GEBRAX®

T h e r a p e u t i c s & D i a g n o s t i c s DIVISION DIAGNÓSTICA

Se recomienda que el prospecto deba ser leído antes de comenzar el procedimiento de

prueba. Aunque el ensayo está diseñado para ser d e fácil uso, es necesario ajustarse al

instructivo del test para asegurar resultados precisos. La exposición directa del producto al sol,

debe ser evitada.

USO. No para selección de donantes.

El Test INSTI VIH-1/VIH-2 es de solo un uso (desechable), rápido, flujo a través de una

membrana como inmunoensayo cualitativo in vitro para la detección de anticuerpos contra el

virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 y tipo 2 en sangre -EDTA, sangre capilar (dedo),

suero o plasma-EDTA. La prueba está diseñada para su uso por personal capacitado en

centros médicos, laboratorios clínicos, situaciones de emergencia médica, consultorios

médicos y estudios de campo, como una prueba de diagnóstico capaz de ofrecer resultados en

menos de un minuto. No es recomendado utilizarlo en el hogar. Todos las directrices

requeridas para las pruebas pre y post consejería debe ser realizada en cada escenario en el

que se utiliza el Test INSTI VIH-1/VIH-2. El test viene como un kit que contiene la unidad de

membrana INSTI, diluyente de la muestra (Solución 1) , revelador de color (Solución 2),

solución para aclarar (Solución 3) , con o sin material de apoyo (lanceta, pipeta y gasa con

alcohol).

RESUMEN.

El Síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) es causado por al menos dos retrovirus,

el VIH-1 y VIH-2. Estos son similares en estructura genómica, morfología y la habilidad de

causar el Sida. El VIH se transmite principalmente por contacto sexual, exposición a

sangre o productos sanguíneos, o de una madre infectada, al feto. Las personas que

presentan alto riesgo de infección por el VIH son hemofílicos, usuarios de drogas intravenosas

y hombres que tienen sexo con hombres. VIH ha sido aislado de pacientes con SIDA, complejo

relacionado al SIDA, y de las personas de alto riesgo de contraer el SIDA. Los anticuerpos

específicos para proteínas de la envoltura VIH son frecuentes en el suero de personas

con alto riesgo de contraer el SIDA, así como en personas con SIDA. La presencia de

anticuerpos al VIH indica exposición previa al virus, pero no constituye necesariamente un

diagnóstico de SIDA. La ausencia de anticuerpos contra el VIH no indica que un individuo

este absolutamente libre de VIH-1 o VIH-2, el VIH ha sido aislado de los individuos

seronegativos antes de la seroconversión. La especificidad y la sensibilidad del test

dependerá, entre otros factores, de: a) la selección de los antígenos del VIH para la detección

de anticuerpos, b) las clases de anticuerpos reconocido por el conjugado de detección, y c)

la complejidad del protocolo utilizado para realizar la prueba.

Reacciones no específicas se pueden observar en algunas muestras. Un test INSTI reactivo

(positivo) debe considerarse como un resultado preliminar. Después de una prueba rápida

reactiva, una muestra de sangre venosa debe ser recogida en un tubo de colección con EDTA

(de sangre o plasma) o un tubo sin anticoagulante (para suero), y enviarlo a un laboratorio

para pruebas de VIH de confirmación.

PRINCIPIOS DEL TEST

El test de anticuerpos INSTI HIV-1/HIV-2 es manual, de lectura visual, flujo a través de

una membrana como inmunoensayo cualitativo in vitro para la detección de anticuerpos VIH-

1/VIH-2 en sangre humana, suero o plasma. La prueba consiste en una membrana de

filtración sintética colocada encima de un material absorbente dentro de un cartucho de

plástico, conocida como la unidad de membrana INSTI. La membrana ha sido específicamente

tratada con proteínas VIH-1 y VIH-

2 recombinantes, que reaccionan con anticuerpos HIV-1/HIV-2 en la muestra para producir

una señal visual diferente en la membrana. La membrana también incluye un procedimiento

de control. El procedimiento de control consiste en un punto tratado con proteína-A capaz de

capturar los anticuerpos IgG presentes normalmente en la sangre y componentes sanguíneos.

