8
Omega-Hydroxyceramides are Required for Corneocyte Lipid Envelope (CLE) Formation and Normal Epidermal Permeability Barrier Function Martin Behne,Yoshikazu Uchida,Taisuke Seki,Paul Ortiz de Montellano,² Peter M. Elias,and Walter M. Holleran*²³ *Department of Dermatology, School of Medicine; ²Department of Pharmaceutical Chemistry, School of Pharmacy University of California, San Francisco; ³Dermatology Service and Research Unit, Department of Veterans Affairs Medical Center, San Francisco, California, U.S.A. Omega-hydroxyceramides (w-OHCer) are the pre- dominant lipid species of the corneocyte lipid envelope in the epidermis. Moreover, their w-esteri- ®ed-derivatives (acylCer) are major components of the stratum corneum extracellular lamellae, which regulate cutaneous permeability barrier function. Because epidermal w-OHCer appear to be generated by a cytochrome P450-dependent process, we deter- mined the effects of a mechanism-based inhibitor of w-hydroxylation, aminobenzotriazole (ABT), on epidermal w-OH Cer formation and barrier function. We ®rst ascertained that ABT, but not hydroxy- benzotriazole (OHBT), a chemical relative with no P450 inhibitory activity, inhibited the incorporation of [ 14 C]-acetate into the w-OH-containing Cer species in cultured human keratinocytes (68.1% 6 6.9% inhibition versus vehicle-treated controls; p < 0.001), without altering the synthesis of other Cer and fatty acid species. In addition, ABT signi®cantly inhibited the w-hydroxylation of very long-chain fatty acids in cultured human keratinocytes. Topical application of ABT, but not OHBT, when applied to the skin of hairless mice following acute barrier dis- ruption by tape-stripping, resulted in a signi®cant delay in barrier recovery (e.g., 38.3% delay at 6 h versus vehicle-treated animals), assessed as increased transepidermal water loss. The ABT±induced barrier abnormality was associated with: (i) a signi®cant decrease in the quantities of w-OHCer in both the unbound and the covalently bound Cer pools; (ii) marked alterations of lamellar body structure and contents; and (iii) abnormal stratum corneum extra- cellular lamellar membrane structures, with no signs of cellular toxicity. Furthermore, pyridine-extraction of ABT- versus vehicle-treated skin, which removes all of the extracellular lamellae, leaving the covalently attached lipids, showed numerous foci with absent corneocyte lipid envelope in ABT- versus vehicle-treated stratum corneum. These results pro- vide the ®rst direct evidence for the importance of w-OHCer for epidermal permeability function, and suggest further that acylCer and/or corneocyte lipid envelope are required elements in permeability barrier homeostasis. Key words: acylceramides/ ceramides/cytochrome p450/epidermal lipids/omega- hydroxylase/permeability barrier/stratum corneum. J Invest Dermatol 114:185±192, 2000 E pidermal permeability barrier function is mediated by an approximately equimolar mixture of nonessential free fatty acids (FFA), cholesterol, and ceramides (Cer), arranged as multilamellar membranes within the stratum corneum (SC) interstices (reviewed in Elias and Menon, 1991). Of these three key lipids, Cer comprise a family of at least seven subfractions (Wertz et al, 1985; Motta et al, 1993; Robson et al, 1994), which account for up to 50% of SC lipid by weight (Elias and Menon, 1991). Not only because of their preponderance, but also because of their amphiphilic structure and extremely long-chain, constituent N-acyl fatty acids, Cer are presumed to be critical for barrier function. Indeed, blockade of either Cer synthesis or Cer formation from its immediate precursor, glucosylCer (GlcCer), results in abnormal permeability barrier homeostasis (Holleran et al, 1991b, 1993). Moreover, modulations in barrier function provoke changes in both mRNA levels and activities for the synthetic and GlcCer-processing enzymes that generate Cer (Holleran et al, 1991a, 1994b, 1995). Although these studies demonstrate a broad requirement for the Cer family for barrier function, neither the function nor the requirement for speci®c species within the Cer family are known. Substantial indirect evidence, however, points to the importance for the barrier of two of these Cer fractions, the most nonpolar species, Cer 1 and Cer 4, which contain linoleic acid w-esteri®ed to an unusually long-chain, N-acyl fatty acid (C > 30; acylCer) Manuscript received July 1, 1999; revised September 17, 1999; accepted for publication September 20, 1999. Reprint requests to: Dr. Walter M. Holleran, Dermatology Service & Research Unit (190), UCSF & Veteran's Affairs Medical Center, 4150 Clement Street, San Francisco, CA 94121. Email: [email protected] Abbreviations: ABT, aminobenzotriazole; acylCer, acylceramides; Cer, ceramides; CHK, cultured human keratinocytes; CLE, corneocyte lipid envelope; FFA, free fatty acids; GlcCer, glucosylceramides; HPTLC, high- performance thin layer chromatography; OHBT, hydroxybenzotriazole; OsO 4 , osmium tetroxide; RuO 4 , ruthenium tetroxide; SC, stratum corneum; TEWL, transepidermal water loss; w-OHCer, omega-hydro- xyceramides. 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 185

Omega-Hydroxyceramides are Required for Corneocyte Lipid Envelope (CLE) Formation and Normal Epidermal Permeability Barrier Function

Embed Size (px)

Citation preview

����������� ������ �� ������ ������� ��� ���� �������� ����� �������� ������� ������� ����!����� "��� ��� ����

������ ������ �� ����� ������� ��� ��� ������ ���� ����� �� ����������� ����� �� ���� �� ��������� �� ���������������������� � ���������!" ����� � ��������# ����������� � ������������� $��� ��" ����� � ������" ���%�� ��" � $��� �����

��� &����� ��# ����������!" ���%��� ��� '� ���� ���� ���������� � (������ ) ��� ������� $����� ��� &����� �� $��� ����� ����)�

������#���� ������ �������� �� �#� ���������� ���� ��� ��� �� �#� ���� ��� ������������ �� �#� �������$ %�����& �#�� ��������'����������� �� ����� �� ��(� ��������� ���#� ������ ����� ���� ������ ��������& )#� #������� �������� �����!����� !��� ��� ����$"� ���� ������� ������ ����� �� !� �������!� � ��� #��� *+,�������� �� ���& )� �������� �#� ���� �� �� � �� #������!��� ��#�!��� ����#����������& �����!��-����-��� �."/�& ��������� ���� �� �������� �� !��� ��� ����$0� '�� �� ������ �#�� ."/& !�� ��� #�����!��-����-��� ���"/�& � #��� �� ������� )��# �� *+, ��#�!���� � ������& ��#�!��� �#� �� ���������� 12*�3�� ����� ���� �#� ����� ��������� ����� ��� �� ����� #���� 4������ ���� �56$27�5$87 ��#�!����� ������ ��#� �������� ������9�: ,$,,2�& )��#��� ������� �#� ����#���� �� ��#� ���� ����� � � ��� ���$ ;� ������& ."/ �����' �������#�!��� �#� ��#���������� �� ��� ����� #�������� � �� �� ����� #���� 4������ ����$ /��� ������� ����� �� ."/& !�� ��� ��"/& )#�� ������ ���#� �4�� �� #������ �� � �����)��� � ��� !��� ��������� !� �������������& ������ �� � �����' ���

