Manual CTV May2009

I N S T I T U T O T E C N O L Ó G I C O SUPERIOR DE MISANTLA

Fecha de Efectividad: 05 de Febrero de 2009 Copia No. Código: No. Revisión: 00 No. de páginas: 0

Elaboró: Revisó: Autorizó:

Puesto Docente Docente Jefatura Académica de IBQ Nombre

y Firma

Lic. Leoncio Laiz Trujillo

Ing. Aracely Romano García.

Ing. Artacely Romano García

R00/11/04 F-CC-03

Manual de Prácticas

De Técnicas de Cultivos Vegetales.

Prologo

El cultivo de tejidos vegetales o cultivo in vitro de tejidos vegetales, es una técnica de reproducción en condiciones totalmente asépticas, en la que a partir de un pequeño segmento inicial de tejido es posible regenerar en poco tiempo miles o millones de plantas genéticamente iguales a la planta madre, cuando a este tejido le es aplicado un estímulo por medio de variables físicas y químicas controladas en un medio de cultivo.

A diferencia de las técnicas tradicionales de cultivo, esta poderosa herramienta permite la propagación de grandes volúmenes de plantas en menor tiempo; así como el manejo de las mismas en espacios reducidos. Por otro lado, la técnica es de gran utilidad en la obtención de plantas libres de patógenos; plantas homocigotas, en la producción de plantas en peligro de extinción, en estudios de ingeniería genética, etc. El enorme potencial que posee esta metodología ha propiciado que en los últimos 25 años se haya incrementado el número de laboratorios de cultivo de tejidos en el país para la producción comercial de plantas ornamentales y frutales al lo que ha motivado que algunos floricultores la estén utilizando como una alternativa viable en sus programas de producción.

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Introducción.

Cultivo in vitro de árboles frutales o Multiplicación o reproducción de frutal in vitro

Cultivo in vitro

El cultivo in vitro es un método de propagación de plantas de aplicación profesional, puesto que se realiza en laboratorio, en unas condiciones estériles y con unas instalaciones especiales.

Un dato para dar una idea comercial es que en España había en 1.990 28 laboratorios dedicados a la producción de plantas por cultivo in vitro como negocio.

El cultivo in vitro consiste en tomar un trocito de hoja, un embrión, una porción pequeñita de tallo (de 0,2 a 1 milímetro) o cualquier otra parte de una planta y ponerla a cultivar en un tubo de ensayo sobre un medio acuoso nutritivo.

Lo fundamental es que se hace en unas condiciones muy controladas y totalmente estériles: utensilios, cámara de manipulación, etc., todo está desinfectado en autoclave.

El cultivo in vitro es muy caro, entre otras cosas porque no se puede mecanizar. Sólo son rentables aquellos laboratorios muy grandes y con mucho mercado.

La planta ya desarrollada en el cultivo in vitro necesita una primera aclimatación en el laboratorio; en el invernadero y después una segunda aclimatación en el campo. Los viveros grandes realizan ambas operaciones; otros sólo se encargan del primer paso.

Fase de aclimatación en invernadero

Aplicaciones prácticas del cultivo in vitro:

• Propagación vegetativa. Esto es lo más práctico. Dos técnicas: Micropropagación de estaquillas

• - Organogénesis de callos

• Producción de plantas libres de virus mediante dos técnicas:

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• Cultivo de meristemos

• - Micro injerto in vitro

• Permite hacer germinar semillas que son muy difícil de hacer en condiciones normales. Ejemplo: algunas Orquídeas tienen en los campos unos parásitos obligados y en viveros no se pueden reproducir; se inoculan esos parásitos o in vitro.

• Eliminar la inhibición de germinación de las semillas. El cultivo in vitro es lo más eficaz porque tiene determinados inhibidores y algunos huesos de frutales no son capaces de germinar ya que no tiene desarrollado el embrión.

• Prevención del aborto embrionario como resultado de incompatibilidad. Se da en cruces de interés científico o intergenéticos, sobre todo en plantas herbáceas. Los cruces incompatibles dan abortos.

• Aplicación en mejora genética para obtener híbridos, para introducir material genético, etc.

• Acortar los ciclos de mejora genética. No hay que esperar que pase el periodo juvenil del árbol para ver resultados.

• Producción de haploides. Cruzamientos o cultivo de polen (anteras).

• Ventajas:

• Obtención rápida de homocigotos.

• - Producción de híbridos (frutos puros).

Equipo necesario para el cultivo in vitro

- Autoclave - Cámara de flujo laminar - Medio de cultivo - Planta - Cámara de cultivo

- Autoclave

Es donde se "esteriliza" todo lo que vamos a utilizar: agua, algunos nutrientes, material, etc. No se pueden meter proteinas. Es como una olla a presión, pero de mayor tamaño, donde se controla la presión y la temperatura (hasta 120º).

- Cámara de flujo laminar

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Es donde se realizan todas las manipulaciones con la planta. Es un habitáculo con un operario en un ambiente estéril. Se usan rayos ultravioletas para esterilizar el aire.

- Medio de cultivo

Agua y nutrientes (hormonas) en un tubo de ensayo, que se tapa con un tapón. Dependiendo del material que se va a propagar, el tubo se pone vertical o un poco inclinado.

- Planta

El material vegetal de partida puede ser del campo, pero esto conlleva un alto riesgo de enfermedades y contaminación, aunque se lave mucho y bien. Lo más corriente es utilizar brotes que crecen en condiciones controlada para que halla menos infecciones.

- Cámara de cultivo

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La cámara de cultivo es una habitación de dimensiones muy variables, en la que se controlan las condiciones de luz, temperatura, humedad, variación día-noche, etc..

Condiciones del cultivo in vitro

• En la cámara de flujo laminar no puede entrar material contaminado. El problema más importante en todo el proceso del cultivo in vitro son las contaminaciones.

• En el autoclave no se pueden meter determinadas sustancias, como vitaminas, antibióticos, ácido giberélico, sacarosa, encimas, extractos vegetales, etc., ni tampoco recipientes que no soporten altas temperaturas.

• El vidrio ha de ser de muy buena calidad para que no suministre al medio sustancias contaminantes para la planta. Normalmente se prepara el medio y se filtra directamente. El problema es que se absorben en el filtro determinadas sustancias.

• Los reguladores de crecimiento (hormonas) son imprescindibles, ya que sin ellos no se puede hacer el medio de cultivo.

• El pH ideal es 6, pero puede oscilar entre 5,5 y 6,5.

• Se necesita agar y medio sólido 0,6-0,9%.

• El medio de cultivo realmente sólo tiene que llevar agua, fuente de energía (azúcares) y reguladores de crecimiento.

• El medio de cultivo es secreto, y se pueden tardar dos años en prepararlo.

• En la cámara de cultivo se aplican cantidades variables de luz (16-20 horas). También existen plantas que se desarrollan en la oscuridad. Las temperaturas también varían. Lo normal son 22-26ºC, aunque en ocasiones se exigen fríos de 4ºC y también 28-30ºC para plantas tropicales.

• Igualmente, en el éxito de esta técnica de propagación también influyen determinadas características de la planta, como el tipo, genética e incluso el tipo de implante, parte más juvenil o más adulta.

• En cuanto a los recipientes, deben permitir el intercambio de gases, pero evitar la pérdida de agua, lo que provocaría un aumento de la concentración de sales, y por tanto la muerte de la planta. De ahí la importancia del cierre.

Subcultivos o replicado

Cuando sembramos microestaquillas en cultivo in vitro, no nos interesa que se emitan raíces ni hojas, sino que se produzca una proliferación (crecimiento) para obtener nuevas microestaquillas. Son lo que se denominan subcultivos.

No se pueden hacer infinitamente ya que se agota el material vegetal; tan sólo se hace 8-10 veces.

Ocurre entonces lo siguiente:

- El medio nutritivo se agota y se seca. - El material vegetal ocupa todo el tubo. - Se produce un cambio de olor en el medio (sustancias tóxicas). - El medio se hace líquido.

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Fases del cultivo de meristemos

1. Toma un ápice meristemático (0,2-1 mm). 2. Siembra en el medio del tubo. 3. Fase de proliferación: crecimiento de brotes. Subcultivos. 4. Fase de enraizamiento (cambiar el medio). 5. Primera fase de aclimatación. Es muy importante el que la planta pueda llegar o no al campo. Invernaderos, bolsas de plástico, bandejas de vidrio, etc.. 6. Segunda fase de aclimatación. Siempre en invernadero. 7. Plantación en el campo.

Fases del cultivo de embriones

Se utiliza mucho en manzano.

1. Se desinfecta el fruto en alcohol. Se flamea. 2. Se coge el embrión de la semilla. 3. Se inocula en el tubo. 4. A las 1-2 semanas, la planta está más o menos reconocible. 5. Se deja crecer y se pasa por las fases de aclimatación.

Micropropagación

Se parte de una yema, de bráctea o axilar.

Se empieza a desarrollar en el medio de cultivo.

Entre la fase de proliferación y de enraizamiento hay muchos subcultivos (para obtener más plantas).

El número de subcultivos depende del material vegetal.

Ejemplo de micropropagación de Kiwi:

- Se parte de un trozo de tallo. - Al cabo de 4 semanas se obtiene una yema y crece un brote. - En la fase de proliferación intentamos obtener gran cantidad de brotes. - Sacamos microestaquillas del primer brote, haciendo subcultivos cada 6-8 semanas hasta llenar el vidrio. - Al aumentar la concentración de auxinas se obtienen plantas enraizadas. - Puede hacerse de forma industrial y la fase de enraizamiento se hace en vivo.