Los anticuerpos IgG reaccionan con un agente de propiedad cromática para producir una señal

visual en la membrana. Desde que los anticuerpos IgG presentes en las muestras de sangre VIH

positiva o normal reaccionan, el punto de control proporciona una señal visual cuando se

ejecuta el test, lo que indica que el test fue realizado correctamente. Si el punto de control no

aparece, el test es considerado no válido. En el caso de ser positivo, en el control del test,

proteínas recombinantes VIH-1 y VIH-2, incrustadas en la membrana, capturan anticuerpos

específicos para VIH, que están presentes en la muestra. Anticuerpos capturados en el control

del test reaccionan con un agente de propiedad cromática para producir una señal visible de

la membrana. La unidad de membrana

está diseñada para filtrar, absorber y retener la muestra y todos los reactivos del test, de tal

manera que se eviten las fugas y la exposición del personal a materiales potencialmente

infecciosos.

Los reactivos necesarios para llevar a cabo el test incluyen diluyente de la muestra (Solución1), revelador de color (Solución 2) y la solución de aclaramiento (Solución 3). El test se realiza mediante la adición de la muestra de sangre, suero, plasma, al vial que diluye la muestra y que rompe los glóbulos rojos. Esta solución muestra /diluyente es vertido en el contenedor de la unidad de membrana. Anticuerpos HIV-1/HIV-2, si están presentes en la muestra, son capturados por las proteínas en la membrana de filtración. El revelador de color se añade a la unidad de membrana. El revelador de color reacciona con los anticuerpos capturados para generar un punto distinto color azul en la localización del punto de control y, en caso de que anticuerpos HIV-1/HIV-2 están presentes en la muestra, un punto azul también aparece en el lugar del punto del test de la membrana. En el paso final, la solución de aclaramiento es agregado a la membrana para disminuir el color de fondo con el fin de hacer que el control y los puntos de prueba sean más claros.

Selección de antígenos: El ensayo INSTI HIV-1/HIV-2 utiliza una combinación de proteínas

transmembrana recombinante del VIH-1 (gp41) y VIH-2 (gp36). El uso de estas proteínas

supera los problemas de sensibilidad y especificidad asociados con la prueba sobre la base de

lisados virales o una combinación de antígeno del core y otras proteínas virales.

Detección anticuerpo: El ensayo INSTI HIV-1/HIV-2 utiliza un reactivo único para detectar

anticuerpos contra el VIH-1 y / o VIH-2. Aunque inicialmente diseñado para detectar la clase

IgG de anticuerpos específicos, el ensayo INSTI HIV-1/HIV-2 ha sido presentado para detectar

anticuerpos en muestras obtenidas en la infección temprana, durante la seroconversión y baja

titulación anti-VIH-1 de muestras obtenidas en la infección tardía. (Tablas 1, 2 y 3)

La complejidad de la prueba: El test INSTI HIV-1/HIV-2 fue diseñado para reducir la

complejidad del protocolo. El test INSTI HIV-1/HIV-2 no requiere preparación de la muestra, el

momento exacto, o varios pasos, que incluyen múltiples lavados y reactivos. Estos requisitos

aumentan la complejidad de un test y dan lugar a errores de procedimiento que puede afectar

negativamente la sensibilidad y la especificidad. El tiempo total de prueba puede variar

ligeramente en función del tipo de muestra, pero los resultados validos del test siempre están

claramente legibles dentro de 1 o 2 minutos.

COLECCIÓN DE MUESTRA Y ALMACENAMIENTO.

1.- Para sangre entera-EDTA, plasma-EDTA o muestras de suero, siga los procedimientos

normales de punción venosa utilizando un tubo de tapa lila con anticoagulante EDTA (sangre y

plasma) o tubos con tapa roja (sin anticoagulante) para el suero.

2.- Si se va a utilizar el plasma o suero, separar de las células sanguíneas por centrifugación. 3.- El suero o plasma con EDTA, se puede almacenar a 2-8 ° C durante un máximo de 5 días,

congelar a -20 ºC durante 3 meses, o congelarse a -70C durante un año.

4.- Las muestras de sangre recogidas en EDTA puede conservarse a 4 º C y deben ser analizadas

dentro de 48 horas. No calentar o congelar las muestras de sangre entera.

5.- No diluir antes de la prueba.

COMPONENTES DEL KIT Y ALMACENAMIENTO.

Reactivos INSTI deben mantenerse entre 15-30 º C para su almacenamiento prolongado.

-Catálogos de Nos, 90-1012 todos los componentes del kit son empaquetados individualmente

para un solo uso.

