digunakan adalah metode DPPH. Hasil aktivitas
penangkap radikal bebas dari ekstrak etanol daun jeringau merah
dibandingkan dengan vitamin C. Besarnya aktivitas penangkap radikal
dihitung dengan rumus :Persen (%) penangkap radikal =
kemudian dilakukan perhitungan IC50 yakni suatu nilai yang dapat
menangkap radikal bebas sebesar 50% melalui persamaan garis regresi
linier yang menyatakan hubungan antara konsentrasi senyawa (sampel)
uji (X) dengan aktivitas penangkap radikal rata-rata (Y) dari seri
replikasi pengukuran. Semakin kecil IC50 -nya maka senyawa uji
tersebut mempunyai keefektifan sebagai penangkap radikal yang lebih
baik (Cholisoh, 2008).3.5 Tahapan Penelitian3.5.1 Pembuatan
EkstrakMetode yang digunakan untuk membuat ekstrak daun jeringau
merah ini adalah metode soxhletasi. 20 gr serbuk rimpang jeringau
merah dimasukkan ke dalam kantong dari kertas saring yang diatur
sedemikian rupa hingga dapat dimasukkan ke dalam tabung soxhlet.
Dilakukan soxhletasi menggunakan etanol 96% dengan volume 1,5 kali
sirkulasi dan pada suhu 70o-80oC sampai pelarut tidak berwarna.
Ekstrak yang didapat dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu
70oC sampai didapat ekstrak kental yang dianggap mempunyai
konsentrasi 100%. maserasi. Terakhir ekstrak kental kemudian
dipindahkan dalam cawan porselin.3.5.2 Uji Pendahuluan Aktivitas
Antioksidan Secara KLTUji pendahuluan aktivitas antioksidan ekstrak
sebagai penangkap radikal bebas dilakukan sesuai metode Demirezera,
L.. et al (2001) dengan sedikit modifikasi. Uji pendahuluan diawali
dengan mengaktifkan plat KLT pada oven dengan suhu 105C selama 10
menit. Fase diam yang digunakan adalah silika gel 60 F254 dengan
luas 2 x 10 cm dengan jarak elusi 8 cm dan fase gerak yang
digunakan untuk mengelusi yaitu kloroform : metanol dengan
perbandingan 1 : 4 sebanyak 2 mL. Setelah dikembangkan sampai batas
pengembangan, elusi dihentikan, lalu lempeng diangin-anginkan
sampai kering. Bercak yang terbentuk diamati dengan sinar tampak,
lampu UV 366 nm, dan pereaksi DPPH 0,2%. Senyawa aktif penangkap
radikal radikal bebas akan menunjukkan bercak berwarna kuning pucat
dengan latar belakang ungu.
3.5.3 Penentuan Panjang Gelombang DPPH dan Penentuan Operating
TimeLarutan DPPH yang digunakan dibuat dengan cara menimbang
seksama lebih kurang 5 mg serbuk DPPH kemudian dilarutkan dengan
metanol p.a dalam labu ukur 50 mL dan dicukupkan dengan metanol p.a
hingga tanda batas sehinggadidapat larutan DPPH 100 g/mL. Larutan
ini ditentukan spektrum serapannya menggunakan spektrofotometer UV
pada panjang gelombang 400 nm hingga 800nm kemudian ditentukan
panjang gelombang optimumnya (Erawati,2012). Penentuan operating
time dilakukan pada panjang gelombang maksimum dengan interval
waktu 5 menit sampai didapat absorbsansi yang stabil, tidak
terlihat adanya penurunan absorbansi.3.5.3 Uji Aktivitas
Antioksidan Menggunakan Spektrofotometri UV-VisUji aktivitas
antioksidan ekstrak dilakukan sesuai metode Zuhra,Cut Fatimah.et al
(2008) dengan sedikit modifikasi. Sebanyak 25 mg ekstrak kasar
ditimbang kemudian dilarutkan dalam labu ukur 25 ml dengan metanol
lalu volumenya dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda
(larutan induk 1000 ppm). Larutan induk dipipet sebanyak 0,1 ml;
0,2 ml; 0,3 ml; dan 0,4 ml ke dalam labu ukur 25 ml untuk
mendapatkan konsentrasi larutan uji 4 ppm, 8 ppm, 12 ppm, 16 ppm
dan 18 ppm. Kedalam masing-masing labu ukur ditambahkan 5 ml
larutan DPPH 0,5 mM lalu volumenya dicukupkan dengan metanol sampai
garis tanda. Larutan blanko dibuat dengan cara larutan DPPH 0,5 mM
dipipet sebanyak 5 ml kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml
lalu volumenya dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda.
Sebagai pembanding digunakan vitamin C (2 ppm, 3 ppm, 4 ppm, 5ppm
dan 6 ppm) dengan perlakuan yang sama dengan ekstrak. Dicatat hasil
dari nilai absorbansi ekstrak jeringau merah dan vitamin C.
