[I 5- };Ei~Ua~ i946 ] 0omnlmlication provisoires - Comunicazioni provvisorie 07

suinus ( a u x o - a u t o t r o p h ) , w a h r s c h e i n l i c h fiir d ie g a n z e F a m i l i e d e r M u c o r i n e e n , a l s ze i t l i ch b e g r e n z t w i r k e n d e r Zusatzzvaehslums/aktor z u b e t r a e h t e n ist .

l o r i m 6 t r i q u e . N o u s a v o n s t r a n s f o r m 6 c e t t e m 6 t h o d e e n u n e m f t h o d e p o t e n t i o m 6 t r i q u e g ~ n 6 r a l e e n u t i l i s a n t l '61ec t rode d ' a n t i m o i n e p o u r la me.~ure d u p H .

90

80

7O

60

50

40,

30,

20'

I0"

/,,

/ / a~

l . . . - t

Stunden Abb. 2. Sporenkeimung yon Rhizopus nodosus.

mit Hypoxanthin - - - ohne Hypoxanthin.

D e r F i r m a H o f f m a n n - L a R o c h e & Co., B ase l , sei f l i t d i e I r e u n d l i c h e { ) b e r l a s s u n g y o n H y p o x a n t h i n b e s t e n s

g e d a n k t . HANS HURNI

B o t a n i s c h e s I n s t i t t l t d e r [ :n ivers i tS . t B e r n , d e n 9, J a n u a r 1946.

Sbl~ll$i'~ar~ I n c a s e of Absidia coerulea, Muter mucedo, Rhizopus

nodos,ts, Rhizopus oryzae a n d Rhizopus suitors ( a u x o - a u t o t r o p h ) . H y p o x a n t h i n e e f fec t s , a s well a s in e a s e of Phycomyces Blakesleeanus ( a u x o - h e t e r o t r o p h ) , b y acce- l e r a t i o n of t h e g e r m i n a t i n g of t h e s p o r e s a t e m p o r a r y i n c r e a s e d g r o w t h in c o n t r a r y to c o n t r o l s w i t h o u t t h i s a d d i t i o n a l g r m v t h f ac to r .

M i c r o m 6 t h o d e p o t e n t i o m 6 t r i q u e p o u r l a d 6 t e r m i n a t i o n d e la c h o l i n e s t 6 r a s e

L ' a c t u a l i t 6 d u p r o b l b m e de la c h o l i n e s t 6 r a s e a s u s c i t 6 l ' id6e de l ' 6 1 a b o r a t i o n d ' u n e m 6 t h o d e e x a c t e , p r a t i q u e e t s i m p l e p o u r la d 6 t e r m i n a t i o n de la t e n e u r e n c h o l i n e s t & r a s e d u s 6 r u m s a n g u i n ou d e s t i s s u s e n se b a s a n t s u r la v i t e s s e d ' h y d r o l y s e de l ' a c 6 t y l c h o l i n e , L a l i t t6 r~ , ture (R. AMMON ~) n o u s r e n s e i g n e s u r t o u t e u n e s6rie de m 6 t h o d e s . P a r m i cel les-ci , c i t o n s ce l les d e F. HEIM e t A. FAHR; 0 . Lov;wt e t E . ~%I~AVRATIL; LINDESTR/}M, LANG et HOLTER; E . STEDMAN e t E , STEDMAN; M. RIN- ~ b e t M. I)IJOAN; RENSHA~,V et BACON; E . ~TEDMAN, l'~. STEDMAN e t L. H , EASSON; E . STEDMAN, E. ST]:.I)- ?.tAN e t A. C. WHITV:; B. VAHLQUIST, G . E . HALL e t C. C,. LUCAS; 1). GLtCK; N. O, ABDON e t B. UVNAS.