-Catálogos de Nos 90-1013 y 90-1010, se proporcionan los componentes para 24 pruebas.

Cada kits contiene el mismo número de cada tipo de componentes.

Cada prueba requiere de los siguientes materiales.

1.- Unidad de membrana, individualmente embalados, preparados con control (captura de

IgG) y test (antígeno gp41 y gp36) puntos de reacción. Para un solo uso en el procedimiento de

INSTI.

2 .- Diluyente de la muestra - Xn R22, Vial Solución 1, que contiene 1,5 ml de tris-glicina

solución tampón que contiene reactivos de lisis celular, con un espacio adecuado para adición

de sangre, muestras de suero o plasma que serán probados con INSTI. Listo para usar, sin

mezcla o preparación necesaria. Contiene 0,1% de azida de sodio como conservante. Para un

solo uso en el procedimiento de INSTI. Estable hasta la fecha y las condiciones de

almacenamiento indicado en la etiqueta.

3.-Botella que desarrolla el Color - Xn R22, Vial Solución 2, que contiene 1,5 ml de borato de

color azul indicador de solución tampón, diseñada para detectar IgG en el punto de control y

anticuerpos específicos contra el VIH en el lugar de prueba. Listo para usar, sin mezcla o

preparación necesaria, invertir 2 o 3 veces inmediatamente antes de usar. Contiene 0,1% de

azida de sodio como conservante. Estable hasta la fecha y las condiciones de almacenamiento,

como se indica en la etiqueta.

4.- Botella de solución de aclaramiento - Xn R22, Vial Solución 3, que contiene 1,5 ml de

buffer tris-glicina, la solución de aclaramiento de proteína está diseñado para eliminar la

tinción de fondo de la unidad de la membrana antes de leer los resultados de la prueba INSTI.

Listo para usar, sin mezcla o preparación necesaria. Contiene 0,1% de azida de sodio como

conservante. Estable hasta la fecha y las condiciones de almacenamiento indicadas en la

etiqueta.

MATERIALES DE APOYO

El siguiente material es para la prueba de sangre capilar (dedo) (incluido en los kits 90-1012 y

90-113 especificado para su uso):

1.-Toallas con alcohol desechable.

2.- Lancetas desechables (que se suministra estéril)

3.-Pipeta desechables, capaz de dispensar 50 ul.

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO ENTREGADOS.

-Equipo de protección personal como guantes, bata de laboratorio o una bata.

-Apropiados contenedores de residuos biológicos peligrosos.

-Bolas de algodón absorbente para la punción en el dedo o el cierre de la herida de punción

venosa.

Para la recolección de punción venosa:

-Dispositivo para punción venosa, si la muestra de sangre es recogida.

-Apropiado tubo de colección de sangre.

-Recipientes adecuados de envío.

-Equipo de protección personal.

-Apropiados contenedores de residuos biológicos peligrosos y desinfectantes.

MATERIALES DISPONIBLES COMO ACCESORIOS AL KIT

Controles para el INSTI test HIV-1/HIV-2: Muestra de control de suero humano HIV-negativo y

HIV-1/HIV-2 positivo de plasma humano desfibrinada por separado (no. 80-1037) están

disponible en BioLytical Laboratories en cantidades definidas por el usuario, para uso en

procedimientos de control de calidad. Por favor referirse a la sección de control de calidad,

siguiendo los procedimientos y las instrucciones de los test de control de INSTI test HIV-1/HIV-

2.

ADVERTENCIA

Para uso diagnóstico in vitro solamente.

Se recomienda leer el prospecto completo antes de comenzar el procedimiento de prueba.

Aunque el test está diseñado para ser fácil de usar, de conformidad con el procedimiento de

prueba, es necesaria su lectura para asegurar resultados precisos.

1.- No mezcle los reactivos de lotes diferentes.

2.- No usar los reactivos o kits más allá de la caducidad.

3.- No usar la unidad de membrana si la bolsa de aluminio se ha abierto previamente o si la

integridad de los envases ha sido comprometida. Una vez que la unidad de membrana se ha

abierto, debe ser utilizado inmediatamente.

4.- Evite la contaminación microbiana de los reactivos.

