PASTEURELOSIS NEUMÓNICA (MANNHEIMIOSIS) BOVINA

7/22/2019 PASTEURELOSIS NEUMNICA (MANNHEIMIOSIS) BOVINA

1/22

Abstract

Mannheimia haemolytica (Mh) is the most pathogenic bacteria associated with bovine pneumonicpasteurellosis (mannheimiosis); furthermore, it is the most important economic loss disease in beefcattle, and the second one after gastrointestinal diseases mainly in less than a year old dairyheifers. It is a common and important opportunistic agent in bovine nasopharynx. Stress

immunosuppression or the infection caused by respiratory viruses or Mycoplasma spp, lead to itsestablishment and multiplication in lung tissue. A1 and A6 are the most frequent serotypes inpneumonic injuries, and A1 and A2 in the nasopharynx of healthy bovine. Among the Mh virulencefactors, leukotoxin is the most important one; its primarily toxic effect is primarily against leukocytesin ruminants. A better understanding of the epidemiology and the importance of Mh speciesrequires new identification criteria that include molecular techniques, as well as more sensitiveprocedures regarding biochemical and immunological isolation and identification. Antimicrobialefficacy, as prophylactic or therapeutical agents, has been very variable due to diagnosisinaccuracies and to the increase of multiresistant strains. There is a varied range of bacterins thathave been used over the last decades; the efficacy of many of them has been questioned as theyonly protect partially and some of them might even increase the morbility. Vaccines with asupernatant culture containing leukotoxin and other soluble antigens, or isolated bacterial extractsor combined with bacterins, have been recently developed showing satisfactory results. Efficientprevention and control of bovine mannheimiosis should be supported by a reliable diagnosis, use ofvaccines and efficient therapeutic measurements, together with good management practices.

Key words: Bovine Mannheimiosis, Etiology, Prevention and Control, Bovines.

Resumen

Mannheimia haemolytica (Mh) es la bacteria ms patgena y ms comnmente asociada con lapasteurelosis neumnica (mannheimiosis) bovina, la enfermedad econmicamente ms importanteen bovinos productores de carne, y la segunda, despus de las enfermedades grastrointestinales,en becerras lecheras, principalmente menores de un ao. Es un habitante normal y un importante

agente oportunista de la nasofaringe de bovinos; la inmunosupresin por estrs o la infeccin porvirus respiratorios o por Mycoplasma spp, propician su establecimiento y multiplicacin en el tejidopulmonar. El A1 y el A6 son los serotipos ms frecuentes en lesiones neumnicas, y el A1 y A2 ennasofaringe de bovinos sanos. Entre los factores de virulencia de Mh, la leucotoxina es el msimportante, cuyo efecto txico primario es en contra de los leucocitos, particularmente derumiantes. Para comprender mejor la epidemiologa y la importancia de las especies de Mh, serequieren nuevos criterios para su identificacin, que incluyan tcnicas moleculares yprocedimientos ms sensibles de aislamiento e identificacin bioqumica e inmunolgica. Laeficacia de los antimicrobianos, como profilcticos o teraputicos, ha sido muy variable debido ainconsistencias en el diagnstico y al incremento en la frecuencia de cepas multirresitentes. Existeuna amplia gama de bacterinas empleadas durante dcadas; sin embargo, la eficacia de muchasde ellas ha sido cuestionada, pues slo protegen parcialmente, incluso algunas puedenincrementar la morbilidad. Recientemente se han desarrollado vacunas con sobrenadante de

cultivo que contienen leucotoxina y otros antgenos solubles, o extractos bacterianos solos ocombinados con bacterinas, con resultados muy satisfactorios. La prevencin y el control eficaz dela mannheimiosis bovina deben sustentarse en un diagnstico confiable, vacunas y medidasteraputicas eficaces, y buenas prcticas de manejo.

Palabras clave: Mannheimiosis Bovina, Etiologa, Prevencin y Control, Bovinos.


2/22

Introduccin

Entre las enfermedades infecciosas que afectan al ganado bovino, las de origen respiratorioconstituyen la principal causa de prdidas en el mbito mundial, especialmente en animalesjvenes.

1Se calcula que aproximadamente 25% de los becerros experimentan al menos un

episodio de enfermedad respiratoria durante el primer ao de vida, con tasas que van de 14 a 38%;

estas incidencias son mayores en los becerros machos que en las hembras, tanto en la etapaprevia al destete como en los periodos de engorda; adems, se estima que las neumonas causanaproximadamente 75% de los casos clnicos, y provocan de 45% a 55% de la mortalidad; sutratamiento llega a representar 8% del total de los costos de produccin.

2

Los microorganismos del gnero Pasteurella constituyen las bacterias ms frecuentementeaisladas de los procesos neumnicos de los animales domsticos; entre los cuales el problema demayor significacin es la pasteurelosis neumnica bovina (PNB), tambin llamada neumona porfiebre de embarque; enfermedad respiratoria generalmente fatal que se caracteriza por unapleuroneumona fibrinosa grave, y que afecta principalmente a animales menores de un aorecientemente transportados, con una mayor incidencia en becerros de 1 a 5 meses de edadnacidos durante otoo e invierno.

36

La PNB es una de las enfermedades ms costosas que afecta al ganado bovino productor de lecheo productor de carne, especialmente en aquellos animales de reciente ingreso en el hato; seconsidera la enfermedad econmicamente ms importante en bovinos productores de carne y lasegunda, despus de las enfermedades grastrointestinales, en becerras lecheras,

7por lo que es

una de las principales causas de prdidas en la industria ganadera bovina del mundo; se calculaque representa 30% de la mortalidad total en bovinos, y al menos 1% en las ganaderas deengorda, y est relacionada con prdidas econmicas por ms de mil millones de pesos anualestan slo en Norteamrica.

3,6,810Adems, es responsable de la morbilidad y prdidas por ganancia

de peso en al menos 10% adicional de estas ganaderas; consecuentemente, los costos por laenfermedad en la industria ganadera de Estados Unidos de Amrica son de, al menos, 640millones de dlares anuales.

9Esta enfermedad es una de las principales causas de morbilidad y

mortalidad en becerras lecheras en ese pas y Canad, con brotes que llegan a afectar entre 80%y 90% de los animales, con tasas de letalidad menores a 5%.

5

Considerando que Mannheimia haemolytica es el principal patgeno bacteriano de la PNB, paralos propsitos de este artculo se nombrar a esta ltima como mannheimiosis bovina a lo largo detodo el texto.

Et io lo ga

La etiologa de la mannheimiosis bovina (MnB) es multifactorial y se ven involucrados diversosfactores de riesgo que determinan la presentacin y severidad de las lesiones neumnicas; entreellos destacan los relacionados con el manejo que generan estrs, como cambios bruscos detemperatura, hacinamiento, transporte, confinamiento de animales de diferentes edades,

condiciones del destete, nivel de inmunoglobulinas en el calostro, entre otros; asimismo,intervienen otros agentes infecciosos de origen bacteriano y particularmente agentes primarios detipo viral, tales como el virus sincitial, parainfluenza,

3rinotraquetis infecciosa bovina (herpes virus

1) y, ocasionalmente, adenovirus.4,5,10,11

Estos virus causan efecto citoptico directo en el aparatorespiratorio; adems, reducen la remocin bacteriana y la capacidad fagoctica del macrfagoalveolar, lo cual facilita la colonizacin pulmonar por Pasteurella spp.

11

Las especies del gnero Pasteurella son comensales habituales del tracto respiratorio superior delos rumiantes domsticos y silvestres, y no obstante que Mannheimia (Pasteurella)


3/22

haemolytica y P. multocida con mucha frecuencia se encuentran asociadas con enfermedadesrespiratorias, hay variaciones entre las diferentes cepas en su capacidad para producir enfermedaden los diferentes huspedes animales.

9,12

P. multocida se ha identificado como un importante patgeno de los animales durante muchosaos; sin embargo, la frecuencia y la significancia de Mannheimia (Pasteurella) haemolytica como

un patgeno potencial ha sido reconocida ampliamente en los ltimos aos, y numerosasinvestigaciones sobre enfermedades virales han demostrado que P.multocida y Mannheimia (Pasteurella) haemolytica, actan ms frecuentemente como invasoressecundarios que como causa primaria de enfermedad.

13

Mannheimia (Pasteurella) haemolytica es la bacteria ms patgena y ms comnmente asociadacon el complejo de las enfermedades respiratorias de los bovinos, particularmente con laMnB.

6,8,10,14La bacteria es un habitante normal de las criptas de las tonsilas del bovino sano y,

adems, un importante agente oportunista del tracto respiratorio debido a que usualmentecoloniza la parte alta de ste y, bajo ciertas condiciones de inmunosupresin del husped, afectasus mecanismos de defensa, lo cual permite que la bacteria se establezca y se multipliquerpidamente, penetre a los pulmones durante la inhalacin e inicie una infeccin activa del epitelioalveolar.