I , a m 6 t h o d e de E. STEDMAN, E , STEDMAN e t A. C, WHITE a q u i n o u s a s e r v i de b a s e p o u r l ' t q a b o r a t i o n de la m d t h o d e d6c r i t e d a n s la p r 6 e S d e n t e no te , m a n q u e d a n s c c r t a i n s c a s ( s o l u t i o n s color~es) & e x a c t i t u d e k c a u s e de la m e s u r e d u t)H ~ l ' a i d e d ' u n i n d i c a t e u r co-

t I(. A.~Mox, Ergebn. dcr F.nzymforseh. 9, 35 (1943); Pfliigers Arch. °~33, 486 (t935).

a F.. STi?D.~A,~, E. Si'r"DM:~.I~ el A. ('. XVIIITI:, Bi~x'helil, J. 27, 1050 (1933).

Description de la mdthode :

L a f igu re 1 d o n n e u n s c h 6 m a de r a p p a r e i l u t i l i s6 . D a n s u n v a s e A d o u b l e p a r o i de 30 c m a de v o l u m e , o n i n t r o d u i t 20 c m a d ' e a u b id i s t i lMe e t 0 ,2 c m a d ' u n e so lu - t i on de c h l o r h y d r a t e d ' a c 6 t y l c h o l i n e ~ 2 5 % . t i n p e t i t a g i t a t e u r r e m u e la s o l u t i o n d ' u n e m a n i ~ r e e o n s t a n t e , t a n d i s q u e le m ~ m e m o t e u r f a i t I o n c t i o n n e r u n e p e t i t e p o m p e qu i r e n o u v e l l e r e a u t i l d e (30 ° C) d a n s le e a p u e h o n e x t ~ r i e u r d u vase . U n t h e r m o r ~ g u l a t e u r d6c r i t p a r t in (te n o u s ~, u n e c h a u f f e r e t t e e t u u t h e r n m m ? e t r e ~ l e c t r i q u e a s s u r e n t la c o n s t a n c e de la t e m p e r a t u r e de I ' eau .

I , a p a r t i e i n f6 r i eu r e du v a s e e s t m u n i e de p a r t e t d ' a u t r e d ' u n e o u v e r t u r e . Celles-ci l a i s s e n t p a s s e r les 61ec t rodes d ' a n t i m o i n e e t de c a l o m e l ( l '61ectrode de c a l o m e l e s t i n d i r e c t e m e u t raise en c o n t a c t a v e c l a so lu- t i o n k l ' a i d e d ' u n e p i e r r e ponce ) . L e s d e u x e l e c t r o d e s s e n t re l i6es k u n p o t e n t i o m i . t r e . Celu i -c i p e r m e t de s u i v r e le p H de la s o l u t i o n h e x a m i n e r . F,n ef fe t , s u i v a n t

6

l:i~. 1. Seh(.ma de rappareil pour la dOermination de la cholinestt~ra~.

I Vase de r6action A double parols. 2 Electrode de calomel, :i Electrode d'antimoino. 4 R~cipient. 5 Agitateur. t; Micro-burette gradu6e a u 1]100 ¢m "~ 7 Moteur synchrone faisant :i: 100 tours A la mhnlte aetivant la

pompe fie reau tii~de et I'agitateur. k; RtSservoir d'environ 4 litres eontenant l'eau tilde. 9 Thermom~ire A contact tell(' au thermor6gulateur et h In chauf-

ferette pour nlaintenir in tempdrature de | 'eau i'l 30 ~ C.

les c o n s t a t a t i o n s e t c a l c u l s de KOLTItOFV e t H A ~ - TONG l, o n r e t r o u v e c o m m e p o t e n t i e l e n t r e l ' d l e c t r o d e d ' a n t i m o i n e e t l ' d l e c t rode fie c a l o m e l n o r m a l eu mi l i eu a l ca l in u n p o t e n t i e l de :

E = 0,0009 E 0 ,0536 p H (140 C)

p o u r u n p H : 8 a u q u e l E . STEDMAN, E. STEDMAN e t A. C. WHITE t r a v a i l l e n t , o n t r o u v e :

E = 0 ,0009 -I- 0 , 0 5 3 6 . 8 = 0,4297 V

Ce ch i f f r e e s t l ~ g 6 r e m e n t mod i f i 6 ~ 30 o C, s u i t e k la v a r i a t i o n de la t e m p e r a t u r e (la f o r m u l e ~ t a n t 6 l abo r~e ~\ 140 C) e t s u i t e ~. u n p o t e n t i e l de c o n t a c t q u i se m a n i f e s t e

i A. L. DJ.:Lm:~ois, Proc. physiol. Sot., J. Physiol. 96, (1939). '-' I(Ol. r t t l l t 'F et I IAIITONtl , Re,'. Ira','. eh i in , llil)'s-B:l.~>, 19°5, 113.

