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PADECIMIENTOS INFECCIOSOS
CONCEPTOS BASICOS
• Indicación de una prueba de laboratorio = SOSPECHA CLINICA (excepto en las pruebas con implicación en la medicina preventiva)
• Trabajo en equipo MEDICO + LABORATORIO
• Fase pre-analítica: selección, recolección, transporte y procesamiento de los especímenes.
TOMA DE MUESTRA DE CALIDAD ANALÍTICA
• Seleccionar el sitio anatómico en base a la sospecha dx.
• Técnica adecuada de toma de muestra
• Asegurar la sobrevida del germen mediante un medio de transporte adecuado
• Proceso inmediato (< 2 horas)
CALIDAD
TOMA DE MUESTRASELECCIÓN DE MEDIOS
CONSERVACION
TRANSPORTE
TOMA DE MUESTRA DE CALIDAD ANALITICA
• Antes del la recolección la flora comensal debe ser eliminada• Enviar historia clínica (Fecha y hora de toma de muestra, dx.
Clínico, tx. con antibióticos)• No almacenar muestras por lapsos mayores a 24 horas (excepto
cultivos virales por 2 a 3 días a 4° C)• Procesar de inmediato cultivos para anaerobios (15 a 30 min). El
material de biopsias se puede mantener por 24 horas a 25 °C en ambiente anaerobio.
• Conocer la sensibilidad de MO a los cambios bruscos de temperatura.
• Si los síntomas persisten a pesar de un Tx basado en un cultivo inicial, tomar nueva muestra en 72 horas.
• Rechazar muestras mal obtenidas, conservadas o transportadas.
PROCEDIMIENTOS ANALITICOS
• EXAMEN MICROSCOPICO DIRECTO– Celularidad– Calidad de la muestra– Presencia de bacterias, micelios, levaduras,
parásitos o inclusiones virales.– Tinciones
• CULTIVO
TINCIONES
TINCION DE GRAM
• Tinción bacteriana diferencial; las bact. Gram(+) retienen el complejo violeta cristal-yodo, que es eliminado de las células Gram (-) durante la decoloración; estas últimas se tiñen de contracolorante rojo, la safranina
Cocos grampositivos
Bacilos Gramnegativos
TINCION DE ZIEHL-NEELSEN
• Tinción acidorresistente en el que la carbolfucsina tiñe los ácidos micólicos en la pared celular de los MO acidorresistente, que aparecen de color rosa-rojo
• Permite la detección de micobacterias, nocardias y Actinomyces
TINCIONES
Cryptococcus: diferentes tinciones
Tinción con fluorocromos(Naranja de acridina,Rodamina auramina, blancoCalcofluor)
Tinción con tinta china Tinta China c/microscopiaDe contraste
Treponema pallidum: tinciones
Campo Oscuro/Contraste de fases Tinción mediante anticuerpos Específicos antitreponémicos marcadoscon colorantes fluorescentes.
RESPIRATORIO
DIGESTIVO
GENITOURINARIO
SNC….
COPROCULTIVO
UROCULTIVO
HEMOCULTIVO
ESPECTORACION
EXUDADO VAGINAL/URETRAL
EXUDADO OTICO
EXUDADO FARINGEO
EXUDADO CONJUNTIVAL
LIQUIDOS CORPORALES
PARASITOS
BACTERIAS
VIRUS
HONGOS
¿Qué prueba delaboratorio solicito?
METODOS DIRECTOS METODOS INDIRECTOS
ELISAAGLUTINACIONPCR
AnticuerposEnzimas
ProteínasDNA/RNA
HIS
TO
RIA
CL
INIC
AD
IAG
NO
ST
ICO
CL
INIC
O
ESTUDIOS EN HECES
• Afecciones gastrointestinales:– Directa: Por un microorganismo (infección
intestinal)– Indirecta: secreción de diversos fermentos y
toxinas que alteran la motilidad y permeabilidad de la membrana intestinal (intoxicación alimentaria o toxiinfección)
PERFIL COPROLOGICO
• NIÑOS– Amiba en fresco– Azucares reductores– Citología de moco
intestinal– Coproparasitoscopico
(1 muestra)– Sangre oculta en
heces– Coprocultivo– Rotavirus en heces
• ADULTOS– Amiba en fresco– Coproparasitoscopico
(1 muestra)– Grasa en heces
(cualitativa)– Sangre oculta en
heces– Coprocultivo
RELACION ENTRE ALGUNOS TIPOS DE GASTROENTERITIS Y LA FIEBRE
MicroorganismoPatología causada
porPeríodo de incubación
Síntomas comunes
Staphylococcus aureus Toxina (termoestable)
2-6 h Nauseas, vómitos, calambres abdominales, diarrea (30%), s/fiebre o muy poca.