10

Esta bacteria ha sido sometida a una extensa reclasificacin; originalmente fue llamada Bacteriumbipolare multocidum por Theodore Kitt, en 1885;

2,9posteriormente, en 1896, Flugge la

renombra Bacillus boviseptica9y, en 1932, Newson y Cross proponen el nombre de Pasteurella

haemolytica.2,9,15

Entre 1959 y 1961, Smith describe dos biotipos de P. haemolytica sobre la basede caractersticas fenotpicas y de diferencias epidemiolgicas y patolgicas, clasificndolos comoA y T, segn su habilidad para fermentar la Larabinosa o la trealosa, respectivamente.

2,9,1518

Biberstein et al.15,19

desarrollaron en 1960, un sistema de serotipificacin basado en lahemoaglutinacin indirecta (HAI) de antgenos capsulares solubles, y, en 1962, Biberstein yGills

20informaron sobre una asociacin consistente entre los serotipos y los biotipos que establece

una serotipificacin capsular.15,16

En investigaciones subsecuentes, el nmero de serotiposreconocidos aument a 17

15,21los serotipos 3, 4, 10 y 15 asociados con el biotipo T y el resto con

el biotipo A; las cepas no tipificables por HAI fueron clasificadas posteriormente por contrainmunoelectroforesis, demostrndose nueve serogrupos adicionales.15

En 1990, a partir de los resultados obtenidos en estudios sobre hibridacin ADNADN,propiedades bioqumicas y anlisis genticos, los serotipos T3, T4, TIO y T15, del biotipo T, fueronreclasificados como una especie separada que se denomin Pasteurella trehalosi.

22En 1995,

Younan y Fodor23

informaron sobre el aislamiento deP. haemolytica serotipo 17 (A17).Recientemente, P. trehalosi ha sido reclasificada como Bibersteinia trehalosi.

24

Mannheimia haemolytica

El gnero Pasteurella est conformado por un amplio grupo de especies de bacterias que seentrecruzan en sus caractersticas fenotpicas y genotpicas, por lo que desde hace varios aos sehan realizado investigaciones con el propsito de clasificarlas adecuadamente. Los primerosestudios sobre hibridacin del ADNARN demostraron una homologa de 8% a 24% entreaislamientos de P. haemolytica y P. trehalosi; posteriores investigaciones validaron dichosresultados con estudios de hibridacin de ADNADN, los cuales mostraron una homologa de 0%35% entre P. haemolytica y P. trehalosi.

12


4/22

En 1999, mediante estudios de ribotipificacin, electroforesis de enzimas multilocus,secuenciacin del gene 16S del ARNr e hibridacin ADNADN, los serotipos de P. haemolyticaA fueron reclasificados en el nuevo gneroMannheimia. En consecuencia, los anteriores serotiposA de P. haemolytica (A1, A2, A5, A6, A7, A8, A9, A12, A13, A14, A16 y A17) fueron renombradoscomo Mannheimia haemolytica. El serotipo 11 restante, que no est relacionado con Mannheimiahaemolytica, se renombr como Mg.

2,6,9,15

Segn la clasificacin propuesta por Angen et al.,15

el gnero Mannheimia comprende cincoespecies: M. haemolytica (Mh) (originalmente biogrupo 1) que incluye los serotipos A (1, 2, 59,1214, 16 y 17), todos aislados solamente de rumiantes. M. granulomatis, que incluye a cepaspreviamente clasificadas como P. granulomatis, Bisgaard taxn 20 y P. haemolytica biogrupo 3J.Incluye tambin todas las cepas clasificadas genticamente como P. haemolyticalike (parecidasa P. haemolytica), aisladas de conejos, liebres y bovinos, asociadas con neumonas y conjuntivitispurulenta en lepridos y con granulomas en piel y otras enfermedades en bovinos. M.glucosida incluye cepas originalmente clasificadas como P. haemolytica biogrupos 3 AH y 9, ascomo al serotipo 11 y todas sus cepas, la mayora aisladas de cavidad nasal de borregos, enalgunos casos con neumonas u otras enfermedades. M. ruminalis, que incluye cepas nohemolticas de P. haemolytica previamente descritas comoActinobacillus lignieresii y P.haemolytica biogrupo 3J, aisladas del rumen de bovinos y ovinos, no asociadas con estadospatolgicos. Por ltimo, M. varigena, que comprende un grupo de cepas originalmente clasificadas

como P. haemolytica biogrupo 6 y Bisgaard taxn 15 y 36, han sido aisladas de bovinos y porcinos,y asociadas con sepsis, neumona y otros estados patolgicos.

2,9,15,25

Mh es una bacteria gramnegativa, encapsulada, no mvil, de forma cocobacilar o de bacilopequeo pleomrfico (1 a 3 um de dimetro), mesoflica, aerobia y anaerobia facultativa, oxidasapositiva e indolnegativa; fermenta glucosa y otros carbohidratos, produciendo cido pero no gas.Es negativa a las pruebas de rojo de metilo, gelatinasa, VogesProskauer. Crece en agarMacConkey, en medios enriquecidos como agar chocolate o agar sangre, formando colonias lisasde color blanco grisceo, con tamaos de 1 a 2 mm de dimetro despus de 24 h de incubacin.La mayora de las cepas producen una hemlisis cuando crecen en agar con sangre de bovino.Es capaz de fermentar Dsorbitol, Dxilosa, maltosa y dextrina; no fermentan arabinosa oglucsidos, y son negativas a la ornitina descarboxilasa y NPG (glucosidasa), pero positivas aONPF (fucosidasa). La presencia de cpsula con propiedades de superficie antifagocticas la

hacen parcialmente resistente a fagocitosis.15,18

Mh se asla normalmente de procesos neumnicos en bovinos y ovinos, y tambin de procesossepticmicos en borregos y de mastitis en ovejas. Algunos de los serotipos probablemente formanparte de la microflora residente del tracto respiratorio superior de los rumiantes, aunque confrecuencia es difcil su aislamiento.

4,15,18En bovinos que desarrollan pasteurelosis neumnica,

probablemente haya portadores sanos de la cepa de Mh que causa la neumona, o es posible quesean cepas adquiridas de otros animales.

4

Mh es el principal agente etiolgico en el complejo de las enfermedades respiratorias de losbovinos, particularmente de la MnB.

5,11,25Constituye un nuevo miembro de la familia

Pasteurellaceae que originalmente inclua los gneros Haemophilus,Actinobacillus y Pasteurella (HAP). La mayora de los miembros de la familia HAP son comensalesde la mucosa de mamferos, incluyendo humanos, pjaros y reptiles, no obstante, muchos sonpatgenos oportunistas y pueden producir enfermedad bajo condiciones apropiadas.

6,18

De los 12 serotipos reconocidos de Mh, A1 y A2 son los ms prevalentes en el mundo. Estos dosserotipos son los que con mayor frecuencia se aslan de becerros;

26el A1 es el que se asla ms

frecuentemente de lesiones neumnicas en los casos de MnB, aun cuando en bovinos sanos sonms frecuentes los serotipos A1 y A2 en la nasofaringe,

27en ocasiones tambin se aslan los

serotipos A2, A5, A6, A7 y A9.2,5,6,810,28,29

En estudios recientes en Alemania y Estados Unidos deAmrica, adems del A1, el A6 ha sido registrado como el ms frecuentemente aislado en


5/22

pulmones neumnicos de bovinos.30,31

Tambin se han registrado los serotipos A11 (Mg) yA12.

2,32,33No obstante que en los bovinos, por lo general, slo se encuentran los serotipos A1 y A2,

este ltimo se asocia con la pasteurelosis neumnica ms frecuentemente en ovinos que enbovinos.

8,28,34Estos dos serotipos son capaces de colonizar el tracto respiratorio superior de

bovinos y ovinos y con frecuencia son especieespecficos en su capacidad de afectar el tractorespiratorio inferior y producir enfermedad.

2,9

En los bovinos sanos es comn que el serotipo A2 est presente en el tracto respiratorio superior,pero despus de un estado de estrs o de una infeccin viral, el serotipo A1 rpidamentereemplaza al A2 como el serotipo principal; esto probablemente se deba a una transmisinhorizontal a partir de animales enfermos que tengan el A1 activo en secreciones nasales.

2,9Se ha

podido comprobar que el serotipo A2 predominaba en exudado de becerros en granja, y cuandoestos animales fueron trasladados a corrales de subasta y luego a corrales de engorda se encontrque predominaba el A1. En los ovinos es posible aislar cualquiera de los serotipos.