Cultivo de callo in vitro

Se parte de un trozo de hoja o de tallo; bien de una planta madre de maceta o de una planta que viene de cultivo in vitro.

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El medio puede ser sólido o líquido.

Se forma entonces una estructura de callo, de la que parten brotes, o también proembriones, que al unirse forman una estructura similar al embrión.

A partir de entonces se desarrolla normalmente.

Obtención de plantas haploides

Normalmente se trabaja con la antera en su totalidad, no con granos de polen en particular.

De una yema de flor se coge una antera antes de que se abra y se hace un cultivo; bien por embriogénesis u organogénesis.

• Embriogénesis: se forman células (poliembriones).

• Organogénesis: se forma una estructura de callo que puede venir o bien de tejidos de la antera (diploide), o bien del grano de polen (haploide).

No se riega nunca por aspersión (riesgo de patógenos), siempre con regadera.

Problemas en el cultivo in vitro

* Contaminación: es grave. * Vitrificación: es una reacción de las plantas que las hace adquirir apariencia de vidrio. La única solución es hacer un subcultivo de material sano, es decir, se saca y se cortan los trocitos que estén bien.

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Nombre de la Asignatura:

Técnicas de cultivos Vegetales

No. de Práctica: 1

Nombre de la Práctica: Identificación de las partes de la planta

Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 1 de 2 Objetivo:

Identificación de las partes de la planta que se utilizaran para realizar las técnicas de cultivos vegetales. Material y equipo:

Cantidad

Descripción

1 Estuche de disección. 1 Mesa de laboratorio. 1 Hipoclorito de sodio al 5,3,1 %v/v. 1 Solución de jabón al 1%. 1 Cepillo o esponja suave 1 Microscopio.

Procedimiento: 1.- Tomar la planta tratada con el fungicida durante dos a tres semanas anteriores en el invernadero. 2.- Lavar las plantas con la solución jabonosa. 3.- Limpiar el jabón con agua destilada haciendo varios lavados hasta quitar el exceso de jabón. 4.- Dejar reposar ahora los explantes en una solución de hipoclorito de sodio al 5 % y hacer los enjuagues pertinentes. 5.- Hacer los cortes a la planta y revisar las partes en el microscopio y anotar tus observaciones. 7.- Colocar los explanes identificados dentro de un tubo con agua destilada estéril. 8.- Dejar reposar los tubos en presencia de luz para observar comportamiento durante tres días. Nota: en caso de presentar contaminación en la siembra; desechar los tubos con los ex plantes y volver a tratar con diferentes concentraciones de las soluciones para desinfección. Buscar otras técnicas en publicaciones con otros métodos de desinfección de la planta. Ya que recuerda que cada planta tiene su propia colonización de microorganismos. Reporte de práctica: Selecciones la(s) opciones a solicitar

Introducción. Marco Teórico. Desarrollo de la Práctica. Resultados. Conclusiones y recomendaciones. Bibliografía. Anexos.

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No. de Práctica: 1

Nombre de la Práctica: Identificación de las partes de la planta

Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 2

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No. de Práctica: 2

Nombre de la Práctica: Preparación de las partes de la planta


Preparación de las partes de la planta que se utilizaran para realizar las técnicas de cultivos vegetales. (limpieza de la planta). Material y equipo:

Cantidad

Descripción

1 Estuche de disección. 1 Mesa de laboratorio. 1 Hipoclorito de sodio 5, 3, 1 %. 1 Solución de jabón 10%. 1 Cepillo o esponja suave 1 Microscopio.

Procedimiento: 1.- Tomar la planta tratada con el fungicida durante dos a tres semanas anteriores. 2.- Lavar las plantas con la solución jabonosa. 3.- Limpiar el jabón con agua destilada haciendo varios lavados hasta quitar el exceso de jabón. 4.- Deje reposar ahora los explanes en una solución de hipoclorito de sodio al 5 %v/v. y hacer los enjuagues pertinentes. 5.- Rociar sobre la planta una solución de fenol al 1% para eliminar hongos y deje reposar por un periodo corto este puede variar de 2 a 10 min. Y enjuague la planta con varios lavados de agua destilada. 6.- Hacer los cortes a la planta y revisar las partes en el microscopio y anotar tus observaciones. 7.- Colocar los explanes identificados dentro de un tubo con agua destilada estéril. 8.- Dejar reposar los tubos en presencia de luz para observar comportamiento durante tres días. Parte 2.-Explante libre de Contaminación (Confirmación). 1.- Preparar el medio de cultivo suficiente para bacterias y hongos y esterilice en autoclave durante un lapso de tiempo de entre 15 y 45 min. dependiendo que tan llana este la autoclave con el material a utilizar para siembra. 2.- Tomar parte del liquido de los tubos que contienen el explánte y siémbrelos dentro de las cajas en diferentes medios (el medio puede ser para hongos o para bacterias). 3.- Deje en incubación y revise por dos o tres días.

Nota: En caso de presentar contaminación en la siembra; desechar los tubos con los ex plantes y volver a tratar con diferentes concentraciones de las soluciones para desinfección. Buscar otras técnicas en publicaciones con otros métodos de desinfección de la planta. Ya que recuerda que cada planta tiene su propia colonización de m.o.

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No. de Práctica: 2

Nombre de la Práctica: Preparación de las partes de la planta

Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 2 Los antibióticos más utilizados están en el cuadro 1.1 en la siguiente pagina. Cabe mencionar que probablemente no se cuenten con estos en el laboratorio. Pero se podrían conseguir en una farmacia o droguería.

Reporte de práctica: Selecciones la(s) opciones a solicitar


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No. de Práctica: 3

Nombre de la Práctica: Medios de cultivo MS o WPM para cultivo de tejidos vegetales


Preparar los medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales. Material y equipo:

Cantidad

Descripción

1 Matraz de laboratorio 1 Mesa de laboratorio. 1 Medio MS y sales minerales. 1 Autoclave. 1 Frascos estériles y/o tubos donde se sembrara el explante. 1 Estuche de disección.

Procedimiento: 1.- Tomar el frasco del medio MS y leer las indicaciones para preparar 500 ml. 2. Disolver los macronutrientes en 100 ml de agua destilada estéril. (Esto puede requerir dos o tres gotas de HCl 5M.para mejorar o facilitar su dilución) 3. Añadir soluciones madre de nutrientes inorgánicos según indique la formula. 4. Añadir sólidos orgánicos y llevar a 500 ml. con agua destilada. 5.- Agitar para disolver aunado a ello adicione la cantidad de sacarosa aproximadamente 30 g/l. 6. Añadir la solución madre de vitaminas, a continuación, agregue las cantidades de las sustancias de crecimiento (Hormonas). Nota: Algunas hormonas no son Autoclave-hables, antes de adicionar las hormonas al medio de cultivo verificar si estas pueden o no meterse a la autoclave. 7. Ajustar la mezcla a un pH de 6,5 (± 0,3). 8. Añadir de 7.5 a 9 g Agar. 9. Mezclar la solución y hierba hasta que se disuelva el agar. El contenedor debe ser sellado con papel de aluminio para reducir la evaporación. 10. Añadir vidrio para hacer agua destilada hasta 1 litro. 11. Meter el medio preparado al Autoclave a 15 p.s.i. exactamente 15 minutos. 12. Vuelva el pH. Debe estar en el rango de pH 5,5-6,3. 13.- Esterilizar el material suficiente para hacer la siembra en frascos. 14- Una vez esterilizado el material y el medio en los frascos realizar el Notas: El medio es estable durante varias semanas en el refrigerador a bajas temperaturas 2-5º Guardar el medio asépticamente según sea necesario en contenedores estériles. Reporte de práctica: Selecciones la(s) opciones a solicitar


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No. de Práctica: 4

Nombre de la Práctica: Medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales


Preparar los medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales. Material y equipo:

Cantidad

Descripción


Procedimiento: 1.- Tomar el frasco del medio MS y leer las indicaciones para preparar 500 ml. 2. Disolver los micronutrientes en 100 ml de agua destilada estéril. (Esto puede requerir dos o tres gotas de HCl 5M.) 3. Añadir soluciones madre de nutrientes inorgánicos. 4. Añadir sólidos orgánicos y llevar a 500 ml con agua destilada. 5.- Agitar para disolver. 6. Añadir la solución madre de vitaminas, a continuación, agregue las cantidades de las sustancias de crecimiento (Hormonas). Nota: Algunas hormonas no son Autoclave-hables. 7. Ajustar la mezcla a un pH de 6,5 (± 0,3). 8. Añadir 7,5-9 g de Agar. 9. Revuelva la mezcla hierba y se disuelva el agar. El contenedor debe ser sellado con papel de aluminio para reducir la evaporación. 10. Añadir vidrio para hacer agua destilada hasta 1 litro. 11. meter el medio al Autoclave a 15 p.s.i. exactamente 15 minutos. 12. Vuelva el pH. debe estar en el rango de pH 5,5-6,3 .. 13.- Esterilizar el material suficiente para hacer la siembra en frascos. 14- Una vez esterilizado el material y el medio en los frascos realizar la siembra de explantes. Notas: El medio es estable durante varias semanas en el refrigerador a bajas temperaturas 2-5º Dispensar el medio asépticamente según sea necesario en contenedores esteriles. En caso de no contar con el medio de cultivo en el laboratorio; preparar las soluciones a partir de los siguientes cuadros que contienen las formulaciones: 1 - PREPARACIÓN DE LA Murashige y SK00G BASAL MEDIO (EM) 2 - PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN VGA * (VITAMINAS Y ÁCIDO GIBERÉLICO) 3 - PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE VITAMINAS 4 - PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN MADRE DE HORMONAS Ácido giberélico (AG3) 5.- PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES PARA AJUSTAR EL PH

