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El ovocito: estructura, desarrollo y evaluacin de la calidad de
la puesta
M.Sc. Beatriz Angeles
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Primera fase de desarrollo ovrico
Ovario en alevn de lubina
ta= tnica albugnea (tejido conectivo con msculos de fibra lisa y
vasos sanguneos)
Opn= folculos perinucleolares
Carrillo et al, 2009
Laminillas
ovricas
50
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Previtelognesis
ovogonias y ovocitos primarios
Ovogonias: divisin mittica (ncleo grande y un nucleolo)
Ovocitos primarios: clulas somticas separan ovocitos contiguos y
forman unidad folicular definitiva (capa folicular o granulosa y
lmina basal, y teca que rodea los folculos (tejido conjuntivo
vascularizado)
Carrillo et al, 2009
opn= ovocito perinucleolar
opnt= ovocito perinucleolar tardo
CO= cavidad ovrica
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Ovocitos primarios antes de iniciar vitelognesis presentan
transformaciones que afectan ncleo, nucleolo y citoplasma.
Estado perinucleolar (aparicin de nucleolos situados en la
periferia del ncleo)
Incremento del volumen (aprox. 100 veces) y se rodea de clulas
foliculares.
Se originan alveolos corticales (mucopolisacridos y
glicoprotenas) formando un anillo alrededor del ncleo y son
desplazados hacia la periferia del ovocito se liberan durante la
fecundacin
Previtelognesis
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Vitelognesis
Acumulacin de material de reserva (vitelo) por efecto del E2 y
de la accin de la FSH plasmtica.
La FSH estimula la actividad de la aromatasa de los folculos
ovricos.
Vitelo (protenas, glucgeno y lpidos) transportado por va
sangunea, atraviesa envoltura folicular y membrana plasmtica del
ovocito.
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Vitelognesis
Acumulacin de material de reserva en forma de vitelo
Captacin de vitelogenina (glicolipofosfoprotena heptica) por
micropinocitosis de la sangre, y formacin de grnulos de vitelo
(Vg+glucgeno+glicolpidos).
En huevos pelgicos coalescencia del vitelo y formacin de gotas
de grasa
N N
zr
zr
Zr= zona radiata N = ncleo l= lpidos a= alveolos corticales gv=
grnulos de vitelo
a
gv
PV V
Carrillo et al, 2009
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Maduracin final del ovocito
El ovocito continua y completa la primera divisin meitica, y
progresa hasta la metafase de la 2da divisin meitica.
Se da migracin del ncleo o vescula germinal al polo animal.
Ruptura de la vescula germinal, condensacin de cromosomas y
emisin del primer corpsculo polar (fin de la primera divisin
meitica)
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Granulos de vitelo y vacuolas lipdicas sufren coalescencia y en
peces marinos se incrementa el volumen ovocitario por
hidratacin
En este proceso actan las uniones entre el ovocito y la envuelta
folicular.
Maduracin final del ovocito
Parenti, 2004
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MIH o EIM (hormona esteroide inductora de la maduracin) est
relacionado con la unin entre clulas foliculares y ovocito) permite
paso de nutrientes y factores hormonales entre ambos
Ovulacin es la liberacin del ovocito al lumen ovrico o al celoma
abdominal.
Ruptura de la cubierta folicular por accin de enzimas
proteolticas y por contraccin del folculo
Maduracin final del ovocito
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Atresia
Degeneracin y absorcin de ovocitos en cualquier fase de su
desarrollo.
Los cuerpos atrsicos son ms frecuentes en la postpuesta
Atresia= hipertrofia de las clulas foliculares, fragmentacin de
la capa radiada y posterior digestin-
Ocurre de forma natural o puede ser provocada por estrs
ambiental o deficiencias hormonales
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Control hormonal de la vitelognesis
E2 acta a nivel gonadal para estimular el desarrollo ovocitario
pero tambin para controlar la expresin de los genes de los tejidos
no gonadales requeridos para el crecimiento de los ovocitos.
E2 induce la produccin en el hgado de la coriogenina H (formacin
del corion) y vitelogenina (complejo fosfolipdico para desarrollo
ovocito y alimentacin embrionaria).
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Vitelogenesis
Ng/ml
estradiol
testosterona
17a, 20b
dihidroxiprogesterona
previtelognesis vitelogenesis maduracin ovulacin
Vitelogenina
Vitelognesis: Acumulacin de reservas vitelinas en forma de
grnulos
Durante la vitelognesis los ovocitos se mantienen en la
primera profase meitica
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Vitelogenina, producida en mayor proporcin por hembras, permite
realizar ensayos para determinar el sexo fenotpico del pez o para
evaluar el efecto feminizante de poluentes.
