Manual Qca de Prod Naturales- ZNJ

8/18/2019 Manual Qca de Prod Naturales- ZNJ

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DIRECTORIO

MTRO. EMILIO JOSÉ BAÑOS ARDAVÍNRECTOR

MTRO. FRANCISCO FERNANDO EUGENIO URRUTIA ALBISUAVICE-RECTOR ACADÉMICO

M. enCs. MARIANO SÁNCHEZ CUEVASDIRECTOR DEL DEPARTAMENTO DE

CIENCIAS BIOLÓGICAS

M.C. MARIA CRISTINA MIRANDA VERGARA

COORDINADORA DEL ÁREA O FACULTAD

M.C. ZAIDA NELLY JUÁREZAUTOR

MANUAL DE PRÁCTICAS LABORATORIO DEQUÍMICA DE PRODUCTOS NATURALES


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EXPRESIÓN REFLEXIVA

La Química de Productos Naturales de origen vegetal ó animal es degran utilidad al hombre en la búsqueda de nuevos fármacos y en elaprovechamiento integral de los metabolitos secundarios que tienenaplicación en áreas como la de alimentos, control de plagas,toxicología, etc. En este curso, se obtendrán habilidades en el uso detécnicas de extracción, separación e identificación de los principiosactivos, necesarias para la realización de los ensayos biológicos que

demuestren su actividad.


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ÍndiceEXPRESIÓN REFLEXIVA ............................ ...................... ............................... .................... ..... 3

INTRODUCCIÓN ........................................................................................................................ 5

NORMAS DE SEGURIDAD DE LOS LABORATORIOS ......................................................... 6

REGLAS DE LABORATORIO PARA ALUMNOS DE QUÍMICA DE PRODUCTOSNATURALES ............................................................................................................................... 8

CRITERIOS DE EVALUACIÓN ............................................................................................... 10

Código de conducta .......................................................................................................... 10

Requisitos para hacer el reporte........................................................................................ 10

Procedimientos de evaluación .......................................................................................... 10

PROPÓSITO DEL LABORATORIO ........................................................................................ 11

ANÁLISIS FITOQUÍMICO PRELIMINAR ................................................................... 12

FLAVONOIDES .............................................................................................................. 16

FLAVONOIDES .............................................................................................................. 21

PRÁCTICA 3 ............................................................................................................................. 23

SAPONÓSIDOS ............................................................................................................... 23

PRÁCTICA 4 ............................................................................................................................. 26

ESENCIAS ....................................................................................................................... 26

PRÁCTICA 5 ............................................................................................................................. 29

HETERÓSIDOS ANTRAQUINÓNICOS ....................................................................... 29

PRÁCTICA 6 ............................................................................................................................. 33

ALCALOIDES ................................................................................................................. 33

PRÁCTICA 7 ............................................................................................................................. 39

RECONOCIMIENTO DE TANINOS ............................................................................. 39

PRÁCTICA 8 ............................................................................................................................. 41

OBTENCIÓN DE UN EXTRACTO VEGETAL ............................................................ 41

PRÁCTICA 9 ............................................................................................................................. 43

CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA Y PLACA FINA ............................................... 43

BIBLIOGRAFÍA ......................................................................................................................... 46


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INTRODUCCIÓN

La Química de los Productos Naturales se refiere a la investigaciónde los metabolitos secundarios o "metabolitos especiales" de fuentesnaturales de origen vegetal, animal, marino, fúngico y bacteriano.

Se consideran Productos Naturales a todos los compuestos orgánicosprovenientes del metabolismo secundario o también llamadometabolismo especial que, independientemente del peso molecular(PM), se producen en ese organismo vivo como respuesta ante las

condiciones externas, ya sea: estrés hídrico, térmico, de super-población y radiante, siendo en general señales químicas frente aherbivoría, plagas, patógenos y simbiosis con otros organismos. Estosson justamente compuestos de interés porque son activos enorganismos animales, incluido el hombre.


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NORMAS DE SEGURIDAD DE LOS LABORATORIOS

Localiza los dispositivos de seguridad más próximos.Estos dispositivos son elementos tales como extintores, lavaojos, ducha deseguridad, mantas anti-fuego, salida de emergencia. etc. Infórmate sobre sufuncionamiento.

En caso de accidente.Considera la seguridad de sus compañeros, por ello el laboratorio es un lugarpara trabajar con seriedad. En caso de cualquier accidente personal o del materialde trabajo, notifíquese inmediatamente al maestro.

Infórmate sobre las medidas básicas de seguridad.El trabajo en el laboratorio exige conocer una serie de medidas básicas deseguridad que son las que intenta recoger esta guía.

Presta atención a las medidas específicas de seguridad.Las operaciones que se realizan en algunas prácticas requieren información

específica de seguridad. Estas instrucciones son dadas por el profesor y/orecogidas en el guión de laboratorio y debes de prestarles una especial atención.

En caso de duda, consulta al profesor.Cualquier duda que tengas, consúltala con tu profesor. Recuerda que no estápermitido realizar ninguna experiencia no autorizada por tu profesor.

Cuida tus ojos.Los ojos son particularmente susceptibles de daño permanente por productoscorrosivos, así como por salpicaduras de partículas.Es obligatorio usar gafas de seguridad siempre que se esté en un laboratorio

donde los ojos puedan resultar dañados. No lleves lentes de contacto en ellaboratorio, ya que en caso de accidente, las salpicaduras de productos químicoso sus vapores pueden pasar detrás de las lentes y provocar lesiones en los ojos.

Vestuario de laboratorio.El uso de bata es obligatorio en el laboratorio, ya que por mucho cuidado que setenga al trabajar, las salpicaduras de productos químicos son inevitables. La bataserá preferentemente de algodón, porque en caso de accidente, otros tejidospueden adherirse a la piel, aumentando el daño.

Usa guantes.


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Es recomendable usar guantes, sobre todo cuando se utilizan sustanciascorrosivas o tóxicas. En ocasiones, pueden ser recomendables los guantes de unsólo uso.


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REGLAS DE LABORATORIO PARA ALUMNOS DEQUÍMICA DE PRODUCTOS NATURALES

1. Todos los estudiantes deberán usar bata blanca del laboratorio ycorrectamente abotonada.

2. Está prohibido fumar, comer, beber o introducir alimentos al laboratorio aúnfuera de la hora de práctica.

3. La hora de entrada tiene 5 minutos de tolerancia, después no se permitirá el

acceso al laboratorio.4. Coloca tus objetos personales en el lugar que te indique tu profesor, esto espara evitar la acumulación de cosas en el área de trabajo

5. Mantener el orden durante el transcurso de la práctica y respeto a la clase y alos compañeros.

6. Se formarán equipos permanentes de trabajo y las faltas de asistencia aalguna práctica no podrán ser repuestas con otro grupo.

7. Por cada práctica que se realice los alumnos tendrán que entregar un reportepor equipo de la misma, que entregarán cada 8 días.

8. Cada material que se rompa o extravíe, deberá ser repuesto con materialnuevo (amparado con la nota de compra).

9. Antes de iniciar la práctica lea cuidadosamente las instrucciones, si noentiende, pregunte al maestro.

10. Cada equipo deberá responsabilizarse por la limpieza inmediata del material yárea de trabajo.

11. Al destapar cualquier frasco de sustancias, tápese de inmediato después deutilizarlo y evite cambiar los tapones.

12. No arrojar sólidos al lavadero o canales de desagüe.

13. Queda estrictamente prohibido sacar cualquier instrumento o equipo dellaboratorio.

14. Al final de la práctica entregar todo el material o equipo al maestro.

15. Al final de cada práctica colocar los bancos en su lugar y lavarse las manos


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con agua y jabón.


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CRITERIOS DE EVALUACIÓN

Código de conducta

• Tolerancia de 5 minutos para entrar al laboratorio. Después de este tiempono se permitirá el acceso de los alumnos.

• No se permite el uso de celulares durante las sesiones de laboratorio.• Asistencia a todas las prácticas con bata blanca, zapatos cerrados con

suela antiderrapante y lentes de seguridad.