68 Vorlitufige Mitteilungen - Preliminary reports [ExPERIENTIA VOL. II12]

en t re l '~lectrode de calomel e t le fil conduc t eu r qui est en cuivre. A v a n t chaque s~rie de d6termina t ions , on in t rodu i t dans le vase, un t a m p o n au bora te de p H 8 et on d~termine au po ten t iom~t re la t ens ion 61ectrique qui se p rodui t en t re l '~lectrode de calomel et l '61ectrode d ' an t imoine . Connaissan t ce t t e tension, on vide le vase e t on y in t rodu i t 20 cm ~ d ' eau bidisti l l6e e t 0,2 cm ~ d ' u n e solut ion d 'ac6ty lchol ine k 25%. La tens ion 61ectrique qu 'on mesure ~ ce m o m e n t n ' e s t plus la m~me qu 'avec le t am pon , pu i sque le p H e s t modifi6 pa r suite de l ' hydro lyse spon tan6e de l 'ac6tylchot ine. E n rame- n a n t le p H k la va leur ini t iale 8 au m o y e n d ' u n e solut ion de soude caus t ique 0,01 N, on pa rv i en t k r6tabl ir l '6 ta t d '6qui l ibre en t re la tens ion t rouv6e avec le t a m p o n et la t ens ion p rodu i t e duns la solut ion ~ examiner . A c e mo- m e n t le ga lvanom6t re ind ique 0, on m e t un ch ronom6t re en marche et on a jou te un 16ger exe6s de soude caus t ique (:t:0,06 cma); on a t t e n d que le ga lvanom6t re revienue ~t 0, on no te le t e m p s et la quan t i t 4 de soude caus t ique a jout4e e t on r6a joute une faible quan t i t 4 de soude caus t ique ; apr~s :k 2 minutes , lorsque le ga lvanomgt re est ~ 0, on note ~ nouveau le t e m p s et la quan t i t6 de soude caus t ique ajout6e. La d6 t e rmina t i on se poursu i t ainsi p e n d a n t 15 ~t 20 minutes . Les quan t i t6 s de soude caus t ique employ6es et le t e m p s not~ p e n d a n t l ' hydro- lyse spon tan4e de l ' ac6tylchol ine nous p e r m e t t e n t de dresser une courbe.

La f igure 2 nous m on t r e une courbe qui p e r m e t de m e t t r e en valeur la precis ion avec laquelle les diff6rents po in t s p e u v e n t 8tre d6termin6s.

Conna issan t la quan t i t6 de soude caus t ique n~ces- saire pour l 'essai k blanc, on in t rodu i t dans le vase 0,2 cm s du s~rum sanguiu h examiner . On a jou te environ routes

,,! 1,2. tol 0,8, 0,6 0,4.

0.2 0

Fig. 2. Courbes d'hydrolyse de l'ac~tyleholine. En abseisses: temps ea minutes. En ordonn6es: mns NaOH N[100,

1 Hydrolyse spontan6e de Fac6tyleholine A 3 mg %. 2 Hydrolyse de l'ac6tylcholine ~ 3 mg % en pr6sence de globules

sanguins. 3 Hydrolyse spontaa6e de l'acdtylcholine A 25 nag %. 4 Hydrolyse de l'acetylcholiae It 25 mg % ca pr~sencc de s~rum

sang, tin.