16,28Diversos

estudios serolgicos sugieren que es posible que ocurra la transmisin interespecie de Mh desdeanimales domsticos hacia animales silvestres o de vida libre, o viceversa.

35

Cepas de Mh no tipificables (NT) tambin se aslan con frecuencias variables, a veces altas,17

quevaran dependiendo de la fuente de aislamiento. En Gran Bretaa se ha registrado 9.3% en

exudado nasal y 12.8% en pulmones neumnicos de becerros,

26

y en vacas, 20.1% en exudadonasal, 16.2% en pulmones neumnicos, 29.4% en sangre, 25% en hgado y bazo, 72.2% en tractogenital, 89.5% en ubre y leche, 66.7% en tracto intestinal y 16.6% en cerebro.

36En exudado nasal

de ovinos se ha registrado 9.3% en Mxico,37

15.8% en Estados Unidos de Amrica38

y 25% enDinamarca,

39y en pulmones neumnicos, 3.6% en Etiopa,

407% en Hungra

21y 8.3% en Turqua.

41

En estudios recientes realizados en Mxico se encontraron frecuencias superiores a las registradashasta ahora en otros pases. En exudado nasal de bovinos se encontraron frecuencias de 69% enanimales sanos y 67% en animales enfermos,

32,33y en pulmones neumnicos de bovinos, 71%.

42

Esta cepas NT normalmente corresponden al biotipo A43

y se han descrito como mutantes de Mh,algunas de las cuales presentan deficiencias en la produccin de antgenos solubles.

44En este

sentido, algunos estudios citados por Frank43

mencionan la posibilidad de que cepas clasificadas

como NT por la tcnica de hemoaglutinacin indirecta (HAI), quiz sean cepas serotipificablesmediante dicha tcnica, pero que la imposibilidad de reaccionar a la HAI puede ser consecuenciade la prdida de antgenos serotipoespecficos en la superficie celular, lo que corrobora lasdificultades que se presentan para la serotipificacin de Mh mediante la HAI.

Mecanismos de patogenic idad

Los mecanismos de patogenicidad de algunos de los miembros de la familia Pasteurellaceae noestn an muy claramente definidos, particularmente la patognesis de la PNB, ya que algunos delos mecanismos que le permiten a Mh establecerse y diseminarse durante la infeccin, no estnesclarecidos satisfactoriamente, incluso existe la posibilidad de que haya diferencias en dichos

mecanismos entre las cepas aisladas de diversos cuadros neumnicos, as como de cepasprocedentes de animales sanos.

6,9,45

En las cepas de Mh que afectan a los rumiantes se han identificado diversos mecanismos deexpresin de su patogenicidad a travs de potentes antgenos, los cuales incluyen: una leucotoxina(Lkt) con actividad especfica contra leucocitos; lipopolisacridos (LPS), protenas de membranaexterna (PME), protenas reguladas por hierro (PRH), fimbrias, enzimas (neuraminidasa, proteasas,metaloglicoproteasas), antgenos aglutinantes serotipoespecfico y adhesinas; adems de lacpsula y plsmidos de resistencia a antibiticos.

6,8,14,4648Todos estos mecanismos juegan un


6/22

papel fundamental en la patognesis de la enfermedad; sin embargo, slo la Lkt es consideradacomo el factor de patogenicidad primario ms importante.

10,14,45,46Todos los genes relacionados

con los factores de virulencia identificados han sido localizados en el genoma de Mh A1, el cual hasido secuenciado recientemente.

Leucotoxinas (Lkt)

Las Lkt son un grupo de exotoxinas que producen su efecto txico primario en contra de losleucocitos, en particular los leucocitos de rumiantes, especialmente las clulas polimorfonucleares(PMN).

10,48,50,51La toxina origina una amplia variedad de efectos biolgicos sobre los leucocitos

bovinos, cuyo resultado final es una pleuroneumona fibrinosa aguda.10

'50

En estudios realizados en 198018

se pudo comprobar que el sobrenadante libre de clulas decultivos de Mh A1 poda producir fagocitosis a bajas concentraciones y era citotxico a altasconcentraciones; posteriormente se pudo descubrir que el sobrenadante contena una leucotoxina(Lkt) termolbil secretada por Mh durante su crecimiento exponencial.

9,18

La Lkt A de Mh forma parte de la familia de exotoxinas producidas por bacterias gramnegativas,llamadas toxinas RTX, en razn de que contienen un nmero variable de dominios de aminocidos

repetidos ricos en glicina, de los cuales la familia de toxinas RTX (repeats

in

toxin) deriva sunombre y causan una amplia variedad de efectos caractersticos sobre las clulas en queactan.

9,45,47,52,53Las toxinas RTX se han encontrado en los 12 serotipos del gnero Mannheimia.

18

La Lkt de Mh es una protena termolbil, calciodependiente, estable al oxgeno y al pH, y solubleen agua, y las ms altas concentraciones en su produccin se dan en la fase logartmica delcrecimiento de la bacteria.

54,55Se ha podido comprobar que el hierro es un factor requerido para el

ptimo crecimiento de la bacteria y para la produccin de la Lkt.56

Los genes de la Lkt de Mh han sido secuenciados y la toxina se ha expresado en E. coli. Laorganizacin gentica del opern de la Lkt de Mh (lktCABD) es similar a la del opern de lahemolisina de E. coli (hlyCABD), y contiene cuatro genes. El primer gen es el lktC el cual codificauna protena (LktC) que es la responsable de la activacin de la leucotoxina (Lkt) por acilacin. El

segundo gen es el MA, el cual codifica la estructura protenica de la leucotoxina (LktA). Finalmente,los genes lktB y lktD codifican para las protenas LktB y LktD, que en conjunto son responsables dela transportacin y la secrecin de la leucotoxina (LktA).

10,14,45,52

La Lkt de Mh tiene una estrechaespecificidad contra clulas blanco y es citotxica contra los leucocitos de rumiantes,

18y se ha

identificado a la molcula CD18 como el receptor que interviene en la adherencia de la Lkt con losleucocitos de rumiantes.

10,18,52,57

La actividad de la LktA contra las clulas blanco es dosis dependiente y se puede clasificar en trescategoras. A muy bajas concentraciones la leucotoxina activa las clulas blanco para experimentaruna interrupcin de la respiracin y la degranulacin. A medida que la concentracin deleucotoxina se incrementa, las clulas blanco son estimuladas para que experimenten apoptosis(muerte celular programada); cuando la concentracin de la leucotoxina es alta se presenta unanecrosis de las clulas blanco como consecuencia del dao a la membrana debido a la formacin

de poros. De esta manera, aumenta la posibilidad de colonizacin de la mucosa respiratoria porparte de la bacteria.

9,10

El efecto mejor conocido de las toxinas RTX sobre los neutrfilos es la formacin de poros (0.9 a 3nm de dimetro) que atraviesan la membrana.

18En altas concentraciones, la Lkt causa una rpida

(515 min) prdida del potasio intracelular y el hinchamiento de la clula. La formacin denumerosos desperfectos de la membrana plasmtica depende del calcio; entre ellos se incluyenporos hasta de 10 nm de dimetro sobre la superficie de la clula, estos poros hacen que la


7/22

membrana celular sea permeable a los iones y a la salida de agua, lo que origina la lisiscelular.

9,45,47

Por lo tanto, en la MnB los macrfagos alveolares desempean un papel central en todos losprocesos celulares y en la cascada inflamatoria que conduce al dao pulmonar.

10Entre los

leucocitos, los macrfagos son ms resistentes que los neutrfilos contra el efecto ltico de las Lkt,

y entre los macrfagos alveolares son ms resistentes los de los bovinos adultos que los debecerros menores de 16 semanas de edad.2

La induccin de la secrecin y la liberacin de pptidos quimiotcticos vasoactivos por clulasmaestras, aumenta el nmero de leucocitos disponibles en el lugar de la inflamacin, en donde seproducen depsitos fibrinosos, este proceso culmina en una neumona fibrinopurulenta aguda.Cualquier oportunidad de respuesta inmune secundaria es interrumpida por la actividad de la Lkt,que previene la blastognesis de los linfocitos.

10

La interaccin de la Lkt con el sistema inmune del husped es compleja e inteligente; induceefectos biolgicos en los leucocitos bovinos de una manera especieespecfica,

47,58,59pone al

sistema del husped a trabajar en beneficio de la bacteria y deja a los tejidos de dicho portadordesvalido en contra de la infeccin.

Protenas de m emb rana ex terna (PME)

Se han realizado estudios enfocados a la identificacin de protenas de la superficie celular y PMEproducidas por diversos serotipos de Mh como potenciales inmungenos para prevenir lapasteurelosis neumnica en el ganado.