El equipo llevará el manual engargolado a las prácticas del laboratorio.

El alumno se compromete a leer previamente las prácticas del laboratorio.Las inasistencias se justifican solamente con la carta expedida por los Directivosde la CoordinaciónEl alumno que falte a la práctica de laboratorio pierde derecho a su evaluación.

Requisitos para hacer el reporte

PORTADANombre de la universidad, nombre de la práctica y número, nombre

completo de los integrantes del equipoREPORTE

OBJETIVO: Conoce los objetivos (propios del equipo) de la práctica).PROCEDIMIENTO: Obtiene el procedimiento del manual de cada prácticaRESULTADOS: Obtiene los resultados esperados (dibujos o valores).DISCUSIÓN FUNDAMENTADA: Discute los resultados y/o cambios que seobtuvieron en la práctica y fundamenta con los conocimientos teóricos,bibliográficos y de artículos correspondientes al tema de la práctica.CUESTIONARIO: Contesta correctamente las preguntas.CONCLUSIÓN: Concluye con un comentario o idea final que resuma los aspectos

más importantes tanto del tema que se trabajó como de los resultados de laactividad que se realizó en la prácticaBIBLIOGRAFÍAEl reporte se entrega impreso a la semana de realizada.Si hay clonación de práctica se les anulará la calificación del reporte a los dosequipos

Procedimientos de evaluación

Reporte de laboratorio 55%


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Diagramas 15%Seguridad 20%Trabajo final 10%

Total 100%

Esto equivale al 20% de la calificación final de la materia.

La calificación mínima PARA APROBAR EL LABORATORIO es de 7.0. Paraaprobar la materia es indispensable tener aprobada la teoría y el laboratorio.

PROPÓSITO DEL LABORATORIO

Familiarizar al estudiante con las operaciones y reacciones más usuales de laquímica de productos naturales, así como sus limitaciones y riesgos.

Enseñarles los principios científicos sobre los que se basa la química de

productos naturales.

El verdadero éxito se caracteriza por la realización eficaz de cada experiencia.

Incrementar su habilidad manual, criterio y confianza para efectuar reacciones.


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PRÁCTICA 1

ANÁLISIS FITOQUÍMICO PRELIMINAR

OBJETIVO

Efectuar un análisis preliminar al material vegetal, para detectar la presenciade compuestos activos de interés, para su posterior extracción.

INTRODUCCIÓN

El trabajo de investigación bibliográfica constituye el fundamento de cualquierproyecto y determina la diferencia entre un buen proyecto y otro que no lo es.

Una revisión bibliográfica consta de dos partes:

- Búsqueda de bibliografía: buscar, ordenar, gestionar y asimilar la informacióndisponible.- Revisión de la bibliografía: comprender lo leído y extraer las ideas principalespara nuestro propósito.

La investigación bibliográfica forma parte importante de la introducción al proyectoinformático y tiene diversas finalidades:

- Justifica el proyecto, esto es. Demuestra que el proyecto vale la pena y que

hemos elegido un tema relevante. Además, demuestra que el proyecto es originaly no repite el trabajo de otros.- Sitúa el proyecto dentro de un contexto, evaluando la investigación anterior yactual en dicho campo. También muestra cómo se engloba el proyecto en estecontexto y en qué forma hace alguna contribución nueva.- Permite que otros investigadores consulten las fuentes bibliográficas que hemoscitado y puedan entender y, en su caso, continuar nuestro trabajo.

Si imaginamos que un proyecto es como un edificio en construcción, los cimientosdeberán ser siempre la investigación bibliográfica. A menudo los estudiantescomienzan sus proyectos en la “planta baja”, no por los cimientos, ya que tienden

a exponer sus ideas sin justificarlas y fundamentarlas debidamente, sin ubicarlasen el contexto adecuado. El resultado es un proyecto que no está correctamenteconstruido, hay fallos en la publicación, en la perspectiva de la investigación, en ladebilidad de las conclusiones y en la ignorancia de otros impactos e influenciasque pudiera haber tenido el esfuerzo hecho.

Una revisión bibliográfica no debería realizarse de una forma irresponsable, sinoque debe hacerse desde una perspectiva estructurada y profesional. Leercualquier cosa que caiga en nuestras manos es aburrido y, desde luego, es unapérdida de tiempo. Por ello, es importante dirigir la búsqueda bibliográfica hacialos artículos o libros relevantes. Por supuesto, cuando se inicia un proceso de


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búsqueda bibliográfica no se sabe que material es el más relevante; sin embargo,a medida que se avanza en la investigación, debemos delimitar la búsqueda todolo que sea posible.

Hay dos “reglas de oro” a recordar, cuando se realice una búsquedabibliográfica:- El proceso de búsqueda de información puede durar mucho tiempo. Por tanto,hay que empezar lo antes posible y no recopilar material que no esté relacionadocon el tema elegido.- Debe anotar las referencias completas de cualquier tipo de material que seobtenga. Esto ahorrará tiempo al final del proyecto, pues no habrá quemalgastarlo en volver a la biblioteca a buscar los detalles concretos de losartículos que deseemos citas.

Formatos de la Información.

La información se presenta en multitud de formatos diferentes, unos másaccesibles más reconocidos y mejor valorados “académicamente” que otros. Lossiguientes apartados resumen las distintas formas en las que aparece el materialbibliográfico.

Libros.

Los libros son el punto de partida de cualquier investigación bibliográfica, puesproporcionan una buena base y una visión global adecuada del tema elegido. Sinembargo, hay que tener en cuenta que habitualmente, los libros representan

conocimiento consolidado y por ello las ideas que presentan, estandohabitualmente consolidadas, no son de última actualidad.

Hay que conseguir cuanto antes el software necesario para el trabajo(herramientas, librerías, componentes…), pues no es deseable estar a la mitaddel proyecto y darse cuenta que el software que necesitamos ya no estádisponible o es muy caro.

Internet.

Internet aparece como una valiosa fuente de información, pero se debe tratar

con extrema cautela. Afortunadamente, cada vez existen una mayor cantidad depáginas de información de gran valor; éstas aparecen junto a otras menos fiablesy por ello hay que saber seleccionar. Internet puede ser una herramienta útil debúsqueda para material académico, información de empresas, software, y amenudo podemos encontrar también trabajos publicados (artículos de revistas,por ejemplo) que son difíciles de obtener mediante procedimientos normales.

Evaluación crítica.

Normalmente cuando se tiene que hacer una evaluación y la gente escucha o


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lee la palabra “criticar” cree que se emplea en un sentido negativo, sin embargoevaluar críticamente es algo más que entender el tema que se estudia y aprenderde memoria alguna de sus partes. Leer y entender lo que se ha leído es

solamente la primera parte del proceso. Además de conocer sus limitaciones, suscontradicciones, sus áreas de desarrollo y los callejones sin salida que puedatener. El punto crucial de la evaluación crítica es pensar sobre lo que se estáleyendo.

No hay reglas específicas e infalibles que puedan aplicar para escribir unaperfecta revisión bibliográfica, ya que es algo que se mejora con la práctica.

Sin embargo hay que recordar que una revisión bibliográfica no es un informeque enumera los artículos y libros que hemos leído, sean relevantes o no. Hayque ser selectivo en lo que se cita.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

- Visita a la Biblioteca

METODOLOGÍA

La información sobre estudios químicos de plantas que les serán asignadas ysustancias aisladas de ellas, se publica en revistas de diversas áreas, comoFarmacia, Agricultura, Medicina, Botánica y otras. Por lo que la localización de losdatos sobre un vegetal específico puede ser difícil.

Para hacer el trabajo de investigación más fácil se cuenta con el ChemicalAbstracts que condensa resúmenes respecto a cualquier aspecto químicoinvestigado en una especie vegetal. La información se busca en sus índices de lasiguiente manera.