tes 2 b. 3 m inu t e s =t=0,14 em a de soude caus t ique , on no te le t e m p s exac t off le ga lvanom6t re r ev ien t au 0 (pH 8). En r e t r a n c h a n t la va leur t rouv6e pour l ' hydro- lyse de l 'ac$tylchol ine lors de l 'essai ~ blanc, de la va- leur ob tenue en pr6sence du s6rum sanguin, on t rouve d ' u n e taffon exac te et. pr6cise la va leur de la cholinest6- rase en app l iquan t le calcul de E. STEDMA,W, E. STED- MAN et A . C . W m T E . La va leur de la cholinest~rase est expr im~e en cmz de soude caus t ique N/200 n~cessaires pour neut ra l i ser l 'acide ac6t ique form6 p e n d a n t 20 mi- nu tes pa r l ' hydro lyse de l 'ac6tylchol ine en pr6sence de 1 cm 3 de s6rum.

Ci-dessous nous donnons un exemple :

Proto¢oll¢ de l'expdrience I I I (20 septembre 1945) {fig. 2): Temp6rature 30 ° C; pH 8; mV = 407; titre NaOH:0,0097 N.

Valeur de l'hydrolyse sponta- rife de l'ac6tylcholine exprim6e en cm 3 NaOH correspondant

,~ un temps d6termia6

cm s de NaOH Temps

0,19 = 0 0 , 2 6 = 2 " 2 0 ' "

0,38 = 6' 0,47 = 9" 0,54 = 11 '35" 0,61 = 14"25"' 0,69 = 17"25" 0,78 = 20 '30"

Valeur de l'hydrolyse de l'a- c6tyleholine en pr6sence du s6rum sanguin exprim6e en cm a NaOH co~espondant h un

temps d6termin6

cm s de NaOH Temps

0,40 = 3 '20" 0,56 = 5'55'" 0,77 = 8"35" 0,92 = 11'25" 1,10 = 14'25" 1,28 = 1 7 ' i 5 " 1 , 4 7 = 20"i0"" 1,60 = 22'40"

Pour l ' hydro lyse spontan6e de l 'ac6tylchol iue en 20 minu tes nous t rouvons la valeur de A = expr im6e en cm a N a O H . 0,02 N pour 1 cm s de la solut ion de l 'ac6- tylchol ine, de la fa~on su ivan te :

0,0097 • 5 cm 3 N a O H . 20' .

0,02 ,4 = 20,30 ~, ( temps dc la dOterminat ion) .

.4--- 0 ,59 .40 .0 ,485 .5 41 =1,395.

De m6me pour B = va lcur de l ' hydro lyse de l 'ac4tyl- choline en presence du s6rum, nous t rouvons :

1,20- 60.0,485- 5 B = 3,725.

58

Eu r e t r a n c h a n t la va teur `4 de B, nous t rouvons :

3,725 - 1,395= 2,83.

Quan t on co mp are nos valeurs t rouv6es pour t ' hydro- lyse spontan~e de l ' ac6tylchol ine avec celles t rouv6es par E. STEDMAN, E. ST~DMAN et A. C. WroTE, on co n s t a t e une sensible diff6rence. Cet te diff6rence dol t ~tre imput6e au fair que nous t rava i l lons tou jours en milieu 16g6rement atcalin, ce qui favofise l ' hydro lyse de l 'ac6tylchol ine. E n effet, nous in t roduisons tou jours un 16ger exc6s de soude caus t ique et nous d6 te rminons le t e m p s n6cessaire pour le r e tour au p H 8, t and i s que les au teur s pr6cit6s fon t la d6 t e rmina t i on en milieu acide et ne r a m 6 n e n t que tou tes les 5 minu tes la solut ion au p H 8. La m6thode que nous avons adopt6e rend la md- t h o d e p o t en t i o m6 t r i q u e b eau co u p plus p ra t ique . Elle n ' inf luence en rien Fac t ion de la chol ines t6rase du sang, puisque, su ivan t les donn6es de D, GLICK, ce t t e derni~re n ' e s t que tr~s peu influenc6e pa r les var ia t ions du p H au t o u r de la va leur op t imale pour l ' hydro lyse (pH 8) de l 'ac6tylchol ine.

