МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР ГЛАВНОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ УПРАВЛЕНИЕ

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ НО ИДЕНТИФИКАЦИИ ГРАМОТРИПАТЕЛЬНЫХ НЕФЁРМЕНТИРУЮЩИХ МИКРООРГАНИЗМОВ

Москва 1985 г.

испытательный центр

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР

Главное саиитарно агшдемиологическое управление

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИДЕНТИФИКАЦИИ ГРАЫОТРИЦАТЕЛЫйК ШФЕРМЕНТШЩК МИКРООРГАНИЗМОВ

Москва - 1995 г.

Методические рекомендации разработаны Московским ордена Трудового Красного опашни таучночгссделопа?0льа5сШ4 -институтом

гигиен; им.Ф,Ф.Эрисмана (д.м.н. Г.П.Колина, к.м.п. Л А\, Вино­

градова, к«м*н« Г.М.Трухина).

Методические рекомевдаяии рассмотрены Лабораторным Советом

при Главном санитарно-эпидемиологической управлении Минздрава

СССР и рекомендованы к утверждению.

Рекомендации предназначены для использовании в практике

бактериологических лабораторий гигиенического и опидемиологи-

ческого профиля научно-исоледоьателъсккх институтов, медицинских

институтов и, по показаниям, республиканских, кр*д*«х, областных

и городских санитарно-эпидемиологических станций,

"УТВЕРПАЮ"

Начал ьник Главно гч>'ч> дни гарно-зад-'

дамиодогического управления Мини­

стерства здравоохранения СССР

/9 Б»£ * Ко вди л о

еГо 1935 год

I а д Я - и

Методические рекомендации

оо идентификации грамотрицательннх нефермвпгнруощих

микроорганизмов*

I* Введение*

В последние годи внимание гигиенисгой и эпидемиологов

привлекает обширная группа грамотрицате.льннх неферменти-

рувщих микроорганизмов /ИФМЛ широко раопроо гране иная в

объектах окружающей среди. Доказана патогенность о'ных/Bbeudosuiaaa atjru^inoa*t£ordatollu увхЧиьвЫ,ilavobactvrluj» 44ш1щ»о1mptleaf»,uoraxoiitt lbouunt^/if роль в патогенезе заболевая

UOIODCEa SI ЖИВОТНЫХ друг ax НФМ / AciH«tub*et*r $iiUoJu;iticq4t

Bordutella broii-sbie«pticn# ehro«oUbcter x*l по\Ыай#, Bo A id «11»

Однако,чао toe нахождение многия из них в кишечнике человека

свидетельствует о возможном их индикаторном значении.

Поэтому возникла необходимость В оистемагике НФМ,& также уп­

рощенных ж доступных для яирохих иосдедовайий идентификации

микроорганизмов,обнаруживаемых при исследованиях поверхност­

ных и подземных возводи централизованного водоснабжения,

о точных жидкостей,почвы,оиывов с предметов окружения больных

в лечебных учреждениях м в патологическом материале*

В основу идентификации положено систематизирование признаков

по огепени их значения,дополненное тестами, необходимыми

- г -

п отдельных случаях для более четкой идентификация того или иного 1МЫ, имущего медицинское и (ила) санитарное зна­чение, и утя дифференциации последних от хемолятотрофных и сапро­фитных НФМ, широко распространенных в воде и почве. В предлагае­мом виде с денным набором юшчевых признаков и количеством идентвфя* цируемых НФМ предлагаемая схема разработана в СССР впервые.

Z. Лабораторное оборудование, реактивы, материалы.

1 .1 . Основы питательных сред.

1 .1 .1 . Агар микробиологический. ГОСТ 17203-71.1*1 .2 . Дрожжи хлебопекарные прессованные. Технические условия

171-81.1 .1 .3 . Молоко коровье пастеризованное. Технические условия 13277-79.1 .1 .4 . Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей.

Технические условия 13805-76.

1 .2 . Реактивы.

1 .2 .1 . 1-нафтол. Технические условия 5838-79.1 .2 .2 . Натрий уксуснокислой 3-водный. Технические условия 199-78.1 .2 .3 . Реактивы. Калия гидроокись. Технические Головин 24363-80.

(СТ 02В 1439-78).

1 .2 .4 . Диметил-пара-фениландиашн 17 6-09-18-28-72.1 .2 .5 . Калий азотнокислый. Технические условия 4217-77

(CT.C3BI697-79),1.2.6. Аммоний 'арнокиолый. Технические условия 3769-78.1 .2 .7 . Калий сернокислый. Технические уславпя 4145-74.1 .2 .8 . Магний сернокислый 7-водный. Технические уоло^ия 4523-77.1 .2 .9 . Тетраиетил-дара-фешиендиамвд ТУ 6-09-18-28-72,1 .2 .1 0 . Калий фосфорнокислый однозвмещенный. ТУ 4198-76.1 .2 .11. Калий фосфорнокислый двуэвмещенный 3-водпый. Технические

условия 2493-75.

- 3 -

1 .2.12. Натрий-аммониЯ фосфорнокислый двузамащеичый 4-водный. Технические условии 4170-78.

1 .2.13. Аммоний хлористый. Технические условия 3773-72.I .*?. 14. Магний хлористый 6 -водный. Технические условии 4209-77.

