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milagros-belmonte-villalobos
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Nuevas Tendencias en Análisis Microbiológico
de Cosméticos
Q.F. Rosina Odino
Uruguay
Introducción
Definición Cosmético:
«Dicho de un producto: Que se utiliza para la higiene o belleza del cuerpo, especialmente del rostro.»(RAE 22da Edición)
Análisis Microbiológico:
1) Recuento en placa (bacterias, hongos y levaduras)
2) Búsqueda de microorganismos específicos
3) Challenge Test o Preservative Efficacy Test
¿Por qué controlar la presencia de microorganismos presentes en estos productos?- Olor- Color- Desestabilización de emulsiones- Etc
Pero más importante, puede tener efectos en la salud del consumidor:- Comezón en la piel- Infecciones - Ceguera
Método Tradicional
1. Método de Recuento en Placa - Cuantitativo
Se cuenta el número de bacterias aeróbicas y hongos y levaduras, utilizando técnicas de dilución y siembra en placa
2. Técnicas de Enriquecimiento - Cualitativas
Enriquecimiento en caldo seguido de medio no selectivo. Niveles bajos y/o células estresadas
¿ Por qué surgen alternativas?
Métodos Tradicionales
Tiempo (mínimo 4 d)
Días de producto sin poder venderse
Métodos Alternativos
Reducción del tiempo
Métodos Alternativos
Principales requisitos:
• Exactitud en la obtención de resultados (considerando: sensibilidad, limites de detección mínimos, especificidad del sistema de análisis, comparación con métodos de referencia).
• Rapidez: tiempo mínimo requerido para la obtención de resultados.
• Costo mínimo: inicial, por análisis, reactivos, mano de obra.
• Aceptabilidad: por parte de la comunidad científica y de las agencias reguladoras.
Métodos Alternativos
Principales requisitos:
• Sencillez de manejo: preparación de la muestra, funcionamiento del equipo analítico y procesamiento informático de los datos
• Calificación y formación del personal adecuada para la técnica a realizar.
• Reactivos: facilidad de preparación, estabilidad, disponibilidad.
• Soporte técnico adecuado: rapidez, disponibilidad y coste.
• Mínimo espacio util requerido.
Métodos Alternativos
Métodos Alternativos
IMPORTANTE
- Etapa previa de enriquecimiento
- Confirmación de resultados positivos
Test Negativo = PasaTest Positivo = Confirmación
Métodos Alternativos
Al igual que en el caso de los métodos tradicionales, es vital una adecuada toma y preparación de las MUESTRAS a analizar
• Para muestras solidas se han desarrollado instrumentos gravimétricos que realizan automáticamente las diluciones programadas de las muestras. Ej: Dilumat, AES Chemunex; Dilumacher, PBI; Labpro Gravimetric Diluter, Spiral Biotech.
También se han diseñado homogeneizadores que funcionan mediante ondas de choque y una intensa agitaciÓn que permite una mejor transferencia de los microorganismos del producto al diluyente, produciendo una mínima destrucción de la muestra. Ej: Pulsifier de Microgen.
• Para muestras líquidas se han desarrollado equipos que permiten realizar de forma automatizada diluciones seriadas de una muestra problema. Ej: sistema Rapid Plate 96 Pipettting Workstation de Zymark Corpo.; Dilucup, LabRobots Products AB.
1) Siembra en espiral
Ventajas
- Costos bajos- Sencillez- Ahorro de tiempo- Automatización
Desventajas
- Obstrucción de la aguja- Placas uniformes, sin burbujas ni humedad
2) Sistema Iso-Grid
Ventajas
- Exactitud
Desventajas
- Preparación de placas- Esterilización de equipo de filtración
3) Petrifilm
Ventajas
- No requiere preparación previa de medios de cultivo (reduce costos y tiempo de preparación)
- Poco espacio
Desventajas
- Pérdida de muestra líquida al esparcir
4) Bioluminiscencia o medida del ATP
Ventajas
- Reducción del tiempo
Desventajas
- Interferencias con ATP residual
5) Impedimetría
Tiempo de Detección Umbral = Tiempo entre inicio de la medición hasta cambio en el
parámetro eléctrico seleccionado
Tiempo de detección debe ser calibrado frente a una población de microorganismos determinada mediante métodos convencionales para que la electrometría permita estimar el recuento de microorganismos presentes
Ventajas
- Tiempo (6-24 h RTMA, 24–48 h RTCHL)- Puede emplearse en medios ópticamente
opacos
Desventajas
- «Calibración»
6) Citometría de flujo
Ventajas
- Rapidez- Cuantitativa y Cualitativa- Sensibilidad
Desventajas
- Equipos costosos
Ejemplo de implementación de un Método Alternativo
¿Preguntas?
Referencias
1) Métodos rápidos y automatizados aplicados al análisis microbiológico de los alimentos – Rosario Martin De Santos.
2) Food Microbiology and Analytical Methods: New Technologies - Mary Lou Tortorello, Steven M. Gendel.
3) Comparison of Redigel, Petrifilm, Spiral Plate System, Isogrid and Standard Plate Count for the Aerobic Plate Count on Selected Food – Vicky S. Chain
Muchas gracias