10
Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline±water partition coef®cient Hiren Patel a , T. Wayne Schultz b , Mark T.D. Cronin a, * a School of Pharmacy and Chemistry, Liverpool John Moores University, Byrom Street, Liverpool L3 3AF, UK b Department of Comparative Medicine, College of Veterinary Medicine, The University of Tennessee, 2407 River Drive, Knoxville, TN 37996-4500 USA Received 19 April 2001; accepted 3 January 2002 Abstract The dimyristoyl phosphatidyl choline (DMPC)±water partition coef®cient (log K DMPC±W ) has been proposed as an alternative to the 1-octanol±water system (log K OW ) for describing molecular hydrophobicity. In this study literature values of log K DMPC±W for 49 compounds were collated. Quantitative structure±activity relationships (QSARs) were developed for log K DMPC±W in an attempt to develop a predictive model for its estimation and to investigate its meaning. Despite the considerable differences in molecular structure between DMPC and 1-octanol, log K DMPC±W and log K OW were found to be very strongly related, suggesting there is little advantage in the use of DMPC over 1-octanol as the non-polar phase in partitioning studies. Aliphatic amines were found to have a greater af®nity for DMPC than octanol, a phenomenon that may be explained by their protonated nature. Highly hydrophobic compounds were also poorly discriminated by the DMPC system. Other QSARs for the prediction of log K DMPC±W , not including log K OW, con®rmed the role of molecular branching, size and carbon content on the partition coef®cient. q 2002 Elsevier Science B.V. All rights reserved. Keywords: Dimyristoyl phosphatidyl choline; Partition coef®cient; Prediction; Quantitative structure±activity relationship (QSAR); 1-Octanol 1. Introduction Over one hundred years ago, Overton [1] and Meyer [2] demonstrated that an oil/water partition coef®cient of a compound could be related in a quan- titative manner to its biological activity. Partition coef®cients have since been used frequently to assess the biological activity of chemicals in all areas of science. Their use today is commonplace in subjects such as medicinal chemistry, agrochemical and pesti- cide research, formulation science and the prediction of environmental effects of chemicals [3,4]. The ®rst studies carried out by Overton [1] and Meyer [2] used olive oil as the organic phase. However, through the work of Collander [5] and Hansch [6] 1-octanol was recognised as a good surrogate organic phase for the modelling of membrane±water partitioning of chemicals. As the organic phase of the system it is thought to mimic the lipid constituents of biological membranes as it consists essentially of a long hydrocarbon (non- polar) chain with a hydroxyl head group that is relatively polar. Whilst a number of solvent systems have been assessed, for many years 1-octanol has not had a serious rival in the measurement of the Journal of Molecular Structure (Theochem) 593 (2002) 9±18 0166-1280/02/$ - see front matter q 2002 Elsevier Science B.V. All rights reserved. PII: S0166-1280(02)00032-5 www.elsevier.com/locate/theochem * Corresponding author. Tel.: 144-151-231-2066; fax: 144-151- 231-2170. E-mail address: [email protected] (M.T.D. Cronin).

Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

�������������� � ��������� � � �������� �� �� ���������������������� ����� ����� �������� ������ �

��� ������ �� ��� ��������� ��� ��!� "�� � ��#

������� �� ������ �� �������� �������� ���� ����� ���������� ��� ������ �������� �� ���� ����������� �� ��������� �� ������ ����� � �� !������� �� ������ "�� ��������� �� "��������� #$%& '��� �����

���(������ ") �&**+,$-%% ���

$��%� &' (���� )**&+ ������ , -� ���� )**)

��������

�� ���������� ������������ ����� .!��"/����� �������� ������ � .��0 �!��"��/ ��� � ������� �� � ���� ���%

�� �� &����� ������� ���� .��0 �1�/ ��� ������� 0 ������� ��������������� 2 ���� ����� �������� %���� �� ��0 �!��"��

��� 3' ����� �� �� �������� 4�� ������% �������������%��� ������ ����� .4�($�/ �� �%���� ��� ��0 �!��"�� � �

����� �� �%��� � �������% ��� ��� ��� ������� � � �� � %���0�� ��� � � 0� !���� �� �� ������� ����� �� �

������� �������� ��� !��" � � &����� ��� ��0 �!��"�� � � ��0 �1� �� ��� � �� � %�� ���� 0�� ������ ��00��� 0

��� �� ����� ��%� ��0 � �� �� �� !��" �%� &����� �� �� �� � ������ ���� � �������� � 0 ������� (�������� �� � ��

��� � �� ��% � 0���� ��� ��� ��� !��" ��� ���� ��� � �� � � ���� �� � 5���� � �� ���� ����� ��� ����� ��0���

����������� ����� �� �� ���� ������ ������� ��� �� �� !��" ����� 1��� 4�($� ��� �� �������� �� ��0 �!��"���

�� � ����� 0 ��0 �1�� �� ��� �� ��� �� ������� ��� ��� 0� ��� � � ����� �� � � � �� �������� ������ �� � )**)

6��%�� ��� � 7�8� (�� ��0��� ���%��

���.� �9 !��������� ������������ ����� + �������� ������ �+ �������� + 4�� ������% �������������%��� ������ ���� .4�($/+ &�1��� ��

� ���� ������

1%� � �� ��� ���� �0�� 1%��� :&; � �

��� :); �� ������ ���� � ���<���� ��������

������ � �� � ����� � ����� � ����� � � =�� �

������% � � �� ��� �����0���� ����%���� ��������

������ �� ��% �� � � ��� ��=� ��� �� �����

�� �����0���� ����%��� �� ������� � ��� ���� ��

��� �� ���� �� ����� �� ��� ���� � ���>���

���� �� ���� �� �������� �0�������� � � �����

��� ������� ��������� ��� � � � �� ��������

�� %��� ��� ����� �� ������� :,�3;�

�� ���� ������ ������ ��� �� 1%��� :&; � �

��� :); ��� ���% ��� �� �� ��0� �� �����

���%�� �����0� �� ��� �� "���� �� :?; � �

�� ��� :@; &����� �� ��� ���0 ��� �� � 0���

�����0�� ��0� �� ���� ��� �� ����� 0 ��

��� ����� �������� � 0 �� �������� (� ��

��0� �� ���� �� �� ���� �� �� ����0�� �� ���

�� ����� �� ����� �� �� �����0���� ��� � �� ��

�� ����� �� ������ �� � �� 0 ���������� . � �

�����/ ���� ���� � �����5�� ��� 0���� ���� ��

�����%�� ������ ������ � ��� �� ���% � �����

��% � ������� ��� � � ���� &����� �� ���

�� ��� � ������ ��%�� � �� ���� � �� ��

-��� �� �� �������� �������� .�����/ ?', .)**)/ '�&A

*&@@�&)A*<*)<B � � ��� � ���� � )**) 6��%�� ��� � 7�8� (�� ��0��� ���%��

�229 �*&@@�&)A*.*)/***,)�?