1.2.15. Натрий лимоннокислый трехэвысланный. ТУ 22280-76.

1 .3 . Углевода, спирты.

1 .3 .1 . Д-глюкоза. Технические устоЕия 6038-79.1 .3 .2 . Глицерин. Технические условия 6259-75.1 .3 .3 . Ксилоза ТУ 6-09-20-45-77.1 .3 .4 . Лактоза ТУ 6-09-22-93-79,1 .3 .5 . Мальтоза ВТУ 257-59.1 .3 .6 . Спирт эткждшй ректификованный. ТУ 5962-67.

1 .4 . Краовтели, индикаторы.

X .4 .I . Броытишловый синий. ТУ 6-09-20-45-77.1 .4 .2 . Индикаторы. Феноловый красный. ГОСТ 4599-73.1 .4 .3 . Хлорид 2 -, 3 - , б-трифешиггетразола. ТУ 6-09-38-38-78.

1 .5. Лабораторное оборудование, посуда, материалы,

1 .5 .1 . Посуда и оборудование лабораторные, стеклянные. Типы-, основ­ные параметры и раз меры. ГОСТ 25336-82 2 (СТ СЗВ 2945-81),

1 .5 .2 . Термостат электрический о автоиатнчезкой терморегу.таровкой до 60°0 с термэизтрои ценой деления 0,2°С.

Г .5 .3 . Проволока из никелевсго и медионикелевих сплавов для удли­няющих проводов к термоэлектрическим преобразователям,ТУ 1791-54.

2 . Питательные среда.

2 .1 . Среда для определении оксидации и ферментации глясозы (0/Ф). Пертон 2,0,* хлоркч нщрин 5,0 г ; 2-эаывщешшй фоофат калия - 0 ,3 г ; рлшоаа 10.0 r j агар 4 ,0-6 ,0 r j 1,6)6 щелочной раствор феи*-

дового красного 2 ,*5 мл; вода до 1000,0 мд.} pH 7,4-7 ,6 . После раст- порицал ингредиентов разбить в пробирки в колячеогве, достаточном

дая получения высоты столбика не ыанев 6 см (примерно 7,Б-8,0 м л .).

Посла стерилизации при 0,6 атм 15 t?f, охладить в вертикальном по­ложении. Посев иглой (не короче 6-7 см) уколом до дна пробирки. Инкубация 35-37°С 18-20 часов или 30°0 42-44 чара. Пожелтение всего столбики-оксидация и ферментация положительны (+/+). пожелтение только верхней части столбика, иногда всего I , 5-2,0 сы. от поверх­ности, окоидацая без ферментации (+/-), отсутствие цоселтенин всего столбика и, как правило, щелочение (малиновьй цвет) поверх­ности среда - отсутствие ферментации я окондеции (0/0). В некото­рых слу> да наблюдается пожелтение нижнэй половины столбика при малиновой адреско верхней, что может быть следствием выснкой про­теолитической активности, в результате чего образованием кислоты за счет оксидации глюкозы сменяется щелочением в результате интен­сивного расщепления пептона.

2 .2 . Определение вптратаэной активности. Пептон 20,0 г ; хло­рид натрия 5,0 г ; нитрат калин 2,0 г ; агар I , 0-3,0 г ; иядкий дрож­жевой экстракт 200,0 мд; вода до 1000,0. мл. Разлить по 4-6 ил в пробирки, стерилизовать при 1 атм. 20 ыш. Посев уколом до дна пробирки. Процесс воостаношгония нитрата может идти о различной глубиной реакции - от восстановлении нитрата в Нитрит, до редукции последнего до выделонпн свобсдного азота. Нитрат'-редуктезпат актив­

ность способствует утилизации кислорода в анаэробных условиях к диффузному росту шггратаэа-актлвНнх НОД в (роде. Па активные НОД растут в этой среде лишь на поверхности в виде бодав или юнее толстой пленки. При завершении редукции нитрата и шпрота до ко­нечного этапа - образования свободного азота, в среде данного сос­тава В толще я на поверхности образуется пузырьки газа - дрн 0,1#

агара в виде обильной пони, при 0,3# - в толще среда. Реакции можно

- 5 -сор^ шегь с определением способности роста при 42°С, но учиты­вая, что некоторые ШМ на способны расти при этой температуре или продуцировать свободный азот, необходимо дублировать посев с- инкубацией при 30-35°С, Выделение свободного авота в более рад- няе сроке (через 4-5 часов после посева, но на лознн) можно опре­делить, используя феномен "раскаленной патла”, погружение которой в ораду вызывает интенсивное освобождение азота в= ввда пузырьков газа иди пенис на поверхности среды.

2 .3 . Оксидация углеводов (мальтозы, ксилозы, сахарозы) и дру­гих О-оедержацнх компонентов. Пептон 2 ,0 ; хлорид натрия 5,0 г ; углевод 2,0 г} 1,6% щелочкой раствор бромхимолового синего 6 ,0 мл; агар 12,0 ^ | вода до 1000,0 мл., pH 7 ,2 -7 ,4 . После стерализацлл при 0,5 атм 15 мин, разлить среду' в чшкх. Посев макроколонляиг (12-18), инкубация при 35°С 18-20 часов или 30°С до 2 суток. При определении оксидации лактозы концентрации последней увеличив л<№ до I05J и длительность инкубации до 2-7 суток при 25°С х до 4-7 суток при ЗО°0.