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No. de Práctica: 5



1.- FORMULACION DEL MURASHIGE Y SK00G BASAL MEDIO (EM) Preparación de soluciones: Solución Stock A: 1.- Pesar las siguientes cantidades:

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No. de Práctica: 5


Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 3 de 5 2.- Disolver en 200 ml de agua destilada 3.- Guardar la solución en un frasco rotulado convenientemente en 400 CC. 4. Pesar 5 mg de los reactivos siguientes: CuSO4.5H2O O CoCL2.6H2 5.- Disolver en 10 ml de agua destilada. A 1 ml de la solución anterior y añadir 200 ml de agua. 6.- Guardar la solución en un frasco rotulado convenientemente a 400. Solución Stock B MgSO4 1.- Pesar de 3,7 g de MgSO4.7H2O y disolver en 100 ml de agua destilada. 2.- Guardar la solución en un frasco rotulado convenientemente a 4 ° C. Solucion Stock C: 1. Pesar 0,75 g de Na2EDTA. 2.- Disolver en caliente en 20 ml de agua destilada. Deje enfriar la solución. 3.-Pese 0,55 g de FeSO4.7H2O y disuelva en 20 ml de agua destilada 3. Mezclar las dos soluciones y llenar hasta 100 ml por adición de agua destilada Guarde la solución en un lugar oscuro, convenientemente etiquetados vial a 4 ° C. Solucion Stock D Vitaminas 1. Pesar los reactivos siguientes: Thyamine HCI 20mg Glycine 100mg 25 mg de ácido nicotínico Piridoxina HCI 25 mg 2.- Disolver en 500 ml de agua destilada. 3.- Revuelva bien y coloque la solución en viales de 20 ml y guardar en 0º. MS BASAL SOLUTION* Para 1 litro de medio basal de mezclar: 100 ml de solución madre A 10 ml de solución stock B 5 ml de solución stock C 10 ml de solución stock D 100 mg de lnositol Completar hasta 1 litro con agua destilada * Existencias A + B + C + D 2.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN VGA * (VITAMINAS Y ÁCIDO GIBERÉLICO) 1.- Para 500 ml de mezcla VGA mesclar lo siguiente: Thyamine HC! 10mg Glicina 200 mg Ácido nicotínico 50mg Piridoxine HCI 50mg Ácido giberélico (Stock 1 000 ppm) en 10 ml 2.- Hacer esta solución hasta 500 ml con agua destilada

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No. de Práctica: 5


Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 4 de 5 3.- Distribuir esta solución en viales de 20 ml. Nota: Utilizar 5 MI / I * Esta solución antes se llamaba de DPM 3.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE VITAMINAS 1.- Para preparar 500 ml de solución mezcla: Thyamine HCI10mg Glicina 200 mg Nicotínico acid50mg Piridoxine HOI50mg 2.- Aforar hasta 500 ml con agua destilada 3.- Distribuir esta solución en viales de 20 ml. Nota: Utilizar 5 MI / I. 4.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN MADRE DE HORMONAS Ácido giberélico (AG3) La solución madre de ácido giberélico: I, 000 ppm 1. Pesar 1 g de ácido giberélico y disolver bien con algunas gotas de alcohol. 2.- Añadir 200 ml de agua destilada 2. Guardar en un frasco rotulado convenientemente a los 0 ° C. El ácido giberélico puede ser esterilizados junto con el medio de cultivo: sin embargo, la pérdida de alguna actividad también es posible. Nota: Un ml de concentrado de solución (1000 ppm) contiene 1 mg de ácido giberélico. NAFTALENACETIC ÁCIDO (NAA) Solución stock de NAA 1.000 ppm 1.- Pesar .2 g de NAA y disolver bien con algunas gotas de NaOH 1N. 2. Añadir 200 ml de agua destilada. 3.- Guárdelo en un frasco rotulado convenientemente a 0 ~ O. Nota: Un ml de la solución madre (1000 ppm) contiene 1 mg de NAA. BENCYLAMINOPURINE (BAP] La solución madre de BAP: 1.000 ppm 1. Pesar 0. 2 g BAP y disolver bien con algunas gotas de NaOH 1N. 2.- Añadir 200 ml de agua destilada. 3. Guardar en un frasco rotulado convenientemente a los 0 ° C. Nota: La esterilización de BAP puede hacerse junto con el medio de cultivo, sin embargo, la pérdida de alguna actividad es también posible. Un ml de la solución madre (1000 ppm) contiene 1 mg de BAP

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No. de Práctica: 5


Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 5 de 5 INDOLEACETIC ÁCIDO (AIA) Solución madre de la AIA: 1.000 ppm 1. Pesar 0,2 mg de la AIA y disolver bien con algunas gotas de alcohol. 2.- Añadir 200 ml de agua destilada. 3. Guárdelo en un frasco rotulado convenientemente a los 0 ° C. Nota: Esterilización por filtración se recomienda. Un ml de solución madre (1000 ppm) contiene 1 mg de la AIA. KINETINE (KIN) La solución madre de KIN: 1.000 ppm 1. Pesar 0,2 g KIN y disolver bien con algunas gotas de NaOH 1N. 2.-Añadir 200 ml de agua destilada. 3. Guardar en un frasco rotulado convenientemente a los 0 ° C. Nota:KIN pueden ser esterilizados junto con el medio de cultivo, sin embargo, la pérdida de su actividad es también posible. Un ml de la solución madre (1000 ppm) contiene 1 mg de KIN. 2, 4-D La solución madre de 2,4-D: 1.000 ppm 1. Pesar 0,2 g de 2,4-D y disolver bien con algunas gotas de alcohol. 2.- Añadir 200 ml de agua destilada. 3.- Mantenga en un vial convenientemente etiquetados a 0 ° C. Nota: 2,4-0 pueden ser esterilizados junto con el medio de cultivo, sin embargo, una pérdida de su actividad es también posible. Un ml de la solución madre (1 000 ppm) contiene 1 mg de 2,4-0. 5.- PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES PARA AJUSTAR EL PH Solución para reducir el pH - Ácido clorhídrico (HCI) EN 1. Vierta 91,4 ml de agua destilada en un vaso de precipitados (Use una máscara y guantes para protegerse de los vapores de ácido). 2 Con una pipeta tomar 8,8 ml de ácido clorhídrico (concentrado comercial, 36. 5-38.00 / o]. ADVERTENCIA: No respirar al tomar el ácido. Use una pipeta de goma-bombilla. 3. Homogeneizar y conservar en un frasco de boca amplia, cerrado ya temperatura ambiente. Solución para el pH básico con hidróxido de potasio (KOH) 1. Introducir 50 ml de agua destilada en un vaso 2. Añadir 5,6 g de KOH y disolver bien. 3. Llevar a 1 00 ml con agua destilada Manténgalo en un circuito cerrado de amplia boca del vial a temperatura ambiente. Utilización Según el pH del medio, agregue la solución gota a gota hasta que el pH se alcanza.

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No. de Práctica: 6

Nombre de la Práctica: Medios de cultivo para plantas.


Preparar los medios de cultivo para plantas en cultivo de tejidos vegetales.

Material y equipo:

Cantidad Descripción


Procedimiento: Parte 1 Preparar el medio: • 1 sobre de Murashige y Skoog basal con un mínimo de sales orgánicas medio (MS). Si desea hacer su propio medio de cultivo, el uso dado a la receta el final de esta hoja de trabajo. • 1 L de agua destilada • 6 g de agar • 1,5 L o 2 L recipiente para preparar el medio de cultivo. • Tubos de policarbonato con tapas de rosca o en su defecto frascos de Gerber. Parte 1 Preparación de tubos esterilizados de medio de cultivo Esto hará que un 1 L de medio de cultivo, que es suficiente para preparar unos 100 tubos de cultivo. 1.- MS disolver la mezcla en unos 800 ml de agua destilada, agitando el agua continuamente. 2.- Pesar 6 g de agar y añadirlo a la solución MS. 3.- Calentar la solución suavemente mientras revolviendo hasta que todo el agar se haya disuelto. 4.- Añadir más agua destilada para que el total de volumen de hasta 1 L. 5.- Verter en caliente el medio en tubos o frascos de policarbonato a una profundidad de unos 15 mm. 4. Colocar los tubos (con tapas sentado en los tubos, pero no reforzado) en una olla a presión y esterilizar durante 20 minutos. Enfriar la olla a presión, a continuación, quite los tubos y apretar las tapas. Parte 2 Siembra de esquejes. Su material vegetal debe ser esterilizado para eliminar cualquier bacteria o esporas de hongos. El proceso de esterilización se hace para matar a todos los microorganismos, pero que no afectará negativamente a la materia vegetal. 1. Cortar la planta o parte de la planta en pequeños tramos de 1 cm de diámetro. Si se utiliza una hoja hacer cortes de la hoja , cortar los brotes de .5-.7 cm de longitud. Nota: En caso de que la planta ya haya sido tratada asépticamente antes, omita el paso 2.