Salmonella Infección (enteroinvasividad)
12-36 h Diarrea, dolor abdominal, por lo común fiebre.
Shigella Infección (enteroinvasividad)
24-72 h Diarrea líquida con mucus; la fiebre es habitual.
Clostridium perfringens Toxina (moderadamente termoestable)
6-12 h Diarrea, calambres, sin fiebre o muy poca
Clostridium botulinum Toxina (termoestable)
Variable (de horas o días)
Gastroenteritis inicial
ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES ASOCIADAS CON LEUCOCITOS FECALES
EnfermedadPorcentaje de pacientes con
leucocitosis fecalTipo de leucocito
predominante
Shigelosis 100 Leucocito PMN (84 %)
Salmonelosis (no por S. thypi) 82 Leucocito PMN (75 %)
Fiebre Tifoidea 100 Leucocitos mononuclares (95%)
E. Coli (enteroinvasor) 100 Leucocito PMN (85 %)
Colitis ulcerosa (activa) 100Leucocito PMN (88 %) (eosinófilos 8%)
Disentería amebiana VariableGeneralmente monocitos, salvo infección bacteriana secundaria
Diarrea virásica, cólera, toxina por S. aureus, Clostridium, E. coli enterotóxico
0-10 **
Salmonella
Fiebre TifoideaSalmonelosis
gastrointestinal
Salmonella typhiSalmonella paratyphi A/B
Salmonella typhimuriumSalmonella enteritidis
Salmonella Choleraesuis
Niños??
HemocultivoCoprocultivo
METODOSDIRECTOS
METODOSINDIRECTOS
Aglutinación(Reacciones febriles)
Coprocultivo
METODOSDIRECTOS
¿Qué métodos son mejores?¿Cuáles ayudan a hacer el diagnóstico?
HISTORIA NATURAL DE LA ENFERMEDAD
Tiempo transcurrido desde el momento de la infección
HEMOCULTIVO COPROCULTIVO SEROLOGIA
Máximo de positividad durante la 1a. semana
Permite aislar con un 30-50 % de posibilidad Salmonella durante todo el transcurso de la enfermedad, siempre y cuando el paciente no este bajo tratamiento, aunque el máximo de positividad se obtiene durante la 2a. Semana de evolución
Máximo de efectividad a partir de las 2a ó 3er. Semanas de evolución.
Son indicativos de reacción reciente:Salmonella Título ≥1/80 (anticuerpos somáticos)
Título ≥ 1/160 (anticuerpos flagelares)Brucella Título ≥ 1/80Proteus Título de OX19 (somático) ≥ 1/80
OX2 (somático) ≥ 1/20OXK (somático) ≥ 1/80
METODO DIRECTO
Demostración de H. pylori (PCR)Actividad de ureasa (Pba. del aliento)
Biopsia
AcAnti-H.pylori (IgG)
Suero
Heces
ELISA
ENFERMEDAD ULCERO-PEPTICA
DIAGNOSTICO POR LABORATORIO
Ag-H.pylori
UROCULTIVO
• Orina contaminada o Infección urinaria?– Contaminación: Cuenta de MO < 10.000/ml– Infección: cuenta de MO >100.000/ml o UFC
• Cuenta leucocitaria (>10 x campo)
• Hematuria/Leucocituria persistente con cultivo negativo: tuberculosis de vías urinarias (2 muestras seriadas)
• PCR: N. gonorrhoeae, C. trachomatis
MÉTODO DE RECOLECCIÓN CUENTA DE COLONIAS
PROBABILIDAD DE INFECCIÓN (%)
Aspirado suprapúbico
Bacilos gram (-): Cualquier númeroCocos gram (+): > pocos cientos
> 99%
Cateterización transvesical
> 105104 – 105103 - 104< 103
95%Infección probableSospechoso (repetir)
Infecc. Poco probable
Chorro medio Hombre: >104 Infección probable
Mujer: 3 muestras > 105 2 muestras > 105 1 muestra > 105104 - 105 < 104
95%90%80%Sospechoso (repetir)Sintomáticas: sospechosoAsintomáticas: infección poco probable
Criterios microbiológicos diagnósticos de IVU
Uretritis/Prostatitis• Diplococos G(-)= enfermedad
gonocócica• Siembra en medios selectivos
para N. gonorrhoeae (Trayer-Martin; Agar Chocolate; pbas. Bioquímicas)
• PCR• Infección por C. trachomatis
(Tinción Fluorescente; EIA)• En mujeres: muestras de
colposcopía para cultivo e identificación de N. gonorrhoeae y C. trachomatis
• Cervicitis: cultivo e identificación de Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum (+ 104 UFC)
• Urocultivo y hemocultivo (período febril)
• Agente causal más frecuente: E. coli
• En infección crónica: cultivo de exudado prostático.