2 .4 . Определение гелатшвзной активности. Питател-ЦШЙ агар 1,2% (дасоподтонный или фтбричный порошковый) 1000,0 мл; желатин 200,0 г ; стерилизация при 0,6 атм 15 кин, разлить в чшки нетолстым слоем (не болае 16 ад в чашку). Паоле застывания среды еа цоверц- нооть залить тонким олоеы 2% агара на диотиллираваньой вода. Посев цщфсиодонтамх (бляшками) в количестве 12-18. Инкубация при 85°С 1-2 оуток ели при 30°0 2-3 суток. Положительный результат - зона поцутаанхя вокруг колоний.

2 .5 . Определение продукции фен аз кн а (силой пигментов - шгацки- нина, шшрубина, меланина и др.) (ореда Киаг-А), Пептон 20,0 г ; агар 12,0 г ; глицерин 10,0 г{ аульфат калин 10,0 г» хлорид магния

Во всех случаях, при отсутствии специального указания, применяет­ся агар-агар, но не сухой питательный агар фабричного производст­ва.

- 6 -

1 ,4 г ; дода до 1000,0 * д . , 7 ,2 * Посев макроколониями яа чаш­

ках. Инкубация Э5°С 18-24 часа* Продукция феяазинов разных оттен­

ков, от бурого (сочетание рубрина с цианином) до отчетливо зеле­

ного м я красного, в зависимости от преобладания того шш иного

феназкза. Био*?еланш может проявляться в ваде темнокоричневого

гг а черного окрашивания, но феномен наступает обычно поздно

(иногда на 7-14 сутки).

2 *6 . Определение утилизации С и N содержащих Соединенно.

Рехтячавт два типа обмешшх процессов, свойственных Ш 1. При пер­

вой углерод и азот утилизируются микроорганизмом в среде ограни­

ченного минерального состава, при втором базовая среда должна быть

полной* аой, содержать те или иные факторы роста, высоко питатель-

ные вещества или натявиые животные белки*

2 * 6 .1 . Состав базовой минеральной среды ограниченного состава

может быть различиям, от сложных наборов большого количества раз­

ных солей до простых, содержащих неШогие органогены, типа сред

Козвра илл Симмонса* Может бить рекомендован слегш ий комплекс

солей: ОдаозамещонныА фосфат калия 1 ,5 г ; сульфат магния 0 ,02 г ;4росф<%г ajujM>t<cr* Q/tTr;хлорид натрия 0 ,5 г ^ а г с р 1 ,2 г ; 1 ,6 ? щелочной раствор бромгкшдоьо-

го синего 0 ,5 мл; вода 1000,0 мл. После растворения стерилизовать

при 1 ,0 атм 20 мин, хранить в холодильнике, применять по маре на­

добности, прибавлял разные источники углеродного питания к 100,0 мд

базовой среда; по Б ю отарильпых водных растворов 10? глгкозы,

6 ,0 ? ацетата натрия или цитрата натрия, 10? различных углеводов.

Этанол прибавлю :ь перед разливкой в чашки в количество 1 ,2 ? для

определения кнелотообразования или 0 ,3 мл для определения утилиза­

ции. Посев разных шташов макроколониямж (бдягшшя) fro 12-18-24 в

чешке.

2*6 .2* Базовая среда для второго типа метаболизма может быть

различной для разных НФМ. Основная минеральная база аналогична ре-

- 7 -ьсыэнцуемой в п .2 .6*1* Дополнительно гогут оыть введены метионин

( 0 ,2 - 0 ,3 $ ) , дооккввоЛ экстракт ( 0 ,3 $ ) , различные аминокислоты

(такжв до 0 ,G^)j некоторые НФМ нуждаются в полноценных средах»

типа сердечно-мозгового настоя, иногда в нативных тавотных беда ах

- крови, кровяной сыворотке в обычно принятых для таких сред кон­

центрациях. Подбор для каждого ШИ необходимых компонентов сделен,

затрудняет процесс идентификации; прозе ограничиться канетатдаЕей

отсутствия роста и изменения реакции среды в минеральной ср^де с

глмкозой для сахаролитов (кислая реакция в положительна случае)

и с ацетатом натрии для щелочвобразователэй (щелочная реакция в

положительном случае).

2 . ? . Определение уроазной активности. Моде? быть использована

синтетическая минеральная среда ( п .2 .6 .1 0 о заменой источника

азотного питания мочевиной в количестве ОД# t уменьшением содер­

жания глхкоэы до 0 ,1 # . Определение в чашках посевом макрокошш:

ыи. При интенсивно* уреазноЗ реакции щелочение подлежащего сдоя

среды наступает ухо через 5 -4 часа после посова, в умеренной реак­

ции - через 16-18 часов. Целесообразно после 3 -4 часовен инкуба­

ции црж 30-35°С чашей до с^юдущого утра оставлять при комнаткой

температуре*

2 .6 . Определение металлического блеске. Сухой питательный агар порошковый Дагестанок ого производства 3060; пептон 10,0; во­да до 1000,0 г . Поело стерилизации при I ати 20 Mini внеоти 100,0 ш отершсьного снятого молока, 30,0 ил IQ# водного раствора хлори­да трифенилтетрезеда (ТОО ( самостврилизуетса прц кошагаой темпе­ратуре в гечошш 2-3 оутак), смешать и раздать в чадам, по 20-25 мд. Посев макрокод он шин. Доело инкубации при 35-37°р в точение 22-24 часов на поверхности мокроколоний появлягтея золотистые вкрапле­ния. Ирл данном составе среды - рохе воя поверхность шкроколонии

покрыта золотистым налетом. При отрмцахельпоы результате следует

- 8 -

выдергивать посевы на среду при комнатной 'температуре 2-3 суток*

3 , Реакции и роактави.