Busque en diccionarios de química, libros de texto, monografías y revistas derepaso. Se debe empezar por las publicaciones más recientes que abarcanmayor cantidad de referencias.Se deben anotar el nombre del autor, el título del artículo y la revista dondeapareció, la información de importancia, así como el volumen, la página, el año.Anote también los volúmenes, páginas o columnas y posición del artículo y seprocede a revisarlos seleccionando el de importancia.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

1. Con ayuda de lo antes explicado cada equipo deberá hacer una investigaciónbibliográfica de la especie asignada por el Profesor del Laboratorio, sobre algunosde los siguientes tópicos:

a) Botánica. Especifica la función de los componentes en la planta.b) Bioquímica. Especifica las reacciones químicas enzimáticas, en las que el

compuesto participa en la planta.c) Química. Específica las propiedades químicas y reacciones no enzimáticas

del compuesto.


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d) Farmacéutica. Especifica los constituyentes de la planta, útiles en medicina.

Cada equipo entregará fotocopias del material recopilado, así como un resumen

sobre lo más sobresaliente de su investigación.

DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFIA


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PRÁCTICA 2 (PRIMERA PARTE)

FLAVONOIDES

OBJETIVO

Efectuar en el laboratorio una Extracción de Hesperidina, uno de los Flavonoidesde la naranja.

INTRODUCCIÓN

Con este nombre se designa de manera general a una serie de compuestos,

ampliamente distribuidos en el reino vegetal, responsables, en muchas ocasiones,de la coloración de las flores, frutos e incluso de determinadas coloraciones de lashojas.

Químicamente poseen estructuras muy semejantes, ya que todos ellos tienen unorigen biosintético, común, con un esqueleto del tipo C6-C3-C6 y la gran mayoríaderivan de la fenil-2-cromona, diferenciándose unos de los otros por el grado deoxidación de su molécula. En la naturaleza pueden encontrarse en forma libre oen forma de heterósidos, por unión a la estructura de la fenil-2-cromona de una ovarias osas (bien a través de un puente oxídico o en uniones carbono-carbono,formando C-heterósidos).

Atendiendo a su naturaleza química, pueden establecerse los siguientes grupos:

Flavonas y Flavonoles:

Se diferencian entre sí en que todos los favonoles llevan un grupo hidroxilo en C3, mientras que las flavonas carecen de él. A ambos grupos pertenecen lamayoría de los flavonoides conocidos. También, y de una manera general, portandos hidroxilos en C6 y C7 que pueden estar libres, eterificados, esterificados ounidos a moléculas de osas, formando los correspondientes heterósidos. En elcaso de los C-heterósidos, la unión se realiza en el carbono anomérico de la osay el C6 o C8. El fenilo (anillo B) lleva generalmente un grupo hidroxilo en C4’y esfrecuente la presencia de otro grupo hidroxilo en C3’, ambos, libres, eterificados o

esterificados.

OHO

OH

OH O

OH

FLAVONAS

OH

O

OH

OH

HO O

OH

FLAVONOLES


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Las flavanonas y flavanoles se pueden considerar derivados de las estructurasde flavonas y flavonoles, respectivamente, por la hidrogenación del doble enlace

en C2-C3.

OH

O

OH

HO O

OH

FLAVANONAS

OH

O

OH

HO O

OH

OH

DIHIDROFLAVONOLES

Chalconas.

La apertura del heterociclo da lugar a este tipo de moléculas, manteniéndosecasi constante los sustituyentes en el resto de la estructura.

HO

O

OH

OH

CHALCONAS

Auronas.

Se caracterizan por la sustitución en la molécula del anillo piránico por un anillofuránico.

OHO

O

OH

AURONAS

Propiedades físico-químicas

Los heterósidos son generalmente solubles en agua, metanol, etanol, mezclashirdroalcohólicas e insolubles en disolventes apolares (cloroformo, benceno, etc.),al contrario de las agliconas que son solubles en estos últimos disolventes, einsolubles en agua, aunque, si disponen de grupos fenólicos libres, se disuelvenen soluciones acuosas alcalinas.


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La extracción a partir del vegetal vendrá condicionada por la solubilidadparticular del heterósido. De manera general, se pueden extraer con mezclashidroalcohólicas en caliente. La solución obtenida es destilada al vacío para la

completa eliminación del alcohol y, posteriormente es tratada con éter de petróleo,cloroformo, al objeto de eliminar lípidos, clorofilas, agliconas, etc. A continuación,los heterósidos pueden ser extraídos con acetato de etilo y proceder entonces asu purificación, generalmente mediante técnicas cromatográficas.

Reacciones de identificación

De forma general, dan reacciones positivas con reactivos generales de fenoles:Cloruro férrico y ácido sulfanílicodiazotado, por citar los más usuales.

Dentro de las reacciones más específicas, se puede señalar aquella coloraciónque se origina cuando se trata una solución hidroalcohólica de flavonoides con

magnesio metálico y HCl (reacción de Shibata) o la aparición de coloración rojocereza si existen flavonas y dihidroflavanoles, con Zinc y HCl.

Las agliconas poseen espectros de absorción en la región ultravioletacaracterísticos, que sufren alteraciones en presencia de determinados reactivos(cloruro de aluminio, acetato de sodio, etc.) y que ofrecen valiosos datos para lacaracterización de los mismos.La cromatografía en capa fina es una técnica muy utilizada para poner demanifiesto la presencia de agliconas y heterósidos a partir de extractos vegetales.Algunos flavonoides son coloreados (chalconas y auronas, por ejemplo), lo quepermite visualización directamente en el cromatograma: La utilización de diversosreactivos (vapores de amoniaco, tricloruro de aluminio, etc.) y la observación de

las placas antes y después del revelado, a la luz visible y ultravioleta, permite, enmuchas ocasiones, no sólo detectar la presencia de estos compuestos, sinoobtener información acerca del tipo de flavonoide presente.

La hesperidina es un heterósido aislado en 1828 por Leberton a partir del tejidoesponjoso interno de la piel de las naranjas (Citrus sinensis ). No es un compuestoamargo, al contrario que su isómero, la neohesperidina (presente en la naranjaamarga, Citrus aurantium , posee la propiedad de reducir la fragilidad de loscapilares sanguíneos.

La hesperidina puede aislarse con gran facilidad, y el principio de la prácticaconsiste en extraer dicho compuesto con metanol, previa eliminación de lasesencias con éter de petróleo, hexano o cloroformo, concluyendo con la

hirdrólisis ácida para la separación del aglicón (hesperitina) y la porciónglicosídica de la molécula (rutinosa: ramnosa más glucosa).


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HesperidinaMATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS (para las prácticas 1 y 2)

Reactivos

Agua destiladaMuestra. Cáscara de naranja seca.0.5ml de ácido clorhídricoGotas de cloruro Férrico 1%(p/v)FormamidaMagnesio en cinta

Etanol100ml de metanol0.8mL de ácido Sulfhídrico80 mL de cloroformo20mL de formamida20mL de etilen Glicol0.1g de sulfato de sodio anhidro1mL de fenol10 ml de cloroformo: Acetato de Etilo(60:40) (v/v)

Materiales

Cámara de Cromatografía (vaso + cajaPetri)Capilares

1 Conexión en Y (inversa) 24/0 paradestilación1 Conexión porta termómetro 14/24, 24/401 Termómetro esmerilado 14/233 Pinzas de 3 dedos con nuez.PortaobjetosEmbudo Büchner de plásticoMortero de porcelana con pistilo

Embudo de separaciónEmbudo estriadoPapel filtro WhatmanBaño MaríaVasos de 10 mLBaño de arena.2 tubos de ensayoProbeta de 25 y 50 mL1 soporte universal

Equipos

1 parrilla de calentamientoRotavapor y bomba de vacíoMicroscopio

Nota: TODO EL MATERIAL, ASÍ COMO LAS CANTIDADES DE REACTIVOSSE AJUSTARÁN A LA CANTIDAD DE MUESTRA DE LA CUAL SE DISPONE.¡EN TODAS LAS PRÁCTICAS!