Les d6 te rmina t ions de contr61e que nous avons effec- tu6es en u t i l i san t les deux m4thodes , celle de E. STED- MAN, E. S'rEDMAN et A.C.WHIT~ e t celle d6cri te pa r nous, m o n t r e n t c l a i r emen t que la va leur de la cholin- est6rase du s6rum sanguin chez le chien est la m~me duns les deux cas.

[xS, F~Im~'AR x946 ] Communications provi~oircs - Comunieazk)ni provvisoric 69

ChoIinest6rase du s6rum Cholinest6rase du s6mm sanguin err milieu aeide sanguin en milieu basique

cm s NaOH N/200

1 o 1,453 20 ] ,19 3" 1.74

rm a NaOH N/2~)O

1 ° 1,37 20 1,25 30 1,67

Sensibi t i td de ta mdthode:

Nous t r i m s fa i t p lus ieurs essais en double , soi t essais b lanc , soi t dosages de la chol ines t6rase du s6rum

sangu in et a v o n s pu c o n s t a t e r que les r~su l t a t s ne dif- f6rent j a m a i s de plus de 5%.

l "alcurs de l'hydr<dyse de l'acdtylcholine exprimges cn c)n '~ NaOlI N/200

Solut ions aquenses d ' acd ty lcho l ine (0.2 cm -~ "~ ~5%)

1,32 1,33 1,21

1,46 ~ 1,091 1,395/ 1,091 }

Valeurs de l'hydrolyse de l'aedtylcholine exprimdes en cm a NaOH N /~O0

E n pr6sence de sdrum sangu in (0,2 cm:')

2,209 2,17 2,33 J 2.2 }

1,797~ , m o l

Comme le g a l v a n o m ~ t r e accuse des d6v ia t ions encore appr6c iab les h des c o n c e n t r a t i o n s d ' ac6 ty lcho l ine de 3 ,~ 4 m g %, nous avons pu su ivre a i s6men t l ' hydro lyse spon- tan~e de l ' ac6 ty lcho l ine ~ ce t t e c o n c e n t r a t i o n en d i l uan t la soude caus t ique h la c o n c e n t r a t i o n de N]500. Ceci nous a pe rmis d ' 6 t e n d r e la m d t h o d e au dosage de la chol in- es t6rase des globules sanguins . E n effet, B. MENm':L et H. RUDNEY t, a ins i que B. MENDEL, D. MUNDELL et H. RVDNEY 2 o n t pu m e t t r e en 6vidence que l ' ac t iv i t6 de la chol ines tdrase des globules s angu ins est m a x i m a l e

la c o n c e n t r a t i o n de 3 mg % d ' ac f ty l cho l ine . L a f igure 2 nous d o n n e deux courbes : I 0 de l ' hyd ro ly se spon tan~e de l ' ac6 ty lchol ine h ce t te

faible c o n c e n t r a t i o n ; 20 de l ' h y d r o l y s e d e l ' ac~ ty lcho l ine en pr$sence des

g l o b u l e s s angu ins (0,2 cruZ). Nous c o m m u n i q u e r o n s clans u n t r a v a i l d6tail t~ les

r~su t ta t s de nos o b s e r v a t i o n s c o n c e r n a n t la chol in- es t6rase dn s6rum sanguin , des globules sangu ins et des

t issus. A . L . DELAUNOIS et H.CAsn,:R

I n s t i t u t J. F. I I e y m a n s de P h a r m a c o d y n a m i e de l 'Un ive r s i t6 dc ( ; and , le 15 j a n v i e r 1946.

S u m m a r y

A simple very sens i t ive and usefull m e t h o d is describ- ed for t h e p o t e n t i o m e t r i c m i c r o - d e t e r m i n a t i o n of t h e cho l ines te rase of b lood serum, globules a n d t issues, us ing a n o r d i n a r y p o t e n t i o m e t e r a n d an a n t i m o n i u m electrode. Th i s m e t h o d m a k e s i t possible to d e t e r m i n e t he cholin- es te rase in so lu t ions of ace ty lcho l ine down to 3 mg %.