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No. de Práctica: 6

Nombre de la Práctica: Medios de cultivo para plantas leñosas

Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 5 2. Lavar el material vegetal en detergente mezclado con agua durante unos 20 minutos. Nota: Si en material vegetal es peludo, como tallos de plantas de matorral, con un cepillo suave limpie para ayudar a eliminar los hongos etc detergente ayudará a humedecer el material y eliminar las burbujas de aire que pueden ser atrapados entre los diminutos pelos de una planta. 3.- Transferir la planta de lavado de material a la solución de esterilización. 4.- Agitar la mezcla durante 1 minuto y dejar en remojo durante 20 minutos 5.- Colocar en el recipiente de esterilización el material vegetal, los contenedores de agua estéril, las pinzas y cuchillas esterilizadas, toalla de papel para uso como limpieza de superficie. 6.- Colocar el material vegetal en un recipiente de agua esterilizada y lavar a fondo. Repita el proceso de lavado en otro recipiente de agua estéril (en sugerir algunos métodos menos 3 lavados con agua estéril). 7.- Tener preparado una sección de material vegetal en lugar estéril y pinzas en el medio en el tubo de policarbonato. 8.- Sembrar las piezas deben estar parcialmente sumergidas en el medio, botón floral mirando hacia arriba. 9.- Colocar la tapa herméticamente en el tubo. 10.- Colocar la planta de tubos que contienen las secciones en un área de luz del aula, lejos de la luz directa del sol, por ejemplo, bajo una luz fluorescente. Nuevos brotes deben desarrollar dentro de 2 semanas, y debe estar muy avanzada en 3-4 semanas. Nota: Las raíces pueden aparecer dentro de 6 semanas en la coliflor. Rosas y otras plantas pueden haber crecido con éxito utilizando técnicas de cultivo de tejidos. Sin embargo, una vez que los brotes han desarrollados tendrán que ser colocados en la base del brote en una solución con hormonas para estimular el crecimiento y el desarrollo de la raíz.

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No. de Práctica: 6



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No. de Práctica: 6



Nota: El medio es estable durante varias semanas en el refrigerador a bajas temperaturas 2-5º Mantener el medio asépticamente según sea necesario en contenedores esteriles.

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No. de Práctica: 6


Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 5 de 5 Lloyd and McCown (WPM) Inorganic Salt Formulation

Macronutrients (mg/l) Micronutrients (mg/l)

Ammonium nitrate (NH4NO3) 400mg/l Boric Acid (H3BO3) 6.2mg/l

Calcium chloride (CaCl2*2H2O) 96mg/l Na2EDTA*2H2Oa 37.2mg/lb

Magnesium sulfate (MgSO4*7H2O) 370mg/l Cupric Sulfate (CuSO4*5H2O) 0.25mg/l

Potassium sulfate (K2SO4) 990mg/l Ferrous sulfate (FeSO4*7H2O) 27.8mg/l

Potassium phospate (KH2PO4) 170mg/l Manganese sulfate(MnSO4*4H2O)c 22.3mg/l

Calcium nitrate (Ca(NO3)2*4H2O 556mg/l Zinc Sulfate (ZnSO4*7H2O) 8.6mg/l

Sodium molybdate (Na2MoO4*2H2O) 0.25mg/l

Lloyd and McCown (WPM) Common Organic Additives

myo-Inositol 100mg/l Nicotinic Acid 0.5mg/l

Pyridoxine*HCl 0.5mg/l Thiamine *HCl 1.0mg/l

Glycine 2.0mg/l Agar 6.0g/l

Sucrose 20g/l a= Originally printed as Na2EDTA b= Originally printed as 37.3 mg/l anhydrous form c= Originally printed as MnSO4*H2O Lloyd, G. and McCown,B. 1980 Combined Proceedings of the International Plant Propagators Society. 30:421-427. Owen H.R. and Miller A.R. 1992. An examination and correction of plant tissue culture basal medium formulations. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 28: 147-150. Media Recipe Database | Plant Tissue Culture Network | Media Information Page

Reporte de práctica: Selecciones la(s) opciones a solicitar

Introducción. Marco Teórico. Desarrollo de la Práctica. Resultados. Conclusiones y recomendaciones. Bibliografía.

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R00/02/08 F-SA-67




No. de Práctica: 7

Nombre de la Práctica: Micro propagación de plantas


Micro propagación de plantas in vitro Micropropagación Plántulas in vitro, que son libres de patógenos, se utilizan como material inicial para la patata y programas de semillas de camote. Los métodos utilizados en estos programas, principalmente micropropagación dependerá de su volumen de producción y la infraestructura disponible. En el caso de la patata micropropagación, los métodos han sido ya descritos (Dodds, 1985; Espinoza et al. 1992). Que se han verificado en muchas instituciones y que se basan en el rápido crecimiento de cada nodo de recortes, con múltiples tallos o esquejes de nodo. Después, la base se describen los métodos de micropropagación. Nodo A. micropropagación Este método se basa en el principio de que el nodo de una in vitro de plántulas en un medio de cultivo induce el desarrollo de las yemas axilares, lo que resulta en un nuevo in vitro de plántulas. Este tipo de propagación promueve el desarrollo de una preexistente estructura morfológica. La condición nutricional y hormonal del medio rompe la latencia de las yemas axilares y promueve su desarrollo rápido (Lizárraga et al. 1989). Formación de callo y regeneración de plantas se debe evitar porque tienden a afectar a la genética estabilidad del genotipo. En virtud de la sala de condiciones controladas micropropagación es rápida. Cada nodo plantado en una propagación producirá un medio de plántulas que ocupará toda la longitud del tubo de ensayo, después de aproximadamente cuatro semanas para la patata, y de seis semanas de camote. El resultado in vitro plántulas pueden ser trasplantadas a condiciones in vitro en pequeñas macetas en el invernadero. B. Micropropagación por esquejes de nodo en un medio líquido Esta técnica se aplica tanto con la papa y el camote para producir un gran número de nodos rápidamente. Tallo con 5 a 8 nodos son preparados por la eliminación de ambos y el ápice de la raíz in vitro de plantas para ser reproducido. Los tallos son colocados en los correspondientes propagación líquido medio (Espinoza et al., 1992: Lizárraga et al. 1989). También es posible utilizar los ganglios aislados: los nodos y las nuevas plántulas germinadas se desarrollarán durante un período de 3 a 4 semanas. Material y equipo:

Cantidad

Descripción


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No. de Práctica: 7

Nombre de la Práctica: Micro propagación de plantas

Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 2 Procedimiento: 1. Esterilizar placas de Petri (colocados en bolsas de papel) y preparar la cámara de flujo laminar por la desinfección de las superficies internas con el alcohol. 2.- Esterilizar los instrumentos con un instrumento esterilizador y colóquelos en un recipiente estéril. 3. Abrir el tubo, quitar la de plántulas y colóquelo sobre una placa de Petri con la ayuda de fórceps. 4. Quitar las hojas y cortar los nudos. 5. Abrir un tubo estéril que contiene frescos de mediano y lugar dentro de un nodo, tratando de hundir ligeramente en el medio con el botón arriba. Cerrar el tubo. 6. Sellar el tubo con un gas permeable cinta de plástico (o parafilm Saram recapitulación) y etiquetar correctamente. Nota: Se recomienda colocar dos explantes en 16 x 125 mm tubos, tres en 18 x 150 mm tubos, cinco en 25 x 150 mm tubos, magenta y 20-30 en los buques.

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No. de Práctica: 8

Nombre de la Práctica: Método para aislar protoplastos

Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 1 de 3 Objetivo: Utilizar un método para aislar un gran número de metabólicamente competente de protoplastos hojas de monocotiledóneas (gramíneas), dicotiledóneas (como la espinaca y la girasol), o de hipocotilo tejido (por ejemplo, Brassica napus). Material y equipo:

Cantidad

Descripción


Procedimiento: 1. Corte rodajas de hojas de monocotiledóneas y dicotiledóneas con las hojas de corte o con una cuchilla afilada en segmentos 0,5-1 mm de tamaño. En el caso de las dicotiledóneas, la epidermis se puede raspar fuera antes de cortar por el roce con una multa carborúndum polvo o con un pincel fino de nylon. 2. Suspender en 50 mL de sulucion de digestión (de 10-15 g de tejido vegetal), de acuerdo a la receta de solución A. 3. Incubar la hoja rodajas o en trozos de 19 cm de diámetro que contiene el plato digestión medio durante 3 horas a 25 ° C, cubierta con una película plástica. Es posible ser ventajoso para sustituir a la digestión medio a intervalos de 1 hora, como las enzimas pueden ser inactivadas por sustancias liberadas de roto células. 4. Después de la terminación de la digestión de incubación medio es cuidadosamente se extrae y se desecha. Por lo general, contiene muy pocos protoplastos. El tejido de la planta se lavan 3 veces agitando suavemente con 20 ml de lavado medio (Solución B). 5. Después de cada lavado, el tejido es recogida por colada a través de un colador de té (0,5-a 1-mm de tamaño de poro) y la combinación de lavados luego se filtra a través de malla de nylon (100-200 mm de tamaño de poro) para eliminar tejido vascular y sin digerir el material. 6. Los protoplastos son recogidos por centrifugación durante 3 minutos a 500-1000 rpm y el sobrenadante es aspirado y puede desecharse. 7. Este crudo protoplasto preparación también contiene algunas células y cloroplastos y es importante purificar la protoplastos para eliminar estos contaminantes. Esto puede hacerse con soluciones de sacarosa y sorbitol de diferentes densidades. 8. El protoplasto es suavemente precipitado resuspendido en 40 ml de solución C, y esta suspensión se divide entre los dos 100-ml tubos de centrífuga. 9. Para cada tubo, agregue lentamente 5 ml de solución D y, a continuación, esta superposición con 5 ml de medio de lavado (Solución B) para hacer un 3-paso gradiente. 10. Centrifugar a 3000 rpm durante 5 minutos. 11. Los protoplastos ahora recoger como una banda en la interfaz entre el 2 arriba capas. Retirar cuidadosamente con una pipeta Pasteur. 12. Losl protoplastos deben ser examinados con un microscopio de luz para asegurar que la reparación es libre de células y cloroplastos. 13. Cuando una gran parte de protoplastos este en este sacarosa / sorbitol gradiente, la densidad