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MÉTODOLOGÍA

Método A. Extracción hesperidina y hesperitina del pericarpio de la

naranja.

Pese10 g de polvo de pericarpio de naranja en un vaso de precipitados con30 mL de cloroformo y agite unos 10 minutos, El cloroformo eliminará grasas yotras sustancias no glucosídicas. Decante el cloroformo y ubíquelo en el garrafónde desechos correspondiente.

Pase el pericarpio de la naranja a un matraz redondo de 250 mL y añada100 mL de metanol, refluje durante 20 minutos.

Apague el calentamiento, espere a que se enfríe el sistema. (No retire el

agua al refrigerante hasta que finalice la ebullición dentro del matraz).A continuación, con mucho cuidado decante el matraz a un vaso de 100

mL.La solución filtrada, que contiene entre otros compuestos la hesperidina, seconcentra a vacío en un rotavapor hasta consistencia semilíquida (consistenciacomo la miel).

Al extracto obtenido dentro del matraz, se le añaden 20 mL de formamida,calentando en un baño María de 60-70 oC durante 3 minutos.

Filtre al vacío la solución y al filtrado colóquelo en un vaso de 250 mL yañádale 100 mL de agua destilada, dejando la solución en reposo hasta el díasiguiente, para permitir la cristalización de la hesperidina.


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PRÁCTICA 2 (SEGUNDA PARTE)

FLAVONOIDES

Segundo día.

El precipitado de hesperidina se recupera por filtración al vacío.Una pequeña cantidad del precipitado se observa al microscopio, comprobando

la existencia de cristales de hesperidina, en forma de finas agujas.Con una espátula se traslada todo el precipitado, a un erlenmeyer (o vaso de

precipitados de 100 mL) y se añaden 20 mL de etilenglicol, calentandoligeramente en baño de agua.

Filtre si es preciso y el líquido filtrado constituye lo que de ahora en adelante

denominaremos “solución de hesperidina”.Hidrólisis de la Hesperidina

En un tubo de ensaye se colocan 2 mL de “solución de hesperidina” y seadicionan 0.5 mL de ácido sulfúrico concentrado, se mezcla y se calienta durante30 minutos en un baño de agua a ebullición.

Finalizando este tiempo, se vierten en un embudo de separación y se añaden50 mL de agua destilada. Se extrae dos veces con dos porciones de 25 mL decloroformo.

Se recuperan las fracciones de cloroformo y se colocan en un vaso limpio y

seco. En otro recipiente recupere la fase acuosa y guárdela para trabajarposteriormente con ella.A la fase clorofórmica (orgánica) se le añade 0.1 g de sulfato de sodio anhidro

para deshidratar.Después de unos minutos se decanta a un vaso limpio y seco y se concentra,

evaporándose en un baño de arena. Concentrar hasta que quede una cuartaparte del volumen original (no debe llegar a sequedad).

Con este volumen realizará una cromatografía en capa fina, donde se detectarála presencia de hesperitina, aglicona de la hesperidina.

Caracterización de azúcares

En la fase acuosa que guardó, se pondrá de manifiesto la presencia de losazúcares liberados recurriendo a una reacción colorimétrica.

Coloque 0.5 mL de la solución acuosa en un tubo de ensayo, y añádale 1 mL deuna solución de fenol. Agite la mezcla y deje caer por la boca del tubo de ensaye2.5 mL de H2SO4 concentrado gota a gota con una pipeta. El calor generado essuficiente para la formación de color cuando en la solución existen azúcares.

Hesperidina: Reacciones de Identificación

1. Coloque en un tubo de ensaye 2 mL de la “solución de hesperidina”, yse le adiciona 1 mL de metanol. A continuación se le añaden unas gotas de


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solución de cloruro férrico, si la prueba es positiva se deberá formar un color“rojo vino”.

2. En un tubo de ensaye se colocan 2 mL de la “solución de hesperidina”,

se adicionan 0.5 mL de HCl concentrado y un trozo de cinta de magnesio. Agiteel tubo cuidadosamente. La presencia de hesperidina quedará puesta demanifiesto por la aparición de un color violeta.

Hesperitina: Cromatografía.

Cromatografía en capa fina

Preparar una placa cromatográfica.Aplicar dos muestras en cada placa, con la ayuda de un capilar (estirado). Lasmuestras son de la solución clorofórmica concentrada.

Eluente: Cloroformo/Acetato de Etilo (60:40) (v/v)

Revelador: FeCl3 1% (p/v) en etanol.Patrón: Hesperitina.Nota. La hesperitina se localizará como una mancha de color marrón rojizo.


Características y usos de la planta que utilizó.

Especifique la cantidad de muestra que pesó.

Determine la cantidad de producto recuperado en g y %.

Reporte el resultado de sus pruebas de identificación.

Reporte las observaciones de su práctica.

DISCUSION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIONES

BIIBLIOGRAFÍA CONSULTADA


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PRÁCTICA 3

SAPONÓSIDOS

OBJETIVO

Aplicar una de las técnicas mejor probadas para el aislamiento de Saponinas.

INTRODUCCIÓN

Los saponósidos constituyen un grupo particular dentro de los heterósidos.Poseen dos propiedades características: ser tensoactivos y hemolíticos. Así, en

solución acuosa son capaces de originar abundante espuma y por su poderhemolítico, provocan la lisis de los eritrocitos, propiedad que los haceespecialmente tóxicos para animales de sangre fría.Se clasifican en dos grandes grupos, según la naturaleza de la genina:esteroideos y triterpénicos.En ambos tipos de saponósidos la posición del hidroxilo en C3 es constante ysuele portar uno o dos oligósidos, ya sean lineales o ramificados, ligados por unpuente éter o éster.La extracción de estos compuestos, a partir de una droga, puede realizarse conagua, mezclas hidroalcohólicas o metanol, después de eliminar sustanciaslipídicas con otros disolventes.

O

O

HO

ESTEROÍDICOS (Diosgenina )

COOH

OH

O

TRITERPÉNICOS (Ac. Glicirrético )

ESTEROIDEOS


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MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO

Reactivos

28mL de alcohol Butílico normal60mL de alcohol Etílico al 80%Cloruro de Potasio1.2mL de cloruro de Sodio20mL de éter etílico20mL de metanolHojas de la planta asignada molidaTiras de pH

Materiales

2 Anillos metálicos.Embudo Büchner

Embudo de separación de 500 mL

Embudo de separación de 250 mL1 Matraz Kitazato de 500 mL1 Matraz balón de 250 mL, 24/404 Soportes universalesRefrigerante de bolas.2 Tubos de ensayo de 10 mL2 Vasos de precipitados de 250 mL

Equipos

Parrilla de calentamiento1 Balanza granataria

Bomba de vacío.

METODOLOGÍA

Extracción de saponina de una planta

En un matraz de balón de 250 mL, coloque 20 g de hojas molidas o trituradas desu planta y se agregue 60 mL de alcohol etílico al 80%. La mezcla se lleva areflujo 1 h.

Se decanta el metanol y se evapora a baño María (o con ayuda de vacío) hastaun volumen de 12 mL. En seguida se agregan 1.2 g de Cloruro de sodio y lamezcla se lleva a un pH de 4.5 con HCl al 10%(v/v). La solución anterior se colocaen un embudo de separación y se extrae dos veces con porciones de 10 mL deéter etílico, a fin de eliminar grasas y otras sustancias no glucosídicas.

Las capas acuosas se extraen nuevamente, 2 veces, con porciones de 14 mLde alcohol butílico normal. Los extractos se reúnen y se concentran casi asequedad por destilación directa en baño María. Se obtiene de esta forma unasaponina cruda. (Con un poco realice la prueba de identificación).La saponina que se obtuvo, puede purificarse con el siguiente método:

Prueba de IdentificaciónPara comprobar la presencia de saponinas, colocar en un tubo de ensayo unapequeña porción de saponina cruda o purificada, agregar agua y agitarenérgicamente. La formación de espuma que permanezca por lo menos dosminutos, indicara la presencia de saponinas.