������%�����<�����<�����

# "������ �� 0 ������� ���9�33�&?&�),&�)*@@+ ��59�33�&?&�

),&�)&C*�

/,��� � ���0 ������ � D��%>����� .����!� "�� � /�

Page 2: Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

����������� �������� �� �������� ��� �� � �

���� � ��� ���� � ����� 0 ��� �%����������� � � ���� ��

��0����� �� �� &����� ������� �������� ������ �

.��0 �1�/ �� ��� �� �� :,;� E�0 �1� ��� ��� �

� �� �� � ���������� � ����� 0 � � ����

��0���� ����%���� � � ������ �� �� ���%��� � ����

��% ���� �� �� ������� �� � ������ � �� ����

�����0� ����� ��� � �� ���� ��� ����% ��� :C;�

2� ��� ���� ��� � ������� � �� ����� 0 �� ���

���������� � � � ���������� ���� �� � � � ����

��� �� �������� �� �� ������ �� ����� � � F��

:A; � � "�� � � ��� :';�

2� �� ���0 ��� ���� � � � ���% � ���� �� ��

�� ��� ��� �����0���� ��� � � � ���� ����� �

��0� �� ���� �� �� � �� � �� ����� ��

��� ����������� � ���������� ����� 2 0 ����

����� � �� ���� �� �� ���������� ���% �� ���

�� � ���� �� � ������������ ���������

������0� $ � :&*; ��00��� ���� �� ���� �

���� ���� ����� � � ������� ��� ��� ��

���������� ������� 2�������� ������� :&&; ��

� ���� ��0� �� ���� ���� ��� � ������� �� �

������� ��� ��� � � ������ � ��������� ������

��� ���� �� 0�%� ���� ������ :&);�

(�%� �� � �� � ����� �� 0 �� �� �� ��������

� � ��������� �� �����0���� ��� � ��% �� ��

�� 5�������� �� ������������� �� ���� ���%� ��

&����� �� �� �� ��0� �� ���� � � �� ����� �

�� �������� ������ ��� ������������� �� � �� �

���� ���� � �� �� � � �� ����� �� ���� ��0���

��� ������� � :&,;� ��� �� ���� �� � 0������

��� �� � �� ����� ��� ������ ������ &)�)3 �����

���� �� 0� � � � ����� ��� 0���� �� �������� ��

��� 0���� �� ��� � � �������� 0���� ������ ��

�� 0������ � � ��� �� ���� ����� 0���� ���� ��

����� � ��� ���� � �� 0������ :&3;� �� �����

������ �������� �� ������������� ��0 ��� ��� ��% �

���� 0 � � �� �� �00�0�� ��� �� ����� �� ���

������ ������� ������� ������� ���������� ���

��������� ��� ���� � �� ��� � � � ��� � ��

����� �� ������� �������� ��� � ���� �� � �

� �0��� ���� �� �����0���� ��� � � � ����0

�� �� ���������� ���%���� �� �� ������ ��� �

�� ���� ��� � � ����� �� 0 �� ��� �������

���������� � � �������� :&?;�

�� �>����� �� �� ��� ������ ��� ���� ��������

������ �� ��� ��� � ��� ��� ������������

��� ���� � � ������������ ����� � ����� ��

���� �������� ������� 0 � � ��0��� �� ������ �

�>�� ������ �� ����� ��� ��������

������ :&?;� 2� �� �� ����� �� �� ���� � �� ��� ��

���������� ������������ ����� .!��"/� ����� ���

12 ����� �� ��2 3 ��4��� �� �����4�� ��4��4� 5"������6 -*� 5#%%#6 *789&*

G�0� &� �������� �� &����� �� � � ���������� ������������ ����� �

Page 3: Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

� � %���0��� �� ��� 5� ��%�� � ��� ��

����� 0 ������� � � � ��� ����� ��� 5����

��� ���� ��% � ���� � :&@�&';� ��

��������� �� &����� �� � � !��" �� ���� �

G�0� &� �� ��������� ���� �� &����� �� �� ����

���� � ���� �������� � !��" �� �� �����0������

��%� � ���� �� �� 0 ���������� ����� � � �����

������� ����0����� 2� �� ��� ���������� %������� �

���� ��00�� ���� !��" �� ���%�� � ���� ��� �

����� ����� � �� �������������� �� � ������

��� �� � %��� =�� ���� �� � ������� � �����

��0 �1� %���� ��� � � ����� ��� ���� � �����

��� �� � ��=���� ���������� ��� ����� ������

��� ������ � � ������ ��������� ��� �� ���� �

���0 ��� �� ������ ��� �0�� ���� ����

����% � ����� %��� �� �������� � %��� ��� 0

� �� �%��� ��� �=�� :)*;� 2 �������� � ����

� ���� �� ��0 �!��"�� %���� ��� ������� �� �� ��

�����0��������� 0�% ����� �� ��� �� ��� �� ��

� � ������ ��� �0� ��� ��� �������� � � � ����

��%�� �� 5��� ��� ���� ��% � ���������

1� �� �������� ����� 8�� � ��� :&C; ������� �

��� �� =�� ������% �������������%��� ������ �

����� .4�($�/ �� �������� ��0 �!��"��� ���

4�($� ������� )A ��%�� ������� �� �� ���� � 0

�� � � %������ ���������� �� ���� � �� %������

�������������� �� ������� ��

�� �� �� ���� � %���0���� ��� �� �%���

4�($� ��� �� �������� �� ��0 �!��"��� ���� ���

����%� �� ������ 0 ��0 �!��"�� %���� ���

�������� ������ � � ����� 0 �� �� ���� ��������

������ ����������� ���� ���� ���� ���%�� �

� � �� ������� 0 ��0 �!��"�� ��� ���� ��������

G������ � ������ �� �� ��0 ���� � ��������������

���������� � �� 4�($� ���� ���� 0�% � � ��0�� � ��

�� �������� � 0 ������ ��� !��" � � �����

� � �� ���� �� �� ����� ���� ����� �������

���������

� ������������ ����� ����

#282 ����7.��� �������� ����:������

( ����� �� 3' ��0 �!��"�� �������� ������ ��

�� ������ ��� ��� �������� ������� ( ����

���� �� �� ����� �� ��� � �� ���� � 0 �� ��

���� � ���� &�

#28282 ���� ��� 8 5������ �� !��� �� ��2 ;8+<6

)A ��0 �!��"�� %���� ������� 0 � �� 0 ��

��������� � � �� � ��� � ����� � �� �� ����

���� � � �� � �� �� ��� 8�� � ��� :&@;�

��� � ����� &' ����� �� ��%������ ������ ��

8�� � ��� :&C;� �� ����� ' ����� �� ���� �� 0�%

�� ���� �� �� %������ (�� %���� �� �����

5��� ����� ��� 0 �� �������0� ������� ��

8�� � ��� :&@;� 2 ����� ���� � ������� ��������

����� %����� �� �������������� ������������ �����

�� ������ � � ���� ���� �� ������ .�� ,? �" ���

C? � / ��� � ������� �� !��" ������%� � �������

���� 2 ��%����� ������� � �� �� ��� ����� �� ��

������ � � ���������� �����5������� .���6/

��� �=�� �� ����� �� ,?� & �" ��� �� ����

,* � �� ���� �� �������� ������ ��� (��

!��" � � ��� ����� � ������� � �� ������

�� �� C�3 ���� *�&* � ���������

#282#2 ���� ��� # 5������ �� =�>�� �� ��2 ;89<6

( ������ �% ��0 �!��"�� %���� ��� �����

�������� ��� � � � �� �� ��� F���� � ���

:&A;� �� �������0� ��� �� ����� �� !��"

%����� ��� �� �� �� ���� ������� ��� ���� ��

.&/� 5��� �� !��"�"�������� ������� ���

�� ����� �� ,* �" � � � �� ����� �� ��������

������ �� �� ���� � ��� � ������� �� ��� �

� 0 �� !��" ��� %���� ������� .��

)@�?� *�? �"/ � � �� ��� ����� � .� ���5� /

� � ��������� ����� ���� ���� � ����� ���� �����

5������ ��� �� =��������� ��� %����

������� �� �� � ����� �� ,* �" ��� 0 � ������

%�������� � � �� � ����� �� F"�6"!�

#282�2 ���� ��� � 5������ �� �4��� �� ��2 ;8*<6

E�0 �!��"�� %���� ��� ����� ����������� ���

���� ��� .�"7�/ �� �� ��� !���� � ��� :&';�

�� ��������� �� �� !��" %����� ��� �� ��

�� ���� ������ ��� ���� ��� .&/ � � .)/� �� ��� ��

����������� %������ � ������� �� !��" �

���������� ������ �� �� C ��� 0 � &� 6!�(�

��� ������� ����=� � �����0 �� �� %�����

������� �����0� *�3 � � *�) � �������

��� � ������ � �� �������� �� ����

� ������� %����� �� !��"� �� �������� �����

�� �� �� ����� ��� 0 � ������ ���� �� ����

������� ��� ���� �� )� ��� � F"�6"! � ������

������� ��� ����� :&';�

12 ����� �� ��2 3 ��4��� �� �����4�� ��4��4� 5"������6 -*� 5#%%#6 *789 &&

Page 4: Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

12 ����� �� ��2 3 ��4��� �� �����4�� ��4��4� 5"������6 -*� 5#%%#6 *789&)

���� &

H��� ��0 �!��"��� ��0 �1�� � � ��%� � ������� ���������� �� �� ����� �� ��� � �� �����

"���� � E�0�!��"�� ��0�1� 2�).�/ ,�%� ����" '� /�1�1

���� ��� 8

)�7���5���� �� *�@* *�A, &�'3 *�** *�** * � &*�@C

&�7��� �� *�3? *�AA &�?, *�** *�** * � &*�A3

,�� �� �� &�** &�)& &�'& *�&) *�** * � &*�A&

&��5� �� &�'& )�*, &�3' *�** *�** * � &*�A3

"������ � )�A& )�A' )�)3 *�&A *�C' * � '�??

3�I�� )�'A ,�&? )�&A *�,, )�@? * � '�*@

&�,�?����������� � ,�'? 3�&' ,�*A *�?@ &�@A * � '�')

)�3�?�������������� 3�CC 3�?@ ,�)@ *�@, )�@, * � '�3C

( ��� &�@, *�'* )�,* *�*' *�A) * � A�?)

,�H����� ��� )�&C &�,C )�'C *�)* *�3, * � '�)?

H����� � )�*& &�A? )�)' *�&& *�&, * � &*�?@

4�� ��� &�@C )�*, )�?C *�&3 *�** &) � '�&A

)�H�������� )�3& )�,* ,�&@ *�)3 *�AA * � &*�&C

)�)�������� ��� )�,, )�,& )�,A *�)' &�)3 * � A�?*

)�(������ �� ,�*@ )�?3 )�?C *�&@ &�)C & � '�*&

)��� ���� �� ,�3@ ,�*' )�C3 *�)) )�)3 &3 � A�',

3�"������,������� �� ,�,3 ,�&* ,�&& *�,A &�A3 * � '�*,

)�3�?����������� ��� 3�&@ ,�@' ,�&& *�?C &�C* * � A�A&

3���� ����� �� 3�,& 3�*@ )�)) *�&' &�@C @ � A�'&

!������)��� ��3��������� )�?, )�&3 ,�,) *�,) *�C* , � A�A?