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No. de Práctica: 8

Nombre de la Práctica: Método para aislar Protoplastos

Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 3 de las 2 capas se puede aumentar mediante la adición de 5% -10% Dextrano (15000-20000 Señor) o el 10% -20% Ficoll para aumentar el porcentaje de protoplastos flotante. 14. Los Protoplastos purificados puede ser concentrarse al diluir con 10 mL de Solución B, y centrifugar a 1000 rpm por 3 minutos y luego la resuspenda el precipitado en una pequeña cantidad de medio agitando suavemente los tubos. 15. Los protoplastos son estables durante un máximo de 24 horas cuando se almacena en hielo. La actividad Fotosintética de los protoplastos puede ser determinada mediante la medición con un electrodo de oxígeno, siempre revolviendo rápido se evita el daño a los protoplatos, ya que de no hacerse asi se llega a romper algunos de los protoplastos. Un medio adecuado para aparece como Solución E.

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No. de Práctica: 8

Nombre de la Práctica: Método para aislar protoplastos


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Bibliografía

Abdelnour-Esquibel A;Escalant Jean V.(1994) Conceptos Básicos de Cultivo de Tejidos Vegetales.

Alan Doyle & J. Bryan Griffiths. p.(1998);Cell and tissue culture : laboratory procedures in biotechnology I edited by cm. Includes bibliographical references and index. ISBN 0-471-98255-5 (alk. paper) 1. Cell culture-Laboratory manuals. 2. Tissue culture- Laboratory manuals. 1. Doyle, Alan. 11. Griffiths, J. B. ~P248,2S.C44C448 1998

Biotechnology Online School Resource (2008) For further information contact the Gene Technology Information Service on freecall Australia-wide 1800 631 276.© CSIRO 2008

Edwin F. George Merriott, Somerset, United Kingdom Michael A. Hall (2008)Plant Propagation by Tissue Culture 3rd Edition Volume 1. The Background Institute

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Jeffrey W Pollard and John M Walker, 01990 by The Humana Press Methods in Molecular B&gy, vol. 6, P/ml Cell and ksue Cullure Edited

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Mineo, L. 1990. Plant tissue culture techniques. Pages 151-174, in Tested studies for laboratoryteaching. Volume 11. (C. A. Goldman, Editor). Proceedings of the Eleventh Workshop/Conference of the Association for Biology Laboratory Education (ABLE), 195 pages.

S. Harisha.(2007) Biotechnology Procedures and Experiments Handbook. (2007)ISBN: 978-1-934015-11-7; Printed in Canada.

Tonny Storr (2002); Plant Tissue Culture Sharnbrook upper School, Bedfor in association with uniliver PLC, Colworth House, Bebfroshire.SCSST 1985.

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Anexos:

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1

Plant Tissue Culture Basal Salts and MediaProduct Number Product Description Product Notes Package

SizeA267 ANDERSON BASAL SALT MIXTURE

Contains the macro- and micronutrients as described by Anderson (1978, 1980).Plant Tissue Culture Tested

Storage TempSoluble In

2-6° CWater

1 L10 L50 L

B144 BANANA AGS BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, vitamins, and plant growth regulators required to culture bananas.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M462 Musa (Banana) Medium: See MS-Based Plant Specifi c Medium Section

C206 CAPE SUNDEW/ VENUS FLY TRAP MULTIPLICATION BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, vitamins, and plant growth regulators required for the multiplication of carnivorous plants.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

C216 CAPE SUNDEW/ VENUS FLY TRAP PRETRANSPLANT BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, vitamins, and plant growth regulators required for the growth of carnivorous plants.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

C212 CARROT CALLUS INITIATION BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, vitamins, and plant growth regulators required to initiate carrot callus from pith tissue.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

C222 CARROT SHOOT DEVELOPMENT BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, vitamins, and plant growth regulators required to initiate shoots from carrot callus.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

C287 CHEE & POOL C2d VITIS BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients as described by Chee & Pool (1987).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

C167 CHU N6 BASAL MEDIUM w/ VITAMINSContains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Chu (1975).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

C416 CHU N6 BASAL SALT MIXTUREContains the macro- and micronutrients as described by Chu (1975).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

C149 CHU N6 VITAMIN SOLUTION (1000x)See Vitamin Section (following the MS-based media section)

D146 DCR BASAL SALT MIXTUREContains macro- and micronutrients as described by Gupta & Durzan (1985).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

Our Plant Tissue Culture Tested basal salts and media have been formulated according to the references

cited in their respective product listings. These basal salts and media are then manufactured and packaged in en-vironmentally controlled facilities. Our biological testing ensures that each lot produces culture growth consistent with prior lots.

On the following pages are many popular basal salt and media formulas followed by Murashige and Skoog-based formulations. Vitamin listings and formulations complete this section. Please contact us with inquiries about larger package sizes or custom formulations.

Instructions for basal salt, media, and vitamin preparation

are provided in the Technical Information Section of this catalog and on our web site: www.phytotechlab.com.

Basal Salt vs Medium... our defi nition A “Basal Salt Mixture” contains macro- and micronutri-B A “Basal Salt Mixture” contains macro- and micronutri-Bents, but no vitamins, carbohydrates, or growth regulators. A “Basal Medium” contains the macro- and micronutrients, but is incomplete as it typically lacks an organic compo-nent: vitamins, carbohydrates, or growth regulators. A “Medium” typically is complete and requires no additional components (except gelling agent, if desired). A “Modifi ed” Basal Salt, Basal Medium, or Medium indicates that one or more of the components varies in concentration or form from that originally published.

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2

All components expressed in mg/L

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COMPONENT A267 B144 C206 C216 C212 C222 C287 C167 C416 D146Aluminum Chloride•6H2OAmmonium Nitrate 400 1650 400 825 1650 400Ammonium Phosphate, MonobasicAmmonium Sulfate 134 134 463 463Boric Acid 6.2 6.2 6.2 3.1 3 3 6.2 1.6 1.6 6.2Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 333 332.2 166.5 113.24 113.24 125.33 125.33 64.14Calcium Nitrate 492.3 386.31Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.025Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.25Na2EDTA•2H2O 74.5 74.5 37.26 37.26 37.3 37.25 37.25 37.3Ferric ChlorideFerric Sodium EDTA 36.7 18.35Ferrous Sulfate•7H2O 55.7 55.7 27.8 27.8 27.8 27.85 27.85 27.8Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 181 180.7 90.5 122.09 122.09 180.6 90.37 90.37 180.7Manganese Chloride•4H2OManganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 8.45 10 10 0.845 3.3 3.3 22.3Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.125 0.25 0.25 0.25 0.25Molybdenum TrioxideNickel Chloride•6H2O 0.025Nickel Sulfate•6H2OPotassium ChloridePotassium Iodide 0.3 0.83 0.415 0.75 0.75 0.8 0.8 0.83Potassium Nitrate 480 1900 480 950 2500 2500 1900 2830 2830 340Potassium Phosphate, Dibasic

Potassium Phosphate, Monobasic 170 85 170 400 400 170

Potassium SulfateSodium NitrateSodium Phosphate Monobasic 330.6 295 380 150 150Sodium SulfateZinc Nitrate•6H2OZinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 4.3 2 2 8.6 1.5 1.5 8.6Adenine Hemisulfate 80Glycine (Free Base) 22,4-Dichlorophenoxyacetic Acid 16-γ,γ-Dimethylallylaminopurine (2iP) 10 1Indole-3-acetic Acid 1Kinetin 0.2L(-)Malic Acidmyo-Inositol 100 100 50 100 100 10Nicotinic Acid (Free Acid) 1 1 1 0.5Pyridoxine•HCI 1 1 1 0.5Thiamine•HCI 0.4 0.4 0.2 10 10 1 1Grams of powder to prepare 1 liter 1.89 4.71 2.12 2.20 3.21 3.21 4.49 3.99 3.98 1.64pH±0.5 at RT 3.7 5.7 3.5 4.3 3.0 4.0 4.0 4.0 4.1 4.0

NS = No Specifi cation Established rev 11/200531

3

Plant Tissue Culture Basal Salts and Media (continued)Product Number Product Description Product Notes Package

SizeD190 DKW BASAL SALT MIXTURE

Contains the macro- and micronutrients as described by Driver & Kuniyuki (1984) and McGranahan, et al (1987).