1. Características y usos de la planta que utilizó.2. Rendimiento del producto obtenido.

3. Prueba de identificación


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4. Observaciones de la práctica.

CUESTIONARIO

1. Investigar la fórmula estructural de una saponina y su uso.2. De ejemplos de otras plantas de donde se extraen saponinas3. De otra forma de identificar una saponina.


CONCLUSIONES



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PRÁCTICA 4

ESENCIAS

OBJETIVO

Efectuar en el laboratorio una técnica para extraer e identificar AceitesEsenciales.

INTRODUCCIÓN

Las esencias, o aceites esenciales, son líquidos volátiles y olorosos que están

contenidos en los órganos secretores de los vegetales.Están constituidas por mezclas complejas de sustancias: hidrocarburosterpénicos y sus productos de oxidación (alcoholes, aldehídos y cetonas);compuestos aromáticos (fenoles, aldehídos, cetonas), etc. En general, cadaesencia tiene un componente mayoritario que es el responsable de laspropiedades y características de esa esencia en particular, aunque el resto decompuestos minoritarios aportan, en algunos casos calidad y fineza a la misma.

Extracción

Para la extracción de esencias se utilizan principalmente dos métodos generales:

Extracción con solventes. Las esencias son solubles en disolventeslipídicos (Éter de Petróleo, Cloroformo, Dicloroetano, etc.), lípidos(manteca de vaca, aceite de oliva, etc.) y alcohol.Destilación en corriente de vapor de agua.

Ensayos a realizar en una esencia

FísicosRotación óptica, Densidad, índice de Refracción, Solubilidad en etanol y Punto deCongelación son los más frecuentes.

Químicos Índice de acidez, etc.

OH

OH OH

TIMOL CARVACOL p-CIMENO LINALOL


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Reactivos

100 gr Planta seca asignadaAgua destilada20 mL de cloruro de metileno1 gr de sulfato de sodio anhidro

Materiales

1 Matraz redondo 24/40 de 500 mL1 Matraz redondo 24/40 de 1000 mL1 Refrigerante 24/401 Embudo 24/40

1 Conexión en U 24/401 Conexión porta termómetro 14/24, 24/40

1 Termómetro esmerilado 14/23

3 Pinzas de 3 dedos con nuez3 soporte universal1 Mechero Fisher1 tela de asbesto1 Pipeta1 BuretaMangueras

Equipos1 bomba de recirculación de agua con sucharola y hieloBalanza granataria

METODOLOGÍA

Arrastre con vapor

Antes de iniciar monte el equipo que le indique su Profesor de laboratorio.Coloque en el matraz redondo 100 g de su planta molida y 50 mL de aguadestilada. Inicie el calentamiento cuidadoso de su muestra y utilice el agua del

embudo de separación para reponer la que se va perdiendo durante la destilación.De este proceso, recupere aproximadamente 300 mL de destilado,

recuerde que para obtener una recuperación “completa” del aceite deberíaprolongar la destilación hasta que ya no salieran gotas oleosas mezcladas con elagua.

Si es posible la mayor parte del aceite que se recuperó, se puede reunir enla base del matraz donde se recibe el destilado, esto facilita su separación pordecantación. En ocasiones quedan algunas gotas en la superficie del agua, queni por agitación se logra que caigan al fondo. En tal caso se separa la parte

principal mencionada y la solución acuosa se somete a dos extracciones suaves,con 10 mL de cloruro de metileno para cada extracción.

Las fracciones de cloruro de metileno se juntan, se les agrega una pequeñacantidad de sulfato de sodio anhidro, para eliminar el exceso de agua presente, sedecanta (a un vaso limpio y seco), el cloruro de metileno, se evapora en campanay se obtiene el producto deseado. Una las fracciones de aceite esencialrecuperado. Pese su producto.


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1. Características y usos de la planta que utilizó.

2. Especifique la cantidad de muestra que pesó.3. Determine la cantidad de aceite recuperado en g y %.4. Reporte las observaciones de su práctica.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué aplicaciones tienen los aceites esenciales2. De ejemplos de las plantas ricas en aceites esenciales pertenecientes a

las familias antes mencionadas, por ejemplo: labiáceas, pináceas, etc.3. ¿Por qué se recomienda utilizar planta fresca y seca?


CONCLUSIONES



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PRÁCTICA 5

HETERÓSIDOS ANTRAQUINÓNICOS

OBJETIVO

Extraer y caracterizar químicamente antraquinonas que se encuentran ennumerosas drogas.

INTRODUCCIÓN

Heterósidos.Con este nombre se designa a una serie de productos naturales cuyo elemento

común es estar constituidos por un resto glicosídico (una, dos o más osas oderivados de osas) unido a una parte no glicosídica denominada aglicona oaglicón o genina.

La unión entre estas dos partes de la molécula se realiza a través de un átomopuente. En la gran mayoría es un átomo de Oxígeno, dando lugar a los llamadosO-heterósidos, aunque también puede ser Nitrógeno (N-heterósidos) o Azufre (S-heterósidos). En algunas ocasiones no existe ese átomo puente originándose launión entre dos átomos de carbono (C-heterósidos).

En el establecimiento de dicha unión, siempre participa el hidroxilo del Carbono1 de la osa y un grupo hidroxilo, amino o sulfhidrilo del aglicón. Al estar bloqueadoel hidroxilo del Carbono 1 de la osa, ésta pierde su carácter reductor.

Propiedades Generales

Los heterósidos, a diferencia de otros grupos fitoquímicos no ofrecen unconjunto de propiedades comunes, fundamentalmente por la gran diversidadestructural que puede presentar el aglucón y que va a condicionar lascaracterísticas del mismo.

En general, los heterósidos son compuestos sólidos, cristalinos (los hay

amorfos), de punto de fusión definido, generalmente incoloros (los haycoloreados) no reductores; solubles en agua, metanol, etanol, acetato de etilo ymezclas hidroalcohólicas e insolubles en disolventes poco polares (cloroformo,benceno, etc.). Por el contario, las agliconas suelen ser solubles en losdisolventes lipídicos e insolubles o muy poco solubles en agua.

La única propiedad común a todos ellos es la de ser hidrolizables: Portratamiento con ácidos, se rompe el puente de unión separándose el aglucón dela osa, con lo que ésta recupera sus propiedades reductoras. Esta hidrólisispuede conseguirse en condiciones muy suaves o exigir situaciones másenérgicas, caso de los C-heterósidos, que por ser una unión carbono-carbono,precisa de una hidrólisis oxidativa (HCl/FeCl3 y calor).


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Heterósidos Antraquinónicos

Las antraquinonas son derivados hidroxilados de la dicetona del antraceno con

propiedades laxantes o purgantes. Se encuentran en numerosas drogas (hojas deSen, rizoma de Ruibarbo, corteza de Cáscara Sagrada, corteza de Frángula,Aloes…), al estado libre o combinadas con azúcares, formando heterósidos. Losheterósidos son solubles en agua mientras que las aglicoas se disuelven endisolventes lipídicos y soluciones alcalinas acuosas.

Químicamente se pueden poner de manifiesto, cuando se encuentran en estadolibre y no en forma de heterósido, por la reacción de Borntrager, que se basa en elcolor rojo-cereza que dan estos compuesto con lo álcalis (hidróxido de sodio,hidróxido de amonio). Otra reacción coloreada de las 1, 8-dihidroxi antraquinonases con acetato de mangnesio en solución metanólica. Con este reactivo sedesarrolla un color rojo, más intenso y estable que con los álcalis.

Las antronas reaccionan con la p-nitrosodimetilanilina, formando un azoderivado.Se investigarán en este apartado las antraquinonas libres y aquéllas

procedentes de las combinadas.