29,60

Los resultados de diversos estudios resaltan que las PME de Mh constituyen algunos de los msimportantes antgenos para la estimulacin de respuesta inmune en contra de la MnB,

29,61y se ha

podido comprobar una correlacin estadsticamente significativa entre la resistencia a laenfermedad y la presencia de anticuerpos sricos dirigidos contra una gran cantidad de protenaspresentes en extractos salinos de la clula bacteriana ntegra.6163

Se sabe entonces, que las PME tienen un gran potencial para desarrollar inmungenos,especialmente aquellas que estn expuestas en la superficie.

9,63,64Las protenas expuestas en la

cpsula de la clula bacteriana son un objetivo de gran inters para la respuesta inmune delhusped. Dos mecanismos muy importantes en la inmunidad de los bovinos en contra de Mh: lamuerte mediada por el complemento y la fagocitosis mediada por los neutrfilos, son mejoradospor la opzonizacin de la bacteria y por la eliminacin de la cpsula.

61

Se considera que los anticuerpos para las PME de las bacterias gramnegativas tambinsuministran proteccin contra la infeccin por Mh. Es probable que estos anticuerpos promuevan lafagocitosis y quiz tambin la muerte, al disminuir la funcin de estas protenas.

60

Si bien el papel de las PME como factor de virulencia no est del todo dilucidado, diversos estudioshan confirmado su importancia en la patognesis de las infecciones y resaltan su participacinpotencial en la respuesta de anticuerpos en la proteccin antibacteriana, adems de que participancomo transportadoras de materiales a travs de la membrana (porinas) y en la adhesin a la clulahusped.

60,65

De igual manera, se ha podido comprobar que las PME aisladas de Mh son poderosasmoduladoras de la actividad de los leucocitos polimorfonucleados de bovinos e inducenalteraciones en su actividad biolgica, de tal manera que es posible observar in vitro, una


8/22


9/22


10/22

Se sabe de manera general que las bacterias se pueden adherir a las superficies epiteliales atravs de receptores especficos, de tal manera que los factores bacterianos involucrados en lainteraccin bacteriaclula son muy diversos; entre algunas de las estructuras bacterianas quepudieran participar en la adherencia se reconocen las fimbrias, adhesinas no fimbriales, adhesinasproteinceas, el glicoclix, el LPS, protenas de membrana externa y la cpsula.

83Poco se sabe

acerca de las molculas que participan en la habilidad de Mh para colonizar la faringe y las criptastonsilares; es probable que codifique una adhesina que permita a la bacteria atacar el epiteliorespiratorio,9tambin se ha mencionado la participacin del LPS, las fimbrias y el glicoclix; 83se hapodido demostrar la capacidad del LPS de Mh para producir adherencia in vitro,

87tambin se

conoce que el componente del polisacrido capsular facilita que Mh pueda unirseespecficamente a los fagocitos e impedir el desarrollo de sus funciones.

83Se sabe que existen dos

tipos de fimbrias en Mh, unas largas y rgidas de 12 nm, y otras cortas y flexibles de 5 nm, lascuales pudieron ser evidenciadas especialmente cuando las bacterias fueron recuperadas delavados traqueales de becerros infectados experimental o naturalmente.

51

El papel funcional de las adhesinas de Mh en la patognesis debe ser estudiado con ms detalle,no obstante es muy posible que esta adhesina participe en un proceso secuencial dereconocimiento de la clula husped, que precede a la liberacin de exoprotenas con actividadcataltica, como la endopeptidasa o neuraminidasa, o ambas. Se considera que las adhesinas deMh constituyen una alternativa como un inmungeno potencial para el desarrollo de vacunas en

contra de la MnB.77

En estudios recientes en Mxico, Jaramillo et al.77

lograron la purificacin por afinidad de unaadhesina de 68 kDa que fue capaz de aglutinar especficamente eritrocitos de conejo, concluyendoque las adhesinas de Mh juegan un importantsimo papel en la infeccin. La adhesina de Mh essimilar a una adhesina de alto peso molecular caraterizada en cepas no tipificables de H.influenzae.

18

Plsm id os

En Mh se ha podido demostrar la existencia de plsmidos de resistencia a antibiticos; aun cuandola presencia de plsmidos no es un fenmeno caracterstico entre todas las especies, algunascepas poseen slo un plsmido pequeo (aproximadamente 4.2 kb), el cual es responsable de laresistencia contra estreptomicina y sulfonamidas.

9,18,51En estudios con cepas de Mh A1, en la

mayora de ellas se pudo aislar un plsmido que codificaba una (3lactamasa, slo unas pocaspresentaron dos o ningn plsmido.

4No todos los plsmidos encontrados estn asociados con

resistencia a antibiticos, paradjicamente fue posible encontrar resistencia en ausencia deplsmidos y algunos de ellos fueron correlacionados con la leucotoxina u otros factores devirulencia.

9,51

Los plsmidos juegan un papel muy importante en la estructura gentica de resistenciaantimicrobiana de Mh. Entre los genes de resistencia a antimicrobianos uno de los ms frecuentesen Mh es el de resistencia a sulfonamidas (sulII). La mayora de estos genes se han encontrado en

plsmidos de 4.2 a 16.7 kb, algunos de los cuales tambin generan resistencia contraestreptomicina, kanamicina y tetraciclinas; asimismo, la resistencia a lactmicos est asociadacon pequeos plsmidos de 4.2 a 5.2 kb; tambin se ha identificado un pequeo plsmido demenos de 10 kb, asociado con resistencia a aminoglicsidos, as como uno de aproximadamente113 kb de resistencia con estreptomicina, kanamicina, tetraciclinas y sulfonamidas; de igualmanera, el gen de resistencia a estreptomicina (strA) se ha encontrado tanto en plsmidos comoen el cromosoma de Mh; la resistencia a cloranfenicol est mediada principalmente por lascloramfenicolacetiltransferasas, muchas de las cuales estn localizadas en plsmidos que hansido identificados en Mh.

90


11/22

Diagnstico

Para la deteccin e identificacin de Mh se cuenta con diversas tcnicas de laboratorio queincluyen: aislamiento y fenotipificacin, serotipificacin y genotipificacin.

Para el aislamiento y fenotipificacin se utiliza el cultivo in vitro en medios a base de agar sangre,adems de pruebas bioqumicas, todo lo cual permite determinar la morfologa de las colonias, laproduccin de hemlisis, as como su comportamiento bioqumico para efectos de su identificaciny biotipificacin.

15,16Adems de los mtodos convencionales disponibles para la identificacin

bioqumica de Mh, se dispone de otros mtodos alternativos, que se basan en sistemasminiaturizados disponibles comercialmente y que facilitan y agilizan la fenotipificacin; entre ellosse encuentra el sistema API 20E y 20NE,*tabletas diagnsticas**y el sistema OxiFerm,***que sehan usado ampliamente como una herramienta en la identificacin de enterobacterias y noenterobacterias en medicina veterinaria, con resultados muy satisfactorios.

7,35,39,9194

Para la serotipificacin se emplean tcnicas de hemoaglutinacin mediante la utilizacin deantisueros de referencia especficos para los 12 serotipos reconocidos. Otra prueba serolgica que

se puede utilizar es la tcnica de ensayo visual simple a partir de la obtencin de LktA deaislamientos de Mh, para determinar la presencia de anticuerpos antiLktA en el suero de losanimales problema; de igual manera, mediante la tcnica de inmunoelectrotransferencia, a partir deprotenas obtenidas de la membrana externa de Mh, que se emplean como antgenos paradeterminar el patrn de reconocimiento por anticuerpos contra dichos antgenos.

16

La variabilidad y complejidad de las caractersticas fenotpicas y genotpicas delgnero Mannheimia dificultan en gran medida la clasificacin de los aislamientos a travs de lastcnicas de laboratorio rutinarias, basadas en criterios descriptivos convencionales, que hacenimposible la clasificacin taxonmica precisa. Las tcnicas clsicas para la identificacin debacterias, tales como la biotipificacin, serotipificacin, determinacin de patrones desusceptibilidad a antibiticos y fagotipificacion, se basan en diferencias fenotpicas, no obstanteestas tcnicas se ven limitadas por la capacidad de las bacterias de alterar, de manera

impredecible, la expresin de algunas de sus caractersticas, de tal manera que aislamientos deuna misma cepa pueden variar fenotpicamente; adicionalmente, algunos de estos mtodos se venlimitados por la relativa gran cantidad de cepas que son fenotpicamente nulas, es decir, notipificables.

95,96

Los mtodos fenotpicos para la caracterizacin de las especies de Mannheimia se han utilizadodurante mucho tiempo y aunque se acepta que su reproducibilidad es alta, sus limitaciones ya hansido reconocidas ampliamente.