5.- La azida de sodio está presente en el 0,1% en todos los reactivos de ensayo. La azida sódica

puede reaccionar con el plomo o tuberías de cobre para formar azidas metálicas muy

explosivas. Si los productos que contienen azida de sodio se descartan en el desagüe, utilice

gran cantidad de agua para evitar la acumulación de azida. Compruebe con las agencias

reguladoras locales para determinar en qué concentración de azida de sodio puede causar que

un producto sea regulado como residuo peligroso

6.- Las características de la prueba INSTI HIV-1/HIV-2 no se han establecido para otros fluidos

corporales. Solo de sangre con EDTA, la sangre del dedo, suero y plasma EDTA. El uso de la

sangre recogida en otros anticoagulantes EDTA no ha sido validado. No existen datos

suficientes para interpretar las pruebas obtenidas con otros fluidos corporales, sangre

acumulada o combinadas de suero y plasma EDTA, o productos a base de tales agrupaciones.

7.- No utilizar el reactivo y el volumen de muestra más allá de lo recomendado, puede

resultar en fugas y / o desbordamiento de líquidos de la unidad de membrana.

8.- Los pacientes que han estado en terapia a largo plazo de medicamentos antirretrovirales

pueden resultar en falsos negativos en el test INSTI HIV-1/HIV-2.

9.- Las muestras de pacientes con condiciones graves de hipogammaglobulinemia como el

mieloma múltiple puede resultar en falsos resultados negativos o no válido con INSTI.

PRECAUCIONES.

1.- Todas las muestras deben manipularse como si fueran capaces de transmitir enfermedades

infecciosas. Se recomienda nivel 2 de bioseguridad o normas equivalentes.

2.- Lávese bien las manos después de manejar o de realizar esta prueba.

3.- No fumar, comer o beber en las zonas donde las muestras o los reactivos del equipo se

están manejando.

4.- Use una bata de laboratorio y guantes desechables durante la manipulación de los reactivos

del kit o muestras. No pipetear con la boca.

5.- Evite el contacto con la piel y los ojos. Si esto ocurre, lave el área afectada con agua.

6.-Evite los aerosoles.

7.- Deseche todas las muestras y los materiales utilizados para realizar los test como si

contuvieran agentes infecciosos. El método preferido de eliminación es la esterilización en

autoclave durante un mínimo de una hora a 121 º C, seguido de incineración. Residuos

líquidos, no contiene ácido, y los residuos neutralizados se pueden mezclar con hipoclorito de

sodio en

volúmenes de tal manera que la mezcla final contenga 0,5% de hipoclorito de sodio (una

solución que contenga 10% de cloro es de uso doméstico). Deje completar por lo menos 30

minutos para descontaminación. No use en autoclave soluciones que contienen cloro.

8.- Los derrames deben ser limpiados y descontaminados de acuerdo a los procedimientos

establecidos para el manejo de derrames biopeligrosos.

PROCEDIMIENTO DEL TEST.

Nota: Todas las unidades de prueba deben ser usadas de inmediato una vez abiertas. Todos los

reactivos deben verterse de manera uniforme en el centro del test.

TOMA DE MUESTRAS DE SANGRE CAPILAR (Punta del Dedo).

1.- Reunir los materiales de apoyo (toallas, lancetas, pipetas), una bolsa sellada que contenga

la unidad de membrana INSTI, y un vial de diluyente de la muestra, desarrollador de color y

solución de aclaramiento para cada test a realizar.

PRECAUCIÓN: La cantidad de muestra (sangre del dedo) es crítica. Para asegurarse de que

la cantidad de sangre adecuada se logre, siga estas instrucciones cuidadosamente.

2.- Masajee la punta del dedo para permitir que la sangre se mueva en la superficie (los dedos

se tornan de color rosa). Use almohadillas de calefacción si están disponibles para calentar la

mano. La mano debe ser colocada a nivel de la cintura o más bajo.

3.- Limpie la punta del dedo con alcohol.

4.- Tan pronto como el dedo está seco, desenroscar la tapa verde de protección de la lanceta, y

luego tire hacia fuera (ver figura A). Pulse el dedo firme en el punto justo debajo de donde la

lanceta se aplicará. Con la otra mano, sostenga la lanceta por el cuerpo y el cuerpo de la

lanceta firmemente contra el sitio de punción para activar el dispositivo (vea la Figura B abajo).

Inmediatamente desechar la lanceta usada en un contenedor de objetos punzantes.

