. Nematologia .

da floresta ao eppendorf

21 Out 2019 ISA, MSc Florestal

Nemátode da Madeira do Pinheiro (NMP)

Bursaphelenchus xylophilus

Entomologia, INIAV

Organismo de quarentena A2 (presente na Europa, localização restrita – Portugal e Espanha)

Nemátode da Madeira do Pinheiro (NMP)

Bursaphelenchus xylophilus

Entomologia, INIAV

O género Bursaphelenchus inclui ≈120 espécies, das quais apenas B. xylophilus (em coníferas) e B. cocophilus (em coqueiro) são fitoparasitas; as restantes são sobretudo micetófagas e não parasitas.

xylophilus (Grego) = “amigo” da madeira

Nemátode – insecto vector

Nemátode da Madeira do Pinheiro (NMP)

Bursaphelenchus xylophilus E

nto

mo

log

ia, IN

IAV

Colheita de amostras na floresta

Entomologia, INIAV

Colheita de amostras na floresta

As amostras têm de ser remetidas rapidamente ao laboratório e não podem ficar na bagageira a apanhar muito calor: este transporte é da total responsabilidade do cliente ou do técnico que colheu as amostras

Protocolos de diagnóstico OEPP

https://www.eppo.int/

Protocolos de diagnóstico OEPP

https://www.eppo.int/

Os nemátodes são organismos aquáticos e separam-se dos tecidos vegetais (serrim) e dos insectos através de imersão em água (48 hrs) e posterior separação mecânica (crivagem com crivo de malha 38µm)

Montagem de amostras de madeira

Montagem de amostras de madeira (método do tabuleiro)

Montagem de amostras de madeira (método do tabuleiro)

Amostras de madeira em extracção

48 hrs de imersão

Extracção a partir do insecto vector

Extracção de nemátodes das amostras

Extracção de nemátodes a partir da madeira

Extracção de nemátodes (crivo de 38 µm)

Extracção de nemátodes

Extracção de nemátodes

Suspensão de nemátodes

Bancada de observação (lupas e microscópio)

Lupa binocular (luz transmitida)

microscópio

Observação de nemátodes à lupa

Suspensão de nemátodes vista à lupa

Preparação entre lâmina e lamela

Pesca de nemátode com pestana

Preparação entre lâmina e lamela

Observação de nemátodes ao microscópio

Oculares 10 x

Obj x5

Obj x100

Nemátode da Madeira do Pinheiro

cauda do macho e espícula (orgão sexual )

Nemátode da Madeira do Pinheiro

Nemátode em muda

É avaliada a posição que os nemátodes assumem quando morrem “gentilmente” pelo calor e as diferentes características morfológicas de fêmeas e de machos: ( ) A – cabeça; B, C – fêmea (B - vulva, C - cauda) ; D – macho (espícula) [barra= 10 µm].

Nemátode da Madeira do Pinheiro (NMP)

Bursaphelenchus xylophilus

Em caso de qualquer dúvida ou na ausência de machos e/ou fêmeas, os nemátodes seguem para biologia molecular: em tubo eppendorf

Confirmação por biologia molecular

Mª Lurdes Inácio Margarida Fontes Claúdia Vicente Lourdes Silva Marina Cardoso Mª João Camacho Leidy Rusinque

Equ

ipa:

lurdes.inacio@iniav.pt / Tm 916626641