���� �� !��� � ���� ��$�$& <6$<7 ���� �� 5 #������ ��#� �������� ��������& ������� �� �� ��������������� )��� ����$ /#� ."/=��� � !����!�������� )�� ���� ���� )��#> ��� � �����' ���� ���� �� �#� ���������� �� ������ �� !��# �#���!��� �� �#� ��������� !��� �� �����9���� ��4� ���������� �� ������� !�� ��� ��� �� �������9 �� ����� �!����� ������ ����� ����� ������ ������� ���!��� ��� ����& )��# �� ������� ������ ���� ���$ ���#����& ����������� ������ ."/� ������ ��#� �������� �4��& )#� # ��������� �� �#� ���� ������ ��������& ������� �#� ��������� ���� #� �����& �#�)� ������� �� �)��# �!���� ���� ��� ���� �������� �� ."/� ��������#� �������� ������ �����$ /#��� ������ ������ �#� '�� �� � ����� � �� �#� ������� � �������� �� ������� �����!����� ��� ����& ��������� ���#� �#�� � ���� ��?� ���� ��� ������������ �� ����� �������� �� �����!�����!��� #����������$ ��� ���� � �� �������� �������� �� ���� ������������� ��������������������������������� ��������������� ������ � ������ ������ !!��!"�#!$%& %���

��������� ������*����" *������ ������� � �������� *"�� �����+������" �,������� ��+���� � ���� ������ ��� ���" ���� -&&). ���� ����� ��� �������� -$��. �����!�� � ������������� ���*���� /���� �� ������ ������� -�$. ����� ���� -��%��/�� �� ����

��� ����� 0110.� � �� � ���� ��" ����� $�� ������ � � ����"� �� ��� � �%�� �* ������� -����� �� �� 0123# ����� �� �� 0114#

'�* �� �� �� 0115. /�� ������� �� �� �� 367 � �$ ����� *"/��!� -���� ��� ����� 0110.� 8�� ���" *���� � � ����������������� *�� �� � *���� � � ���� ��������� �������� ����+������" ���!9���� ��� ������� 89��"� ���" ���� $�� ������ ���� �� *� �������� �� *������ �������� :����� *������� � ����� $�� "��� � �� $�� �������� ��� �� ��������� ������ ��!���� "�$�� -;��$��. �� ��� �� �*������ ������*����" *���������� �� � -�������� �� �� 0110* 0114.� �����%�� ���������� �� *������ ������� ���%��� ���!� �� *�� �'8) ��%�� �������%���� �� �� "������ ��� ;��$��9����� ��! ���"�� ���!������� $�� -�������� �� �� 0110� 0115* 0113.�

)����! �� � ����� ����� ����� � *���� ��,�������� �� ��$�� ����" �� *������ ������� ������ �� ������� ��� ����,�������� �� ����<� ����� /���� �� $�� ����" ��� ���/����* ������� �������� �%������ �/�%�� ����� �� �� ���������� �� �� *������ � �/� � �� � $�� ������� �� �� � �������� ����� $�� 0 ��� $�� 5 /�� ������� �������� ���� �9� ����<�� ���� ��� ����" ���!9���� 89��"� ���" ���� -$� 46# ��"�$��.

���� ����� �����%�� =��" 0 0111# ��%� �� ������*�� 0> 0111# �������� �� ��*�������� ������*�� ?6 0111�

'������ ��,�� � ��@ ��� ������ �� �������� ���������!" ���%��� A'� ���� ���� -016. �$�& A (������B ) ��� ������� $����� 5036$������ ������ ��� &����� �� $) 150?0� �����@ /���C�� ���� ����

)**��%������ @ )�� �����*������������# ��"�$�� ��"��������� # $���������� # $�D �������� ���� ���������"�� # $E� �������"�� �������%�����# &&) ��� ���" ���� # ;��$�� !���� "��������� # ���E$ �!9��� ������� ��� ��"�� �������!���"# ���� "���+"*������������#� �5 � ���� �����+���# '��5 �������� �����+���# �$ �������������# ���E ���� ��������� /���� �� # �9��$�� ���!�9"���9+"�������� �

66??9?6?FG66GH03�66 I $��"��!� � ?666 *" �� ������" �� :�%� ��!���%� ���������!" :���

26+

-����� ��� ��/���! 0124.� &�� �+����� �� � ������ ���" ������<�����" ������ �* ������ �� ��������� � �� ����������� �9� ����<�� ����� �� ��"�$�� -����� �� �� 0124. �� � �������� /��� ��� ���� *������ �*��������" -���� ��� ���/� 01>2# ���� �� ��0126.� �����%�� ���" /�� ��"�$�� ��� ����� �� ����� �������+���� � ���� ����� &&) ��� ���9�9� ����<�� $�� �����*���� �������� ��� �� ���� /�� ������������ ������ ���� � ����� ������ *" �� �$ �+����������� �������� -���/ ��� �� ��0112.�

:� �������� �� ���� ������%� ���� �� �+����������� �����������*���� ��!��������� � ������� � �� �9��$�� ���� � ��%����� �� �� �+������ �� ��� � �� �����<�� ��%����� -$�./��� �� � ������� ��%������" �� ��%������� ��� ���� ��� �������$� ������� -�/���������*�� �� �� 012># ����� �� �� 0121�#������% ��� �������� 0112. ���������" ����! � ���,������ !�������� � 0 ����%��" -8��� �� �� 0111.� �� �� �����!������"�� � �9��$�� ��� �� �������"�� ����� ��%�����-$E�. -����� ��� ��/���! 012J 012>.� )����! �� $E� �� �� �� � � �� ������ �� /���� *������ ��������� 0 �� � ���!� �� *��������� ����� �� �� ������ ���� ����� � �� �+����������� ��������- �� ��� �������. -��/���! 011?. �� �� ������������"����� ��� -����� �� �� 0121*. ���G�� � � ���������*�����*�����0

�� � ������� /���� �9��$�� ��� �������� �� �� *������ /�� � �� ��� /���� �� ���*���� � �� �"������� �536� � ��� /�� � �� ��� �*�� �� �9"���+"������ � �� &&)����� �� 89��"������ � �� ���!��� *� � /���� ����� ��������� �������� ��� �������� ����� � �� �"�� 5 �* ����" � �"��������536 -$��5. ����<����" ��� ��� �� �9"���+"������ ��� -������� ���������� 0113. �����*������������ -)��. � ���������*���� � �� $��5 �9"���+"�� � -����� �� ���������� �� ��011?# $������ 0113# ����� �� ���������� ��� $������ 0113#����� �� �� 0112. /� �� ��� �� �� �*����" �� ����� ������*����"*������ ������� �$ ���*���� �������� ��� $�� ����� ��������� �� ��� �/ ��� ���*����� � ��������� �9"���+"�������� ��� �� �*������ ������*����" *������ ���� �� � �����*���*�� ��� ������%� �������� � �9��9$�� �� � $E� ������� ��������*��" �������� ��� �*������ �+����������� �������� ���*���� �������� � ��!���� �� � ����� ����� ����� �� ���������� � �9��$�� �� ������ �������� ������*����" *������ ���� �� � �

�)��':)E� )8� �������

%������� ��"���������������������� ���� -���). 09�����*����9�������� -)��. 09"���+"*������������ -����. ��� $�� ������� /��� ��� ��!�� -��� E��� ��.� ���9'�� ������� ���!��� ��� *�%��� ���� ��*���� /��� �*������ ��� ���9'�� E�*�������� -'������$).� ��! ��� ������� ��� ��"�� �������!���" -���E$. ����� - �����!�� J6. /��� ����� �� ��� �� ����� -���� ���� ;�����".� )�� ���!��� /��� � ����"����� !�����

������ #���� 4������ ���� ���@� ����� �������� /� � ������ ��� ��/*��� ��� ��� *" ����*����� �� �� �� � ��� � � ��� ��� � ���������"�� /� �*������ *" ����*����� �� ���) ��� �* �,������"� ��������� -'���/��� ��� ;���� 01>3.� ������9�� �!� ���� /��������� �� ����9 ��� ���������"�� !��/� ������ -D;�# $� ���������!�� �������� �'. ���������! 6�6> �� ������� ��� !��/� ��167K0667 ���L����� � �� ���*�� ���%��� �" -��������/ ��� ����� 012J#�������� �� �� 0116.� :� ����� �� ����� ������ �9��$�� ����������-���� �� ��� ��/��� 011J. �� ������ /� ��� /����� �� ����G��� &90? -?@0. ����������� /�� 067 &�� 06 �! �� ���� ��� �� 6�5�!"�������� ��� ��� �� 3 ���� ���������� ��� �� ��� 3�! �������"������ �� �� 3 � ����� �� ��%� ���!�

���� ����#���� �� � � ���� � ����� "��� � �����9�� �!� $�D/��� ����*���� /�� M05$N9������ ���� -)��� �� )����!��� ���!� :E.� ��� � �� ���*���� -?�3K06 ��. �� %����� �� J ��� ��%� ���� ��� ��� ��! /�� ���9���� �� ����9*� ���� ����� -���.� ����� ����� /��� �+������� � �� ���*�� *���/� E�*���� $�� ��� ;��$�� /��� ��������

�� ���E$ �� �� ����/��! ��%��� " ��� @ �� $������� ���@�������@������ ���� -15@0@5 %��G%��G%��.# ��� �� ;��$������� ���@�������@/���� -56@06@0 %��G%��G%��.� �� ������������� � ������ ����� ���� �� 89-�9��.9��"� !���� /� ��� ���� � ��� �����%�� ��� �� �� ����� ������! ���" ���� ���"� � ��� -���� ����/��!�������" � � ����� $�� ��� ;��$�� ������� .# ���" ���� ���"�� ��� /��� �������� *" ���E$ �� �9�+���@����"�����@������ ���� -J3@43@0%��G%��G%��.� :���%����� ������� /��� ������ �+������� ���� ������������L��� ��� ������� *" ��,��� ������������ ����������"�

.������ �� �����!����� !��� ������ ���� ����� ���� -�D�09�. /��� ����� �� ��� $���� '�%�� E�*�������� -������!��� �).��� �� ������ ��� � ���� ��� /���� � ������ � )�� ������ /��� 2K0? /�� �!� �� �� ���� � ���"� ���� ��������� /���� �� -���E. /� ��� ���� /�� �� ��������"��� /���� ����"��� -����� ������!��� �). � �� ���*�� ���%��� �" -����� �� �� 0123# �������� �� �� 0110*.� �" �%������� �����%� �������! /�� ��� �%� ���� -�� � ����� ��� ;�����".���� � �� �$ ��� �� ��� ������� ����� /��� ����%�� �� ������ �������� � � ���E �%�� *� ����� -� 5 �! ��� ��? ��� .� �� ����������� ��� �� �����+������" �/� �� ����� �������"�� ��"�� �����" �� ���*�����%�� �� ����9 ������� ����� ���E ������! /��� �*������ ����������"� ��� *������ �� ������� ��� �� 4 J ��� ?5 � ���� � ���� ����%�������� ������� ��� ������� ������ ��� ���� ����� /��� ���*���� � ��� ���� ����� %�����

;�#�!��� ������ �� L��� -���� �����+������" ?�3 ��?. � ����� ���� /��� ������� ��������" 0J *� ��� ��� ����������" � ��� ���� �������! /�� 066 �� ������� � )�� �� ���� �%�� � ���!� � ��������� -4�>� 06KJK4�>� 06K0 �. �� �� ������G����"���� !�"��� -4@> %��G%��.%������ )����+������" ����9��9 ��� ���� �!�� ������������� � )��/� ��,����� �� ����%� �������*�� ��������� �� �9��$�� ���������� ����� � �� ���� /����� �%������ � ��+����"� �� %����� ����� /� �����"�� �� �� ����9 ������� ������� ������ �� �� �� ������������� L��� ��� ���*����9������� ������ �

��� ��� �� �� ��� &�� �" �*������ *��� �� � ����� ��� � ���/��� ����� ���� ����� �� �� 9 ����!� D����% �"B <+���%� �� ����� ��<� � �� �* ����� �"������ �� ? -���� �� �� 01>>. ����� �� ����"�� <+������)�� ����� /��� �� �<+�� /�� 07 �,���� � ���� �����+��� -� �5.���������! 6�37 ���� ��� �����"����� ��� ��*����� �� �� ����9���+"��+����� &�� %� ���������� � �������� ���*���� �������� ��������� ����� /��� �� �<+�� /�� �������� �����+��� -'��5. -���� �� �� ��012># ��� �� �� 0110.� ������� /��� ��� �� � '������ �������� ���������� ��� ������� ������ /�� ����"� ������� ��� ���� �������� ������� /��� %��/�� �� � O�� 06 $' �������� ����� ���� �������� �� J6 �(�

����� ��� ���� �������� ������������ &�� ,����������� � �� $E�/� �%������� �������" �*������ ��� ����� �������� �����!��� �� ���� ���� ��!��<������ ��� �"������9�+������� �� �� ����� � �"����������� ��� ������� � �� �%����� ���!� � ������� �� �����������"��9 �� ��� ������ �� ���!� � ������ $E� /���� �� ��������� ����� � $E� ���!� ������ ���!� � �����<�� �� ��� /����*������ ��� )��9 ������ %�����9 �� ����9������� ������ ������������ ����" � /� ��� ����� ���" �� ������������"�� ������ �� �� <� � ��� ����� -�� �9���+����. �����<�� ��"�� �� ��� �� �� ����$E��

�������� �� ������� #���������� ��������� ��� /����*������ ��� ������ ��� ���*����9������� ���� *" <� � ����%��!/��� ��� ����� ��� ��������� ������ ����/�� *" �*���!��!�� � ����� �� �������9 ��� ��!�� ���9 ��� ���*����B ��� ���������!06 �� ���) -�� >�5. �� 43K53 ��� -4>$�. ����/�� *" !����� ������!/�� � ������ *���� -�������� �� �� 0110*.� )�� �* �,���� ��� /������ ����� �� 5�$ ���� ����/� � ������ ��������� ��� /������!������ �� 166�� � ���*����B ��� -�� >�5 ���������! 6�?36 � ���� �. /�� � ���"���� �$�? �� �� ���!������ -437# ?� 03 # 5�$. �������� -437# 4� 06 . � ��! � &� �� ���� ���*� �� ���*�������-)���� &�����!���� 8�. ��� ���� ��*�� /� �������� �� � ����� �!� ��06 666 � � �� 03 ��� -5�$.�

���� ���� ����& �� ���������& �� ������������ ��������� ��� /��� �������� � �� ���*�� �*�%�� �+������*�� ����� <� � /��� �*������/�� �� ����� � ���! ��� �"�� -0131. � ���%��� �" ����<�� -������� �� 0121�# �������� �� �� 0110*.� $�%������" *���� ����� /��� � ������*" �����<������ � �� �+�� ��%��" �+������� ����� -����� �� �� 0121�.��� ����/��! ���E$ ��������� ���%���� ������� ��������� ���,����������� � $�� ��� ;��$�� ����� *" ��� �������"@ $�� ��� ;��$��

0���� �� &���� � � ����� � �������� ��@ �* ��%����� �� �� �������� ������� ��� ���!�� � �� �����9*���� ��%������ � ��������� ��� 00?@35?� 0111

265 ���8� �� �� ��� =��'8)E �& :8(���:;)�:(� ��'�)��E�;�

����� /��� ����������� �� �� ����/��! ��%��� " ��� @ -�. ����� ���@�������@/���� -56@06@0 %��G%��G%��. �� ? �� ��� 3 �� ���� �%��"# -��.����� ���@�������@������ ���� -15@5@0�3 %��G%��G%��. �� �� ���# ��� -���.�9�+���@����"����@������ ���� -J3@43@0 %��G%��G%��.� ) ��� <�����%�������� �� ����� /��� ����� ������ ������ �� ������! �������M0�37 ������ �� ��� �� ������ ����@ �� ���� ����@������ ����� ����@/����-36@06@06@46 *" %�����.N ��� ������ �� 0J6�$ �� 03 ���� ����� /��� ������ /�� � %����*�� /�%����!� ������! ��� �������� -�������D"��� =����. �� �� J25 ��� E���� ������ /��� ,���������� *"���������!���" �!��� � ���/� ������� �

A������� �� �������� ����� ����� ����" � /��� ��� ����� � ��! � ������ ���������� ������� � �� � � ������������

'���E��

."/ ���� ������ ��#�!��� ������#���������� �� 4������� ���� ����� �� ��� �����! �� ��� ����� /�� �� ���*���� /�� � �� �� ������� �� � ���� ���� � ��� ����<���" �� ���*����� ��� �� �� "��� � � �9"���+"����� ������� �� ������������ ���������"�� -$�D.� �� ����� ����� �� ����<���" � )�� �� �9��$�� "��� � /� <� � �������� "��� � � �9��9 ���" ���� -&). ������ ���9��9���������! &) /�������� ��! ������������� � �� ���*����� )�� �� ������������� � �� �� 06 �� ��� ��� ���*�� �� "��� � � ���9��9&) *���� ���*���� ��� ������ �9��9&) ���������� �� � ���!�� �%��������������9��������� � ��� -��� 2.� )�� �� � ���!�� �%��"���*���� �� "��� � � �9��$�� �� ������������� ��� ? ��06 �� /���� �� "��� � � ���� ���9�9��9���������! $�� ����� /� ��� �!��<�����" � ����� -���� ��� �/�# � � ����� 2.�)����! �� "��� � � �9"���+"9���������! ���" ���� /� ��!��" ������ �� �� �� �!� � )�� ������������� �� ��� -����06 ��. �� �� ������ ��� ��� ����%� ���� ����� �!��<����� -��� �/�.�

) ��� �� ��� B )�� -06 ��. �� � ��� ��� ���*�� �� �� ���� "��� � � ����� ���9�9��9$�� �� 9;��$�� ����� /���� ������������ � ���9�9�� $�� ����� ������ �� /�� )����������� -� P 6�60 ������ %����� �������.� :� ������ � ��!��������� � *�� �9� ����<�� ��"�$�� ��� ��"�;��$�� ���9������� �� �� !��������� � �9��$�� /� �!��<�����"

���*���� ����� �� ��� ��������� -� P 6�60 ��� � P 6�663�� �����%��".� �� � ����� �/ ��� )�� ����<����" ���*�� �9�� &) ��� �9�� $�� ���������� �� $�D /����� ��������!��� ����<� �� ��+�� � ��� �� ����� *��� ���!������ �� &) "��� � �

;�#�!����� �� ������#���������� �������� )��# ����������!����� !��� #���������� �� � ������� /���� �9"���+"������ � ��������� �� *������ ���� �� � /� ��+� � � ���� ������� � *������ ����%��" �� ����� ���� ������� �/��� /������� )�� �� �,��� ������������� � �� ��������" �������������%� �����! "���+"*������������ -����.� ) ��� ����� <-'. �/� ������� ����������� � 4> �� )�� -���� 0J *� ��� ��� ����������" � ��� *������ �� �������. *�� ���������� ��� %����� ���%���� � �!��<���� ����" �� *������ ����%��"�� 4 ��� J � �" ?5 � ��� ����� �� ������� *������ ����%��" ���� /��� �������*�� �� ��� !���� � ����� 069 ��� �!�� ��� 069 �����/�� ������������� �������� �������*�� ����" �� *����������%��" ����� �������� � )�� -P 4>6��. ��� ��� �����*������ ���� �� � �!��<�����" -��� �!��� ���� �� �� � ���.-��� <(# ���� �� ���� ��� �/�.� �� � �� ��� �/ ���������� ����������� � �� �9"���+"������ ���*���� ���%����*���������� �� ������*����" ���� �� � �

/��� �� ."/ ���� �� �� ������#���� ������ ������� ������� �� � ������� �� *� � �� �� *�������*��������" /� ��+� ���������� /���� ������� ����������� � )�� ������%��" ������ �� ������� � �9��9���������! $�� �������� �������� � �/� ����������� � )�� �� ����� ��� � ���� �*�%� �������� � �!��<���� ��������� �� �� ������� � �9��9���������! $�� ����� �� *�� �� ��*���� ��� �� ��%������"*���� ����� ������� -��� *'.� E���/� � �� ������� � �������*���� �9��9���������! ;��$�� ����� -���� ��"�;��$��. /� �� � ������� �!��<�����" *" )�� ��������� -� P 6�6?. -��� *(.��� ,�������� � *���� �9�� ;��$�� /��� *���/ �����������%�� � $��%�� ��" )�� ��������� ��� ��� ����� �� ���������������� � ���9�9��9���������! $�� -��� *). ��� ;��$��-��� *(.� &�����" ���� �/�� �� ���*����" � ��� �� �������������� !���� "����� �� ���!���� "����� �9��$�� ����� -��� *( ).� �� � ����� �/ ��� )�� �� ������������� �������� *������ ���� �� � ������%��" ������� ��������� �9�� $��������� /����� �������! ���� $�� ��� ;��$���

����� 2$ ."/ �� �� ��������� � +�% ���� ������ ��#�!��� ������. �������� �� ��@$ $�D /��� ������� /�� ������ ��!������������� � )�� -6K06 ��. ��� �� ������������� � M05$N9�������/� ��� ������ �� ���*���� $�� ������� /��� ����9"����"��� ������� � ��"� &)� �� �9�� ��� ���"���+" ������� /��� �������� *"���E$ ��� ������������� ���� ��� ������� ���������� - �� ��������� �������.� )�� �� ������������� � � 3 �� �!��<�����" ���*���� ��������������� ���� �� �9��9&) -���� � P 6�63 ��� 6�60 �� 3 ��� 06 ���� �����%��". /���� ������������� ���� �� ���9��9&) /��� ��� 9 ������ (���� /��� ���������� �� %����� ������� - �� �� 0667. �� ���&) �* ������� -���� �9��9&) ��� ���9��9&). ��� ����� ��� �� ����� ��# � Q 5�

����� B$ ."/ ���� ������ ��#�!��� ��#���� ����� ���������� ��@$ $�D /��� ������� /�� ����� %����� ������� -��!� *�� . ��)�� -06 ��# ���� *�� . �� J ��� �� ������������� � M05$N9����������� �+������*�� ����� /� ���������� �� �� ���� ������� )�� �!��<�����" ������ �� �� �������� � �9��9���������! $�� ������� -���� ��"�$�� ��� ��"�;��$��# � P 6�60 ��� 6�663 �� �����%��". /���� �� ���������� � ���9�9��9$�� /��� ����� ������ �� -$��. �������!�� -;��$��.� (���� /��� ���������� �� %����� ������� �� ��� ������� ��� ����� ��� �� ���� � ��# � Q 5�

(�E� 005 8�� 0 =)8�)'� ?666 ���;)9���'�F�$�')�:��� )'� '�R�:'�� &�' ��� �)'':�' 26C

;�#�!����� �� ������#���������� ������ �� �������� ����� �� �!���������� �� ���� ������ ������� ���!������ ��� �� ��+� � � �� �/� ��������� ��������� ������ � ��� ����� ������� �� �� ���������� �� *������ ���� �� � �������� *" ���*����� � ���!�9"���+"������� &�� � /� � �"���� �������!" � �� $E� ����� ����������" ��������!,���������%� �������!�� ����� M ����� ����� �� ���� � ��+���� �� ������ �� ���� � *������ ����%��" -���� J # � ������ <'.N� )��9������� *�� ��� %�����9������� �$ ��%��������!�" ��!��� � ��� 9 �������� $� /�� � ��������� ��

����� <$ ����!����� !��� � ���� �� ����� !� ��#�!����� ����#���������� )��# ."/$ �� L��� � ����� ���� /��� ��������/��� /�� ������� )�� -4�> ��.# ���� 0J ����� �� ��� ����������" ����/��! ����9 �������!� ���� ��������� /���� �� -���E. /� ��� ������ 4 J ��� ?5 ����/��! ����9 �������!� -�. ������� ����%��" � ����� ���� � ����"�� *" )�� �� *�� 4 ��� J ����/��! ����9 �������!-� P 6�6660 �� )��9 ��� %�����9������� !���� �� �����%��". *�� ��� *"�� �,��%����� ������������� � �� ������%� ���!���� ���� -�� J ����/�� � 4 ���E ��� ������� ��� ��� � �� ��� %����.� -�.$������������K�� ��� � �� %��"��! ������������� � )�� /� ��� ������� �� ���� � ��+���� ����" ����/��! ����� *������ �� ������� M���� J # �� -�.N� )�� *�� �� ��/� � )�� ������������� ������� -���� S 4�>��. �!��<�����" ������� *������ ������ �������� /�� ��� �� �� %�����9������� ������� !���� -� Q 3K00 ������ �� ��� ��������� !����# � Q 46 �� %����� ������� !����.�

����� *$ /��� �� ."/ ������#�� ������� ������ �� ����� ��������� ������$ �� L��� � ����� ���� /��� ������� /��)�� ���� �� %����� -� �� ��� < �+���� 06� �!�� ������������� � ��� �������� /��� � �� �� �� ��� ��+���� � ���- .# ���� 4> ��.� ���*���� -���� $E�. ��� ��*���� ����� /��� �+������� �������� *"���E$ ��� �� ������� � ��� ����� ������� ���������� - �� ����������� �����.� '� ��� ��� ��� ����� � �� ���� ������� -�! ��� ��? � �������� .� ���# � Q 4 �� ���� -�. �� ������� � *�� *���� �9��9$�� ��� ��*���� ��"�$�� /��� �!��<�����" ������ �� -���� � P 6�63 ����� ������ %�����9������� %���� . *" )�� /���� ���� ��� ��� ������� ������� � �� � �/� $�� ������� � -�. �� ������� � ��"�;��$�� �� �/� ������ �� *" )�� -�� P 6�6?.# �� ���!� �� ����� ;��$�� ������� /� ��� ���� ������" �!��<����� )!��� ���� ��� ��� ����� �� ������� � �������"�;��$�� �� ����� ;��$��� -�. �� ������� �� ���9�9��9$�� /� ���������� *" ����� )�� �� �����

266 ���8� �� �� ��� =��'8)E �& :8(���:;)�:(� ��'�)��E�;�

�����!��� $E� �� �� ��/��G�� ���� �$ ��"��- . -���� + 5.� �� ��* ��%����� /��� ���<���� *" ,���������%� ����� �� �������"�*������ ����� �����!��� � � �� �� �� �* ��%��9*������ � ���� �� �+���� � $E� /� ������� *" �����+������" 367-/�!�� ;. /�� ���������� /��� /�� �� �%����� ��������� ��*���� �9�� $�� ������� -� � ����� *'.� &���� ���� �� �� ����T����� �$ -���� ���9�$. �� ���"�� ������ �������� ���������� �������� -��� �/�. �����" ����� �����! �� ����� ��� ������$ ����� �� ����9 �������!� &��������� �� ��������� �� �� ����$E� ���������� /�� �� ��� �� �� �������� � �� �������!���*���� � �������� *���� K ��!������ ��%����� ����� ���������� ���� �* ���� �������� �������� �� ����� ���*���� ����� ��� �� ������ ���*�� ���*���� -��� C'.� ��� �� ����%������� ������ �� *� ������ ���� ��� � � ��� /�� �� ��������� �� ���*���� �����! �������� *��" �+��"�� � �� �� �;K�$����� ��� -��� C'%.� ��� � ����� � �� �*���������� ����� �� ����� �� �� ���� �������� � $E� /�� ���� �� ��� � �� � �� ��� �/ ��� )�� ��������� ����� ��������� ��� ���*�� *��*������ ������*����" ����%��" ��� ���!�9"���+"������ �* ��������" ������ � �� $E� ������� � �$ ��� �� ��������������� � ��� ����� ������� �� *�� �*������ $E� ����������� �*������ ������*����" *������ ���� �� � �� ���*����9������� ����

)�� �� � ����� ����� *������ ���� �� � *" ������ �� ���������������� �- .# ���� �� ������� � �+����������� �������� ���*���� ��� �� ������ �� ���������� � ��"�$��� :� ��� ������� )�� �!��<�����" ������ � �� ��"�$�� ��� ��"�;��$�� ������� � ������ �������� -��� *' (. ���� ��*���� ��"�$�� �� �+���9�������� ��������� ����� �� � ��������� )��9������� �������� ��%����� �*������ �������� *��" ������� -��� C'!. ��������� � ������� �������� *��" ������� �� �� �;K�$ ����� ��� -��� C. � /��� � �� ������� � �� ����������� � �� �+����������� ��������-��� 5.� '������� �����+��� �� �<+�� )��9������� ����� ��%����� ��� �� ���� �+����������� �������� ����� �� ���� ��� ������������ ���*���� ���� �������� �� �� ��/�� �$ -� � ����� 5'�� 5(. �� ���� �+��� �%� �+����������� ���� ����� � ������������������� -��� 5'.� �� � ����� ���%��� �� ��������� �� ���������� ��������� ������ � /���*" )�� ����� �������� *������

���� �� � ���� *" �� ������� � �+����������� �������� ���*���� �������� ��� �� ������ �� ��"�$�� ��� ��"�;��$�� !����������

�:�$���:�8

)*������ �%������ �������� � �������� ���� �� *��� $�� ����������� ������*����" *������ �������� &�� �+����� ���*���� � ����� ����� �������"����� ��� � �� �9!��������*�� ��� � �� ��"���"�� � $�� "��� � ��� $�� !��������� ��� ;��$���� �����%��" ����� *������ ���� �� � -�������� �� �� 0110* 0114.������%�� $�� �� � *� ��� ��� �� ��+���� � �" ����!�� ����� ��������*����" *������ ����%��" �� ����� �� ������ �� ����������� ���� � ��� ����� �*��!����� -��� �� �� 011J.� ��� $�� ������ � ������!����� ����" � �� ��� � �%�� �* ������� -����� �� ��0123# ����� �� �� 0114# '�* �� �� �� 0115. /� � ����<� ������� ������ �����/�� �/� � �� � ����� $�� 0 ��� $�� 5-��"�$��. -'�* �� �� �� 0115. /�� �� �� ���" �� ���� ���!���*� � �� � � ��������� �����" � ����<�� %�� �� �9�� ������� ��� %��" ���!9���� 89��"� !���� -����� �� �� 0124.� ���� � ����!�������� �%������ �� �� ���������� � �� � �9� ����<�� $�� ���� ������*����" *������ ��������! ���� ��,�������� �� ����������� ���*���� �������� �� ����� ���*���� ��� ����� ������ �� ����� ��� � �+����������� �������� �� ��� -���/ ��� �� ��011J 0112. ��� ���� ������%� ���������� �� � ������ ���" ����

����� 5$ A� ��� ������� !�� ������� ������ �����-� ���� ����� ������� ���!������� ��� ���� �����)��� ."/ ��������$ ) �� ���� + ��� C� -�. )������ �������� ��� ��� ������� �������� ���� -���� ����. ���9�������� �� �$ ����� ���� � )��9������� ����$E� � ��� ��� �����" -�� ��� �����. *�� �* ��� ��� �+��� �%� ��!��� � �������"�� �� ��� -����������.� -�. :� ������ � ������ *������������*���� ����" ����� �� %�����9������� ������� ����� -�����.� -� �. '������� �����+��� �� �9<+������ ����� ���@ 6�?3���

����� +$ ."/ �������� ������ �� ���������������� �� ��� ��� ���� ��� ���� �$�������� �����!��� � ����� ��� � ������������� � ��� �/� ������� ����������� � )��-4> ��# �. �� %����� -$��# �. -� �� ��� *.��� ���� ����� �������� ��� 9 ������ � �����9<�� ��%����� /����� %� �*�� $E�� !��� ������������� �� ����� ��� � $E� �� )��9������� ��9��� -�. /���� ��� ����� �������� ������ $E��� ������� -�.� -� �. �"������9������� � ���������+��� �� �<+������ ����� ���@ 6�?3���

/�!�� ;$ ;�#�!����� �� ������#���������� � ����� ��� ������

��������� 7 $E�* �!���� -� ��. -<��� .