3*1. Ct разные реакция,

9 ,1 .1 . Реашрся окощазц л о Ковачу* Реактив; тетракетия-п^ра- феяллэедиаггсшг хлорид 0 ,6 г ; вода 100,0 мл* Реактив наносить пла­

тиновой дли нлхрошой пстло# на колонию ( макрокодондю) * Дсложи­

те льная реакция порозовеняе, а эатем окрашивание ц глубокий фио~

тотовнй цвет* Альтернативно - пропитать фильтровальную бумагу

tie активом и наносить на нее микробную массу из макроколонии. П6- ложиггельннй результат тот же.

ЗД 2 , Реакция Цитохромоксадазы, по Гэби и Хедли, Реактивы:

/I) альфа- гаргол 1 ,0 г ; етанол 100,0 мл; Б) Дш«ткл-парэ-фенилвн-

циамия хлорид (ига оксалат) 2 ,0 г ; вода 100,0 адг* Реактивы хранить

раздольно в хододнтьнюсе* олшввать небольшими порциями непосред­ственно перед употреблением. Способы Применения те же# что в п .З Л Л . Результат - при положительной реакции колония ш микроб­

ная масса на фильтровальной бумаге приобретает синий (ультрамари­новый). цвет.

3 .1*3 . Реакция окендаэы по Ковачу рекомендована специально

для нефермвнглрушах микроорганизмов; реакция хцтгохромзкендазы

но Габи и Хедли - как для неферментируицвк, так ж преимущественно

для ферментирующих иш^оорганизмав (аэромонцд, плаэиоманед* вибрио­

нов) ♦ В СССР распространен в основном метод Гвбк и Хедли (циго-

хромоксцдаза), Неправильно трактуемый некоторыми как реакция оконда-

зы, хоть последний термин должен быть пркленен к реакции о тетрад

г/ютилч1£фанфеидл8 1дашмином. Некоторые микроорганизмы дают различ­

ные реакции с тем и другим реактивом (си.таблицу I ) .

G.2. В некоторых случаях возникает необходимость определить

принадлежность изучаемой культуры к грамотрицателькой группе. С

Таблица К I.

Систематизированная идентификация грамотрицательных Пефермен-

тирующих цнтохромохсидаза-отрицатенъкых микроорганизмов*

Микроорганизмы О сновное ключевые призна?:и __Ля полни тельные п о и зн .

«50

1 о *4SаXгас

toeасП89с«1XО0•е

1 X

. v

$

Я8IQК3

f

§ ‘X

•оио0X1 S ё

1•J

й

»«Оwв

а

5

*gо

d

8&нS

н9

15

Очэорч?

i5D « CJ ст X со5 2

Р

5 * .ьеX 4»я « в} оСП О- К О»ЯХГЕн о S а:

й s & *£ Sх 4X н

" 1о« °§ й<9 О сп о*X сИX is «СН о х 4* х а

IX§ок*5§«о

3 рd S8 8нЕ о

X

оьOJJ -5§ноо

Рч /ти

пи

зац

ия

саха

ро

зы воX8ОСX3«XкXa4,

СПXк.сXV

Сч

иСП§XнS

aX4>XиXе:

ДогЙе-СН*parupcrtuBSls

0 >0 0 0 0 0 0 0 0 4 0 коричневый

Aei ! ‘t f f S , r t , r0 э & 0 0 0 0 0 0 3 4 i 0 4 э Pfi

jf.b*ejuol Ulcus V.«IcaliCCQ«f 0 о/

10 4 р { 0 0 0 Г 4 >+ 0 4 4 4

AciBcto-ucttrluiltrpfJi

и +/ >Р и и 4 и и 4 4 + 4 и 4 и и

4,b«mj0jytieuBT.liaewUtlcuB 0 */ 0 4 4 0 0 4 4 4 э+ 0 4 + 4

£м)£Ьеьм>0ав 0 V >4 4 ? 0 0 0 0 0 4 0 желтый

Р вн ао и о ви /j(mrtbo«~oa«j/

n t i t о M ill In. _

0 J Р/ >♦ 4 4 0 ев 0 0 0 4 0 4 0 4 желтый или 0

fI tv o u tc ta r lu x> 0 U р ° 4 * э 0 0 0 + 0 0 2

jжелтый

1° 0

f etudoaoatec tp tc lA

55 ♦/ >4 4 £ 4 ? ° « р5 4 4 р 4 желтый и м

ЛИЛОВЫЙ

ферментиру­ющие грамот

р ♦/ ► р А 3 л и ч н ь £

рнцателыыем и к р о о р г а н и з м ы __

I) Реакция по Коми/ подожитежьна; 2)Мокег бс ть замедленная фер­мента ция.Р-раз *кч но; Р**ча«а положительно; Р°*чаще отрицательно.