Reactivos

Hojas de plantaMuestra20ml de Cloroformo4ml de NH4OH al 10% (v/v)5ml de H2SO4 10% (v/v)Papel filtro # 2

Materiales

1 Matraz Erlenmeyer de 50 ml2 Tubos de ensayo

Embudo de separación de 100 mL

Equipos

Parrilla


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METODOLOGÍA

Antraquinonas Libres

Se pesa 1 g de polvo de hoja de planta y se coloca en un matraz Erlenmeyer de50 mL (deben estar encendidos los extractores del laboratorio), se le añaden 10mL de cloroformo agite la mezcla durante 5 minutos.Decante el contenido del matraz a un tubo de ensaye, evite que el sólido se paseal tubo.Al líquido filtrado del tubo se le añaden 2 mL de hidróxido de amonio al 10%. Seagita y se deja reposar hasta la separación de las dos capas. Si en el polvo de ladroga existen antraquinonas libres, la capa amoniacal aparecerá de color rojo-cereza.

Antraquinonas combinadas

Se pesa 1 g de polvo de droga (medicina que se sepa contiene la planta), secoloca en un vaso de 100 mL y se pone a hervir sobre una parrilla con 50 mL deagua, durante 2 minutos.Al cabo del tiempo deberá enfriar y decantar la solución a otro vaso de 100 mL.A la solución filtrada se le añaden 5 mL de H2SO4 al 10% y se calienta ebullicióndurante 5 minutos (sobre parrilla), con el fin de hidrolizar los heterósidosantraquinónicos.Se deja enfriar la solución (a temperatura ambiente) y se trasvasa a un embudode separación donde se añaden 10 mL de cloroformo. Se agita para que las

antraquinonas libres se disuelvan en el cloroformo y se deja reposar,recuperándose la fase orgánica (clorofórmica) en un tubo de ensayo.Se añaden a este tubo 2mL de hidróxido de amonio al 10% se agita y se dejareposar.La presencia de antraquinonas libres se pondrá de manifiesto por la aparición decolor rojo cereza en la capa acuosa amoniacal.


Características y usos de la planta(s) que utilizó.Observaciones y resultados de las reacciones que llevó a cabo.

CUESTIONARIO

1. ¿De acuerdo a los ejemplos de su práctica, sugiera los equipos que podríautilizar para identificar estos compuestos? Explique su respuesta.¿En dónde se pueden encontrar estos heterósidos?Nombre 5 heterósidos antraquinónicos obtenidos de las plantas. Escriba sufórmula.¿Por qué son importantes las antraquinonas?¿De qué otra forma podría identificar esto heterósidos antraquinónicos?


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DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA


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PRÁCTICA 6

ALCALOIDES

OBJETIVO

Extraer y caracterizar químicamente un Alcaloide a partir de una planta.

INTRODUCCIÓN

Alcaloides.

La palabra alcaloide significa “semejante a la sosa” y hace alusión a una de suspropiedades más comunes: su carácter básico.Aunque no existe una definición completa, y a la misma se han incorporado

diferentes matices, los alcaloides pueden considerarse como sustancias de origennatural, nitrogenadas, con carácter básico y dotado de propiedadesfarmacológicas notables.

Como rasgos característicos se señalarán, la presencia de Nitrógeno en sumolécula, su actividad farmacológica y el carácter más o menos básico de lamisma. La basicidad dependerá de la posición de nitrógeno, pudiendo oscilar decompuestos débilmente básicos (Aconitina) a bases fuertes (derivados de amoniocuaternario como la Tubocurarina).

Las tendencias actuales llevan a restringir la presencia de los alcaloides al ReinoVegetal, a delimitar su estructura a aquellas moléculas cuyo átomo de nitrógenoestá incluido en un heterociclo y, biosintéticamente, sólo a aquellas sustanciasoriginadas a partir de aminoácidos.

Propiedades generalesAl ser compuestos básicos, los alcaloides son susceptibles de reaccionar con los

ácidos para formar las correspondientes sales. Por lo tanto, un alcaloide puedeencontrarse en forma de sal o en forma de base. Los alcaloides en el vegetal seencuentran generalmente en forma de sales (oxalatos, tartratos, malatos,…) ounidos a taninos.

Los alcaloides en estado de base son generalmente sólidos cristalizables, depunto de fusión definido (los que no portan oxígeno en su molécula son líquidosvolátiles, arrastrables en corriente de vapor de agua). Son solubles en la mayoríade los disolventes lipídicos (éter etílico, cloroformo, benceno, etc.), etanol einsolubles en agua. No son solubles en disolventes tales como el éter depetróleo ni hexano.En el estado de sal son sólidos, de puntos de fusión definidos, solubles en etanol

y agua e insolubles en los disolventes lipídicos. Las diferentes propiedades desolubilidad, van a permitir su extracción de las drogas.

Reacciones de Precipitación


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Los alcaloides, en forma de sal y en solución acuosa precipitan con una serie dereactivos. Las principales reacciones que se realizan son:

Taninos, originando taninos de alcaloide

Sales Complejas

Reactivo Mayer (Iodomercuriato de Potasio/HCl): Pecipitado amarillo.Reactivo Dragendorff (Iodobismutato de Potasio/HNO3): Precipitado rojo teja.Reactivo Bouchardat (Iodo/Ioduro de Potasio/HCl). Precipitado rojo.

Acidos Complejos

AcidoFosfomolíbdico: Fosfomolibdato de alcaloide.AcidoFosfotúngstico: Fosfotungstato de alcaloide.AcidoSilicotúngstico: Silicotungstato de alcaloide.Acido Pícrico:Picrato de alcaloide (cristalino)Sales.Cloruro aúrico:Cloroaurato de alcaloide.Cloruro platínico:Cloroplatinato de alcaloide (cristalino)Cloruro mercúrico:

Cloromercurato del alcaloide.Todos estos precipitados se pueden romper por tratamiento con una base fuerte,

liberando al alcaloide en forma de base.

Extracción

Los procedimientos de extracción son bastante comunes para la gran mayoría delos alcaloides, ya que salvo los que presentan en su estructura químicadeterminadas particularidades (grupos fenólicos, uniones éster, etc.), lasdiferencias que se establecen radican en el procedimiento inicial de extracción,según sea el agente alcalinizante y el disolvente elegido para la misma. En todo

caso, el fundamento siempre es el mismo: aprovechar la diferente solubilidad delos alcaloides según se encuentren en forma de base o en forma de sal.

Extracción en estado de base

En un matraz se humedece el polvo de droga con una pequeña cantidad de álcali(generalmente hidróxido de amonio) con el objeto de desplazar los alcaloides desu estado salino y, a continuación, se añade un disolvente lipídico (éter etílico,cloroformo, diclorometano, etc.), agitando. Se filtra, y el polvo se vuelve a extraerde nuevo con el disolvente, con objeto de asegurar la extracción completa.Se reúnen las soluciones extractivas que contienen disueltos los alcaloides en


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forma de base y se agita en un embudo de separación con ácido diluido (HCl oH2SO4). Los alcaloides forman las sales correspondientes, solubilizándose en lacapa acuosa.

Se separa la capa acuosa, se lleva a otro embudo de decantación y se trata conuna base (NaOH, KOH, etc.) hasta pH básico. Los alcaloides precipitan. Al mismoembudo de separación se le adiciona el solvente lipídico, agitando. Los alcaloidesen forma de base se disuelven en dicho disolvente, con lo que una vezseparadas las dos fases, se recoge la fase lipídica, se deshidrata (generalmentecon sulfato de sodio anhidro) y se destila el disolvente.En el matraz quedará un residuo constituido mayoritariamente por los alcaloides

totales procedentes del polvo de la droga.

Extracción en medio ácido

La diferencia con respecto al procedimiento anterior estriba en el inicio delproceso. En este caso, se extraen los alcaloides del polvo de la droga al estadode la sal. Para ello, se trata con agua ácida (HCL 1%, por ejemplo) varias veces,agitando. Se filtra y los líquidos filtrados se alcalinizan hasta un pH básico; seadiciona un disolvente lipídico, con lo que los alcaloides se disolverán en la capaorgánica. A continuación se sigue el mismo procedimiento que en la extracción enmedio básico.