1 B. MENDEL et H. RUDNEY, Bioehem. J. 37, 59 (1943). z B. MENDF.L, D. MIINDELL et tL R~'D~EV, Biochem. J. 37, 473

(1943).

S u b s t a n z e n m i t a s k a r i z i d e r W i r k u n g

Nat t i r l i che Insek t i z ide w u r d e n schon ve r sch ieden t - ]ich, zum Tell m i t Erfolg, als A n t h e h n i n t i k a v e r s n c h t x-'~. F.s schien uns desha lb in t e re s san t , a u c h das D D T auf seine a n t h e l m i n t i s c h e n E i g e n s c h a f t e n zu pri ifen, ins- besondere d a dieser Stoff fiir d en W a r m b l i i t e r weit- gehend ungi f t ig is t 4,s. Bei de r T e s t i e r u n g de r S u b s t a n z in 1% 0-Suspension in B u n g e - L 6 s u n g U a n Schweine- a ska r iden (Ascaris lumbricoides) n a c h LAMSON~ u n d Mi ta rbe i t e r oder a m R e g e n w u r m n a c h JENKINS 8 oder STRAtrB g i ibe r leb ten die W i i r m e r abe r eine E i mv i rk u n g s - zeit yon 7 S t u n d e n ohne i rgendwelche Sch~tdigung.

Nach diesem nega t i ven R e s u l t a t w a n d t e n wir uns d em Stoff I zu, der u n t e r d em D R P . 673246 als Insek t i z id c ingcf i ihr t wurde . Bei der Pr i i fung s t i rb t der R e g e n w u r m in e iner K o n z e n t r a t i o n y o n 1 :5000 n a c h 2 - - 3 Mi n u t en u n t e r h e f t i g s t e n Zuckungen . E b e n s o wi rksam erwies sich das Benzo lde r iva t I I und die T b l y l v e r b i n d u n g I I I . A u c h an Askar iden erwiesen sich die drei V e r b i n d u n g e n als g u t wirksam.

II t

R2

I : R I = H ; R,,=CI l I : R t = H ; R . , = H

I I I : R l = H ; R 2 = - C I ] n IV: Rx=-COCH~CH:CO_,H; R.,=~C1

V : [( l = -- COCH,,CH._,CO~tf ; R.~ =" H \ r l : R t = - COCH.,CHzC().,H ; R., =- CI I:t

Wic aus der u n t c n s t e h e n d e n g raph i schen Dars te l - h m g ers icht l ich ist, e r re ich t die Wirkungss t t i rke tier S u b s t a n z I I an Aska r iden diejenige des Thymols , (Die S u b s t a n z e n I u n d I l l geben m i t sehr ger ingen Ab- we ichungen die gle ichen K u r v e n wie II .) Dabei i s t noch zu beach t en , d ab die Wasser l6s l ichkei t y o n I, I I u n d I I I viel ger inger ist als die yon Thymol , das somi t besser zur W i r k u n g gelangen kaun .

iEinudrkungszeit in Min. - - I L

345-0 . . . . . . . Thgmol

/0 20 30 40 50 60 70 80 90 tOO%tote Tiere

Zur Pr t i fung an Askar iden v e r w e n d e t e n wir eine 1% 0-Suspension, die t i ir Regenwi i rmer i n n e r h a l b e iner halber t Minu te t6d l ich wi rk t ; in 0 b e r e i n s t i m m u n g mi t I.AMSON '° k o n n t e n auch wir fests tel len, dab R e g e n -

t M. ANC, LAm~, O. GAm~IN, R. ARco.uv, 131. des Sei. plmrmaeol. 3.% 2~ (1932).

2 E. P~Rrto% B1. des Sci, pharmacol. 39, 42 (1932). a A. JoR~s, H. WOLTER, Klin. Wsehr. 18, 885 (1939). 4 p. L£vGr.m, R. PULVF.R, C. MoNxmm., Helv. physiol, acta

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