- 9 -

этой це.&а, микробную массу с сведей агаровое культуры петлей

вносят в 3# водный раствор КОН. Грамотрпцахельные микроорганизмы

доело поскольку секуцд перемотавания массы в растворе ослнзняйт- сл К за петлей тянутся трудно отрывающиеся нити. Этот феномен

отсутствует у грамполонительных микроорганизмов .

4 . Систематизированный таблицы ключевых признаков H®L

4 .1* Обоснование систематизации и подбора ключевых признаков.

При отборе ключевых признаков были у ч т е т основные, имеющие меди­

цинское и санитарное значений, вефершытдрупцие микроорганизмы. Лишь

немногие из включенных в набор признаков у некоторых НФгЛ нестабиль­

ны, являясь решающими в отношении Других НШ (например оксидация

мальтозы, продукция своо'одьог'о азота). Принятый набор обеспечивает

надежную идентификацию большинства НМ и дашь для уточнения неко­

торых необходимы дополнительные тесты*

4 . 2 . Схема последовательной первичной идентификации

неферыентнруицих микроорганизмов.

исследувьш культура

Среда Кннг-А Среда 0/Ф

+/0

- 10 -4 .3 . Систеустизацня признаков выявила три основным группы

ШМ:1 . Питохромоксндаз а-отрнцагелъкыв, делящиеся на подгруппы

1а . На оксддзрупдиа глшоэу (цесахароллты);

Хс5 * Оксадвд шие глюкояу (оахаролиты).

2 . Потохромоксвдаза-пситожЕтольнцо, но не оксвдирухцие глюкозу.

3 . Питскрошкседша-лоложлтелъныв, оксидирущив глюкозу (сама-

ролиты).

В подгруппах первой группы и в 2 и 3 группах дальнейшая диф­

ференциация прсведена до двум другим решающим ключевым признакам -

оксидации мальтозы и подвижности. Комбинации этих четырех решаю­

щих ключевюс>ярлзнаков выявляют подгруппу третьего порядка, каццая

состоят пз дешогнх видов, дифференциация которых по остальным

ключевым признакам к, в отдельных случаях, по дополнительным

тестам, не Составляет труда. ( ь )

4 .4 . Пользование таблицами. Из п .4 .1 следует, что после полу­

чения чистой культуры НСМ с селектзшно-даК^ренцшальной среды и

отсева ее кд среду Кинг-А для выявления и исключения из дальней­

шего изучения фен вз пн-образ ухщ их (пигментных), p.oernffinosor

рекомендуется посев ыакроколонвш^и в чашке), определяется отноше­

ние к реакции цитахромаксцдазы. Одновременнб с росевом на сроду

КжнГ-А прокзводятся посев в среду 0 /с . Эти даа теста - р^цнтахро-

максцдозн ж окоадативно-фермэнтативнея реакция, позволяют рпреде­

лить пршададиность изучаемого микроорганизма к той или иной груп­

пе ига через сутки после инкубации при 36-37°С шш через двое

суток после инкубации при ЭО°С. Остальные ключевые признаки могут

бить определены одновременно, но в целях экономии труда и сред

предпочтительно на втором этапе выявить отношение к мальтозе,

подшезюсть н характер роста на нитратной среде (при 42°С п при

35-37°С) | учитывая диффузное помутнение среда при положительной

нитратазной реакции, рост на поверхности среды в веде плотного

_ „ ТабяпцЬ №2Сиогеыатизпрованная иделгификация Ррамогрицагевьжгх неф&рменгируофи иигохшяок^1Даэа*-аояож«телы*нх ивсахаооЛилоп.

N rcvpooj низ ЧН

«a53Eоl*r*s ix \©ия?Xi

0

52о*и=г»о?КX3 .RЯГкр з« о В 4.

с н о

2

я

3и!О а4 юЭ

ubft

•лиооXи

§£

10

а01dяti

г»4

Йлоч***--в

8кXX«IffX X О 01У о

О Ь.

РШ

«Jз

&нX

33

Г»*

ЕчОSОСгпо>ооё

ПрКЭКЕ х — * ©

o g ,ttf is S t s оX О 01at X о oi л ki x w ©6 «3 w x P«|U

, f-r 01 t s ; o

" b - ,

« В§ *at оАЛ trK v s l№ Iff Ct

t s o r i

J <оXрчьiff

! CtiCOX=fcoT>TCx cзНЭk o

no

aXatяr>toXXat«Xxи

>->

ЛНИГ1

atcuиXГ*XSC wя s f f a яг M sc «

s *b a] S н

е л ь hi

iоwXuУ(Гsа3кУ X

о pi

НО

пёaX

_©

п р

It0>и&->

43НЫ

IояXО X

я « о б <3 и у

£ gп оо о.