5.- A medida que la sangre brota, mantenga la pipeta horizontal tocando con la punta de la

pipeta la muestra de sangre (vea la Figura C abajo). La acción capilar automáticamente extrae

la muestra completando la línea de llenado y se detiene. Si la sangre escurre muy poco, aplique

una suave presión intermitente cerca del sitio de la punción para obtener el volumen de sangre

necesario. Si el flujo sanguíneo es inadecuado, realizar una segunda punción en la piel con una

lanceta.

PRECAUCIÓN: El llenado es automático: Nunca se debe apretar el tubo durante la

toma de la muestra.

6.- Transfiera la sangre, tomada con la pipeta, al vial con el diluyente (Solución 1). Alinear la

punta de la pipeta con el frasco de diluyente de la muestra y apriete la perilla para dispensar la

muestra (ver Figura D). NOTA: Si la muestra no es expulsada, mantenga la pipeta verticalmente

y deslizar un dedo sobre (sin presionar) el orificio de ventilación, a continuación, presione la

perilla (ver figura E). Vuelva a tapar el vial y mezclar por inversión. Siga el procedimiento

general, previa toma de muestras, a continuación.

De sangre entera con EDTA, suero y plasma-EDTA y Test de Control:

1.- Llevar las muestras a temperatura ambiente y mezclar cada muestra antes de su uso. No

caliente o repetidamente congele / descongele las muestras.

2.- Reunir una bolsa sellada que contenga la unidad de membrana INSTI y un vial de diluyente

de la muestra, Desarrollador de Color y Solución de aclaramiento para cada prueba que se

realizará.

NOTA: En el ajuste "Point of Care", para los controles INSTI Test kits, es importante utilizar un

dispositivo de pipeta de 50 ul para añadir el material de control al vial de diluyente de la

muestra. No utilice la pipeta desechable provista para la recogida de sangre desde el dedo.

PROCEDIMIENTOS GENERALES DESPUES DEL MUESTREO

1.- Abra la bolsa y retire con cuidado la unidad de membrana, sin tocar el centro del

contenedor. Coloque la unidad sobre una superficie plana. Para fines de identificación de la

muestra la unidad de la membrana puede ser etiquetada con el nombre del paciente o el

número.

NOTA: En este punto, es importante que los pasos siguientes se realicen de inmediato y de

forma secuencial.

2.- Mezcle la solución muestra/diluyente y vierte todo el contenido en el centro de la Unidad de la membrana (NOTA: Se debe realizar esto dentro de los cinco minutos después que la muestra haya sido agregada al vial con el diluyente) . La muestra debe ser absorbida a través de la membrana en menos de 30 segundos, sin embargo, los tiempos de absorción varían ligeramente dependiendo del tipo de muestra.

3.- Homogeneizar el Desarrollador Color lentamente invirtiendo para mezclar bien la solución. Continúe este proceso hasta que observe que el reactivo se suspende de manera uniforme. Abra el revelador de color y añadir todo el contenido al centro de la unidad de membrana. La solución de color debe fluir a través de por completo en aproximadamente 20 segundos.

4.- Abrir la solución de la aclaramiento y vierta todo su contenido en el centro de la unidad de membrana. Se aclarará el color de fondo y facilitara la lectura. Lea inmediatamente el resultado, mientras que la membrana está todavía húmeda. No lea los resultados si son más de 5 minutos los transcurridos después de la adición de la solución de aclaramiento.

CONTROL DE CALIDAD.

Kit Controles:

La prueba de anticuerpos HIV-1/HIV-2 INSTI tiene incorporado un IgG control del

procedimiento que demuestra la validez del ensayo y la adecuada adición de la muestra. Un

color azul en el punto de control indica que la muestra fue apropiadamente agregada y que el

procedimiento de ensayo se realizó correctamente. El punto de control aparecerá en todas las

pruebas INSTI válidos. (Refiérase a la interpretación de los resultados, más abajo).

Los controles del INTI Test están disponibles separadamente para ser usado solo con la prueba

de anticuerpos HIV-1/HIV-2 INSTI. Los controles son utilizados para verificar el rendimiento del

test y la interpretación de los resultados. El kit de control deben ser realizados bajo las

siguientes circunstancias:

- para la verificación del un nueva operador del INSTI antes de realizar el test a muestras de

pacientes.

-cuando se cambia a un nuevo número de lote del INSTI test.

-siempre que un nuevo envío del test haya sido recibido.

-cuando la temperatura durante el almacenamiento de los kits esta fuera del rango de 15°-

30°C.

-cuando la temperatura del área del test cae fuera del rango de 15°-30°C.