2-6° CWater

1 L10 L50 L

D191 DKW BASAL MEDIUMContains 10 g/L Sucrose; without VitaminsContains macro- and micronutrients as described by Driver & Kuniyuki (1984) and McGranahan, et al. (1987).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

D189 DKW BASAL MEDIUM Contains 30 g/L Sucrose; without vitaminsContains macro- and micronutrients as described by Driver & Kuniyuki (1984) and McGranahan, et al. (1987).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

E330 ERIKSSON VITAMIN SOLUTION (1000x)See Vitamin Section (following the MS-based media section)

G768 GAMBORG BASAL SALT MIXTUREContains the macro- and micronutrients as described by Gamborg, et al. (1968).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

G398 GAMBORG B-5 BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Gamborg, et al. (1968).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

G359 GAMBORG (PRL-4-DM) LONG BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Gamborg, et al. (1966).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

G249 GAMBORG VITAMIN POWDER (1000x)See Vitamin Section (following the MS-based media section)

G219 GAMBORG VITAMIN SOLUTION (1000x)See Vitamin Section (following the MS-based media section)

G371 GRESSHOFF & DOY BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients as described by Gresshoff & Doy (1974).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

H393 HELLER BASAL SALT MIXTUREContains the macro- and micronutrients as described by Heller (1953).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

H396 HELLER/ WHITE MODIFIED BASAL SALT MIXTUREContains the macro- and micronutrients as described by Heller (1953) and White (1963). Without Molybdenum TrioxidePlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

H353 HOAGLAND MODIFIED BASAL SALT MIXTUREContains Ferrous SulfateContains the macro- and micronutrients as described by Hoagland and Arnon (1938).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

HOSTA MediaSee MS-Based Plant-Specifi c Media (following this section)

K413 KAO & MICHAYLUK BASAL SALT MIXTUREContains the macro- and micronutrients as described by Kao & Michayluk (1975).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

K427 KAO & MICHAYLUK MODIFIED BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, vitamins, and organic acids as described by Kao & Michayluk (1975).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

K421 KAO & MICHAYLUK VITAMIN SOLUTION (100x)See Vitamin Section (following the MS-based media section)

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COMPONENT D190 D191 D189 G768 G398 G359 G371 H393 H396 H353 K413 K427Aluminum Chloride•6H2O 0.0543 0.03Ammonium Nitrate 1416 1416 1416 1000 600 600Ammonium Phosphate, Monobasic 115.03

Ammonium Sulfate 134 134 200Boric Acid 4.8 4.8 4.8 3 3 3 0.3 1 1.24 2.86 3 3Calcium Chloride, Anhydrous 112.5 112.5 112.5 113.24 113.24 113.24 56.7 453 453Calcium Nitrate 1367 1367 1367 241.2 300 656.4Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.25 0.025 0.025 0.025Cupric Sulfate•5H2O 0.25 0.25 0.25 0.025 0.025 0.25 0.025 0.03 0.03 0.08 0.025 0.025

Na2EDTA•2H2O 45.4 45.4 45.4 37.26 37.26 186.0 37.25 3.35 37.26 37.26

Ferric Chloride 1Ferrous Sulfate•7H2O 33.8 33.8 33.8 27.8 27.8 139.0 27.85 25 2.5 27.85 27.85Magnesium Sulfate, AnhydrousMagnesium Sulfate, Anhydrous 361.49 361.49 361.49 122.09 122.09 122.09 17.099 122.1 351.63 240.76 146.55 146.55Manganese Chloride•4H2O 1.81Manganese Sulfate•H2O 33.5 33.5 33.5 10 10 132.0 1 0.0758 0.01 10 10Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.39 0.39 0.39 0.25 0.25 0.25 0.025 0.25 0.25Molybdenum Trioxide 0.016Nickel Chloride 0.03 0.03Nickel Sulfate•6H2O 0.005 0.005 0.005Potassium Chloride 300 65 750 65 300 300Potassium Iodide 0.75 0.75 0.75 0.8 0.01 0.01 0.75 0.75Potassium Nitrate 2500 2500 1000 1000 80 606.6 1900 1900Potassium Phosphate, Monobasic 265 265 265 300 170 170Potassium Sulfate 1559 1559 1559Sodium Nitrate 600Sodium Phosphate Monobasic 150 150 90.0 108.75 16.5Sodium Sulfate 200Zinc Nitrate•6H2O 17 17 17Zinc Sulfate•7H2O 2 2 3 0.3 1 1 0.22 2 2p-Aminobenzoic Acid 0.2 0.02L-Arginine (Free Base) 40L-Ascorbic Acid 0.4 2Asparagine 40D-Biotin 0.00025 0.2 0.01D-Calcium Pantothenate 0.4 1Choline Chloride 0.2 1Citric Acid (Free Acid) Anhydrous 40Cyancobalamin, Vit B12 0.02Folic Acid 0.015 0.4Fumaric Acid 40L-Glutamine 60Glycine (Free Base) 20 4L(-)-Maleic Acid 40L-Methionine 30.0myo-Inositol 100 100 10 100Nicotinamide 1Nicotinic Acid (Free Acid) 1 0.5 0.1L-Phenylalanine 20Pyridoxine•HCI 1 0.5 0.1 1Pyruvic Acid 20Ribofl avin 0.015 0.2Sucrose 10,000 30,000Thiamine•HCI 10 0.5 1 1L-Tryptophan 40Vitamin A 0.01Vitamin D3 0.01Grams of powder to prepare 1 liter 5.22 15.22 35.22 3.10 3.21 3.64 2.71 1.64 1.04 1.63 3.65 3.9pH±0.5 at RT 4.3 4.0 4.1 4.0 4.0 NS 3.9 4.9 4.7 4.5 4.0 4.4NS = No Specifi cation Established

rev 11/2005rev 11/2005

33

5

Product Number Product Description Product Notes Package

SizeL689 LINSMAIER & SKOOG BASAL MEDIUM

This medium may be sold as Murashige & Skoog Medium with Minimal Organics (MSMO) by some media suppliers.Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Linsmaier & Skoog (1965).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

L477 LINSMAIER & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUMpH Adjusted and BufferedThis medium may be sold as Murashige & Skoog Medium with Minimal Organics (MSMO) by some media suppliers.Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Linsmaier & Skoog (1965).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

L467 LINSMAIER & SKOOG BASAL MEDIUMw/ 30 g/L SUCROSE & 7 g/L AGARContains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Linsmaier & Skoog (1965).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

L452 LINSMAIER & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUMw/ 30 g/L SUCROSE & 7 g/L AGARpH Adjusted and BufferedContains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Linsmaier & Skoog (1965).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

L154 LLOYD & McCOWN WOODY PLANT BASAL SALT MIXTUREContains the WPM macro- and micronutrients as described by Lloyd & McCown (1981).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

L449 LLOYD & McCOWN WOODY PLANT BASAL MEDIUM w/ VITAMINSContains the WPM macro- and micronutrients, and vitamins as described by Lloyd & McCown (1981).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

L444 LLOYD & McCOWN WOODY PLANT MICRONUTRIENT MIXTUREContains the WPM micronutrients described by Lloyd & McCown (1981).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M419 MG BASAL SALT MIXTUREModifi ed Murashige & Skoog/ Gamborg Basal Salt MixturePlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

MURASHIGE & SKOOG BASAL SALTS & MEDIASee Murashige & Skoog-Based Basal Salts & Media Section (following this section)

N492 NB BASAL MEDIUMModifi ed Chu/ Gamborg Basal MediumContains the macronutrients as described by Chu (1975) and the micronutrients as described by Gamborg, et al. (1968).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

N613 NITSCH & NITSCH BASAL SALT MIXTUREContains the macro- and micronutrients as described by Nitsch & Nitsch (1969).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

N616 NITSCH & NITSCH BASAL MEDIUM w/ VITAMINSContains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Nitsch & Nitsch (1969).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

N608 NITSCH & NITSCH VITAMIN POWDER (1000x)See Vitamin Section (following the MS-based media section)

N603 NITSCH & NITSCH VITAMIN SOLUTION (1000x)See Vitamin Section (following the MS-based media section)

34

6


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COMPONENT L689 L477 L467 L452 L154 L449 L444 M419 N492 N613 N616Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 400 400 720 720Ammonium Sulfate 33.5 463Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 2.3 3 10 10Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 332.2 332.2 332.2 72.5 72.5 72.5 111.36 125.33 166 166Calcium Nitrate 386 386Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.0125 0.025Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.25 0.25 0.25 0.0125 0.025 0.025 0.025Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 37.26 37.26 37.3 37.3 37.3 18.64 37.26 37.26 37.26Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8 27.85 27.85 27.85 13.9 27.8 27.8 27.8Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7 75.7 90.37 90.372 90.372Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 22.3 22.3 22.3 6.7 10 18.9 18.9Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.125 0.25 0.25 0.25Potassium Hydroxide 100 100Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.4 0.75Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1100 2830 950 950Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170 170 170 42.5 400 68 68Potassium Sulfate 990 990Sodium Nitrate 437.8Sodium Phosphate Monobasic 32.6Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 2.7 2 10 10Agar 7000 7000D-Biotin 0.05Folic Acid 0.5Glycine (Free Base) 2 2MES (Free Acid) 1000 1000myo-Inositol 100 100 100 100 100 100 100Nicotinic Acid (Free Acid) 0.5 1 5Pyridoxine•HCI 0.5 1 0.5Sucrose 30,000 30,000Thiamine•HCI 0.4 0.4 0.4 0.4 1 10 0.5Grams of powder to prepare 1 liter 4.43 5.53 41.43 42.53 2.30 2.41 0.53 1.88 4.10 2.10 2.21pH±0.5 at RT NS 6.2 NS NS NS NS 4.3 4.0 3.8 NSNS = No Specifi cation Established rev 11/2005