т

i3KJ0*iff

atе*

a - 5H X

оОЕМ■ff*

. 14*О

l.Oi- + с / о 0 0 0 0 0 0 0 0 4 0 0 J

l 'i c t r u l Is 4 о / с и 0 0 0 и С 0 4 4 4 0U-i о 1 i a o s lu e i .» ;b 4 о / о 0 0 0 0 Р 0 0 4 4 4 0 0

4 о / с о ' 0 0 0 4 0 0 0 0 0 0 0 0'o riiSe^ i а '/« o -uii j i-jVlCd

t~jr стт гЬд— ■——1 „;Cuil„L^

■*■

+

о / о

о /о

0

Т "

0

У

0

V0 34 0 0 0 4 и 0 0 0 4

0 4 0 0 0 4 p " 0 0 4 0bovl i 4 о/о 0 0 4 0 0 0 0 0 4 4 ( 4 4 0

Zpuj^luva l l l i - D&<> 1 r± 4 .о/ эО 4 0 0 0 0 0 0 4 0Faeuuiiuouabi^ b to s lt io t il 4- о / эО + 0 0 0 0 0 4 4 0 0irBuuutiMuita»jiBeLigoidcaii-(eu tfi с/о 0 4 0 0 0 0 0 4 4 4 4

I'iieiiiiuuUUliSkO/lujWl'Uuft 4- о/о 0 ♦ 0 0 0 0 0 4 4 4 0 Р°Jicu l faeca l l* 4- о/о 0 4- 0 J L

1 Р1) 0 4 4 4 0

bortitiic il*brunubi 4 с/о 0 4 0 0 г 0 0 0 4 4 0 4дсдгоыеЬасгегxylo»</klUaiiB 4- о/о 0 0 0 4 р 0 4 4 4 4 0tdcftili*ueB A о/ > 0 4 р ° 0 0 0 0 4 4 0 4 0 4|*веиио~<ь<иЬ

4 с/о 0 4 0 0 0 0 ,0 0 4 4 0 Р®

Л '*о»и<1 ь 'грги у,5 0 огмк4 Нй111Гбатмроти1Провя ш йо'Кяйм'вибных кйс*й» утират.к-прое^, 2 ) Лрсицуиеогвенно свеке-выдоинные*

/О s

Таблица № 3Систематизированная идентификация грамогрицателькых нефесмекгирувщнх цй то хтомо хон даз&-по лохи те льнах сахаролигов

Микроорганизму Оскожаые ;:лочевые^.признаки Дополнительные поизнI . о| 1 ^ Г 1 "' * —

tisftXиkf0 X1

яStЕ=»

5м<usCLtietc»-■=/3sОMЭ

ияВлвзгса:"»

яоVI?

&Ии569

£

ti1Sю55еWМ

а«0 и ыtiftfc*еISКEJ

1

о

ti3ft*3

иtiCOtifar3XKSоХЭов У

тили

заци

я С

в ми

не­

раль

ной

сред

е с

глпк

оэо Я0 ,0

01 т-S B* 3IQ ti

О осе ti S *=Г СТ ti ti о,s ° sK SH| § S► .-X У

тили

заци

я С

и по

яноц

е ин

ой с

реде

ОэCVJ56 ИОоО» J

Ути

лиза

ция

этан

ола

Золо

тист

ый

блес

к

иX

1SBс :AlCaiA;,C4)Ci*piracioxas 4 ?< 0 )+ 0 ) P э 4 4 4 0 4

т- ft 0 4- 0 ) 4 Р1 ) 4 4 4 0 0

p»M *sftr,,r“ ft 0 4- 0 0 0 0 4 4 +• 0 4 0 Бл< дно-желтый

Гбсии<ил>па*aenuoclua + ti 1° 4- 0 0 4 4 4 4 4 4 4 0

Ра«ис1иыи1«о*chivroi'bpbla ♦ ft 0 4 4 ) N 0 4 4 4 0 4 0

feouuouonuaorufeinosm 4 a. 0 »г: р 0 - + 4 4 + 4 4 4 феназин или 0

PetuaiBioiiOBpuLXua 4 с р(1 л6 0 0 0 4 4 4 0 0 флуоресцеин

Peeuuouoiiaa fluoreucena

STl4

£l

A0

t

£ti

4

п

1*

и

0

-ftl>

г

рШШЛ

4

СЕЕШ4

Ш Е4

З Ш

0

m u* 0

ЬХ Ш Ш Ш П Ш

флуоресцеин4 . A. !+ 4 0 0 ) 0 4 4 4 0 4 0 бледно-желтый

PoraCtfCCUat io i i i t r U ic o n * ♦/ 4 4 0 0 0 4 4 4 4

A iC iiite U f l*fttiUnBiarliiui

+ '>|

4 4 0 0 0 0 4 : 4 4

Z o o j;l« « a ;;r» a o te it A4 0 4 0 0 4 4 4

Л з й й Г " * *4

A4 4 0 0 + 4 4 4 4 Р 0

рампЦиольАpeQUUOlUliei

4A И 4 4 4 4 4 4 4 4 4 0 ораижево-креиовий

Лреицуиеотмнко- свеже-выделенные | Продуцируваде каттоу лу-не подвижные

- IT -

кольца игра отрицательной нитратаэной реакции и продукцию свобод-

цого а зо т а ), поело чего при некоторых когкЗннавдях этих признаков

становятся кзл:ишиьн остальные тести, либо намечается необходи­

мость в цроводоняи лишь некоторых из них, а иногда н использова­

ние рекодецдуемых дополнительных тестов.