39,97En estudios realizados para evaluar la especificidad de la

serotipificacin como una herramienta diagnstica, se ha demostrado que no es un mtodoconfiable para la correcta identificacin de Mh, y se hace nfasis sobre la necesidad de una ampliacaracterizacin fenotpica y genotpica para la adecuada tipificacin de este microorganismo,considerando las dificultades que han presentado otros estudios para su clasificacin, basadasolamente en la fenotipificacin y la serotipificacin,

25,39,98teniendo en cuenta que el

gneroMannheimia abarca taxones de una gran heterogeneidad fenotpica y genotpica.39

Es evidente que los estudios sobre caracterizacin epidemiolgica requieren del uso tanto de losmtodos fenotpicos como genotpicos. Diversas tcnicas de biologa molecular han demostrado suutilidad en el estudio de la taxonoma, patognesis y epidemiologa de Mh. Entre las tcnicasempleadas en diversas investigaciones sobre la epidemiologa molecular de aislamientos de Mh sepueden destacar las siguientes: anlisis de restriccin para la deteccin de los genes del ARNr oribotipificacin, polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restriccin (RFLP), anlisis deendonucleasas de restriccin (REA) del ADN cromosomal, hibridacin de ADNADN, electroforesisde enzimas multilocus (EEML), amplificacin al azar del polimorfismo del ADN (RAPD),
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notashttp://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notashttp://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notashttp://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notashttp://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notashttp://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notashttp://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notashttp://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notashttp://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notashttp://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notashttp://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0301-50922009000300008&script=sci_arttext#notas


12/22

secuenciacin del ADN, electroforesis en gel de campos pulsados (PFGE) y anlisis delpolimorfismo de la longitud de fragmentos amplificados (AFLP).

15'39

'97

"99

Todos estos mtodostienen como base el estudio del polimorfismo del ADN bacteriano y se ha demostrado su alto poderde discriminacin para la diferenciacin de cepas, superior a los mtodos convencionales detipificacin fenotpica.

15,95,96,100

Prevencin y c ontro l

Dada la complejidad que involucra la multicausalidad de esta enfermedad, las medidas deprevencin y control siguen siendo motivo de anlisis y polmica respecto de su eficacia y laeficiencia de la inmunizacin, el empleo de quimioteraputicos y el control de factoresmedioambientales que propician el estrs en los animales y favorecen la accin invasora de Mh atravs de sus complejos mecanismos de virulencia.

Tradicionalmente, el tratamiento contra la MnB se ha basado en el uso intensivo de antibiticos,incluyendo, adems, el tratamiento masivo de hatos, lo cual ha determinado un incremento en laincidencia de cepas multirresistentes de Mh. De ah que sea preferible una prevencin y control de

la enfermedad, basada ms en la vacunacin que en la quimioterapia.9

La seleccin de losantimicrobianos a emplear, raramente se basa en estudios previos de sensibilidad in vitro de cepasaisladas a partir de exudado nasal o traqueal, considerando, adems, que estos aislamientos noreflejan necesariamente los microorganismos presentes en el tejido pulmonar.

101

Para el tratamiento de la MnB se ha empleado una gran variedad de antimicrobianos que incluyenprincipalmente penicilinas, oxitetraciclina, trimetoprim/ sulfadoxina, ampicilina, tilmicosn, florfenicoly tulatromicina, y aunque todos ellos han demostrado eficacia, tambin se ha podido comprobar laresistencia contra peniclina, ampicilina, tetraciclina, sulfonamidas y tilmicosn en muchosaislamientos de Mh.

102Una revisin ms amplia sobre dosificacin y eficacia de diversos

antimicrobianos en el tratamiento de la MnB, as como sobre resistencia a antimicrobianos de Mh,se encuentra en Rice et al.

102y Highlander.

9

Existe en el mercado una amplia gama de vacunas, desafortunadamente no hay muchainformacin publicada en revistas arbitradas que sustenten su eficacia en estudios con desafoscontrolados o en condiciones de campo.

9,103

Aparentemente, estas vacunas slo aportan una proteccin parcial, incluso algunas, como laspreparadas a base de clulas ntegras, pueden llegar a incrementar la morbilidad en elhato.

104Otra estrategia de prevencin en lotes de engorda ha sido el empleo de vacunas

nicamente contra agentes virales, la cual tambin ha resultado poco efectiva.103

El desarrollo de vacunas efectivas contra la MnB depende primordialmente del conocimientodetallado de los antgenos y factores de virulencia de Mh, necesarios para estimular una proteccininmune. Estos antgenos incluyen componentes de la superficie bacteriana (LPS, OMP) adems demolculas secretadas (Lkt).

9

Se ha podido demostrar correlacin entre los ttulos de anticuerpos antileucotoxina neutralizantes yla resistencia a la enfermedad; sin embargo, el empleo de la Lkt sola, purificada o recombinante,no ha sido suficiente para originar proteccin.

62'78

De manera similar, el empleo de polisacridoscapsulares combinados con Lkt tampoco ha generado proteccin; sin embargo, el sobrenadante decultivos mezclados con Lkt recombinante ha sido efectivo en ensayos con animales desafiados, loque sugiere que la mejor opcin como vacuna para la MnB sea la mezcla de Lkt asociada conantgenos de sobrenadante.

9


13/22

Tambin se ha informado sobre algunos resultados exitosos mediante el uso de vacunas vivas; sinembargo, existe la preocupacin respecto a la posible virulencia de estas cepas.

105,106

Estudios recientes se han enfocado a lograr la induccin de inmunidad local contra Mh, mediante laliberacin de antgenos a travs de la mucosa, reduciendo as la colonizacin de la nasofaringe porparte del microorganismo,

102ya sea mediante la expresin de antgenos de Mh en vectores virales,

que facilitaran la replicacin en el tracto respiratorio superior, o la administracin oral de dichosantgenos encapsulados en microesferas de alginato,102,107

as como el desarrollo medianteingeniera gentica, de plantas para la expresin de antgenos de Mh, a fin de producir vacunastransgnicas comestibles.

108Estos antgenos derivados de plantas fueron inmunognicos cuando

se inyectaron en conejos y tambin mediante vacunas orales estimularon una respuesta inmune enla mucosa de becerros.

109

Conclusiones

El impacto de la MnB en la industria bovina, tanto en ganado productor de carne como de leche, hasido ampliamente comprobado en diversos estudios, tanto en Norteamrica como en

Europa;1,2

desafortunadamente poco se sabe al respecto en los pases de Amrica Latina y enMxico en particular. Esta enfermedad se considera como la ms importante en bovinosproductores de carne y la segunda, despus de las gastrointestinales, en becerras lecheras.

7

La MnB se desencadena como consecuencia de un desbalance en la interaccin en la tradaconstituida por uno o ms agentes infecciosos, las defensas del husped y factores estresantesmedioambientales; no obstante esta complejidad etiolgica, la mayora de los estudios coincidenen que el microorganismo involucrado como el principal agente etiolgico es la Mh A1.

2,6,810

Los mecanismos de patogenicidad de esta bacteria no estn del todo esclarecidos, y es posibleque existan diferencias entre cepas aisladas de diferentes cuadros neumnicos o de animalessanos.

6,9,45Son varios los mecanismos de patogenicidad identificados en Mh, los cuales han sido

motivo de anlisis y discusin en diversos estudios.6,8,14,46,47

Entre ellos destaca particularmente la

Lkt como el factor ms importante y ms ampliamente estudiado, y no obstante la capacidadinmunognica comprobada en algunos de dichos mecanismos, se considera que la Lkt juega elpapel ms preponderante en la induccin de una respuesta protectora.

9,18

Siguen existiendo enigmas respecto de Mh, particularmente relacionados con aspectos depatogenicidad, virulencia y taxonoma, debido a la variabilidad y la complejidad de lascaractersticas fenotpicas y genotpicas del gnero Mannheimia, as como por las dificultades ensu manipulacin gentica.

9Para una comprensin ms amplia de la epidemiologa y la importancia

de todas las especies de Mh, es necesario adoptar nuevos criterios para su identificacin, queincluyan la utilizacin de tcnicas moleculares, as como procedimientos ms sensibles deaislamiento e identificacin bioqumica e inmunolgica.

Los mtodos fenotpicos para su clasificacin, no obstante su alta reproducibilidad, presentan

limitaciones. La serotipificacin en particular, no es confiable por s sola, si no es apoyada por unaslida caracterizacin bioqumica. Por esta razn, la adecuada tipificacin de este microorganismorequiere de una amplia caracterizacin fenotpica y genotpica.

25,44,97,98

Las investigaciones basadas en ensayos experimentales de desafo o en el estudio acerca de laepidemiologa, taxonoma y virulencia, aportarn informacin primordial sobre el comportamientode Mannheimia haemolytica en bovinos y otras especies animales.