Método de Stas-Otto

Es un procedimiento de extracción utilizado cuando se investiga la presencia de

alcaloides de naturaleza desconocida en una droga. Se trata el polvo de la drogarepetidas veces con una solución de ácido tartárico en etanol (2%), reuniéndoselas soluciones alcohólicas. A continuación se destila el etanol y el residuo se tratacon agua y se filtra. Los alcaloides se encontraran en forma de tartratos disueltosen el agua. Se alcaliniza hasta pH básico y se extrae con un disolvente lipídico.Se separa dicha capa; se deshidrata y se destila el disolvente, obteniéndose unresiduo de alcaloides totales en forma de bases.

Valoración

Además de los diferentes procedimientos particulares que permiten determinar

alcaloides concretos, es posible establecer un método general de valoración delos alcaloides totales existentes en una droga.El fundamento reside en la capacidad de los alcaloides de combinarse con los

ácidos para dar las sales correspondientes. Por los que se puede establecer unavolumetría de neutralización (puede ser directa o por retroceso), y en función de lacantidad del ácido gastado en la neutralización conocer la cantidad de alcaloidespresentes.


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Reactivos

25ml de Cloroformo7ml de NH4OHGotas de NaOH0.1g de Sulfato de Sodio anhidro1ml de Metanol203 Gotas de Reactivo de DragendorffGotas de Reactivo de MayerSolución (Cloroformo:Dietilamina)(90:10)(v/v)Gotas de solución saturada de ácidopícrico en agua

H2SO4 2% (v/v)15ml de H2SO4 10% (v/v)Gotas de Bromo/H2O al 2%(v/v)Papel pHMuestra

Materiales

Cámara de cromatografíaCromatofoliosPorta objetos.Matraz Erlenmeyer de 50mlAgitador de vidrio4 tubos de ensayeVaso de 50 mLEmbudo de separación de 100 mL

Equipos

Lámpara UVParrilla

METODOLOGÍA

Extracción de alcaloides

Se pesa 1 g de polvo de la planta y se coloca en un matraz Erlenmeyer de 50mL y agregue 1 mL de NH4OH concentrado, remueva el sólido con un agitado.Añada 25 mL de cloroformo (asegúrese que el extractor este encendido) y agite

durante 15 minutos.Se decanta a un embudo de separación, evitando que el sólido se pase al

embudo.Se agregan al embudo 15 mL de una solución de H2SO4 al 2%(v/v).Agite y libere presión, varias veces, para realizar la extracción. Separe la fase

acuosa, colóquela en un recipiente aparte.Vuelva a extraer la fase orgánica con otros 15 mL del ácido. Junte los extractos

acuosos.

Caracterización de alcaloides

Se toman cuatro tubos de ensaye y a cada uno de ellos se agrega 1 mL de lasolución acuosa anterior, efectúe con ellos las siguientes pruebas:Tubo1. Observación a la luz ultravioleta de la fluorescencia azul, típica de lassales de estos alcaloides con ácidos oxigenados. Por adición de unas gotas dereactivo Mayer se aprecia la formación de un precipitado y desaparición de lafluorescencia.Tubo 2. Adicione 2 ó 3 gotas de reactivo Dragendorff. La formación de unprecipitado, el cual se puede disolver si se agrega NaOH hasta un pH alcalino.Tubo 3. Adicione 2 ó 3 gotas de solución acuosa de ácido pícrico. Se formará un


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precipitado, que se disuelve al calentar, volviendo a formarse al enfriar el tubo.Tubo 4. Se le añada, gota a gota, una solución de agua de bromo al 2%(v/v)recién preparada hasta que la solución adquiera un color amarillo permanente. A

continuación se añade aproximadamente 1 mL de NH4OH, hasta la aparición deun color verde esmeralda.

Cromatografía en capa fina

Preparación de la muestra

A 15 mL de la solución ácida recuperada en la extracción, se alcaliniza hasta unpH básico con NH4OH.Dicha solución alcalinizada se coloca en un embudo de separación, se añaden

20 mL de cloroformo, se agita y se efectúa la extracción:

La fase orgánica (clorofórmica) se separa, se coloca en un recipiente limpio y sele añade 0.1g de sulfato de sodio anhidro para secarla. Se deja reposar unosminutos con el agente desecante.Decante el cloroformo a un vaso pequeño (limpio y seco), previamente pesado,

evapore en parrilla dicho cloroformo a sequedad, pese el vaso nuevamente.Redisuelva el residuo en 1 mL de metanol.

De esta solución tome la muestra con un capilar para su placa de cromatografía.Prepare 2 placas de Silica gel G.Eluente: (Cloroformo: Dietilamina) (90:10) (v/v)Revelador: Acido sulfúrico 10% en metanol.


1.- Rendimiento.

2.- Características y usos de la planta que utilizó.

3.- Características físicas de producto.

CUESTIONARIO

1. ¿Por qué se considera que los alcaloides son bases vegetales

nitrogenadas? De ejemplos.

2. ¿En donde se pueden encontrar alcaloides?

3. Nombre 5 alcaloides obtenidos de las plantas. Escriba su fórmula.

4. ¿Por qué son importantes los alcaloides?

5. ¿Con qué técnicas es posible identificar alcaloides?


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CONCLUSIONES



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PRÁCTICA 7

RECONOCIMIENTO DE TANINOS

INTRODUCCIÓN

Los taninos son compuestos polifenólicos muy astringentes (capacidad parasecar las mucosas) y de gusto amargo, su color va desde el amarillo hasta elcastaño oscuro. De origen vegetal, masa molecular relativamente elevada. Lostaninos son sustancias amorfas solubles en agua, que forman solucionescoloidales, en alcohol y en acetona. Son insolubles en solventes apolares. Poseen

la habilidad de reaccionar y precipitar con alcaloides, gelatinas y otras proteínas.Los taninos se encuentran en gran cantidad de árboles, siendo las agallas deroble y la corteza de zumaque las mejores materias para su obtención. Tambiénse utilizan las hojas del aliso, nogal, frambueso, fresal y zarza; frutos y hojas delarándano; sumidades de agrimonia; raíz de tormentila, bistorta y pimpinela, entreotros.Entre las actividades farmacológicas de los taninos podemos destacar las

propiedades astringentes, tanto por vía interna como tópica; por vía interna seemplean como antidiarreicos, ya que precipitan los enzimas extracelularessecretados por los microorganismos causantes de las infecciones. Poseentambién propiedades vasoconstrictoras, por lo que se utilizan tanto interna como

tópicamente en el tratamiento de afecciones vasculares como varices ohemorroides y en pequeñas heridas. En uso tópico están indicados en diversosproblemas de la piel, empleándose en ciertas dermatosis así como en cosméticacomo tónicos astringentes.

MATERIALES Y REACTIVOS

Reactivos

FeCl3 al 1%Solución de gelatina al 1%

Materiales

1 mortero con pistiloBaño MaríaEmbudo de vidrio de vástago largoPapel filtroArillo

SoporteVidrio de reloj2 Erlenmeyer de 150 mL2 tubos de ensayoPipeta de 1mLPipeta beral

Equipos

Balanza granataria


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METODOLOGÍA

1. Tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco.

2. Macerar en un mortero hidratando la muestra, para facilitar el rompimientode los tejidos.

3. Pasar la muestra completamente macerada a un beaker y adicionarcantidad suficiente de agua para cubrir la muestra.

4. Calentar en baño maría de 10 a 15 minutos, filtrar en caliente.5. Tomar 1 ml del filtrado en un tubo de ensayo y adicionar dos gotas de

solución de tricloruro férrico (FeCL3 al 1%).a. La aparición de un color verde, azul o negro es prueba positiva (+)

para compuestos fenólicos.6. En un segundo tubo de ensayo tomar otro mililitro del filtrado y agregar

unas gotas de gelatina sal, si hay turbidez o formación de precipitado es

prueba positiva para taninos en la muestra.

Las dos pruebas son necesarias para comprobar la presencia de taninos.Gelatina-sal: Solución al 1% de gelatina y al 10% de cloruro de sodio.