- a intervalos regulares que determine el usuario.

Consulte las instrucciones de uso de los controles de la prueba HIV-1/HIV-2 INSTI para obtener

más información sobre el uso de estos reactivos. Es responsabilidad de cada usuario del test de

anticuerpos HIV-1/HIV-2 INSTI para establecer un programa de garantía de calidad adecuado

para garantizar un rendimiento adecuado de acuerdo a sus condiciones y lugares específicos.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS.

- No lea los resultados después de 5 minutos de haber agregado la solución de

aclaramiento.

- Si usa las muestras de control provistas por BioLytical, todos los controles positivos

deben ser reactivos con el INSTI test y todos los controles negativos deben ser no

reactivos con INSTI test. Controles que producen resultados incorrectos e inválidos

deben ser re- testeado con INSTI test. Si los resultados son aun incorrectos o inválidos,

informar inmediatamente a BioLytical Laboratories o Gebrax-Chile.

NO REACTIVO: Un punto azul que es claramente perceptible por encima de cualquier color de

fondo que aparecen en la membrana. Este es el punto de control de procedimiento y muestra

que la prueba se ha realizado correctamente. El control se encuentra en la parte superior del

marco de lectura más alejada de la pestaña de plástico en la unidad de membrana. No hay

reacción debe ser visible en el lugar de prueba, que se encuentra debajo del control. Un

resultado no reactivo indica que los anticuerpos HIV-1/HIV-2 no se detectaron en la muestra.

REACTIVOS (POSITIVOS): Los dos puntos azules que se pueden distinguir por encima de

cualquier matiz de fondo indican que la muestra contiene anticuerpos contra VIH-1 y / o VIH-

2. Un punto puede ser más oscuro que el otro. Una muestra que da este patrón es considerado

como un reactivo preliminar. Después de un resultado de rápida reacción del test, una muestra

de sangre venosa debe ser depositada en un tubo de tapa color lila de recogida EDTA (de

sangre o plasma) o un tubo de tapa roja (para suero), y enviarlo a un laboratorio para la

prueba del VIH de confirmación.

NO VÁLIDO: La prueba no es válida si se da cualquiera de las siguientes situaciones:

A. - No hay ningún punto en la membrana.

B. - El punto de prueba apareció sin el punto de control.

C. - Color uniforme a través de la membrana.

D. - Sólo manchas azules aparecen en la membrana.

NOTA: la prueba no válida, con muestras de sangre capilar (dedo) en este test debe repetirse

con una nueva muestra con una unidad de membrana nueva, los componentes del equipo y

materiales de apoyo. Prueba no válidos con EDTA, plasma EDTA o muestras de suero en el

laboratorio se debe repetir con una unidad nueva membrana y los componentes del kit.

INDETERMINADO: La prueba es indeterminada si un anillo apenas visible aparece en el área

del test.

Después de un resultado indeterminado INSTI, una muestra de sangre venosa debe ser

almacenada en un tubo de recogida tapa color lila de EDTA (de sangre o plasma) o un tubo de

tapa roja (para suero), y enviarlo a un laboratorio para la prueba del VIH de confirmación.

Tenga en cuenta lo siguiente:

1.- Después de un resultado reactivo (positivo) o indeterminado INSTI, una muestra de sangre

venosa debe ser almacenada en un tubo de recogida tapa color lila de EDTA (de sangre o

plasma) o un tubo de tapa roja (para suero), y enviarlo a un laboratorio para la prueba del VIH

de confirmación.

2.- En función de la titulación de anticuerpos, la muestra de reacción (positiva) puede ser

menos intensa en color que el procedimiento de control, o viceversa.

3.- Sólo una mancha de color azul de color visiblemente más oscuro que el color de fondo

debe ser interpretada como reactiva. En raras ocasiones, un anillo de fondo tenue puede

aparecer alrededor del punto de prueba, lo que no debe interpretarse como un resultado

reactivo (positivo). Sólo test que exhiben distintos puntos de prueba totalmente formado de

color azul combinado con un claro punto de control completamente formado azul debe ser

interpretada como reactiva (positivo).

4.- Un resultado inválido indica que el test fue realizado incorrectamente o hay un problema

con la muestra o el dispositivo. La ausencia de un punto de control diferente por lo general

indica que el volumen de la muestra era insuficiente. Una prueba inválida debe repetirse.