Kemudian dibuat persamaan regresi. IC50 dihitung dengan cara
memasukkan nilai 50% ke dalam persamaan kurva standar sebagai sumbu
y lalu dihitung nilai x sebagai konsentrasi IC50.3.6 Alur Kerja
PenelitianPada penelitian ini, dilakukan pengumpulan daun jeringau
merah di . Tahap lebih lanjutnya dapat dilihat pada gambar dibawah
ini :Soxhletasidengan etanol dan disaringDicuci, disortasi,
dikeringkan dan dihaluskanRimpang Jeringau MerahSerbuk Rimpang
Jeringau MerahAmpas (residu)Ekstrak daun jeringau merahPenapisan
fitokimiaUji Aktifitas Antioksidan ekstrak dengan metode DPPHUji
Pendahuluan Aktivitas Antioksidan Secara KLTAnalisis
DataPengamatanPelaporan
BAB 4BIAYA DAN JADWAL KEGIATAN4.1 Anggaran BiayaTabel 2. Format
Ringkasan Anggaran BiayaNo.Jenis PengeluaranBiaya (Rp)
1Peralatan penunjang
2Bahan habis pakai
3Perjalanan
4Lain-lain
Jumlah
4.2 Jadwal KegiatanPenelitian dilaksanakan selama 3 bulan,
dengan perician sebagai berikut :Tabel 3. Jadwal KegiatanNoJenis
KegiatanBulan
123
1Pengumpulan dan penyediaan bahan penelitian
2Pembuatan ekstrak jeringau merah
3Pengujian fitokimia ekstrak jeringau merah
4Uji pendahuluan aktivitas antioksidan secara KLT
5Uji aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH
6Analisis dan pelaporan
DAFTAR PUSTAKA
Purwaningsih, 2009, Budidaya dan Pengembangan Jeringau Merah
(Acorus sp.) Endemik Kalimantan Barat sebagai Fitofarmaka
Imunostimulan, Laporan Penelitian Dana DIPA UNTAN.Pratiwi, A.,
Kurniawan, H., Helmi, H., Ropiqa M., dan Rahmawati, S., 2010,
Pengembangan Jeringau Merah (Acorus sp.) Endemik Kalimantan Barat
sebagai Herbal Terstandar untuk Meningkatkan Trombosit pada Pasien
Demam Berdarah. Pontianak: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam Universitas Tanjungpura.Attau-ur-Rahman, M.I. Choudhary.
(2001). Bioactive Natural Products a Potential of pharmacophores, A
Theory of Memory. Pure Appl. Chem., 73, 555-560.Lautan, J. (1997).
Radikal Bebas Pada Eritrosit dan Leukosit. Cermin Dunia Kedokteran,
116, 49-52.Sies, H. (1993). Strategies of Antioxidant Defense.
European Journal of Biochemistry,215,213-219.Waji, R. A, Sugrani
Andis. 2009. Makalah Kimia Organik Bahan Alam Flavonoid
(Quercetin). MIPA; Universitas Hasanudin.Rohdiana, D. (2001).
Aktivitas Daya Tangkap Radikal Polifenol dalam Daun Teh. Majalah
Jurnal Indonesia,12 (1),53-58.Pokorny, J., Yanishlieva,N., Gordon,
M. (2001). Antioxidant in Food. Practical Applications. England:
Woodhead Publishing Ltd and CRC Press LLC. Green, R.J. (2004).
Antioxidant Activity of Peanut Plant Tissues. Thesis. North
Caroline State University: Department of Food Science,
Raleigh.Gurav, S., N. Deshkar., V. Gulkari., N. Duragkar., A.
Patil. (2007). Free Radical Scavengeng Activity of Polygala
Chinensis Linn. Pharmacologyline, 2, 245-253.Molyneux, P. 2003.The
use of the stable free radikal diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for
estimating antioxidant activity. Journal Science of Technology.
26(2):211-219.Prakash, Aruna. 2001. Antioxidant Activity Medallion
Laboratories Analitical Progress, 19 (2). Minnesota. Halaman
1-3.Yulia O. 2007. Pengujian kapasitas antioksidan ekstrak polar,
nonpolar, fraksi protein dan nonprotein kacang komak (Lablab
purpureus (L) sweet). [Skripsi]. Bogor: Departemen Ilmu dan
Teknologi Pangan. Fakultas Pertanian. Institut Pertanian
Bogor.Demirezera, L.. et al., 2001. The Structures of Antioxidant
and Cytotoxic Agents from Natural Source: Antraquinones and Tannin
from Roots of Rumex patientia. Phytochemistry, 58(8),
pp.12131217.
Juniarti, O.D., Yuhernita. (2009). Kandungan senyawa kimia, uji
toksisitas (BSLT) dan antioksidan (1,1-diphenyl-2-pikrilhydrazyl)
dari ekstrak daun saga. Makara Sains. 13(1):50-54.
Blois, MS. (1958). Antioxidant Determinations by The Use of A
Stable FreeRadical. Nature 181, 1199-1200