14/22

Las medidas de prevencin y control ms eficaces contra la MnB se deben sustentar en lacombinacin de un conjunto de actividades que incluyan un diagnstico confiable, vacunas ymedidas teraputicas eficaces, y buenas prcticas de manejo.

Referencias

1. Lekeu P. Bovine respiratory disease complex. Ann Med Vet 1996; 140: 101105. [Links]

2. Zeccchinon L, Fett T, Desmecht D. How Mannheimia haemolytica defeats hostdefense through a kiss of death mechanism. Vet Res 2005; 36:133156. [Links]

3. Trigo T. El complejo respiratorio infeccioso de los bovinos y ovinos. Cien Vet 1987;4:136. [Links]

4. Murphy GL, Robinson LC, Burrows GE. Restriction endonuclease analysis andribotyping differentiate Pasteurella haemolytica serotype A1 isolates from cattle withina feedlot. J Clin Microbiol 1993; 31:23032308. [Links]

5. Pijoan P, Aguilar R, Morales A. Caracterizacin de los procesos neumnicos enbecerros lecheros de la regin de Tijuana, Baja California. Vet Mx 1999;30:149155. [Links]

6. Lo RY. Genetic analysis of virulence factors of Mannheimia (Pasteurella)haemolytica A1. Vet Microbiol 2001; 83:2335. [Links]

7. Katsuda K, Kamiyama M, Kohmoto M, Kawashima K, Tsunemitsu H, Eguchi M.Serotyping of Mannheimia haemolytica isolates from bovine pneumonia: 19872006.Vet J 2007; 178:146148. [Links]

8. Burrows LL, OlahWinfield E, Lo RY. Molecular analysis of the leukotoxindeterminants from Pasteurella haemolyticaserotypes 1 to 16. Infect Immun 1993;61:50015007. [Links]

9. Highlander SK. Molecular genetic analysis of virulence in Mannheimia (Pasteurella)haemolytica. Front Biosci 2001; 6:11281150. [Links]

10. Narayanan S, Nagaraja T, Chengappa M, Stewart G. Leukotoxins of gramnegativebacteria. Vet Microbiol 2002; 84:337356. [Links]

11. Trigo F. Patognesis y aspectos inmunolgicos de la pasteurelosis pulmonarbovina. Vet Mx 1991; 22:131134. [Links]

12. Jaworski MD, Hunter DL, Ward AC. Biovariants of isolates of Pasteurella fromdomestic and wild ruminants. J Vet Diagn Invest 1998; 10:4955. [Links]

13. Carter GR. Pasteurellosis: Pasteurella multocida and Pasteurella haemolytica. AdvVet Sci 1967; 11:321379. [Links]


15/22

14. Fedorova ND, Highlander SK. Generation of targeted nonpolar gene insertions andoperon fusions in Pasteurella haemolytica and creation of a strain that produces andsecretes inactive leukotoxin. Infect Immun 1997; 65:25932598. [Links]

15. Angen O, Mutters R, Caugant DA, Olsen JE, Bisgaard M. Taxonomic relationships ofthe (Pasteurella) haemolytica complex as evaluated by DNADNA hybridizations and

16S rRNA sequencing with proposal ofMannheimia haemolytica gen. nov., comb.nov., Mannheimia granulomatis comb. nov., Mannheimia glucosidasp,nov., Mannheimia ruminalis sp, nov. and Mannheimia varigena sp, nov. Int J SystBacteriol 1999; 49 :6786. [Links]

16. Biberstein E. Biotyping and serotyping of Pasteurella haemolytica In: Ban JR,editor. Methods in Microbiology. NewYork: Academic Press Inc, 1978; 253269. [Links]

17. Fraser J, Laird S, Gilmour N. A new serotype (biotype T) of Pasteurellahaemolytica. Res Vet Sci 1982; 32:127128. [Links]

18. Boyce J, Lo R, Wilkie I, Adler B. Pasteurella and Mannheimia. In: Giles CL, PrescottJF, Songer JG, Thoen CO, editors. Pathogenesis of Bacterial Infectious in Animals.Carlton, Australia: Blackwell Publishing, 2004; 273294. [Links]

19. Biberstein EL, Gills M, Knight H. Serological types of Pasteurella hemolytica. CornellVet 1960; 50:283300. [Links]

20. Biberstein EL, Gills MG. The relation of the antigenic types to the A and T typesof Pasteurella haemolytica. J Comp Pathol 1962; 72:316320. [Links]

21. Fodor L, Varga J. Characterization of a new serotype of P. haemolytica isolated inHungary. Res Vet Sci 1988; 44:399. [Links]

22. Sneath PH, Stevens M.Actinobacillus rossii sp, nov.,Actinobacillus seminis sp.nov., nom. rev., Pasteurella bettii sp. nov., Pasteurella lymphangitidis sp.nov., Pasteurella mairi sp. nov., and Pasteurella trehalosi sp. nov. Int J Syst Bacteriol1990; 40:148153. [Links]

23. Younan M, Fodor L. Characterization of a new Pasteurella haemolytica serotype(A17). Res Vet Sci 1995; 58:98. [Links]

24. Blackall P, Bojesen A, Christensen H, Bisgaard M. Reclassification of (Pasteurella)trehalosi as Bibersteinia trehalosi gen. nov., comb. nov. Int J Syst Evol Microbiol 2007;57:666674. [Links]

25. Angen O, Quirie M, Donachie W, Bisgaard M. Investigations on the speciesspecificity of Mannheimia (Pasteurella) haemolytica serotyping. Vet Microbiol1999;65:283290. [Links]

26. Wray B, Thompson D. Serotypes of Pasteurella haemolytica isolated from calves.Br Vet J 1971; 127:lxvilxvii. [Links]


16/22

27. Frank G, Smith P. Prevalence of Pasteurella haemolytica in transported calves. AmJ Vet Res 1983; 44:981985. [Links]

28. Coln F, Jaramillo L, Aguilar F, Trigo F, Merino M. Serotipos de Pasteurellahaemolytica en pulmones neumnicos de ovinos en Mxico. Rev LatiAm Microbiol1987; 29:231234. [Links]

29. Pandher K, Murphy GL, Confer AW. Identification of immunogenic, surfaceexposed outer membrane proteins of Pasteurella haemolytica serotype 1. Vet Microbiol1999; 65:215226. [Links]

30. AlGhamdi GM, Ames TR, Baker JC, Walker R, Chase CC, Frank GH etal. Serotyping of Mannheimia (Pasteurella) haemolytica isolates from the upperMidwest United States. J Vet Diagn Invest 2000; 12:576578. [Links]

31. Ewers C, LubkeBecker A, Wieler LH. Mannheimia haemolytica and thepathogenesis of enzootic bronchopneumonia. Berl Mnch Tierrztl Wochenschr 2004;117:97115. [Links]

32. JaramilloArango C, HernandezCastro R, SuarezGuemes F, MartinezMaya J,AguilarRomero F, JaramilloMeza L et al. Prevalence of Mannheimiahaemolytica isolated from bovine nasal exudates and associated factors, in dairy farmsin the NorthCentral of Mexico. J Anim Vet Adv 2007; 6:404409. [Links]

33. JaramilloArando C, HernandezCastro R, SuarezGuemes F, MartinezMaya J,AguilarRomero F, JaramilloMeza L et al. Characterization of Mannheimia spp. strainsisolated from bovine nasal exudates and factors associated to isolates, in dairy farmsin the Central Valley of Mexico. Res Vet Sci 2008; 84:713. [Links]

34. BlancoViera F, Trigo F, JaramilloMeza L, AguilarRomero F. Serotypes

of Pasteurella multocida andPasteurella haemolytica isolated from pneumonic lesions incattle and sheep from Mexico. Rev LatAm Microbiol 1995; 37:121126. [Links]

35. Villard L, Gauthier D, Lacheretz A, Abadie G, Game Y, Maurin F et al. Serologicaland molecular comparison ofMannheimia haemolytica and Pasteurella trehalosi strainsisolated from wild and domestic ruminants in the French Alps. Vet J 2006; 171:545550. [Links]

36. Quirie M, Donachie W, Gilmour N. Serotypes of Pasteurella haemolytica fromcattle. Vet Rec 1986; 119:9394. [Links]

37. Argueta G, Mercado P, Trigo T. Frecuencia de Pasteurella haemolytica en la cavidad

nasal de corderos y ovinos adultos. Vet Mx 1988; 19:93

97. [Links]

38. Frank G. Serotypes of Pasteurella haemolytica in sheep in the Midwestern UnitedStates. American J Vet Res 1982; 43:20352037. [Links]

39. Angen O, Ahrens P, Bisgaard M. Phenotypic and genotypic characterizationof Mannheimia (Pasteurella) haemolyticalike strains isolated from diseased animals inDenmark. Vet Microbiol 2002; 84:103114. [Links]