������3��������)�

����� ����

)�3? )�3* )�A, *�3* *�)C ? � &*�@&

!����������� �� )�3* ,�@* &�C) *�&& *�** C � &&�)@

!�������)�������� 3�), 3�C) @�@' *�)) *�?, )? � &*�)C

!����������� &�@@ &�C' &�C3 *�&& *�** ? � &&�)@

����������� &�*& &�)3 &�A? *�*A *�** * � &&�&A

!�������� �� *�?* *�'@ &�'C *�&& *�** * � &&�3*

7������ )�C& *�'C &�?) *�** *�** * � '�@A

1������ 3�&) ,�*3 &�3A *�** *�** * � '�@'

���� ��� #

)�!�������� � ,�@3 ,�3, )�A3 *�,) &�)& * � '�@*

,�!�������� � ,�C& ,�?, ,�)) *�,C &�,? * � '�@A

3�!�������� � ,�?C ,�33 )�&C *�,C &�3, * � '�?)

&�)�,����������� � 3�&? 3�&3 ,�@@ *�3@ &�,' * � '�CA

&�)�3����������� � 3�)* 3�*? )�A& *�?& &�@) * � '�@)

&�)�3�?������������ � 3�AC 3�@* )�?* *�@? &�@? * � '�@?

� ��������� � ?�)@ ?�&A )�') *�C? &�), * � '�CA

���� ��� �

,�?�!����������� �� 3�?) ?�,C ,�&? *�?3 ,�3' )* � '�3C

)�3�@�������������� �� 3�C& ?�C& ,�), *�@@ ,�3' )* � '�'C

3�3 ��!����������� �� 3�CA ?�?A )�&' *�?3 ,�C' )3 � '�)?

)�3�?�������������� �� ?�&@ ?�'* ,�,A *�@3 ,�?& )) � '�@3

)�) ��3�?��������������� �� ?�?? @�)@ ,�@3 *�C' ,�@@ )@ � '�A*

)�) ��,�, ���������������� �� ?�3* @�&A ,�@' *�C? ,�?* )A � '�'&

)�,�3�?��������������� �� ?�33 @�3& ,�@@ *�C3 ,�&& )@ � '�C,

)�) ��3�3 ��@�@ ���5����������� ��

?�'A C�)' )�C* &�&? ,�33 3* � &*�,C

)�,�3�?�@�� ������������ �� ?�'* @�C3 3�*C *�A? )�@) )A � &*�*3

)�) ��,�, ��@�@ ���5����������� ��

?�'* C�&) ,�@) &�*@ ,�*? ,A � &*�&*

Page 5: Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

#2#2 �������,������� ��������

( ����� �� A& �������������� ���������� ��

��������� ��� ��� �� �� 3' ����� �� � �� ����

��� � ���� ���� �� �� ���������� ��������� �� ���%���

� ���� )� �� �������� ����������� ��2E6� .����

�������� 2 ��� E� �� 6 ��� ����/ ���� 0� :)&;

�� �� ������� ��� ��� �� �� ����� �� ������

� ���� &� �� ��2E6� ���� 0� �� %������� � �

��0 �1� %���� �� 0 ����� ���� �� ����� ��

��������� %����� ��� 0 �� "��0� .%� &�*�*/ ���

�� ���� ��� �0 .7������ "���� �� "(� J�(/�

������ %���� �� ��� � ���� � �� ������

���� %�����

�� ��2E6� ���� 0� �� ���� ��� �� �� � ��� ��

�� ����� ��K )�! �������� � �� �� ��($ .%� ,�)/

������� �������� .15���� �������� E���

15����� 6 0�� �/� �� "1$2H( �� �������

� ������ ������� �� %��� �� ��2E6� ���� 0� � ��

���������� ��� �0� ,�! ���������� ���

��������� �� �0� � ���� ��� 0 �� (�&

������ �� � �� 8(�� ������� ������� ��� �0

.15���� �������� E��/� ( ��� �� ������

������0���� � � ����� ����������� � ����� 0 �%���

� ������� %������� .��� �� �� �����5�� � � �� ��

0�����/ �� ��������� ��� 0 �� ��($ ���0���

G����� ������0���� ����������� � ����� 0 ��

������� �� ���%��� .� / ���� �%��� �� L��

� � ���� :));� �� ��������� ��� 0 �� 4�($2�

������� .���8���� � 7���� 0�� �(� J�(/�

�� �0� � ���� ��������� ��� �� ��($

�������� �� 5����� �� ����� ������� .����/

��� � � �� %��� � �� �1�(" � �� �� ��� ��� 0

�� 7(76E ������� �� �� %���� �����

�1�("@ .4"�6� 7���� 0�� 2H/ ��� ��� ��

����� ������� ������� ���������� � � � ����

12 ����� �� ��2 3 ��4��� �� �����4�� ��4��4� 5"������6 -*� 5#%%#6 *789 &,

���� & .������4� /

"���� � E�0�!��"�� ��0�1� 2�).�/ ,�%� ����" '� /�1�1

)�) ��,�, ��3�3 ���5����������� ��

@�*' C�,) ,�&C &�*, ,�)3 3* � &*�*,

)�) ��,�3�3 ��?�? ���������������� ��

@�,, A�*3 ,�&3 &�)) ,�*3 3@ � '�A@

)�) ��,�, ��3�?�? ��@�1������������� ��

@�&A A�,A ,�@@ &�,, )�*, ?* � &*�&)

)�) ��,�, ��3�3 ��?�? ��@�@ ��!������������ ��

@�&C A�)C ,�*& &�?3 *�)? @3 � &*�&C

���� )

�������������� ���������� ���������� � � ���� �����

������� !��������� ���������

"��0� ��� �� ���� E�0����� �� �� ���� ������� �������� ������ � .��0 �1�/

8(�� .��($/ ����� �0�� ������ ���� � ��������������� �������������� ������� ��� .??� @@� AA� ?A� ?@� @A/

��($ �������� ���� ������� ������ ���� ������� %���� � ���� � �� ��� .&�)�,/ � � � 0��

.&�)�,/� ���������� %���� ���� �������%���� ��� �� �����0 �� � �� ��� � � ��������� 0����

��� �� .�� �� �����5��� �� ��/

4�($�� L�� �� ���%���� ����+ ���� .&�&*/ ������ .,�@/ ����������� .3�@/+ %�� � .*�'/+ %��� �������

������ .3�@/+ ���������0���� ���� � ���� .��� �"�,� �"�)� ��"�)� ��"�� ��"�� ���"� ���"� �H�)�

�1�� �1� ��1� �"�/+ ������� ���������� .4�� 4�%� 4%/

�1�(" G� �� ��� �� ������� � �0� �� �� ��0��� ������� ������� ������� ./�1�1/� �0� �� �� �����

� ������� ������� ������� ./EJ�1/� �� ��� 0���% ����0 � � � � ������0 ��� .B� /� ��

��� ������% ����0 � � � �����0 ��� .B� /� �� �� ����� � ��

(��1E 6����� ��� ����� �0� �� ����� ./� 6H.���//+ ����������� �� �0� �� ���%���� .F� �.���//+

����� ��� ����� ����������� �� �0� �� ���� .=� 6H�.���//+ ��%������������ ����% �

�������� �� �0� .=� "!�.���//+ =� �� "!�.���/� =� �.���/� =� "!�.���/+ =� �.���/

�� �0� �� ����

Page 6: Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

����� �� ����������� (��1E .15���� ��������

E��� 15����� 6 0�� �/ ��� ��� �� �������� ���%����

����������� �� ������� 0 ������ �� �����

��� ���� �� �1�("@ � � (��1E ���������� �9

(�& 6H�($� F61�1L H1IMN H12H�6$

�$6"2�6� � � �� ������� �� ������ �� H1��

��� ��� �1�("@ � � ��) ��� ��� (��1E�

#2�2 ����������� ��������

����������� � ������ ��� ������ � �� �����

���� �� ��� 0 �� �2H2�(7 .%� &,�*/ ����������� �����

��� .�� ����� ���� "���0� �(� J�(/� �� ���

��0 ���� � ������� �� ������ ��0 �!��"�� ��

�� ���� ��� �� ���� �� ��� 0 ������ �0����� �

(��� ��� ��� � ���������� �� �� �0�����

� ������ ��� ��� �� ������ =�� ������% ���������

����%��� ������ ������ ( ������ �� �������� ��� ��

�0����� =����� � ��� ��� �� �� ���� ��������

� �������

( �%�� �� �� �������� �%��� 3' ����� ��

��� ����� ��0 �!��"�� ���� �� �%������� ������

��� �� ���0�� %������� � � �������0��� �� ��

���%� ���� �� �!��"�� %���� ��� � �� ���� �

���� �� ��� ������ � ������� �� ������ �����

��� ��0 �!��"�� � � �� ��������������

���������� �� �� ������ �� � ����� � �

����� ���� �� �%��� � 4�($ �� ������

��0 �!��"�� � � �� � %���0�� �� ��������������

� � 0 �� �� �������� ������ ��� ������

�0����� � ������ �� ���� �� ��0����� �� ��

���� ������� �������� ������ �� .��0 �1�/ �� ��

�� 0� ��� ��0 ���� � ������ �� ������

��0 �!��"��9

��0 �!��"7� � *�C,' ��0 �1� � *�C?A �&�� � 3'� ) � *�'&� � � *�?)� � � 3@*� ��%��� ���

��0 �1� � )&�?� ��� � �� �� ��� �� ����%��

��� �� )� �� ������ � �� ���� ���� ��>���� ���

�0�� �� ����� �� �� ��� ���� ���� �� ��

������ �� �� G���� ���������� � � ��%��� �� �

���� �� ��0 ���� � �� �� %������

( ������ �� �� �������� � � � ���� �� �� ���

�������� ������ �� .� G�0� )/ �� �� ���� ���

�� ��� ������� �� 6=� .&/� ��� ����� �� ��

������� � � ������� � $�%�� �� ���

����� �� � � ����=� � �� ������ �� �� ������ �

���� ���� ��0 �1� �%��� �� ������� 0 ��0 ���� �

������ ����9

��0 �!��"7� � *�C@& ��0 �1� � *�@)) �)�� � 3C� ) � *�',� � � *�3C� � � ?A?� ��%��� ���

��0 �1� � )3�&�

2 ���� �� ����% �� ����������� �� �� 6=�� .&/ � �

.)/� ���� ��0 ���� � �������� � ������� ��

��0 �1�� �� � %���0���� ���� ������ � � ������

12 ����� �� ��2 3 ��4��� �� �����4�� ��4��4� 5"������6 -*� 5#%%#6 *789&3

G�0� )� ���� �� �� ��0����� �� �� !��"����� �������� ������ � .��0 �!��"��/ �0�� �� �� ��0����� �� �� ���� ������� ��������

������ � .��0 �1�/ ��� ����� �� � ���� &� E0 �9 ����� ������ �� �� ��� ������ �� �9 ������� & � � ������� )�

Page 7: Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

��� �������� � �� ���� ������� �� ���%���

.'� / � � �� �0� �� �� ��0��� ������� �������

������� ./�1�1/� �� 0 ��� � �� � ��0 ���� �� ��

� ������ �� �� ��� ������ ��0 ���� � �������

����� �� ������� 0 ��� ��� ��� 3' ����9

��0 �!��"7� � *�A'C ��0 �1� � *�*)?C '�

� *�,3A /�1�1 � ,�A@ �,�� � 3'� ) � *�'@� � � *�,@� � � ,3,� ��%��� ���

��0 �1� � &'�*� ��%��� ��� '� � �3�&*� ��%��� ���

/�1�1 � 3�@3�

( ������ �� �� �������� ��� 6=� .,/ � ������ ����

�� �� ��� ����� �� �� ���� ��0 �1� ���

.6=� .&// �� ����%� �� � �������� ���� ��%��

������ � �� ������� 0 ��0��� ��0 ���� � ������ �

����� � ���� �� 5��� ��� �0�� �� ������� %����

��� ����� �� ���� � G�0� ,9

��0 �!��"7� � *�',@ ��0 �1� � *�*)A& '�

� *�,&' /�1�1 � ,�3* �3�� � 3C� ) � *�'A� � � *�)@� � � @@'� ��%��� ���

��0 �1� � )@�C� ��%��� ��� '� � �@�&)� ��%��� ���

/�1�1 � ?�AA�

�� ������ ���� �� ��0 �!��"�� ���� ��0 �1� ��

������ ��0 ���� � � � ��� �� ����� ��� �� � ������

�� ���� ��0 ���� �� � � �������� ��� ���������

� ��������� �������� 2 ���� �� � %���0�� ��

�� �� ��� � � 0 �� ��0 �!��"�� � ������ ���

��� �%���� ������� �� � ������ �� ��0 �1� � ��

�������������� ���� ��� ������ �0�����

� ������ �� ���� �� ������� 0 ��0 ���� � =����� 9

��0 �!��"7� � )�@, ,��� � *�3&C ����"