CUESTIONARIO

1. ¿En dónde se pueden encontrar taninos?

2. ¿Por qué son importantes los taninos en la industria alimenticia?

3. ¿Con qué técnicas es posible identificar taninos?


CONCLUSIONES



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PRÁCTICA 8

OBTENCIÓN DE UN EXTRACTO VEGETAL

OBJETIVO

Obtener un extracto de mediana polaridad de la planta asignada por elprofesor

INTRODUCCIÓN

Un extracto vegetal es lo que obtenemos de las plantas con ayuda de

disolventes y que permite extraerles los compuestos activos o útiles, las quepueden tener diferentes usos, en el control de enfermedades, plagas, etc. Éstecontiene una mezcla muy grande de compuestos que deben ser purificadosposteriormente para su mejor aplicación o uso.

El extracto vegetal se puede obtener por maceración, extracción continua enSoxhlet, o algún otro procedimiento de extracción.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Reactivos

100 gramos de planta secaCHCl3 CH3OH

Materiales

Erlenmeyer 1000 mLMatraz balón de 250 mL (boca 24/40)

Agitador de vidrioEspátula

Embudo de vástago largoAlgodón

Equipos

Rotavapor y bomba de vacío

METODOLOGÍA

Obtención del extracto por maceración

Una vez seco el material vegetal, se realiza el extracto clorofórmico de hojasy/o tallos.Se colocan 100 gramos del material vegetal seco en el erlenmeyer decapacidad apropiada y se agrega cloroformo hasta cubrirlo completamente, sedeja macerar durante 3 días a temperatura ambiente con agitación ocasionalcon agitador de vidrio, al cabo de este tiempo, se filtra y se evapora el solventeen un rotavapor a temperatura inferior a los 40°C.


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1.- Rendimiento.

2.- Características y usos del extracto obtenido.

3.- Características físicas del extracto obtenido.

CUESTIONARIO

1. Investigue en qué consiste el método de obtención continua en Soxlet.2. ¿Por qué es importante la obtención cuidadosa de un extracto?

(cuidado de temperatura y tiempo de evaporación del solvente)3. ¿Qué tipo de estructuras químicas puede esperar a encontrar en su

extracto?, mencione 4 de las vistas en clase.4. ¿Qué aplicaciones puede tener un extracto vegetal?, mencione por lo

menos 2.


CONCLUSIONES



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PRÁCTICA 9

CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA Y PLACA FINA

OBJETIVO

Realizar una columna cromatográfica y seguirla con cromatografía en placafina.

INTRODUCCIÓN

La cromatografía es una técnica de separación y purificación de compuestos

presentes en una mezcla, la cual puede ser de origen variado, por lo general, deorigen biológico. En algunos casos muy específicos, se puede utilizar esta técnicacomo un método de identificación, utilizando sustancias patrones. Sin embargo,ésta es una técnica intrínsecamente de separación y purificación más que deidentificación de compuestos.Esta técnica se basa en las diferentes interacciones que presentan los

constituyentes de una mezcla con dos fases. Estas fases se denominan faseestacionaria y fase móvil. La fase estacionaria suele ser un sólido o un líquidoadsorbido o unido químicamente a un sólido y normalmente esta fase estácontenida en un tubo de vidrio o metal llamado columna. La fase móvil puede serun líquido o un gas que impregna y se mueve a través de la columna.

La cromatografía puede clasificarse de acuerdo al estado de agregación de lafase móvil y de la estacionaria, en este orden, de la siguiente manera:cromatografía gas-sólida (GSC), gas-líquida (GLC), líquida-sólida (LSC) y líquida-líquida (LLC). En general, cuando la fase móvil es gaseosa, dicha cromatografíarecibe el nombre de Cromatografía Gaseosa (CG o GC), mientras que si la fasemóvil es líquida, ésta recibe el nombre de Cromatografía Líquida (CL o LC).Por otra parte, la cromatografía puede ser clasificada de acuerdo al fenómeno

principal que se lleve a cabo dentro de la columna y que conduzca a la separaciónde los componentes de la mezcla. Así, por ejemplo, puede haber cromatografíade adsorción o partición.

MATERIALES Y REACTIVOSReactivos

CHCl3 CH3OHHexano

Materiales

Cuba de corrida (o vaso de 150 mL ycaja Petri de vidrio)Capilares

Placas cromatográficas o cromatofolios

Sílica gel 60-230 Meshpipeta de 5mLpipeta de 1mLbureta de 25 mLembudo de vástago largopinzas6 Erlenmeyer de 50 mL

Equipos

Rotavapor y bomba de vacío


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METODOLOGÍA

Primero se ensayan el extracto por cromatografía en capa fina (CCF) condiferentes sistemas de solventes de elución, seleccionando al que dé una mejorseparación de los componentes. Este sistema de solventes se utilizará para unaprimera cromatografía en columna (CC), denominada columna madre y tiene porobjeto separar paquetes de compuestos. Estos paquetes se trabajan porseparado, y de acuerdo a la complejidad de las mezclas se utilizan diferentestécnicas cromatográficas para resolverlas. Estas técnicas pueden ser:cromatografía en columnas, utilizando diferentes tamaños de sílica, y en los casosque por estas técnicas no se puedan purificar totalmente los compuestos, seutiliza la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).En la CCF se utilizan cromatofolios marca Merck.

En la CC se utiliza como adsorbente sílica gel de diferentes tamaños de partícula,de acuerdo al tipo de dificultad de separación. Por lo general en columnas madresse usan gránulos grandes (60-230 Mesh). La aplicación de la muestra en lacolumna cromatográfica dependerá de la solubilidad del extracto en la fase móvily de su consistencia. En el caso de un extracto insoluble en la fase móvil y/o deconsistencia chiclosa se debe elaborar una pastilla para la cual se utiliza sílica gelen polvo y para lo cual el Maestro le dará las indicaciones necesarias. Una vezobtenido el extractoen forma de pastilla, se vierte sobre la sílica gel yacompactada y con disolvente en la columna, se agrega más disolvente de fasemóvil y se procede con el método cromatográfico de columna.En el caso de un extracto soluble en el disolvente escogido como fase móvil, se

disuelve la cantidad del extracto a cromatografiar con la mínima cantidad deldisolvente y se aplica con ayuda de una pipeta Pasteur sobre la sílica gelcompactado y se procede con el método cromatográfico de columna.


1.- Cantidad y características físicas de las fracciones colectadas.

2.- Características de las placas cromatográficas realizadas.

CUESTIONARIO

1. ¿Para qué se realiza la separación de un extracto vegetal porcromatografía en columna?

2. ¿Qué otros métodos se pueden ocupar para separar y/o purificar unextracto?.

3. ¿Cuáles son los pasos siguientes a la obtención de fracciones de unacolumna cromatográfica?


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CONCLUSIONES



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BIBLIOGRAFÍA

1. Villar A. M. y W. C. Evans. Farmacognosia General , 5a Ed. New York: W. B.Saunders, 2002.2. Maiti R., Sanchez E., Manual de Farmacognosia . Puebla: Universidad de lasAméricas, Puebla, 2001.3. Heinrich M., J. Barnes, S. Gibbons y E. M. Williamson.Fundamentals ofPharmacognosy and Phytotherapy . Amsterdam: Elsevier, 2003.4.Rahman Atta-ur. Studies in Natural Products Chemistry: Structure andChemistry. Amsterdam, Elsevier, 2005.5. Casadevall E. Progressin the Chemistry of Organic Natural Products , New York:

Springe Verlag, 2002.6. AVANCES EN AGROECOLOGÍA Y AMBIENTE VOL. I. López-Olguín J.F., A.Aragón G. y A.M. Tapia R. (Eds.). 2007. Purificación cromatográfica demetabolitos secundarios de origen vegetal, Luis Ricardo HernándezMolina.Publicación especial de la Benemérita Universidad Autónoma de Puebla.Puebla, México. pp. x-xx. ISBN: 978 968 9391 07 4

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