17/22

40. Sisay T, Zerihun A. Diversity of Mannheimia haemolytica and Pasteurellatrehalosi serotypes from apparently healthy sheep and abattoir specimens in thehighlands of Wollo, North East Ethiopia. Vet Res Commun 2003; 27:314. [Links]

41. Kirkan S, Kaya O. Serotyping of Mannheimia haemolytica strains in pneumonic

lungs of sheep in the Aydin Region of Turkey. Turk Vet Anim Sci 2005: 29:491494. [Links]

42. JaramilloArango C, HernandezCastro R, CampuzanoOcampo V, SuarezGuemesF, DelgadoGonzalez R, Trigo F. Characterization of Mannheimia sp. and P.multocida strains isolated from bovine pneumonic lungs in two slauhgterhouses inMexico. J Anim Vet Adv 2007; 6:13981404. [Links]

43. Frank G. Serological groups among untypable bovine isolates of Pasteurellahaemolytica. J Clin Microbiol 1980; 12:579582. [Links]

44. Gentry M, Confer A, Holland S. Comparison of the toxic and antigenic properties of

single bovine isolates of Pasteurella haemolyticarepreaenting five sero types and anuntypable strain. Vet Microbiol 1988; 16:351367. [Links]

45. Highlander SK, Fedorova ND, Dusek DM, Panciera R, Alvarez LE, Rinehart C.Inactivation of Pasteurella (Mannheimia) haemolytica leukotoxin causes partialattenuation of virulence in a calf challenge model. Infect Immun 2000; 68:39163922. [Links]

46. Marciel AM, Highlander SK. Use of operon fusions in Mannheimia haemolytica toidentify environmental and cisacting regulators of leukotoxin transcription. InfectImmun 2001; 69:62316239. [Links]

47. Jeyaseelan S, Sreevatsan S, Maheswaran SK. Role of Mannheimiahaemolytica leukotoxin in the pathogenesis of bovine pneumonic pasteurellosis. AnimHealth Res Rev 2002; 3:6982. [Links]

48. Leite F, O'Brien S, Sylte MJ, Page T, Atapattu D, Czuprynski CJ. Inflammatorycytokines enhance the interaction of Mannheimia haemolytica leukotoxin with bovineperipheral blood neutrophils in vitro. Infect Immun 2002; 70:43364343. [Links]

49. Gioia J, Qin X, Jiang H, Clinkenbeard K, Lo R, Liu Y et al. The genome sequenceof Mannheimia haemolyticaA1: insights into virulence, natural competence,and Pasteurellaceae phylogeny. J Bacteriol 2006; 188:72577266. [Links]

50. Deshpande MS, Ambagala TC, Ambagala AP, Kehrli ME Jr., Srikumaran S. BovineCD18 is necessary and sufficient to mediate Mannheimia (Pasteurella)haemolytica leukotoxininduced cytolysis. Infect Immun 2002; 70:50585064. [Links]

51. Sleim R. Review: Major pathogenic components of Pasteurellamultocida and Mannheimia (Pasteurella) haemolytica isolated from animal origin. ElCairo, Egypt: Bacteriology Department, Animal Health Research Institute,2005. [Links]


18/22

52. Hsuan SL, Kannan MS, Jeyaseelan S, Prakash YS, Sieck GC, MaheswaranSK. Pasteurella haemolytica A1derived leukotoxin and endotoxin induce intracellularcalcium elevation in bovine alveolar macrophages by different signaling pathways.Infect Immun 1998; 66:28362844. [Links]

53. Wang Z, Clarke C, Clinkenbeard K. Pasteurella haemolytica leukotoxininduced

increase in phospholipase A2 activity in bovine neutrophils. Infect Immun 1998;66:18851890. [Links]

54. Berggren K, Baluyut C, Simonson R, Bemrick W, Maheswaran S. Cytotoxic effectsof Pasteurrella haemolyticaon bovine neutrophils. Am J Vet Res 1981; 42:13831388. [Links]

55. Shewen PE, Wilkie BN. Evidence for the Pasteurella haemolytica cytotoxin as aproduct of actively growing bacteria. Am J Vet Res 1985; 46:12121214. [Links]

56. Gentry MJ, Confer AW, Weinberg ED, Homer JT. Cytotoxin (leukotoxin) productionby Pasteurella haemolytica:requirement for an ironcontaining compound. Am J Vet

Res 1986; 47:19191923. [Links]

57. Li J, Clinkenbeard KD, Ritchey JW. Bovine CD18 identified as a species specificreceptor for Pasteurella haemolytica leukotoxin. Vet Microbiol 1999; 67:9197. [Links]

58. Jeyaseelan S, Kannan MS, Briggs RE, Thumbikat P, Maheswaran SK. Mannheimiahaemolytica leukotoxin activates a nonreceptor tyrosine kinase signaling cascade inbovine leukocytes, which induces biological effects. Infect Immun 2001; 69:61316139. [Links]

59. Jeyaseelan S, Kannan MS, Hsuan SL, Singh AK, Walseth TF, Maheswaran

SK. Pasteurella (Mannheimia) haemolytica leukotoxininduced cytolysis of bovineleukocytes: role of arachidonic acid and its regulation. Microb Pathog 2001;30:5969. [Links]

60. Squire P, Smiley D, Croskell R. Identification and extraction of Pasteurellahaemolytica membrane proteins. Infect Immun 1984; 45:667673. [Links]

61. Pandher K, Murphy GL. Genetic and immunological analyses of a 38 kDa surfaceexposed lipoprotein of Pasteurella haemolytica A1. Vet Microbiol 1996; 51:331341. [Links]

62. Purdy CW, Straus DC, Struck D, Foster GS. Efficacy of Pasteurella

haemolytica subunit antigens in a goat model of pasteurellosis. Am J Vet Res 1993;54:16371647. [Links]

63. Morton RJ, Panciera RJ, Fulton RW, Frank GH, Ewing SA, Homer JT etal. Vaccination of cattle with outer membrane proteinenriched fractions of Pasteurellahaemolytica and resistance against experimental challenge exposure. Am J Vet Res1995; 56:875879. [Links]


19/22

64. Kimura A, Gulig PA, McCracken GH Jr., Loftus TA, Hansen EJ. A minor highmolecularweight outer membrane protein of Haemophilus influenzae type b is aprotective antigen. Infect Immun 1985; 47:253259. [Links]

65. Iovane G, Galdiero M, Vitiello M, De Martino L. Effect of Pasteurellahaemolytica outer membrane proteins on bovine neutrophils. FEMS Immun Med

Microbiol 1998; 20:2936. [Links]

66. McBride JW, Wozniak EJ, Brewer AW, Naydan DK, Osburn BI. Evidenceof Pasteurella haemolytica linked immune complex disease in natural and experimentalmodels. Microb Pathog 1999; 26:183193. [Links]

67. Srinand S, Ames T, Maheswaran S, King V. Efficacy of various vaccines againstpneumonic pasteurellosis in cattle: a metaanalysis. Prev Vet Med 1995; 25:717. [Links]

68. Sabri MY, ZamriSaad M, Mutalib AR, Israf DA, Muniandy N. Efficacy of an outermembrane protein of Pasteurella haemolytica A2, A7 or A9enriched vaccine against

intratracheal challenge exposure in sheep. Vet Microbiol 2000; 73:1323. [Links]

69. Pandher K, Confer AW, Murphy GL. Genetic and immunologic analyses of PlpE, alipoprotein important in complementmediated killing of Pasteurellahaemolytica serotype 1. Infect Immun 1998; 66:56135619. [Links]

70. Confer A, Ayalew S, Panciera R, MonteLongo M, Whitworth L, Hammer J.Immunogenicity of recombinantMannheimia haemolytica serotype 1 outer membraneprotein PlpE and augmentation of a commercial vaccine. Vaccine 2003; 21:28212829. [Links]

71. Ayalew S, Confer A, Blackwood E. Characterization of immunodominant and

potentially protective epitopes ofMannheimia haemolytica serotype 1 outer membranelipoprotein PlpE. Infect Immun 2004; 72:72657274. [Links]

72. Abdullah KM, Udoh EA, Shewen PE, Mellors A. A neutral glycoproteaseof Pasteurella haemolytica A1 specifically cleaves Osialoglycoproteins. Infect Immun1992; 60:5662. [Links]

73. Lee CW, Lo RY, Shewen PE, Mellors A. The detection of the sialoglycoprotease geneand assay for sialoglycoprotease activity among isolates of Pasteurella haemolytica A1strains, serotypes A13, A14, T15 and A16. FEMS Microbiol Lett 1994; 121:199205. [Links]