� *�)C& 2�)���� &�*@ �?�� � 3'� ) � *�A,� � � *�C&� � � CC�)� ��%��� ���,��� � C�)3� ��%��� ��� ����" � 3�*,� ��%��� ���

2�)��� � )�*?� ��� ,��� �� �� ����� ����

%�� ��������� ������ ������� �� ���%����

����"� �� �� �� �����������0���� .//����� � ����

��� ��� ����� ����� � � 2�).�/ �� �� ��� � ����

� 0�� �� �� � � �� � �����

65�� ���� �� �� �������� ��� 6=� .?/ �0��

�%��� �� �� ��� ��0 ���� � ������� .�������

� � ������� /� $�%�� � � �� ������ �� ��

������ ���� �%��� �� ������� 0 =����� 9

��0 �!��"7� � )�C, ,��� � *�3?* ����"

� *�,AC 2�)���� *�?3' �@�� � 3C� ) � *�'*� � � *�?3� � � &3)� ��%��� ���

��0,��� � '�A)� ��%��� ��� ����" � ?�@C� ��%��� ���

2�)��� � ,�C?�

2 ������ �� ������ %������� � ���� 6=� .3/ �� .@/

��� �� ��0 ���� ��� ����% ���� ����������� =�������

G�������� 5�� ���� �� �� �������� ��00���

12 ����� �� ��2 3 ��4��� �� �����4�� ��4��4� 5"������6 -*� 5#%%#6 *789 &?

G�0� ,� ���� �� ������� %���� .��� 6=� .3// �0�� �� ����� %���� ��� �� ��0����� �� �� !��"����� �������� ������ � .��0 �!��"�

�/�

Page 8: Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

���� ��� �� � �� ��0 ���� � �������� "������

��� ������ �� �� %������� ��� � 6=� .3/ .���� ,/

� � 6=� .@/ .���� 3/ � ����� ���� �� ��������� �

��� �� %������� �� �� �� �� �� �����

��%���� �� ������ ������

� ����������

�� ���������� ������������ ����� .!��"/�

���� ���� ��� � ������� �� � ���� ���% ��

�� &����� ������� ���� �� ����� �� ������

��������� �� ������ ������ ��� �� �������� � 0

���%���� �� ����� �� ��� !��" � � ����

.��0 �!��"��/ �� ����0�� �� � � ���� ��������� ��

�� �������� � 0 � �� � � �����0� �����0����

��� � ��� �� ���� �� � � ���� ���������

������ � .��0 �1�/ :&@�&';� 2 ���� ����� � �����

�� 3' ��0 �!��"�� %���� ��� � ����0 ��� 0����

�� ����� �� ��% � ������� � � ���� ������ �

���� ���� ���� �������������� ���������� ��� �

� ����� � � ����� �� �%��� � �������% ���

� � �� � ����� ���� � � 0�

�� �� 0� ��� ������ � ��������� ��

��0 �!��"�� �� ��0 �1� .6=� .&//� ���� �� ������

� %�� 0��� ����� ����� ��� �� ��� ��������

������ ��� ����� �� �� �� �� ��� ������ 0 � �

����� ������ 2 ���� �� ����% 6=� .&/ ��� �������

�� ��%� ��� �� ���� �� .6=� .)//� $�%�� ��

��� ������� ��� �� ���� �� ����%� �� ������ �

���� ����� �� �� �������� ������� � � ������

�� �� ������ � �=� �� �� ���� �� �� 0 ��

� �� ��� ������ ��������� �� � ��� �� ���

��% ���� � ��� � �� � ������� � ���� 4�($

� ����� ��� 0 ��0 �!��"�� :),;� 2� ��� � ��00���

���� �� � ����� 0 ���� ��� ��� ��� �� 0 �������

��� ����� � �� �� 5��� ��� �� ����� � ���� ���

�� ������ �� ��������� �� � �� ��% 5����

� � ����� ��� ���� �� �� ��� ��� �� ��

������ ���� � ����� ���� �� ����� ��� 0�����

�� �� !��"��� � � � � ���� ��� � �����

����� ����� ��� �� � ��% � ����%� �� ��%

� �������� 0�� ��0� ��� ��� ��� !��" :)3;� G�0� )

��00��� ���� �� ��0 �!��"�� %���� ��� �� �� �

�� 0���� ��� �� ������� �� 0 %���� ��� ��0 �1�

����� ����� �� �� �� ����� �� ������ �

��� ������ ������� � ���� ���� ����

��0 �1� �� ��� � �� � ��0 ���� � �� ������

��0 �!��"��� ��� �������� �� � �� ����

������� �� ���%��� .'� / � � �0� �� �� ��0���

������� ������� ������� ./�1�1/ ����� ������

� ��0�� � �� ��0 �!��"��� /�1�1� �� � ���� �� ��

�� �� � ����� �� �� �� � ����� � � ��� �

�� ����� �� � �����0 ��� �� 0 ��������� :)?;�

G������ -� � � ���� 0� :)@; ������ ���� ��

������� �������� �� �� � ����� �� ����

��� �� (� ����� �� �� ������ �� ����� ��

� �����0 �� �� 0 ��� �� ��� ��0� ��

���% ��� �� � ������ �� '� �� �� ������ ��������

�� ���%���� �� �������� �� � ������ ������0� ��

��0�� � ���� �� ��� ����� �� ������� ��� ���

� 0 :)C;� ( � �� ���� � �5 �� ���� ����% �� �

���0 ����� ��� �� ��� ��% � ���� � 0�� ��

� ��������� 2 ���� ���� ��� ��� ��� � .� ���

������� � / �� �� ������ ���� ���� �������� ��

�� ���������� ��� ���� ���� ���� '� �� ������� 0 ��

� ������ ������� �� ��� ������� �� 0���%

������ �� � '� � 6=�� .,/ � � .3/ � ����� ����

�"7� ��% ���� ��0 �!��"�� %���� ��� ����� �

5���� ��� � �������� ���� ��� ��0 �1��

"� ����� 0 ���� � �� ������ ��� � �����

�� ��� %����� � � � ����� ������ ���� ���

�� ��� �������� ������ �� ����� � 5�����

���%�� �� ���� �� 6=� .)/ �� ���� � .*�C?/�

2 ���� ���� ���� �� ���� ���������� � 6=�� .,/

� � .3/ �� ���� � ��0 �1� �� ���� ���� �� � ��

� ��� .*�'?/� ���� �� � �������� �� �� �� ���� ��

������� 0 ��� �� �"7� �� �� � ������ �� '� � ��������� ���� ���������� ������ 0 G�0� ) � ��

������ ��00��� ���� ��� �� � ��0�� ���� ��� ��

������ ���� ��� ��0 �!��"�� � � ��0 �1� ���

12 ����� �� ��2 3 ��4��� �� �����4�� ��4��4� 5"������6 -*� 5#%%#6 *789&@

���� ,

"�������� ����5 ��� �� %������� �� ����� � 6=� .3/

E�0 �1�'�

'� *�A?3

/�1�1 *�*C' � *�*'&

���� 3

"�������� ����5 ��� �� %������� �� ����� � 6=� .@/

,��� ����"