35

7


SizeN479 NLN BASAL MEDIUM

Contains the macro- and micronutrients, and organic constituents as described by Lichter (1982); without sucrose.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

P713 PARKER THOMPSON BASIC C FERN BASAL SALT MIXTUREContains the macro- and micronutrients as described by Hickok, et al. (1995). Formulated for the growth of Ceratopteris richardii.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

Q673 QUOIRIN & LEPOIVRE BASAL SALT MIXTUREContains the macro- and micronutrients as described by Quoirin & Lepoivre (1977) and Quoirin, et al. (1977).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

R756 ROSE MODIFIED INITIATION BASAL MEDIUMStage IContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

R757 ROSE MODIFIED MULTIPLICATION BASAL MEDIUMStage IIContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

R758 ROSE MODIFIED ROOTING BASAL MEDIUMStage IIIContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

S816 SCHENK & HILDEBRANDT BASAL SALT MIXTUREContains the macro- and micronutrients as described by Schenk and Hildebrandt (1972).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

S811 SCHENK & HILDEBRANDT MODIFIED BASAL MEDIUMContains 10 g/L Sucrose; Without VitaminsPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

S808 SCHENK & HILDEBRANDT MODIFIED BASAL MEDIUM Contains 10 g/L sucrose, 1⁄2x vitamins, 1⁄2x micro- and 1⁄2x macronutrients.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

S806 SCHENK & HILDEBRANDT MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Without CalciumPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

S813 SCHENK & HILDEBRANDT MODIFIED BASAL MEDIUMContains vitamins and 10g/L sucrose.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

S826 SCHENK & HILDEBRANDT VITAMIN POWDER (100x)See Vitamin Section (following the MS-based media section)

36

8


NLN

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COMPONENT N479 P713 Q673 R756 R757 R758 S816 S811 S808 S806 S813Ammonium Molybdate 0.037Ammonium Nitrate 125 400 1650 1650 412.5Ammonium Phosphate, Monobasic 300 300 150 300 300

Boric Acid 10 1.86 6.2 6.2 6.2 1.55 5.0 5.0 2.5 5.0 5.0Calcium Chloride, Anhydrous 19.628 333 333 83.25 151 151 75.5 151Calcium Nitrate 347 833.77Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.006 0.1 0.1 0.05 0.1 0.1Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.37 0.025 0.025 0.025 0.006 0.2 0.2 0.1 0.2 0.2Na2EDTA•2H2O 37.3 37.3 20 20 10 20 20Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 9.175Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 15 15 7.5 15 15Magnesium Sulfate, Anhydrous 61 58.565 175.79 181 181 45.25 195.4 195.4 97.7 195.4 195.4Manganese Sulfate•H2O 18.95 0.25 0.76 16.9 16.9 4.225 10 10 5 10 10Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.063 0.1 0.1 0.05 0.1 0.1Potassium Iodide 0.08 0.83 0.83 0.208 1.0 1.0 0.5 1.0 1.0Potassium Nitrate 125 1800 1900 1900 475 2500 2500 1250 2500 2500Potassium Phosphate, Monobasic 125 500 270 170 170 42.5Zinc Sulfate•7H2O 10 0.52 8.6 8.6 8.6 2.15 1.0 1.0 0.5 1.0 1.0L-Ascorbic Acid 50 506-Benzylaminopurine (BA) 2.0 3.0D-Biotin 0.05Citric Acid (Free Acid) Anhydrous 50 50Folic Acid 0.5L-Glutamine 800Glutathion 30Glycine (Free Base) 2.0 2.0 2.0 2.0Indole-3-acetic Acid 0.30 0.30myo-Inositol 100 100 100 100 500 1000α-Naphthaleneacetic Acid 0.03Nicotinic Acid (Free Acid) 5.0 0.5 0.5 0.5 2.5 5.0Pyridoxine•HCI 0.5 0.5 0.5 0.5 0.25 0.5L-Serine 100Sucrose 10000 10000 10000Thiamine•HCI 0.5 0.4 0.4 0.4 2.5 5.0Grams of powder to prepare 1 liter 1.93 0.77 3.56 4.51 4.51 1.18 3.20 13.20 12.10 3.05 14.21pH±0.5 at RT 4.5 3.8 3.9 3.5 3.5 5.0 4.2 4.3 4.5 4.3 4.3NS = No Specifi cation Established

rev 11/2005

37

9


SizeT853 TM4G BASAL SALT MIXTURE

Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

T868 TM4G BASAL MEDIUM

Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

T856 TOBACCO MODIFIED CALLUS INITIATION BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

T864 TOBACCO MODIFIED SHOOT MULTIPLICATION BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

T867 TOBACCO MODIFIED SHOOT & ROOT BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

T861 TOBACCO MODIFIED ROOT INITIATION BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

W863 WESTVACO WV3 BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Coke (1996b).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

W865 WESTVACO WV5 BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Coke (1996a).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

W898 WHITE BASAL SALT MIXTUREContains the macro- and micronutrients as described by White (1963).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

Murashige & Skoog Basal Salts and Media following this section.

38

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TM4G

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COMPONENT T853 T868 T856 T864 T867 T861 W863 W865 W898Ammonium Nitrate 320 320 1650 1650 1650 1650 700Ammonium Phosphate, Monobasic 230 230Ammonium Sulfate 130 130Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 31.0 31.0 1.5Calcium Chloride, Anhydrous 113.25 113.25 333 333 333 333 452.88 452.88Calcium Nitrate 208.5Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.25 0.25 0.001Na2EDTA•2H2O 18.65 18.65Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 36.7 36.7 36.71Ferric Sulfate 2.5Ferrous Sulfate 13.9 13.9Magnesium Sulfate, Anhydrous 122.12 122.12 181 181 181 181 903.79 903.79 351.62Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 15.16 15.16 5.31Molybdenum Trioxide 0.001Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25Potassium Chloride 656.79 718.67 65.0Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.75Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900 1900 910.06 1084.06 80.0Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 270 270Sodium Phosphate Monobasic 16.5Sodium Sulfate 200Zinc Sulfate•7H2O 9.2 9.2 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 3.0D-Biotin 0.05Casein, Enzymatic Hydrolysate 1000 1000 1000 1000Folic Acid 0.5Glycine (Free Base) 2.5 2.0 2.0 2.0 2.0Indole-3-acetic Acid 2.0 0.03 3.0Kinetin 0.2 1.0 1.0myo-Inositol 100 100 100 100 100 1000 1000Nicotinic Acid (Free Acid) 5.0 0.5 0.5 0.5 0.5Pyridoxine•HCI 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5Thiamine•HCI 0.5 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4Grams of powder to prepare 1 liter 2.88 2.99 5.41 5.41 5.41 5.41 5.22 0.934pH±0.5 at RT NS NS 5.5 4.3 NS 5.0 NS NS 4.7NS = No Specifi cation Established rev 11/2005

39

11

Murashige & Skoog-Based Basal SaltsProduct Number Product Description Product Notes Package

SizeM524 MURASHIGE & SKOOG BASAL SALT MIXTURE

Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture TestedSee Product No. M519 for Murashige & Skoog Basal Medium w/ Vitamins


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M499 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTUREContains FeNa–EDTAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M502 MURASHIGE & SKOOG MACRONUTRIENT SALT BASEContains the macronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M654 MURASHIGE & SKOOG MACRONUTRIENT STOCK SOLUTION (10x)Contains the macronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M554 MURASHIGE & SKOOG MICRONUTRIENT SALT BASEContains the micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M529 MURASHIGE & SKOOG MICRONUTRIENT STOCK SOLUTION (10x)Contains the micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M153 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTUREContains 1⁄2x macro- and 1⁄2x micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M561 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTUREContains 1⁄2x Ammonium Nitrate and 1⁄2x Potassium Nitrate, with the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M290 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTUREContains 1⁄2x Ammonium Nitrate, 1⁄2x Potassium Nitrate, and 1⁄2x Calcium Chloride, with the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M571 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTUREWithout Ammonium Nitrate. Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M531 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTUREWithout Nitrogen. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962), modifi ed by eliminating NH4NO3 and KNO3.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M407 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Without Nitrogen, Phosphorous, and PotassiumContains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

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COMPONENT M524 M499 M502 M654 M554 M529 M153 M561 M290 M571 M531 M407

Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 16500 825 825 825

Boric Acid 6.2 6.2 6.2 62 3.1 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2

Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 333 332.2 3322 166.1 332.2 166.1 332.2 332.2 332.2

Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.25 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025

Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.25 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025

Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 373 18.63 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26

Ferric Sodium EDTA 36.7

Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 278 13.9 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8

Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 181 180.7 1810 90.35 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7

Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 169 8.45 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9

Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O

0.25 0.25 0.25 2.5 0.125 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25

Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 8.30 0.415 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83

Potassium Nitrate 1900 1900 1900 19000 950 950 950 1900

Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 1700 85 170 170 170 170

Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 86 4.3 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6

Grams of powder to prepare 1 liter 4.33 4.30 4.23 N/A 0.10 NA 2.17 2.56 2.39 2.68 0.78 0.61

pH±0.5 at RT 3.9 NS NS 4.3 4.3 3.2 NS 4.3 NS NS 4.3 4.3

NS = No Specifi cation Established Rev. 11/2005

41

13

Murashige & Skoog-Based MediaProduct Number Product Description Product Notes Package