Tratamientos con estrgenos en machos pueden generar la sntesis
de vitelogenina en pequeas proporciones en el testculo
(tilapia).
Control hormonal de la vitelognesis
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Los andrgenos pueden inducir la produccin de vitelogenina en
hepatocitos en trucha, este efecto es bloqueado con el tamoxifen
(bloqueador de receptores), indica que la estimulacin ocurre a
nivel de receptores de estrgenos.
La vitelogenina se encuentra relacionada con el control de
retroalimentacin de los niveles de estrgeno. (>vitelogenina
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Calidad de la puesta
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Determinacin de la calidad de los ovocitos
La produccin acucola puede verse afectada seriamente por la
cantidad y calidad de los huevos producidos en el desove.
La calidad de los huevos puede ser definida como la capacidad de
producir alevines viables
Los huevos de buena calidad son aquellos que tienen bajas tasa
de mortalidad en la fertilizacin, embrionaje, eclosin y primer
desarrollo larval (Bromage et al)
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Dada por factores intrnsecos (edad de la madre, gentica,
composicin de la yema, morfologa, etc.) y extrnsecos (maduracin,
manipulacin, condiciones de incubacin, calidad del agua, etc.).
Primeras evaluaciones: tamao ovocito, gota lipdica, %
fertilizacin, desarrollo embrionario, sobrevivencia larval
Actualmente: simetra de las primeras clulas, composicin del
vitelo, enzimas clave del metabolismo intermediario, y herramientas
moleculares, etc.
Determinacin de la calidad de los ovocitos
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Criterios utilizados para seleccionar desoves de buena
calidad
Fecundidad o numero de huevos producidos por desove
Tamao, forma y transparencia de los huevos
Porcentaje de huevos boyantes (>50%)
Porcentaje de fertilizacin de los huevos (>70%)
Aspecto del corion
Simetra en los 1ros estados de clivaje
% de huevos eclosionados
Supervivencia larvaria
Composicin qumica de los huevos
Silva (Ed), 2005
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Las tcnicas de evaluacin permiten mejorar las condiciones de
maduracin de los reproductores y la produccin de alevinos.
Los factores paternos y maternos operan en diferentes tiempos y
de diferentes manera.
Efectos paternos se observan la primera fase (densidad
espermtica, motilidad), y los maternos posteriormente
(sobrevivencia embrionaria).
Determinacin de la calidad de los ovocitos
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Con fertilizacin externa: ovocitos pelgicos o demersales.
Diferencia: estado de desarrollo larval al momento de la
eclosin.
Huevos pelgicos larvas ciegas con boca y ano cerrado.
Huevos demersales huevos con ojo, larvas nadadoras con boca
grande, pueden alimentarse de dietas formuladas (finalizada la
reabsorcin del saco vitelino).
Determinacin de la calidad de los ovocitos
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Periodo de incubacin mayor en larvas demersales que en pelgicas
(depende de T) (p ej. Trucha: 30 das, gamitana:12-18 horas),
Desarrollo embrionario (sujetos a factores externos) Reabsorcin
del saco vitelino: trucha: 15-18 das, gamitana:3-5 das
Los parmetros de calidad son diferentes entre ambos.
Determinacin de la calidad de los ovocitos
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Evaluacin en ovocitos extrados manualmente
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Evaluacin de la calidad en desoves naturales
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Seleccin por Caractersticas
Obtencin de muestras de ovocitos
Solucin de Gilson 30 min
Solucin de Serra 1-2 min
Medicin del dimetro De los oocitos (n>200) Calculo de la
frecuencia de Distribucin y valor modal
Observacin de la posicin Del ncleo en el ovocito (n> 200)
Realizar la induccin
Evaluacin de los ovocitos peces amaznicos
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Seleccin de reproductores peces
amaznicos
Por caractersticas externas
Por biopsia ovrica (posicin del ncleo en el ovocito) Solucin
aclaradora: Liq. Serra (etanol:formol:acido actico glacial=
7:2:1)
Ncleo ausente
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Shoking
Sifoneo de los huevos y se dejan caer libremente desde una
altura de 50cm.
Eliminacin de embriones dbiles. Lote se coloca en salmuera
(60-70
gr sal/L agua) por 10 min Se limpian las estructuras de
incubacin Se sigue el periodo de incubacin
(queda un 30% del tiempo) o se realiza el empaque y envo.