4. и При массовых исследованиях негут быть выявлены культуры, не укладывающиеся в предлагаемый набор признаков. В зависимости от обстоятельств, такие варианты подложат дополнительному изуче­нию С если это вызвано необходимостью), либо исключаются в тех случаях, когда с-тоЙ,;:е солеЕЛтИвно-д^еренциальноК среда сняты другие колонии, полностью отвечающие той или иной комбинации клю­чевых признаков л, следовательно, идвнтифицчруешх как той или иной НФМ.

5 . Ориентиры основных нефершнтяруадше микроорганизмов

5 .1 . ^сличенный в т&бшцы набор не исчерпывает обилия нефер-

мент яру вц их микроорганизмов, обитающих в окружающей среде. Отобра­

ли лишь имеющие медицинское л (иля) санитарное значение ТШ.1, а

такие сапрофиты или фитопатогены, от которнх их нудно дифферен­

цировать. Характеристика включенных в таблицы Н<ЯЛ и их ключевые

признаки доны в соответствии о литературными данными последних лет

и ка основании собственного материала. В таблицах представлены

РОДЫ РвечЛояопав f A olnetobaot*r МогахеПч в отдельные

представители родов BoTdotella , T levoonoterlчп f Aehronobnetftr,

Aionitgenefl а ташке гоо?\о«л •

Xantboaonna , Ры г &оооома . В ТабЛПЦЫ HO ВКЛЮЧЕНЫ ПрОВИЭОр

Hue группы W И "Ш" В роде MoraxeUfl , и Y4-1 " , “ У4-2"|

* V4-J “ ( Agrobeotдг Tndlobnoter ) В РОДГ Aobromobaoter f

“ E fe ", "1Уе-2" в роде Bordeteiia , как ндощие лишь

единичные ключоьцо признаки, отличающие их от легализированных

вдцов.

- 12 -

5.2 . Рол pseudomonas включает 265 видов, S3 которых по основным свойствам охарактеризован 32, не считал фито патогенных п морских псевдомонад. В таблицы включены наиболее часто встра- чанщнобя а имвюяпе медицинское значопко или сищулирущие их 10 видов сахаролитоа и 6 нэсахаролптов. Наибольший интерес представ­

ляет группа флуоресцирующих псевдомонад - P.neruf1повв F.fluoresoens и Y.puUia , которые диЭДеренщфуащся

На основании ключевых признаков - глубокой редукции нитратов-нит­

ритов с освобождением свободного азота нри 42°С и при 35°С, жела­

тинозной реакции, рооте на средах Кипг-А и "блеск". Эти ив тес­

ты, как и некоторые дополнительные, могут служить ориентиром

после определения основных ключевых признаков - р.цитохромоковда- зы, Оксидации глюкозы и мальтозы, и для остальных представителей

рода.Б.З. Aoinetobeotsr osiocsoetious , в практических целях

удобнее изменить номенклатуру этого единственного вида рода Aoinntobaetnr , считая его подвиды ва самостоятельные виды:

A.lwoffl , A.enltratus , A.bse'nol.ytloue (с Дву­мя вариантами - heemolytlons и eloellrenee ) . Все они

цитахромшетаоэй-отрвдательны, неподвижна, утилизируют в мине­ральной ореде этанол и, в зависимости ст вида, глюкозу и (или) ацетат натрия. Ключевые признаки для } .sn itrstua - оксида­

ция I0J? лактозы, для A.Haemolytlnns -гемолиз» гидролиз

желатина и продукция лецитпнаэы.для A .l*o ff i - отсутствие

всех этих свойств, но способность утилизировать ацетат натрия и

этанол в минеральной среде.

5 .4 . Род MoraxeUe представлен 7 видами. Общие ключевые

признаки: р.цигохромоксидазы положительна, подвижность и окисление

глюкозы и других углеводов отсутствует. M.osloansis иM.uretbraiis способны утилизировать ацетат натрия в минеральной

среде без дополнительных ростовых факторов, различаясь по способ-

- 13 -

HOOT И асСНМШЩрОВаТЪ ЦИТраТ натрия, е M. tlentpa не УТИЛТВЗ- рует НИ ТО?, из другой ИСТОЧНИК С. М.Ъог1в и ts.laeunati* расщепляют желатин, но последняя для проявления этой активности требует добавления к среде кровяной сыворотки шш солей джрных, кислот с высоким содержанием атомов углерода (бутнрат, кацрат).

„ обладает выраженной гемолитической активностью, а при: использовавея "шоколадного* агара гемолитическую активность проявляет и B.leaiuiete , которая, в отличие от M.bovte продуцирует нптратасу, как и K.noniion^faoien» и в меяьшей степени к *рД<?пугругмт1 оа . Последняя деадивнрувт (уенилл-лгапш м триптофан. Спорным является наличие фенилаяанйй-деамнна* ЗЫ у M.uTethrella . И, ЯакОНбЦ, УЛогХл я K.lednnataразжигают свернутую кровяную сыворотку. Провизорная группа "US" будучи сходной -с м*оз1овпа 1 ч по большинству ключевых прнзка- ков, отличается до отсутствию способности утилизировать ацетат натрия б минеральной среда, Группа "Мб11 отличается от прочих ви­дов моракселл по отсутствию каталазы.