����" *�@&@

2�).�/ *�3,C *�,A*

Page 9: Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

����� �� ���� ��0����� �� �� �������� ������ ��

�� ��� ��� 3�?� �� � ��� ����� � G�0� ) ������ ���

�� �"7K� ���� ��% ��0 �!��"�� %���� �� @ ��� ���

����� �1� �� ��� 0����� ���� � ������� ��

������� �� '� � 6=�� .,/ � � .3/ ����� ������ ���

�� ���� � ��0 �1� �� � ���� �� �� � ����

2 ���� �� �� � %���0�� �� ������ ���� ���

�� ���% � ����� ��� ����� �� ���� �� ��

��0��� ����������� �� ������� �� ������ ����

��� ����� �� 5����� 0 �� �� � �� ��������

���� � ��0 �!��"�� %��� �� ��� ��� �� =��� �� 3�?

��� �� ������ ���� 0�%� �� ������� 0 ��� �����

��� 0��� ����������� �� � � � ���� �� ����� � ���9

��0 �!��"7� � *�'C& ��0 �1� � *�&** �C�� � )'� ) � *�AC� � � *�3&� � � &'3� ��%��� ���

��0 �1� � &,�'�

2 ���� �� ����� � �� �� �� ��� � �������

��� �� ��0 �!��"��� ������ ����� �� ���0�� ����

���� ���������� .��� ��0 �1� ��� 5�����/� 2

6=� .?/ �� ����� ���� %�� ��������� ������

������� �� ���%��� �,����� �� �� /����� � ����

��� ��� ����� ���� .����"/ � � ��� � ����

� � �� � ���� � 0�� .2�).�// �� ��� � �� �

������ �� ��� ��0 ���� � ������� �� ����%� .��

��������� �� �� ��� �� ���� � ������ �������/�

$�%�� �� �� ������� ���%��� � ��0��� �������%

��� .6=� .@// ��� �� �������� �� ��0 �!��"��� 2�

�� ��� ���� ������� ������ � ����� 0 �������

���� ��� ��� 0 � � ����� �� � � �� ������ � ���

�������� � 0 ��� !��" � � ����� ��� ������

������ ������� ��� ��� 0� �� ���� �� �� ,� %� ��

��������� ���� �� ����������� ������� ��

%������ ����" ������� �� ����� �� � � �� ��

������ ����� �0�� �� ������%�� �������� ����

��0 �!��"��� �� � � 0 �� ���� �� ��%���� �� �����

�� �� ��� ��� ����� ��� � � �� ���� ��

�� �� ��� �� ������� ��������������� ��

��������� 2�).�/ ���� �� �� ��� � ����

� � �� � ���� � 0��� ��������� ��� ��

��� ���� �5� �� � ���� �� � ������ ( 0���%

��������� ���� ��0 �!��"�� ��00��� ���� ���0�

������ ����� ��% �������� �������� � 0 ����

������� ��� ��� ��� � �� �� ��0� �� .!��"/ �����

����� �� � � ���� ������ �� ���� �������

������ ��� �� �"7K��

2 � ���� ����� �� �� �������� �� ��0 �!��"���

8�� � ��� :&C; ��� � ���� �� �� )A ����� �� � �

������� ��� ��0 ���� � 4�($�� �� ����������

��� �� 8�� � ��� :&C; � ����� ���� ��� �����0

�� �� 0� ����� ��� � � ���������� ���0 � ��� ���

�� ����� �� ��� ���������� ��� ���� ��� ��

��� ��� ���� �� ����� �� ��� �>�� ������

�� � ����� �� �� ��� ����� �� � �

���% ��� ���� �� �� � ����� �� � �0�� ���� ��0�

��0������ ���� �� �� � ����� �����0 �� �� 0

��� �� :)@;� 2 �� ��� � ������ � ���0� ���� ��

������� 0 � �� ��%�� �� �� ����� ��� ���

����� � ���0 ��� �� �������� ���� ����������

��% � ���������� ��� � ��� �� ����% ���

����� 6% ����0� � ���0� � � �� ��������

����0 ��� ���� �� ��� � ������� �������������

��0 ���� � ���� .6=�� .)/� .3/� � � .@// ��% �

��������

������ � �� �� ���%���� �� �� ������� ����

����� �� ���� � ������� ���� ������� � ��%

���� ���� �� 5� � �� �������� � 0 � �� ������ ��

�� �� � � �� ��� ��������� � ��

�������������� �������� �� ���� ������� � �

���� �� ����� � ���� �� ������� �� ��� ��

����� ������� ����� �� ������ �� �������� ����0�

� �� ����� �� �� ����0�� �� ���� � �>�� ��� �

����������� �� � ����� �� � ������� � ���� �� �����

��� 0����� �� �� ������������ �������� :)A;� ��

������� �� ������������ !��" �� ���� �0���� ��

��� �� �������� � 0 �� ������� ���

��� � �� ��������� ��� &����� ��� �����

��� �� ������ � ����0 �� � ��� �� � ����� ��

� ���0 5� � ���� �� ����0� ������ ����� 0�����

� ������ ��������

�� ������ .6=�� .)/ � � .C// � ����� ���� ��� ��

����� �� �� ����� ��� �� � ���� 0 �� ��

������ ���� ��� ��0 �!��"�� � � ��0 �1�� ����

�� ��00�� ��� �� ����� ��%� ��0 � ��� 0

��0 �!��"�� � ���� �� ��0 �1�� !���� ����� ���

�� �� ��%���� ����� �� � �� ���������

��� &����� �� � � ���������� ������������

����� .!��"/� G�� � ��� �� ���� �� ����� ���

0���� � &����� �� �� ����� � �����5�� 0����� !��"

