NEUTRALIZACION DE VIRUS CON ANTICUERPOS
1. MULTIPLICACION DE LOS VIRUS EN CULTIVOS CELULARES
Debido a que los virus solo pueden multiplicarse en tejidos
vivos, uno de los mtodos para su propagacin son los cultivos
celulares
Este mtodo tiene la ventaja de un mayor control que los mtodos
de propagacin en animal completo. Se utilizan lneas celulares
susceptibles a la infeccin. La multiplicacin de los virus en las
clulas cultivadas se ha usado principalmente para su aislamiento,
ensayo, diagnostico y obtencin de vacunas en cantidad.
El uso de los cultivos celulares en diagnostico sirve para
demostrar la presencia del virus y detectar anticuerpos en el suero
de los pacientes.Corte de un tumor generado en las clulas
epiteliales. Mediante hibridacin in situ se detecta la presencia
del virus del papiloma humano de tipo II. El precipitado oscuro
sobre algunos ncleos indica la presencia del genoma vrico.
El ms comn de los mtodos empleados es el cultivo celular en
monocapa, solo aplicable a clulas animales .En un cultivo celular
la mayora de las clulas crecidas a partir de un tejido slido
disgregado o de un subcultivo tienen la capacidad de adherirse en
monocapa, transformarse o anclarse independientemente.
Hay algunos tipos de virus que no han podido adaptarse a crecer
en lneas celulares (por ejemplo, muchos de los virus vegetales);
han de ensayarse por crecimiento in vivo, bien en ratones recin
nacidos, en embriones de pollo, en plantas, o en los animales de
los que se han aislado.
Estos mtodos tienen muchas desventajas, por lo que cualquier
avance en el conocimiento y diagnostico de un virus nuevo est muy
supeditado a que se puede crecer en una lnea celular in vitro. El
virus de la inmunodeficiencia humana HIV, productor del SIDA, es
uno de estos ejemplos ms recientes.
La mayora de los virus solo crecen bien en clulas procedentes de
la misma especie de la que se aislaron en primer lugar. Esta es una
de las mayores dificultades al trabajar con virus in vitro
El rendimiento de virus por clula varia con el virus, la lnea
celular y las condiciones de cultivo
El aislamiento de un virus desde un husped gravemente infectado
durante el periodo de viremia puede no presentar problemas
especiales debido a la gran abundancia de virus en todo el
organismo. Sin embargo, el mismo procedimiento puede ser mucho ms
difcil cuando el husped solo contiene unos pocos virus como, por
ejemplo, al inicio de una infeccin, al final de la infeccin
CULTIVO DE CELULAS ANIMALES
Clulas in vivo e in vitro
Los cultivos celulares se usan hoy en da para la obtencin y
propagacin de virus y micoplasmas, estudio de los efectos de
frmacos y antibiticos y produccin de sustancias orgnicas complejas.
Por todo ello, el progreso en el conocimiento y el control de esta
tcnica llevan aparejada su repercusin en un importante abanico de
aplicaciones.
La clula es la unidad funcional de ser vivo. Esta limitada por
una membrana proteico-lipidica dentrote la cual se encuentra el
ncleo celular donde reside la informacin gentica (DNA) y las
enzimas que llevan a cabo las reacciones celulares. La membrana
permite el paso de algunas sustancias e impide el de otras, con lo
que mantiene unas ciertas condiciones en el interior de la clula
que hacen posible su funcionamiento y supervivencia. La clula, como
individuo perteneciente a un ser vivo, tiene todas sus necesidades
satisfechas.
Las clulas transplantadas del tejido al tubo de laboratario
(cultivos primarios) mueren al cabo de un tiempo variable pero
definido. Raras veces es posible mantener estos cultivos ms all de
varias semanas o en cultivo indefinido. Cuando esto sucede, da
lugar a las lneas celulares. Las lneas celulares de uso mas
frecuente pertenecen a los tres tipos mas comunes de clulas segn su
aspecto morfolgico en cultivo: linfoide, epitelial y
fibroblastico
Linfoide
Epitelial
Fibroblastico
Las clulas de tipo linfoide crecen generalmente en suspensin,
mientras que tanto las clulas de tipo epitelial como las
fibroblasticas crecen adosadas a las superficies de los tubos o
frascos de cultivo. Estos tipos celulares que crecen en las
superficies de los tubos o frascos de cultivo. Estos tipos
celulares que crecen en las superficies exhiben el fenmeno
denominado inhibicin por contacto, es decir, cesan de dividirse
cuando llegan a confluencia ocupando toda la superficie
disponible
Para que las clulas puedan crecer in vitro, necesitan satisfacer
sus requerimientos fsicos, nutritivos, factores de crecimiento y
sus necesidades antitxicas y de defensa
Requerimientos fsicos
Los requerimientos fsicos pueden agruparse en: pH, osmolaridad,
oxigeno, temperatura, redox y sustrato.
El pH fisiolgico vara de 6,9 a 7,7, lo que corresponde a una
concertacin de bicarbonato (el tampn fisiolgico) de unos 24mM al 5
por 100 CO2 en la fase gaseosa. La osmoralidad fisiolgica es de
unos 285 osm/l. La oxigenacin se consigue teniendo cuidado de no
tapar hermticamente los cultivos La temperatura constante se lleva
a cabo mediante termostatos en los incubadores
Requerimientos nutritivos
Un nutriente es una sustancia que necesitan las clulas para
realizar sus funciones normales: crecimiento, metabolismo, divisin
celular o diferenciacin. Los principales requerimientos nutritivos
de los cultivos celulares son esencialmente los de una clula dentro
del organismo: aminocidos, purinas y pirimidinas, carbohidratos,
lpidos, vitaminas y coenzimas y sales