74. Lee CW, Shewen PE. Evidence of bovine immunoglobulin G1 (IgG1) proteaseactivity in partially purified culture supernate of Pasteurella haemolytica A1. Can J VetRes 1996; 60:127132. [Links]

75. Lee CW, Shewen PE, Cladman WM, Conlon JA, Mellors A, Lo RY. Sialoglycoproteaseof Pasteurella haemolytica A1: detection of antisialoglycoprotease antibodies in sera ofcalves. Can J Vet Res 1994; 58:9398. [Links]


20/22

76. Nyarko KA, Coomber BL, Mellors A, Gentry PA. Bovine platelet adhesion isenhanced by leukotoxin and sialoglycoprotease isolated from Pasteurella haemolyticaA1 cultures. Vet Microbiol 1998; 61:8191. [Links]

77. Jaramillo L, Diaz F, Hernandez P, Debray H, Trigo F, Mendoza G et al. Purificationand characterization of an adhesin from Pasteurella haemolytica. Glycobiology 2000;

10:3137. [Links]

78. Conlon J, Shewen P, Lo RY. Efficacy of recombinant leukotoxin in protection againstpneumonic challenge with live Pasteurella haemolytica A1. Infect Immun 1991;59:587591. [Links]

79. Shewen PE, Lee CW, Perets A, Hodgins DC, Baldwin K, Lo RY. Efficacy ofrecombinant sialoglycoprotease in protection of cattle against pneumonic challengewith Mannheimia (Pasteurella ) haemolytica A1. Vaccine 2003; 21:19011906. [Links]

80. Straus DC, Purdy CW. In vivo production of neuraminidase by Pasteurella

haemolytica A1 in goats after transthoracic challenge. Infect Immun 1994; 62:46754678. [Links]

81. Straus DC, Jolley WL, Purdy CW. Characterization of neuraminidases produced byvarious serotypes ofPasteurella haemolytica. Infect Immun 1993; 61:46694674. [Links]

82. Confer AW, Panciera RJ, Gentry MJ, Fulton RW. Immunologic response andresistance to experimentally induced pneumonic pasteurellosis in cattle vaccinated withvarious dosages of lyophilized Pasteurella haemolytica.Am J Vet Res 1986; 47:18531857. [Links]

83. Jaramillo ML, Zenteno E, Trigo FJ. Mechanisms of pathogenicity and adhesionin Pasteurella haemolytica. Rev LatAm Microbiol 1999; 41:105116. [Links]

84. Frank GH, Tabatabai LB. Neuraminidase activity of Pasteurellahaemolytica isolates. Infect Immun 1981; 32:11191122. [Links]

85. Straus DC, Unbehagen PJ, Purdy CW. Neuraminidase production by a Pasteurellahaemolytica A1 strain associated with bovine pneumonia. Infect Immun 1993;61:253259. [Links]

86. Poulsen D, Mosier D, Clinkenbeard K, Confer A. Direct effects of Pasteurellahaemolytica lipopolysaccharide of bovine pulmonary endothelial cells in vitro. Am J

Vet Res 1989; 50:1633

1637. [Links]

87. Poulsen D, Confer A, Clinkenbeard K, Mosier D. Pasteurellahaemolytica lipopolysaccharideinduced arachidonic acid release from a neutrophiladherence to bovine pulmonary artery endothelial cells. Am J Vet Res 1990; 51:16351639. [Links]

88. Lafleur RL, Abrahamsen MS, Maheswaran SK. The biphasic mRNA expressionpattern of bovine interleukin8 inPasteurella haemolytica lipopolysaccharide


21/22

stimulated alveolar macrophages is primarily due to tumor necrosis factor alpha. InfectImmun 1998; 66:40874092. [Links]

89. Lafleur RL, Malazdrewich C, Jeyaseelan S, Bleifield E, Abrahamsen MS,Maheswaran SK. Lipopolysaccharide enhances cytolysis and inflammatory cytokineinduction in bovine alveolar macrophages exposed to Pasteurella (Mannheimia)

haemolytica leukotoxin. Microb Pathog 2001; 30:347357. [Links]

90. Kehrenberg C, SchulzeTanzil G, Martel JL, ChaslusDancla E, Schwarz S.Antimicrobial resistance inPasteurella and Mannheimia: epidemiology and geneticbasis. Vet Res 2001; 32:323339. [Links]

91. Oberhofer T. Comparison of the API 20E and Oxi/ Ferm Systems in identification ofnonfermentative and oxidasepositive fermentative bacteria. J Clin Microbiol 1979;9:220226. [Links]

92. Swanson E, Collins M. Use of the API 20E system to identify veterinaryEnterobacteriaceae. J Clin Microbiol 1980; 12:1014. [Links]

93. Collins M, Swanson E. Use of the API 20E system to identify nonenterobacteriaceae from veterinary medical sources. Am J Vet Res 1981; 42:12691273. [Links]

94. Erasmus J. The usefulness of the API 20E classification system in the identificationofActinobacillus actinomycetem comitans, Actinobacillus seminis and Pasteurellahaemolytica. Onderst J Vet Res 1983; 50: 9799. [Links]

95. Maslow J, Mulligan M. Molecular Epidemiology: Application of contemporarytechniques to the typing of microorganisms. Clin Infect Dis 1993:153164. [Links]

96. Versalovic J, Lupski J. Molecular detection and genotyping of pathogens: moreaccurate and rapid answers. Trends Microbiol 2002; 10:1521. [Links]

97. ChasludDancla E, LesageDecauses MC, LeroySetrin S, Martel JL, Coudert P,Lafont JP. Validation of random amplified polymorphic DNA assays by ribotyping astools for epidemiological surveys of Pasteurella from animals. Vet Microbiol 1996;52:91102. [Links]

98. Poulsen LL, Reinert TM, Sand RL, Bisgaard M, Christensen H, Olsen JE etal. Occurrence of haemolyticMannheimia spp. in apparently healthy sheep in Norway.Acta Vet Scand 2006; 47:70. [Links]

99. Derosa DC, Mechor GD, Staats JJ, Chengappa MM, Shryock TR. Comparisonof Pasteurella spp. simultaneously isolated from nasal and transtracheal swabs fromcattle with clinical signs of bovine respiratory disease. J Clin Microbiol 2000; 38:327332. [Links]

100. Liu SL, Schryvers A, Sanderson K, Johnston R. Bacterial phylogenetic clostersrevealed by genome structure. J Bacteriol 1999; 181:67476755. [Links]


22/22

101. Allen JW, Viel L, Bateman KG, Rosedal S, Shewen PE, PhysickSheard P. Themicrobial flora of the respiratory tract in feedlot calves: associations betweennasopharyngeal and bronchoalveolar lavage cultures. Can J Vet Res 1991; 55:341346. [Links]

102. Rice J, CarrascoMedina L, Hodgins D, Shewen P. Mannheimia haemolytica and

bovine respiratory disease. Anim Health Res Rev 2008; 8 117128. [Links]

103. Bowland SL, Shewen PE. Bovine respiratory disease: commercial vaccinescurrently available in Canada. Can Vet J 2000; 41:3348. [Links]

104. Wilkie BN, Markham RJ, Shewen PE. Response of calves to lung challengeexposure with Pasteurella haemolytica after parenteral or pulmonary immunization.Am J Vet Res 1980; 41:17731778. [Links]

105. Confer AW, Panciera RJ, Fulton RW, Gentry MJ, Rummage JA. Effect ofvaccination with live or killedPasteurella haemolytica on resistance to experimentalbovine pneumonic pasteurellosis. Am J Vet Res 1985; 46:342347. [Links]

106. Panciera RJ, Corstvet RE, Confer AW, Gresham CN. Bovine pneumonicpasteurellosis: effect of vaccination with live Pasteurella species. Am J Vet Res 1984;45:25382542. [Links]

107. Bowersock TL, Hogenesch H, Suckow M, Guimond P, Martin S, Borie D et al. Oralvaccination of animals with antigens encapsulated in alginate microspheres. Vaccine1999; 17:18041811. [Links]

108. Lee RW, Strommer J, Hodgings D, Shewen PE, Niu Y, Lo RY. Towardsdevelopment of an edible vaccine against bovine pneumonic pasteurellosis usingtransgenic white clover expressing a Mannheimia haemolytica A1 leukotoxin 50 fusion

protein. Infect Immun 2001; 69:5786

5793. [Links]

109. Lo RY. Development of transgenic alfalfa expressing antigens of Mannheimiahemolytica as an oral vaccine against bovine pneumonic pasteurellosis. Proceedings ofthe International Pasteurellaceae Society Conference 2008; 2008 Oct 1215; Sorrento,Italia. Sorrento, Italia: International Pasteurellaceae Society, 2008:S:11. [Links]

Documents

PASTEURELOSIS NEUMÓNICA (MANNHEIMIOSIS) BOVINA