5*5* Aohronobflrtter xylo DJfldens , дходецдШ в группу цито- хромокенцэза-полакителшд нееихаролиТов, единственный в этой

т

rpymie косчдаруот ксилозу, особенно четко яра 1($ концентрации последней, Провизорные группы этого рода " 11, "Vd-я 4И " td.3 " ( Afcrobactor redloosoter ) ОТЛИНОЮТСЯ ОТА.ху1овох1<}чпв по энергичной уреаэыой активности, послед­ние две по оксидации сахарозы, мальтозы п шитта*

5#б. riavobeoterliia menlnpoe|“T)ttoiim отлпчаотся ОТ сходной с ним по другим признакам pee'idonwnee oepaol» поотсутствию окендацьл сахарозы, а от сходных видов рода AobroraobHOter Я нрОВИЗОрЫОЙ ГРУППЫ Л " НО ОКСЦДаЦИЦ

изшглта. Ддя этого НА!, дак и для y.nieitophiue нV*o«peoiB характеров двоякое отиошедио к оксцдезиой реакции:

они доловите тьни по окездазо и отрицательны по цитохролюксадазв*

- 14 -

5.7* Б;$>; рода Bcraatoiia f в завис тэАбрть.>-о*т цггтолро-моксшсаэноЛ реакции расположены п naps oil и s?opftt таблицах. Отлкчш* язе от сходных Ш',\ других po&op даны в таблицах* Вщ в,р«чмщвзи исключен ез таолпц, как требующий особью методов культивирования*Дш B.brcmhia^pti оа характер)fa высокая уреазн&с активность(гидролиз исчеашш в порше 4 часа иякубацим) и отсутствие утили­зации цитрата патрил в минеральной среде (потребность в дополкктель- них факторах роста) s в отличие от провизорной группы r,U-2o'\ аосигдахкрущвй цитрат натрия. Провизорная груша "ХУе" отличает­ся от в ,ь гопом sent tea по редукции нитрата до образованиясвободного азота.

5*5. Наиболее распространенный п изученный вид рода Alepit*— -Л-*ГавовИ8 , OTJE439TCff ОТ СХОДНЫХ О НИМ P.sclfloTll rtms

по утилизации цитрата натрий, а от B.bronohisopMee но ОТ­СУТСТВИЙ уреаЗНоЯ акТИВПССТЯ. ВИДЫ А-о<10гапэ И АЛ1вм0Гве?«»па объединены в таблица 2 с A*fawoeUg , поскольку ключевыми признакам этих вццов (по Вогану - синонимов а.ГяяспП в служат нитрат аз кая активность и выделение при редукции нитрата,( 1 A.rtenitrtfieene ) шш нитрита ( а*о(1пгйпр ) свободного

азота. Одаако, нитратаза обнаруяэпа и у 43 -02? /#fneeeHs своде выделенные штаммы которого могут т-акдв выделять свобод­

ный азот . ВИДЫ А.рягаЙохча , A .ontropbia И A •erpamarlnua

необычны по оксидации глюкозы, а последний и мальтозы, к включены

в таблицу 3 как подлваацпе дальнейшему изучению е позиций их

принадлежности к роду Ps«it<3onont* (сходство в строении

ДНЮ.

З А К Л Ю Ч Е Н И Е

Ъ цели облегчения идентификации выделяемых при лсследова-

нднх объектов окрулсащеЙ сродц граиютрпцителъных Неформэнтиру^цих

микроорганизмов (НМ) , представляющих медэвднскиП ( эпидемиологи-

чеоклВ) и оенлтарныЯ (гигиенический) интерес, дродъчгавтоа наибо­

лее суиг огненные ключевые признаки, систьматизирэ^ uuye до основ?-

ныл ришашш ключовш признаком на группы; I . Циокромоковдаза-

атрицательпых ШЦ; 2 . Цитс*хромокс1д;аз-а'Полоздае.шщзс не овсвди-

рушюс глюкозу (цесакаралитов) ИМ и 0 , Цитохромоковдаза-долозад-

уолышх, онседирующях глюкозу (сехгралятоь) б подразделением

б калдоЧ группе на основе оксидации мальтозы к додвняяостн на дод-п

группу и с послодуюцчм мсшюгьзозашшы других клетевых признаков.

Применение такой онстемагазирэванной едентя&зсеции, основанной* иц

нэбо^ыном набора тестов» позволит ориентироваться в большом коли­

честве разнообразных по сбоям свойства** НМ и дифференцировать их

от еадроГитарных и хемшыгсетрофшле НМ» обиташих в воде и-дочве.

Достаточность данного набора клетевых признаков для идентифи­кации основных, шлещих медицинское д санитарное значение нофер- меятпрутнх микроорганизмов» обосновала изучением больсого коли­чества штйьедев КШ, выдолештых на протяжении трех лет кз воды поверхностных: водоемов, сточных ааодг.оствй а объектов окружения больных в лечебных учрегздехШгос.

Ограниченный набор предназначенных для адэнтг^ташш НМ ме­тод об д дитатолышх ород, не тробуицих специального лабораторно­

го оборудования, дефицитных, импортных дли дорогостоящих реюстн нов л материалов, может быть использован по только в лабораторных

нручнсь-исолодэвотельскюс институтов и кафедр гиглопического и е^идоиислогичоского профиля, НО П В саяиторно-яцадвмлологпческюс ошицкях по соответствующим показаниям*

Л о т^ /О б ы м ■. * ТирTnnwp4^i()t Mm**4‘ t*pcT*« u » u o o ip m n i( i СССРМР 3923-85