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO EN ENFERMEDADES VIRALES
PATOGENOS PROCEDIMIENTOS
Tracto respiratorio. Adenovirus, Influenza, Enterovirus, Rubeola, Paramixovirus
Hisopado de rinofaringe para cultivo celular o detección de Ag por FIA
Tracto digestivo. Rotavirus, reovirus, adenovirus, virus Norwalk
Microscopia electrónica, ELISA para Ag virales en heces o hisopado rectal
Exantémicas. Rubeola, sarampión, picornavirus Detección de Ag virales en orina (rubeola); efectos citopáticos en exudado faríngeo (sarampión), serología
Piel-mucosas. Herpes simple, varicela zoster, echovirus
Impronta de las vesículas y frotis de Tzanck; serología; PCR
SNC. Enterovirus, arbovirus, rabia, CMV, sarampión, parotiditis
FIA del Ag en saliva y tejidos; cultivo celular de LCR, antigenemia en suero para CMV; PCR para VHS
Sangre. VIH, Hepatitis viral A, B, C Detección de Ag o Ac en suero (ELISA); PCR; carga viral. Western Blot
PRUEBA RAPIDA PARA N1H1
INFORME
Infecciones Virales
• Lesiones más frecuentes en humanos por VPH– Papilomatosis laringea– Condiloma acuminado y plano cervicouterino– Verrugas cutaneas vulgares y plantares– Lesiones en la conjuntiva ocular– Displasias y carcinomas anogenitales– Adenocarcinoma de próstata
• Tres niveles de riesgo por tipos• Tipo 6, 11, 16, 18 y 31 asociados a neoplasias
anogenitales
Diagnóstico de laboratorio de las enfermedades parasitarias
PATOGENOS PROCEDIMIENTOS
Sangre: Plasmodium, Babesia, tripanosomiasis
Gota gruesa con sangre anticoagulada y tinción de Giemsa
Médula ósea y úlceras cutáneas Aspirado y frotis con Giemsa
Sistema nervioso central: Acanthamoeba, Naegleria, Treponema, Cisticercosis
Examen microscópico del LCR
Pulmón: Paragonimus, strongyloides Frotis del esputo, lavado bronquial y frotis con Giemsa-Gram
Músculo: Trichinella spiralis; leishmania Biopsia y serología
Piel: Onchocerca, Larva migrans Microscopía directa y serología
Urogenital: Tricomonas, Schistosoma Examen en fresco, serología, FIA, sedimento urinario
La elección de la prueba adecuada y la interpretación de los resultados se basanEn la comprensión del ciclo vital del parásito y de la patogénesis en los humanos
Trypanosoma cruzi
MOSCA TSE TSÉ (GLOSSINA)
Tripomastigotesen sangre periférica
Amastigotesen tejido
T. Cruzi (positivo, FIA)
Leishmaniasis
T. saginata T. solium
DIAGNOSTICO POR LABORATORIO• COPROPARASITOSCOPICO• CITOLOGICO DE LCR• SEROLOGÍA
HU
EV
OS
PR
OG
LO
TID
EE
SC
OL
EX
DIAGNOSTICO CLINICO• TAC• EPIDEMIOLOGIA
Ascaris lumbricoides
Enterobius vermicularis
Recolección de la muestra
Элементы
¿RECONOCES ESTOS PARASITOS?
¿RECONOCES ESTOS PARASITOS?