(����� >5�>� ?6�5 05:��*���� -)��. 4?�3� 0J�5 ?J

����� ��" -�������.�*��� ���� � �����9�� �� ���� ��!��� /�� $E� -���������" � �+�� ��%��"9

�+������� �$.�

(�E� 005 8�� 0 =)8�)'� ?666 ���;)9���'�F�$�')�:��� )'� '�R�:'�� &�' ��� �)'':�' 268

��<�����" -����� �� �� 0124. /�� �� ���" � ��� ���� *�������*��������" -���� ��� ���/� 01>2# ���� �� �� 0126.�

:� �� ���" /� ��!� ������ �%������ �� �� ���������� � �9��$�� ���G�� ���� 89��"� � ��� �� �� *������� ���!�9��$����� ������%� ������� � �� �"�� 5 �"������� �536 ���"�� �* ����" $��5 -����� �� ���������� 0113.� �� �/���������" ��� $��5) ������� � ��� ��� �� �������� ��������������� �� �� �"�� �� � �� ������ !������ ���? �� �� � �/�� ��� �9"���+"������ � �� 89��"�&) ����� ����� ��� ��*�" � �� 89��"�&) /�� � ���!��� *� � �� ��� $���4

����� � �������� *��" ������� ������� ���������" � ��*�����"�;��$�� -����� �� �� 0125. �9"���+"������ �� � ����� ������� �����!��! ���� �� ��!������ -��� 6.� �� ������ ��� � �������� *" ��� ����� ��������� �* ��%����� ��� � �*�������������� *��" ������� �� �������� ������� /�� �� $��5) ������ ���*���� )��� �����%�� /� �/�� ��� ��� )�����*�� �9"���+"������ �� ������������� ��� ��� ���*����"������ �� &) ��� �� *��� $�� "��� � �� ���� ��� �� ���� :������� � �� ��������" ������� )�� �����! ���� /���� � � �� ���/� ���"��9���*����" ��������� -�� �� �� 0112.

��� ��� ����� �9��$�� ���������� ����� �%������ *�� �� �� ����<���" � )�� �� ���������"�� �9"���+"������ ��� �� �� ����� ��+����" �� �� ������������� �����"�� ����

���!�9��$�� ������ �� *� ��,����� �� ������ ������*����"*������ ���� �� � *���� � *������ ����%��" /� ����"�� ����/��!������� ����������� � �����+�� ������������� � )��� �� *� � �� �� *������ �*��������" � ������%� ��������� � �$ �9��9���������! $�� ������� -*" �*��� 367 ������ %�����. �� �����! ���*���������� �� �$ ���*���� ��������� :� ������ � ������������� "������ ����%���� ��� ��� ������� ����� �� � ��������� ��� � !������ ��+����" %� �*�� *" ����� ���"� ����� � �� ���� � ��� ����� �9��$�� �� �� �$ /���� ��� *� � ����� *" ���9���� ����������� � �����"�� ��� �� � �����" ��� ����������!��G ��,���� ���*���� ����������� /���� ���%��� � ������������ �� �9��$�� -��� � ����K��� ���� *������ �*��������".*�� �� �� ��������� �� � � ��������%� ��+����"� ����� � ������������%� ���� ����� ����� ������%� ���*����� � ���!�9"���9+"������ ����� �� ��� ��������� ��� �*��!��� *������ ����%��"�� � �� ��� �������� ��� �9��$�� ��� ��,����� �� ������*����"*������ ���� �� � �

89��"����� ��� �����"����� �9��$�� ��� ��� ������� � �/��$ ���*���� �������� -��� 6. �� $E� ��� �+������������������� �� �����%��" *�� � /�� /��� ������� *" )������������ �� �� ��������� �*��������" �� �����! ������*����� � �9��$�� ���������� ����� *� �����*���� ����������� �� ���������� �� ��� �� *�� � �� � ������������ ������� � )�� �������� �*���������� �� *�� �������� *��"

����� C$ ."/ �������� ������ �� �!����������� �� �������� ���!��� �� ������� ��������� !����$ )��9������� �������� -� ������ +. ��%��� �* �������� � ��� ������� �������� -�. �� ������ ������� E� ������� /����������� � ������� �������� �������� �� �� ������ !������ �� -�;.9 ������ ������� -�$.����� ��� -� ��.� :���%����� �������� *���� �� ���" �*������ ��� ��� �������� ������� -����� �����. � /��� � �*���������� �� ����!������ �������! ���*���� -�� ��������.�)*���������� �� �� ��!������ B �������! ���9*���� ������ �� ��������� /�� ���� �������� � ������ ��� �� ���*���� � ������� � �; ���� �� ��� � �������� *��" �������� -�" ��������.�-� ��� �����. (�����9������� �������� �� ���" ������� �������� *���� -�����. � ��� ��� ����� �"�� �� /�� �������9��9������� �������� ������� �-� �. � ���� �����+��� �� �<+������

?���� � ����� � ���� � ���� �� �������� ��@ ���!�9"���+" �������� �� �����9*���� ��%����� -E��. ��������� � ��������� ��� 00?@J63� 0111 -�* ���.

4����� � ���� � ���� �� �������� ��@ ����*���� ���/�" �� �� �������� � ���!�9"���+" �������� �� ��������� �������� � � ��������� ��� 006@J>?� 0112 -�* ���.

28, ���8� �� �� ��� =��'8)E �& :8(���:;)�:(� ��'�)��E�;�

������� ��� ���� �+����������� �������� ���*���� ������� � �� �*������ �+����������� �������� ���*���� �������� ��� ������� ����� �+����� �� *������ �*��������"# �/�%�� ��� ����� �� ������ ����� �* ������� �������� � �� $E� ����/��! )����������� /�� ,���������%��" ���������� �� ��������� ���9��$�� �������� �����%�� )�� ��������� �������� ������9���� �� �� �������! ���*���� � �������� *���� ��� ��!� �� �������� �� �� $E� �*��������" -��� 6.� �� � �*���������� �!!� � ����� ��� �� $E� �� �� ��" �� ��� ��� ������! � ���������! ���*���� � �� �������� *���� ���� �� ��� �����*���� � ������ !������ �� ���� � ) ���%��� �" �!!� ���-����� 011J. �� �������! ���*���� � �������� *���� �� � *��9��$��9������� ��� �� � ���� �� �� "����"��� ��!� ���� �����!���� ���*���� �� ������� �����! �����<������� ��������� � ��� ����� ��� �� �� �� � ����� /���� *� �� �������� � ����<������ � �9��$�� ��� �� ��"�$�� �� $� ������� � �������" �!!� ��� *" �������� ��� ������!�� -8��� �� �� 0111.�)����! �� $E� ��� ��� �� ���" ������ �� *������ ��������� 0 ��� *��� �� ������� �� ��%� � � �� ��� -��/���! 011?. �������� �� �� ���� ����� ��� ��!��������� � �� �+����������� �����������*���� " ���� ����� �� ���������� �� �� �+������������������� ���*���� �* ��%�� ��� �� ��� ��� � ������" $E��*��������" ������! �� ��������� �� ��!��������� ���G�� ���������� �� ��"�$�� ��������� � �� �+����������� �������� ����� ���*� ���������� ��� �� ���"� 8�%������ �� � ����� ���,��%�����" ����� ����� �� ��,�������� � �9��$�� �������� ��������� ������*����" *������ ���� �� � �

�� � �� ��� ��!���� /�� ���� �������" ��*�� �� /��� �%�*�!�� �� ��%��� �� �,����� � *��������� �%��� �� �� ���/�"� $E� �������� ��� !��������� � ������ �������� ���*���� �������� �� �� �$ -��� 6.� &�� � � �/� ���%��� �"4 ��� �!��� ���� ���" -� � ����� 2. �9"���+"������ � %��" ���!9���� &)������� ������ ����� /�� ���!��� *� � ������� �� ����9��$�� ����� � ��* �,���� !���� "������ ��� �9��"������!������� � ��+���� � ��������" !���� "����� ��"�$�� ����� -���� ��"�;��$��. /�� ��� ��� �����!�� /�� ���� *������ ����� ���� *�� �� ������� ���� ��� �� �������! ���*���� � �� E�-����� �� �� 0125# ;��" �� �� �� 0123# ����� 011J.� &� ��� � ��

E� �������! ���*���� /�� �� ������ ��� �� ���*���� � ��������� � �; ���� ����%�� E� ������� ���� �� �;9�$ ����� ���� ��� ������%��" ������ �� ������ ��� �� ���*���� /�� �9��9���������! $�� ����� -���� ��� �� E� �������! ���*����.� �� �* �,���� ��%����� ��������� � �9��$�� �� $� ������� �� ��� �� $E� ��" ����� /�� ����� �� ��� �9��$�� -����"�$�� ����� . -��� 6 �� ��. �� �� �*�" /�� ���� $�� "���+"�9�� ���� #5 �/�%�� �� �� �* ���� � �9!��������*�� ��� � ����%��"� ��������� ���%��� �" �/� �� �!��<�����" ����� ��������� *������ �������� ��� ������� -�������� �� �� 0114 0115�. �9��;��$�� ����� �� � ��� *� ��%������" ������ �� �� $� -������! �� ��0111� *.3 �!!� ���! ��� ��!���� "������ �������" ��" ����� ����/��! $E� ��������� &�����" ������ �������� ���*���� ���� �������� ��� �� �� �+����������� ������ � �� �$ ����!��������� � /�� ������ �� ������ ���� �� ��� ���� � �������� ��!���� "����� $E�� �� ������ ����� � ����������� *" ����� ���� � )�� /�� ����! �� ���*����� � �� ������� �9"���+"������ �������� �� ���� *�� $E� ��� ������ �����������*���� �������� ����� �����! �� ��" ���� �� �� ���,�� �9��$�� �������� �� ��������� ������*����" *������ ���� �� � �

����� ������ ���� ������� �# $�% ������ �& '())* +,�%-. �& �(/(*

+0��-. �� 1� "22�2 +0!�-. �� ���� �� ��� ������ &������� ������� 3 ���

4������� � ����������5 ��5 ����� ��� ���� �� ��5 ����# 0���#���6��

����� �7������� ��������� ����������5

����� 6$ ��������& �� 4�����& �� ������-����� �� ������� ������ �� �������)���& �� �� ������ !� ."/$ &����9���� � �������� ���*���� �� �� ����� ���� � �� �$ ������� �� � ���9/� � ������� ���!�-�.9"���+"������ � %��" ���!9���� ���" ���� -&). ������� ������ ����� /�� ���!��� *� �-��. �� ��� �9��$�� ����� -���� :# �� *����/�� ��� ����� ��������� ��"�� . ��������!!���� "����� ��� �9��"����� ��� -��� �/�.��� ����� � ����������� *" �� ��� ���� � )�� /�� *���� �� ������� �9"���+"��������������� �� �9��$�� ����� ��� ��� ����9�!�� ����! /�� ���� *������ ����� ���� *�� ���������! ���*���� ��� �� ������� ���� � �����9��� *���� -E�. -���� ::# ��������" �� �� ���9��9����� ��������� ��"�� .� ��* �,���� � ��� � ��E� �������! ���*���� /�� �� ������ ��� �����*���� -��. � �� ������� � ������ !����9�� �� -�;. ���� ����%�� E� ������� ���� �� ��9��� ���� *��/��� �; ��� �����<�� ���� -���� :::.��� ����� �� � ������%��" ������ �� ��������� �� ���*���� /�� �9��9���������! $�� ����� -���� ��� �� E� �������! ���*����./�� �* �,���� ��%����� ��������� � �9��$���� �����<�� ��%����� -$�. ������� �� ��� ���������"�� ����� ��%����� -$E�. -�� ��.� &�����"������ �������� ���*���� ���� �������� ��� ���� �+����������� ������ � �� �$ �� ��!�����9���� � /�� ������ �� ������ ���� �� ���9 ���� � �� ������ $E� -���� :(.�

5��/���! �� ���/��� �� E��� 8@ &���" ��� ���� � �������"����%����� �9"���+"�������� ��� *���� �� ������� ����! ���� �9"���+"� ��� J6 ������� ����! ���� ���!� ��� 09"���+"�� � ��������� ��� 00?@3>3� 0111 -�* ���.3����� � ������ �" � ;��� �: ���� �� �������� ��@ �������� � �� �����9*���� ��%����� -E��.@ :� �!� ��� !��������*�� ��� �9��<����� ;����� ��� � �������� � � ������ ��� ��� 00?@354� 0111-�* ���.

(�E� 005 8�� 0 =)8�)'� ?666 ���;)9���'�F�$�')�:��� )'� '�R�:'�� &�' ��� �)'':�' 282

'�&�'�8$��

���! �; �"�� �=@ ) ����� ����� � ����� ����� �+�������� ��� ����<������� ��� ������ 0�#��� 4>@100K10> 0131

���/ ��� =) $��! D ;���� ;� ������� ) ����� �@ �� ���� � �������� 0��� ? �� �� ������ ������� ����� ��!��� ������ ����� ����#� ����0466@0>>K02J 011J

���/ ��� =) ;���� ;� ��**����� &� ������� )� :T������ )� ����� �@'��� � �������� 0 �� �� ��������� ��!��������� � �� ������ ������������ � � ���� &�� 41@02JK01J 0112

$������ �)� '�� ��� ���� �"������� �536� �* ����� ��� ���*���� ����<����� ��� ��������� ������ � :�@ ����� �� ���������� � -���.� �#���� � 0)2/���������. �������� �� ����� ����#5 8�/ ����@ ������ ��� 0113 ��� J6>KJ?0

����� �) ��%� �$ ����� �� ���������� �'@ ;��94?6 ��� ) �94?4 �������������� � �� $��5)0 "���+"������ ��!�� ����<���" ��� �� � ����� ��������%����� *" 09�����*������������� ����� ����# 4>@0241K025> 0112

������! � �������� �� ������� ) (����*�� ; ���� �� ������ D ����� D@����!������ ����%���� ������� ��� ��,����� �� ��������� ������*����" *������ ��������� � ��� ��� ?>5@00642K00653 0111�

������! � ����� 'E ����� D@ )����������� � �������9*���� ���������!���� "��������� �� *���9!��������*�� ��� � ��<����� �"�� ? ;����� �����8��� ���� 55>@0J>K0>6 0111*

��/���! ��@ E���� ��� ������� �������� �� �� ������*����" *������ � ����������������� � � ���� &�� 44@460K404 011?