�� ��� � � ��� 0����� � � � ��� �� ����5

������������ ����� 0����+ &����� �� �� ��� � �0��

��������� ����� � ����� !��" ��� ����� +

&����� �� ��� � �� � ��������� ���� �����

!��" ��� ���� �������� �� ��� ������ � ��

��� �� ���� &����� �� �� ����� � ��� ���% ��

����� !��" �� ��� �� ��� � ����� ������

12 ����� �� ��2 3 ��4��� �� �����4�� ��4��4� 5"������6 -*� 5#%%#6 *789 &C

Page 10: Physico-chemical interpretation and prediction of the dimyristoyl phosphatidyl choline–water partition coefficient

������� �������� ���� ��� � ���� 0 � %�� ������

�� ���� �� � ������� :&@;� 7��� � ����

%�� � �� �� �������� 0 ���� ��0 �!��"�� � � ��0 �1�

�� �� ��0��� ��������� � � ���� !��" ��������

������ �� �� �� ���%�� � ���� ��� ����� � ���

������� �� �� �������� � 0 ���%���� �� �������

�����0� ��� ��

� ����������

���� ����� ��� ������� � ��� �� �������� ������

��� ������ �� ��� �� !��"����� ���� � �

��� � � ���� 0 ������ ���� ���� �� &����� �������

����� E�0 �1� �� � ���� ��� �� ������� ��

��� ��0��� ����������� ������� G�����

���� �� ������� ���� �������� ��0 �!��"�� �

�� ����� �� �� �� ��� �������������� �������

����� �� �������� � 0 �� ��������� �� � ���

����%� �� � ��� 0���� � !��" ��� &����� ���

� �� � � ��������� �� ���� ����� ��� ���������

����� ���� ���� ���%��� ����� �� ������

��0 �!��"�� ����� ��� � �������� 0���� ��

����� ���

�������� ������

���� ����� ��� �� �� � ���� �����0� �� 6�����

"����� 2 ������ "�� ��� E� 0 $� 0�������

2 ������% ."6G2"�E$2/�

�� �������

:&; 6� 1%��� � ����� �O�� �� H�� �� N�0���� � 7����0 ���

(��0� ����� ���0�� - �� %� F����% G������

F�� �� &'*&�

:); �� ���� 65�� ������� ��������� 3) .&A''/ &*'�

:,; ��-� ������� � 9 "�(� $��� .6��/� "���� ��%

����� �� "������� %��� 3� ��0�� ����� 15����� &''*�

��� )3&�)'3�

:3; !�-� E�%� 0��� � -� "�� 2 �� "����� ���� 3* .)***/ &'?�

:?; $� "���� ��� (��� "�� ��� �� ? .&'?&/ CC3�

:@; "� �� ���� (��� "�� $�� ) .&'@'/ ),)�

:C; -�"� !��� � 6 %��� � ����� ����� @& .&'A?/ )*,�

:A; $�1� ������ $��� F��� ����� $�� ' .&'')/ @@,�

:'; ����!� "�� � � -�"� !��� � F��� ����� F� �������!�� �� �

6��� -� ����� ���� C .&'''/ ,)?�

:&*; $�G� $ �� �� ����������� G��0 ��� "� ��� ��

6��%��� (������ &'CC�

:&&; H� 7�� �� -� ��������� 2 �� -� ����� A .&'A&/ &',�

:&); ��6� -���� (��� ��=� H�G��� ��� F�E� G�� � H�

!��������� E� "� �� -��� -� ����� ���� C? .&'A@/ &*'A�

:&,; 8� L��� ��� -� 7������ )& .&''@/ ?CC�

:&3; E�(� ��>�� G�(��� E�� ��� -� E� ��� -� "�� �����

&&* .&'''/ @?@*�

:&?; �� ������ 2� ������� $��� ����� � �� �� ���� 7�����

7������� (��� @?* .&'A&/ )&�

:&@; ����-� 8��� 6�J� $���� ��-��� 8������ "�-� "����

-�E��� �� �� "�� $�� ��5����� && .&''A/ A3C�

:&C; ����-� 8��� 6�J� $���� "� ����> � 2� %� ������ � 7�-�

7���������� �� �� � ��-��� 8������ -�E��� �� ��

"�� $�� ��5����� &* .&''C/ &*@C�

:&A; (���"� F����� -��� E������� F� F�������� ��M� �����

-� ����� ���� CC .&'AA/ )@?�

:&'; ��-� !����� ��(�-� F�%��� 6 %��� � ���� ��� ��� )' .&''?/

)?3A�

:)*; �� 7�������� H� 7����� "���� ��� "�� ? .&''A/ ,?,�

:)&; !� �� � 0�� -� "�� 2 �� "����� ���� )A .&'AA/ ,&�

:)); E�7� L��� E��� ����� �������� "� ���%��� � ���������

(���%��� ( ������� ����� "�������� 6 0�� �� &'A@�

:),; ���� �������� -�$� ������ 4�� �� ��������(��� $���� &'

.)***/ ,,'�

:)3; $��� (���� � (��� !�%��� "�H� �� ��� -� ����� ���� A3

.&''?/ &&A*�

:)?; �� L����� � 8��� E��� �%� (�$� L������ �� "�� $%� '@

.&''@/ &*)C�

:)@; 7� -� � (�-� ���� 0�� ����� $�� &, .&''@/ &CA@�

:)C; -�"� !��� � ��-�(� 7������ � ����!� "�� � � �� ���� ��

� 9 -�6� ��� �� ���� 6 0�� �� ���� �������� H�-� L���

.6���/� 4�($ AA9 ����� 2 �� ���� �� ��� ���� 1 4�� ���

����% ���������(���%��� $����� ����� � 6 %��� ���

��5�����0�� J� !1"� 1� $��0� &'AA� �� 3,�

:)A; M��� "���� -�(� $�0��� -� ����� ���� A* .&''&/ C?C�

12 ����� �� ��2 3 ��4��� �� �����4�� ��4��4� 5"������6 -*� 5#%%#6 *789&A