5.-Un ensayo en un tono uniforme azul a través de toda la membrana, lo que oculta al control

y puntos de prueba, se produce cuando más de 60 ul de sangre entera se utiliza y el flujo a

través de la membrana de ensayo está obstruido.

6.- Un individuo que tiene un resultado no reactivo (negativo), pero tiene conducta o

actividades de alto riesgo para VIH es recomendable obtener pruebas adicionales en los

próximos meses.

7.- A fin de reducir significativamente el riesgo de transmisión del VIH, es aconsejable

abstenerse de realizar actividades de alto riesgo como relaciones sexuales sin protección o

compartir agujas en todo momento.

LIMITACIONES DE LA PRUEBA

Tiempos de flujo.

En algunos casos, las muestras pueden presentar tiempos de flujo más largo que lo normal.

(Desde el momento en que la mezcla, muestra /diluyente, se vierte en la membrana y al

tiempo de la solución de aclaramiento a fluido plenamente a través de la membrana). Esto se

debe a distintos factores, como los componentes celulares, en especial con la sangre entera.

En los casos de flujo largos de tiempo, una leve sombra en forma de un anillo pueden

aparecer en el lugar del punto del test, pero esto no debe interpretarse como un resultado

reactivo (positivo). Esto debe ser considerado como un resultado indeterminado. En estos

casos, una muestra de sangre venosa debe ser elaborado en un tubo de recogida de tapa lila

con EDTA, y procesados en el laboratorio para la prueba del confirmación de VIH.

El procedimiento INSTI HIV-1/HIV-2 y la interpretación de los resultados debe ser seguido muy

de cerca cuando las pruebas de la presencia de anticuerpos de VIH en suero, plasma o sangre

total.

No existen datos suficientes para interpretar los test realizados en otros fluidos corporales,

sangre o combinadas de suero, plasma, o productos a base de tales agrupaciones, por lo tanto,

las pruebas de estos ejemplares no es recomendable.

El ensayo INSTI HIV-1/HIV-2 no ha sido validada para la detección de anticuerpos contra el VIH-

1 subtipos grupo O o N.

El test INSTI HIV-1/HIV-2 detecta anticuerpos contra HIV-1/HIV-2 y es útil en el establecimiento

de la infección con el VIH. Debido a una variedad de factores que pueden causar reacciones no

específicas, pacientes encontrados reactivos (positivos) utilizando el ensayo de INSTI HIV-

1/HIV-2 debe tener una muestra de sangre con EDTA procesadas por laboratorio basada en

pruebas de confirmación. Una persona que tiene anticuerpos contra el VIH se sospecha que

están infectadas con el virus, una adecuada consejería y evaluación médica debe ser ofrecida.

La presencia de anticuerpos de VIH indica exposición previa al virus, pero no es un diagnóstico

de SIDA, que sólo puede ser hecha por un médico. Sin embargo, un test no reactivo (negativo)

no descarta la exposición en el pasado con el VIH. El riesgo de que una persona asintomática

con repetidas test de suero reactiva desarrolle SIDA no se conoce.

La prevalencia de infección por HIV en varios grupos, así como clínicas y guías de salud publica

están disponibles en el reporte de morbilidad y mortalidad de CDC.

CARACTERÍSTICAS DE LA PRUEBA.

Sensibilidad y especificidad.

La sensibilidad de un test es la capacidad de una prueba para detectar a las personas

verdaderamente infectadas, mientras que la especificidad de un test es la capacidad de una

prueba para identificar a todas las personas no infectadas. Por lo tanto, una prueba sensible no

debe producir falsos negativos, y una prueba específica no debe producir falsos positivos. No

existe un estándar único para la detección de la sensibilidad o especificidad de una prueba de

anticuerpos para el VIH en suero humano, plasma o sangre entera. Sin embargo, el método

generalmente aceptado para expresar la sensibilidad y la especificidad de una prueba dada en

términos de tasa de detección es comparar los resultados con los resultados del ensayo

aprobado suplementarios, tales como ELISA y Westernblot. Basándose en estos criterios, la

sensibilidad y especificidad de la prueba INSTI HIV-1/HIV-2 se determinó mediante la

comparación de sangre capilar (punta del dedo), sangre entera con EDTA , muestras de suero y

plasma EDTA, que también se analizaron para anti-VIH-anticuerpos por ELISA y Western Blot.

