Mikroteknik (Mikroskop, Jenis

Mikrotom dan Reagen)

Gamaliel Septian Airlanda, M.Pd

Mikrotom

Mikrotom adalah sebuah alat yang digunakan untuk

memotong secara tipis sebuah jaringan hewan/tumbuhan.

Microtome is the instrument which is used to cut thin section of tissue. Microtome are machines that will advance an object for a predetermined distance then slide the object to the cutting tool.

Jenis-jenis Mikrotom

Ada beberapa tipe mikrotom yang dibuat atau di desain berdasarkan tujuan

tertentu dan memiliki fungsi sesifik. Beberapa mikrotom ini diberi nama

sesuai dengan cara penggunaannya, yaitu:

1. Rotary microtome

2. Rocking microtome

3. Rotary rocking microtome

4. Base sledge microtome

5. Sliding microtome

6. Freezing microtome

Tipe-tipe Pisau pada Microtome

berdasarkan kemiringannya 1. Planar Concave

Sangat tajam tetapi dapat menghasilkan potongan sampel yang sangat lembut dan tipis.

2. Wedge Profile Knives

Bentuknya lebih seimbang dan digunakan untuk memotong sampel yang cukup keras

3. Chisel Profile memiliki bentuk mata pisau yang tumpul namun memiliki kestabilan bentuk potongan. Pisau ini menghasilkan potongan dengan ukuran relatif besar

Tipe-tipe Pisau pada

Microtome berdasarkan

bahan dasarnya 1. Glass Microtome Blades

digunakan untuk memotong sampel yang akan diamati dibawah mikroskop cahaya

2. Diamond Blades

i. Industrial grade blades digunakan untuk memotong sampel yang sangat

keras seperti gigi dan tulang. ii. Gem quality blades digunakan untuk sampel yang khusus diamati

dibawah mikroskop elektron

Rotary Microtome

Mikrotom yang digunakan untuk memotong sampel yang

akan terlihat dibawah mikroskop cahaya. Biasanya

dioperasikan secara manual dengan memutar handel

hingga mendekati mata pisau. Rotary microtome dapat

memotong sampel yang keras (biasanya sampel jaringan

dilapisi parafin).

Ketebalan yang dihasilkan antara 0,5 m hingga 60 m

Bagian-bagian Rotary

Microtome

1. Block holder

2. Knife clamps screws

3. Knife clamps

4. Block adjustment

5. Thickness gauge

6. Angle of tilt adjustment

7. Operating handle

8. Internal and

external lock

Disebut dengan nama The rotary microtome karena penggunaannya

dengan cara diputar

Mikrotom jenis ini adalah yang paling sering digunakan dalam berbagai

penelitian dasar

Pergerakan pisau pemotong secara vertikal

Biasanya menggunakan tipe wedge knife

Tingkat ketebalan ditentukan oleh micrometer screws

Mikrotom jenis ini membutuhkan bantuan parafin sebagai pelapis

sampel agar tidak rusak pada saat dipotong.

Karakteristik Rotary Microtome

Keuntungan Menggunakan Rotary

Microtome

Tidak lebih berat daripada rocking microtome

Tidak ada gelombang yang terjadi pada hasil potongan

Dapat digunakan untuk memotong jaringan yang cukup keras

Sudut kemiringan pisau dapat disesuaikan

Pisau mudah dipindahkan atau diatur

The ability to cope with very hard tissues , together with cutting good accurate section at 3mm gives the flexibility that is now required.

Electrically driven microtome can be used when the necessary to produce ribbons for serial reactions required.

This microtome are employed to their best advantage with resign embedded tissues.

Manual or electrically driven rotary microtome are successfully used in cryostats.

Rocking Microtome

• Tipe mikrotom yang paling tua

• Namanya didasarkan dari cara penggunaan handel mikrotom secara mengayun

(rocking action of the handle)

• Metode pemotongan menghasilkan bagian dari permukaan sedikit silinder

• Efektif untuk memproduksi serangkaian berkualitas baik 6-20 mikron

• Mikrotom ini tidak dapat memotong sampel yang keras seperti kayu atau tulang

• Menggunakan pisau biconcave yaang sangat tajam namun juga mudah tumpul

Bagian-bagian Rocking Microtome

Kelemahan

Ukuran sampel yang dilapisi blok parafin terbatas (kecil)

Mikrotom ini cenderung menghasilkan gelombang pada hasil pita (potongan).

Sudut kemiringan pisau tidak dapat diatur

Bentuk pita hasil potongan menyerupai busur

Sledge Microtome

Merupakan mikrotom yang digunakan untuk memotong

sampel yang lebar dan dapat digunakan untuk sampel kasar

seperti kayu dan tulang.

Digunakan untuk memotong blok parafin yang besar seperti sampel: bola mata, otak, paru-paru dan jaringan yang keras

Mikrotom ini ukurannya cukup besar dan berat

Jenis pisau yang digunakan adalah wedge atau planar

Ketebalan potongan dapat diatur melalui micrometer yang ada di bagian bawah

Cara Menggunakan

1. Mengatur ketebalan potongan dengan micormeter yang ada di bagian bawah

2. Meletakkan sampel / blok parafin

Cara Menggunakan

3. Mengatur letak pisau dan memastikan holder pada pisau telah diputar

4. Mulai memotong sampel dengan memaju mundurkan pisau

Ultra Microtome

Ultra mikrotom adalah alat yang digunakan untuk

memotong sampel dengan metode ultramicrotomy. Metode

ini adalah cara memotong yang sangat tipis dan disiapkan

untuk pengamatan pada mikroskop elektron. Ketebalan

blok parafin yang dapat digunakan tidak lebih dari 0,7 mm.

Jenis pisau yang digunakan adalah diamond knives

FREEZING MICROTOME

Sering digunakan untuk penyayatan jaringan yang tidak ditanam dalam paraffin maupun dalam celloidin, jadi jaringan yang disayat adalah jaringan yang tidak di tanam tetapi dibekukan dengan memakai gas CO2.

Keuntungan dari mikrotom ini adalah waktu yang dipakai lebih pendek, karena langsung disayat setelah proses fiksasi. Kerugiannya adalah bila temperature kamar tinggi, objek menjadi lunak sehingga sulit dipotong.

VIBRATING MICROTOME

– Instrumen dengan silet bergetar untuk memotong

jaringan. Pengguna dapat memanipulasi amplitudo

getaran, kecepatan, dan sudut pisau. potongan jaringan

tetap segar karena tertanam dalam agarose dengan suhu

rendah.

Keuntungan

– membran sel tidak patah atau rusak, sitosol tetap dalam sel.

– Dapat menjaga sel-sel hidup karena Jaringan mendapat oksigen di dalam media

agar saat pemotongan.