���� �� ���/� ��@ �� ��������� �������� ������*����" *������@ �� ����%�*������ ������� �� � ������ ���" ���� ��<�����" ��������� /�� �*������������������� ����� ���� ������ ��� ������ 41@3>5K324 01>2

���� �� ����� ;D@ ���������� ��� ����� *��������� ��������� � �� ���������������*����" *������� �� ���� &�� ?5@0K?J 0110

���� �� ���/� �� O�*� ()@ �� ������*����" *������ �� � ������ ���" ������<�����"@ �%������ �� � ������ ���� �� �������� ���� �� *������ �������� � ��������� ��� >5@?46K?44 0126

���� �� ;����� = &����� ��@ ��������� ��������� *������ ��"�� ����� @����� ����� ��� ��L����� �� ��������� � ������ ��� ��� J1@343K35J 01>>

;��" �� � =�� ��9����!�� ); �������* �� : ��� '' �� ���� �� =� ���� ��@ E������� *��"9������� ������� ��� �������� ����@ ���������%������,�� ��� ������� ���������������� � ������ ��� ��� 23@?21K?15 0123

�������� �� ������� �E ;�� �8 ���� ��@ ������9�������"� ���� ��� �����%��" �� �������� ���� ���������"�� � � ���� &�� 40@0J33K0JJ0 0116

�������� �� &���!��� D' ��� �R ;�� �8 E�� =� ���� ��@ '�!������� � ��������� ���!������ "��� � *" ������*����" *������ �������� � ���� &��4?@0030K0032 0110�

�������� �� ��� �R ;�� �8 ����� ;D ���� �� &���!��� D'@����!������ ��� ��,����� �� ��������� ��������� *������ ��������:��*����� � ���!������ "��� � ����" *������ ����%��" � ��� �����������*������ � ���� ������ 22@0442K0453 0110*

�������� �� ����!� � ����� ;D E�!��� ; &���!��� D' ���� ��@ ����� ��!� ��������� !���� "��������� � ��,����� �� ������� ��������� �������� ������*����" *������ �������� � ���� ������ 10@0J3JK0JJ5 0114

�������� �� ;��� �: ����� ;D �� ��@ $�� �,����� � *���9!��������*�� ��� ���<�����" �� �������� � ����� �������� ��� ������*����" *������ ���������� ��;����� �� �� �� � ���� ������ 14@0>3JK0>J5 0115�

�������� �� ����!� � ����� ;D =��� �� �� E�� =� &���!��� D' ���� ��@������*����" *������ ��,�������� ��!����� ��������� *���9!��������*�� ��� �� ����� &�� 43@163K10? 0115*

�������� �� ;�� �8 &���!��� D' ���� ��@ E����������� � ��������� ���!������ "��� � ��� ����� �������"� ���� ��� � ����%��"@ ���������� ���� �� *" ������*����" *������ ��,�������� � ���� ��� ��� &�� ?2>@?35K?320113

��� �� ����� )D ���� �� ����� ;D ;������" ' ���� ��@ ���*���� �������� �� ������ ��� � ������ ���" ����9��<����� ������ �������@��������������� *" �������� �����+��� ������! ��� +9��" �� �������� ������� ��� ��� 1J@?03K??4 0110

���� �� D$ ��/��� �=@ $������� ��� ���� ������ ����! �� ;��!� �������� ������ ���������"�� �� %����� � ������ ��� ��� 06J@0646K0643 011J

���� �� D$ �/���������*�� �$ ����� �� ��/���! ��@ ��� ���� � ������������������� ����� �������� �� �� ����� ��"�� � �� ������ �������� � ��������� ��� 22@>05K>02 012>

��� �� &���!��� D' ���� ���� $' ���� ��@ ������������ � �" ����!��������� ��+���� �� *������ ������� � ������ ��� ��� 06J@061JK0060 011J

������% E8 �������� ��@ $������� ��� *���� �� ��������� ������� � �� ���� ��� ��� ��������� �����<�� ���� ��%������ � ��� ��� ?>4@0>>J4K0>>>60112

����� ;D &���!��� D' �� �� )� ���/� �� ���� ��@ �� ��%� ������!��� � �� �� ���� ::� '�!������� *" �������� *������ ��,�������� � � ���� &��?J@502K5?> 0123

����� � ����� � �� ��� � $����� ' $������ � ;����� '@ $������������ ����� � �� � ������� ����� ����� ����#� ���� 002?@05>K030 0114

8��� O ������% E8 &�U �V E �������� ��@ ) ��%�� ������� �� ���� !�������� �0@ ��������� � ���!9���� ���!�9"���+"�������� �� ��%������� *" � ���*��� ��������� 0�� $��� ��� ��� 9�� 1J@256?K256> 0111

����� �� ���������� �@ $"������� �536� ���������. �������� . �� ����� ����# ?������ 8�/ ����@ ������ ��� 0113

����� �� ���������� �' $�� �D ���� �& D����� '� �� 8� ����� �� =)@������ �9*� �� ���*� � �� ������!" ��� ������� � ���" ����"���+"�� � � 8���� � J@J13KJ11 011?

����� �� ���������� �' $������ �)@ :��*���� � �"������� �536 ���"�� � :�@����� �� ���������� � -���.� �#���� � 0)2/ ���������. �������� ������� ����#5 8�/ ����@ ������ ��� 0113 ��� 463K4J5

��������/ �' ����� '�@ 8�/ �����,�� �� �� �� %���� ������� � ���� ������������"�� ��� ��� �����%� �� ���� � � �� !�� ���! � ������� /���+��� �%� *��� � ��# ������ 0�������� J0@>>0K>>> 012J

'���/��� =; ;���� �@ ������ �����%����� � ����� � ���� ������������������"�� @ �� �������� � �����������! ������� ��� ��!�� ���� � ����J@440K454 01>3

'�* �� D= ���/��� �� ����� �� � E��� 8� ��/���! ��@ J9�"���+"959 ���!����� �� ���� ��������� �������� � � ���� &�� 43@?6J6K?6J2 0115

�� � D�� �� D� D����� �E@ :��*����� � ����� ���������� ���� ���!�9"���+"�� � ����%��" /�� )�� ������ *���� ��� ��� �� �� ��'� � �0�#��� ?>3@'5?JK'542 0112

�/���������*�� �$ ����� �� ���� �� D$ ��/���! ��@ �%������ ��� ���������"�� � � ��������" *���� ����� ��%������ � ������ ��� ��� 22@>61K>04 012>

����� ��@ �� ������ � �� ��������� *������@ ���������� � ���� � �� ���� ���&�� 02@?24K?15 011J

����� �� ��/���! ��@ $������� � ��! �������� @ �������� �������������� ����� &�� ?5@>31K>J3 0124

����� �� ��/���! ��@ $�%����� ��������� � ���!�9"���+"���� ����%���%� ����������� ������������� @ � ����������" ���������������� ����� ����#� &��� �� 04>@11?K11> 012J

����� �� ��/���! ��@ $�%������" *���� ���!�9"���+"��"� ���!� ��� �� �� ������ �������� ����� ����#� ���� 10>@062K000 012>

����� �� $� �� ��/���! ��@ � ��� � � ������ ���" ���� ��<�����" �� ����������� ���!������ � �� ���� ����� ����#� ���� >34@436K433 0124

����� �� ��/���! �� &������� 'D �����"� �8@ ����!������ � �� ������������� ��� �������� !������ � ���� ��� �������� � � ������ ��� ��� 24@014K013 0125

����� �� ������ �$ E��! �) ����� =� ��/���! ��@ �� ����� ����� � �� �������� ��� ���� ������ ������� ��� ��� �������� � � ��������� ��� 25@506K50? 0123

����� �� ���� �� D$ ��/���! ��@ $�%������" *���� ����� � ���� �������������� � ������ ��� ��� 1?@061K000 0121�

����� �� �/���������*�� �$ D���� �= ���� �� D$ ��/���! ��@ �� ���� � �� �������"�� ����� ��%����� �� ��� ��� � �� ������ �������� � ��������� ��� 14@0J1K0>? 0121*

28B ���8� �� �� ��� =��'8)E �& :8(���:;)�:(� ��'�)��E�;