Muestras analizadas usando el test INSTI HIV-1/HIV-2 están en 4 categorías:

1.- Veinticinco paneles de seroconversión comerciales (cuadro 1) y un anticuerpo HIV-1 bajo

título del panel de rendimiento (tabla 3), que representan una amplia gama de títulos de

anticuerpos o clases.

2.- Muestras de pacientes de Canadá seroconversión de VIH. (Tabla 2)

3.- Muestras prospectivas de los pacientes con VIH reclutados en el ensayo clínico canadiense

(tabla 4).

4.- Muestras prospectiva negativas de pacientes reclutados en el ensayo clínico canadiense.

(Tabla 5)

Datos clínicos canadienses BioLytical laboratorios muestran :

1.- La sensibilidad relativa del test INSTI HIV-1/HIV-2 para la detección temprana de

anticuerpos se evaluó mediante paneles estandarizados seroconversión de Boston Biomédica

Inc. Tabla 1 resume los datos del ensayo INSTI HIV-1/HIV-2 en comparación con un número

de licencia EE.UU u europeas aprobaron los inmunoensayos enzimáticos (EIA) mediante

paneles comerciales.

2.- La sensibilidad relativa del test INSTI HIV-1/HIV-2 para la detección temprana de

anticuerpos también se evaluó utilizando los pacientes canadienses con seroconversión. La

Tabla 2 resume los datos de los pacientes con seroconversión canadiense.

3.- La sensibilidad de la prueba INSTI HIV-1/HIV-2 fue ≥ 99% de sangre del dedo, EDTA sangre,

plasma y suero (rango 99,0-99,6%) (Tabla 4). Resultados indeterminados y no válidos fueron

eliminados de la evaluación.

4.- La especificidad de la prueba INSTI HIV-1/HIV-2 fue≥ 99,3% (rango de 99,3 a 100%) de

sangre capilar (punta del dedo), EDTA de sangre, plasma y suero (Tabla 5). Resultados

indeterminados y no válidos fueron eliminados de la evaluación.

5.- Resultados de los test anticuerpo INSTI HIV-1/HIV-2 no se vieron afectados por la mayoría

de las condiciones que puedan interferir o sustancias, como se ilustra en el cuadro 6. Muestras

de pacientes con condiciones graves con hypogammaglobulinemia como el mieloma múltiple

en los resultados pueden obtener resultados falsos negativos o no válido con INSTI.

6.- La sensibilidad del test de anticuerpos INSTI HIV-1/HIV-2 en el VIH-2 muestras positivas es

del 98,3% (cuadro 7).

REPRODUCTIBILIDAD.

Se realizaron dos estudios para evaluar la reproducibilidad de la prueba de anticuerpos INSTI

HIV-1/HIV-2. Para cada estudio, un grupo de nueve muestras de plasma con código oculto que

consta de 4 anticuerpos positivos, 1 muestra el nivel de anticuerpos muy bajo, y 4 muestras de

anticuerpos negativos, se analizó por triplicado en tres sitios en 3 días separados con 3 lotes de

INSTI.

La reproducibilidad global del INSTI para el VIH-1 fue del 99,7% (646/648, dos muestras de

anticuerpos negativos fueron leídos como débil positivo en un sitio). Para la muestra un nivel

muy bajo de anticuerpos, el 59% (48/81) de los resultados fue positivo mientras que el 41%

(33/81) fueron negativos.

La reproducibilidad global del INSTI para el VIH-2 fue del 99,8% (566/567, una muestra de

anticuerpos negativos fue leído como indeterminado en un sitio: En el más bajo nivel de

anticuerpos dos muestras, el 85,2% de los resultados fueron positivos, con miembros de Grupo

3 (69 / 81), mientras que el 63% de los resultados fueron negativos con los Miembros del Panel

4 (51/81).

VIH-1 subtipo de pruebas

Cuarenta y ocho muestras de 48 pacientes infectados con cepas VIH-1 no B fueron probados.

Todas las muestras fueron genotipo por secuenciación de didesoxinucleótidos del gen de la

proteasa todo el VIH-1 y los primeros 450 codones de la transcriptasa inversa, para la

determinación del subtipo. La distribución del subtipo fue el siguiente:

A: 7

C: 8

D: 8

F: 6

G: 8

J: 1

CRF AG: 5

CRF AE: 5

La sensibilidad de la prueba de anticuerpos al INSTI HIV-1/HIV-2 en los 48 no-B muestras de

VIH resultaron positivos fue del 100%.

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