Organizacja i ekspresja genomu eukariotycznego

Katarzyna Kozioł

Magdalena Machowska

Katarzyna Piekarowicz

(Pracownia Białek Jądrowych, p.41c, e-mail: koziol@ibmb.uni.wroc.pl)

Cel ćwiczeń: Analiza procesu dekondensacji chromatyny Analiza procesu wiązania białek do chromatyny podczas

dekondensacji Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder

komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszki owocowej embrion larwa poczwarka jajniki

Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu komórkowego w komórkach w hodowlach komórkowych

-chromatyna

-ekstrakt

- energia

ODTWARZANIE JĄDER KOM.:- ekstrakt z oocytów Xenopus laevis (żaba szponiasta) - LSS- DSP odbłoniona chromatyna ze spermy Xenopus (demembranated sperm chromatin)- inhibitor coctail- energy mix: ATP, PC (fosforan kreatyniny), PCKinase

METODA IN VITRO NUCLEAR ASSEMBLY

- ANALIZA DEKONDENSACJI CHROMATYNY-ORGANIZACJA CHROMATYNY- REPLIKACJA- BADANIE MITOZY- WPŁYW WYBRANYCH BIAŁEK NA PROCESY DEKONDENSACJI I ODTWARZANIA OTOCZKI

Analiza procesu dekondensacji chromatyny

Odtwarzanie jąder komórkowych (chromatyna i otoczka)

http://www.jove.com/details.php?id=908

Widoczne pęcherzyki błonowe asocjujące z chromatyną

Widoczne prekursory porów i kompletne kompleksy porowe.

Populacje pęcherzyków mitotycznych NEP-B i NEP-A

Budowa otoczki jądrowej

-wraz z innymi białkami otoczki jądrowej tworzą dynamiczny szkielet białkowy zapewniający mechaniczną podporę otoczki jądrowej -kontrolują umiejscowienie kompleksów porowych w obrębie otoczki jądrowej-regulują organizację przestrzenną chromatyny, stanowią miejsce kotwiczenia domen chromatynowych-wpływają na replikację, transkrypcję, splicing-zaangażowane są w procesy starzenia, różnicowania i apoptozy

LAMINY

Molecular Biology of the Cell

Alberts,B i wsp., (1994)

TYPY LAMIN (ludzkie)

-B: (LMNB1) - B1 (LMNB2) –B2, B3 -A/C (LMNA) , A, C,C2, A10

Wpływ emeryny na odtwarzanie struktury otoczki jądrowej in vitro

Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszki owocowej

Dymorfizm płciowy u Drosophila melanogaster

Budowa jajników u Drosophila melanogaster

Jajniki Cewka jajnikowa (owariola)

Owariole i komory jajowe muszki owocowej

Analiza dystrybucji obu typów lamin w embrionach D.melanogaster przy użyciu mikroskopii konfokalnej.

Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu komórkowego

Formowanie wrzeciona podziałowego

The Cell A Molecular Approach Geoffrey M. Cooper Boston University Second Edition Sinauer Associates, Inc., ISBN 0-87893-106-62000

Dziękujemy za uwagę! Do zobaczenia na ćwiczeniach.

Zaliczenie:

- kolokwium ( termin do uzgodnienia)

-praca na ćwiczeniach

-obecność