SizeM519 MURASHIGE & SKOOG BASAL MEDIUM w/ VITAMINS

With the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture TestedContains the basal salts of Product No. M524


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M541 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUMWithout Potassium Phosphate; contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients, and modifi ed vitamins as described by Murashige & Skoog (1962). Also contains (mg/L): 300 Sodium Phosphate Monobasic, 150 Adenine Hemisulfate, and 1000 Casein Hydrolysate.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M404 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM w/ GAMBORG VITAMINSWith the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962), and vitamins as described by Gamborg, et al. (1966).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M401 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED MEDIUMContains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); modifi ed with the addition of (mg/L): 1.0 BA and 0.1 NAAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M701 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUMThis medium was formerly listed as M506.This medium may be sold as Murashige Begonia Multiplication Medium by some media suppliers. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); modifi ed with the addition of (mg/L): 10 2iP and 30 Adenine Hemisulfate.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M702 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED MEDIUMContains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); modifi ed with the addition of (mg/L): 30 2iP and 80 Adenine Hemisulfate, and 0.3 IAAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M535 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUMWithout Nicotinic Acid, Pyridoxine•HCl, and GlycineContains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); modifi ed with the addition of (mg/L) 0.4 Thiamine•HCl, 100 myo-Inositol, and 80 Adenine Hemisulfate.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

MURASHIGE MEDIUM WITH MINIMAL ORGANICS (MSMO)See L689 & L477 Linsmaier & Skoog Basal Medium

M536 MURASHIGE MODIFIED MULTIPLICATION BASAL MEDIUMContains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Murashige & Skoog (1962); modifi ed with the addition of (mg/L): 2.0 2iP, 80 Adenine Hemisulfate, and 170 Sodium Phosphate.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M555 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED MULTIPLICATION MEDIUMThis medium may be sold as Murashige & Skoog Shoot Multiplication Medium C by some media suppliers. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); modifi ed with the addition of (mg/L): 1.0 Kinetin, 80 Adenine Hemisulfate, and 148 Sodium Phosphate Monobasic. Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M527 MURASHIGE MODIFIED MULTIPLICATION BASAL MEDIUMThis medium is sold as Murashige Shoot Tip Rooting Medium by some media suppliers. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962) and vitamins as described by Linsmaier & Skoog (1965); modifi ed with the addition of (mg/L): 0.3 IAA, 1.0 Kinetin, and FeNaEDTA.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M491 MURASHIGE MODIFIED SHOOT MULTIPLICATION BASAL MEDIUMThis medium is sold as MS Shoot Multiplication Medium A by some media suppliers. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962) and vitamins as described by Linsmaier & Skoog (1965); modifi ed with the addition of (mg/L): 170 Sodium Phosphate Monobasic, 80 Adenine Hemisulfate, 30 2iP, and 0.3 IAA.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

MURASHIGE & SKOOG VITAMIN POWDERS & SOLUTIONSSee Vitamin Section (following this section) 42

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COMPONENT M519 M541 M404 M401 M701 M702 M535 M536 M555 M527 M491Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 332.2 332.2 332.2 333 332.2 332.2 332.2 332.2 333 333Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 36.7Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 180.7 180.7 180.7 181 180.7 180.7 180.7 180.7 181 181Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170 170 170 170 170 170Sodium Phosphate Monobasic 300 148 170 148 170Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6Adenine Hemisulfate 150 30 80 80 80 80 806-Benzylaminopurine (BA) 1Casein, Enzymatic Hydrolysate 1000Glycine (Free Base) 2 2 2 2.0

6-γ,γ-Dimethylallylaminopurine (2iP) 10 30 30

Indole-3-acetic Acid 1 0.3 0.3 0.3Indole-3-butyric AcidKinetin 1 1myo-Inositol 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100α-Naphthaleneacetic Acid 0.1 0.1Nicotinic Acid (Free Acid) 0.5 5 1 0.5 0.5Pyridoxine•HCI 0.5 1 1 0.5 0.5Sucrose 30000 30000 30000Thiamine•HCI 0.1 0.5 10 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4Grams of powder to prepare 1 liter 4.43 5.69 4.44 34.44 4.44 34.69 4.51 4.68 34.66 4.41 4.68pH±0.5 at RT 3.9 4.0 4.0 4.0 3.9 3.8 4.0 3.5 4.4 NS NSNS = No Specifi cation Established Rev 11/2005

43

15

MS-Based Plant-Specifi c MediaProduct Number Product Description Product Notes Package

SizeM517 MURASHIGE MODIFIED AFRICAN VIOLET/ GLOXINIA

MULTIPLICATION BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M518 MURASHIGE MODIFIED AFRICAN VIOLET/ GLOXINIA PRETRANSPLANT BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M550 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED MEDIUMArabidopsis Culture MediumModifi ed with the addition of (mg/L): 2.0 2,4-D, and 0.05 KinetinPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M506 MURASHIGE BEGONIA MULTIPLICATION MEDIUMSee Product No. M701 Murashige & Skoog Modifi ed Medium (same formulation)

M508 MURASHIGE MODIFIED FERN MULTIPLICATION BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M509 MURASHIGE MODIFIED GERBERA MULTIPLICATION BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M510 MURASHIGE MODIFIED GERBERA PRETRANSPLANT BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

H435 HOSTA INITIATION/ MULTIPLICATION MEDIUMStage I/II MediumModifi ed Murashige & Skoog (1962) with (mg/L): 2.0 BA, 160 Adenine Hemisulfate, 500 Casein Hydrolysate, and 0.5 NAA Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

H436 HOSTA MULTIPLICATION MEDIUMStage II MediumModifi ed Murashige & Skoog (1962) with (mg/L): 0.1 BA, 160 Adenine Hemisulfate, 500 Casein Hydrolysate, and 0.5 NAAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

H437 HOSTA ROOTING MEDIUMStage III MediumModifi ed Murashige & Skoog (1962) with (mg/L): 0.1 BA, 500 Casein Hydrolysate, and 0.5 NAAPlant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

44

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COMPONENT M517 M518 M550 M508 M509 M510 H435 H436 H437 M519Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2Calcium Chloride, Anhydrous 333 333 332.2 333 333 333 332.2 332.2 332.2 332.2Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 36.7 36.7Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8Magnesium Sulfate, Anhydrous 181 181 180.7 181 181 181 180.7 180.7 180.7 180.7Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170 170 300 300 300 170Sodium Phosphate Monobasic 170 255 85 85 170 170 170Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6Adenine Hemisulfate 80 80 160 160Agar 8000 8000 80006-Benzylaminopurine (BA) 2.0 0.1 0.1Casein, Enzymatic Hydrolysate 500 500 500Glycine (Free Base) 2.0 2.0 2.02,4-Dichlorophenoxyacetic Acid 2.0Indole-3-acetic Acid 2.0 1.0 0.5 10Indole-3-butyric AcidKinetin 2.0 0.05 2.0 10MES (Free Acid)myo-Inositol 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100a-Naphthaleneacetic Acid 0.1 0.5 0.5 0.5Nicotinic Acid (Free Acid) 1.0 10 10 0.5Peptone from MeatPyridoxine•HCI 1.0 1.0 1.0 0.5Sucrose 20000 30000 30000 30000Thiamine•HCI 0.4 0.4 10 0.4 30 30 0.4 0.4 0.4 0.1L-Tyrosine 100 100Grams of powder to prepare 1 liter 4.66 4.4 24.44 4.66 4.72 4.64 43.40 43.39 43.23 4.43pH±0.5 at RT 4.0 4.8 4.0 4.5 NS 5.9 4.3 4.3 4.3 3.9NS = No Specifi cation Established Rev 11/2005

45

17

MS-Based Plant-Specifi c Media (continued)Product Number Product Description Product Notes Package

SizeM511 MURASHIGE MODIFIED KALANCHOE MULTIPLICATION BASAL MEDIUM

Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M512 MURASHIGE MODIFIED KALANCHOE PRETRANSPLANT BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M513 MURASHIGE MODIFIED LILY MULTIPLICATION BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M462 MUSA (BANANA) MULTIPLICATION MEDIUMIITA Formulation as described by Vuylsteke (1998).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L

M516 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BC POTATO BASAL MEDIUMContains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

1 L10 L50 L


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COMPONENT M511 M512 M513 M462 M516Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 1650

Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2

Calcium Chloride, Anhydrous 333 333 333 332.2 333

Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025

Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025

Na2EDTA•2H2O 37.25

Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 36.7

Ferrous Sulfate•7H2O 27.85

Magnesium Sulfate, Anhydrous 181 181 181 180.74 181

Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9

Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25

Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83

Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900

Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170

Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6

L-Ascorbic Acid 20

6-Benzylaminopurine (BA) 4.5

Gelrite 2000

D-Glucose 2.0

Glycine (Free Base) 2.0 2.0

6-γ,γ-Dimethylallylaminopurine (2iP) 3.0

Indole-3-acetic Acid 3.0 0.175

Kinetin 0.04

myo-Inositol 100 100 100 100

α-Naphthaleneacetic Acid 0.03

Nicotinic Acid (Free Acid) 0.5 0.5

Pyridoxine•HCI 0.5 0.5

Sucrose 30,000

Thiamine•HCI 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4

Grams of powder to prepare 1 liter 4.41 4.41 4.4 36.36 4.41

pH±0.5 at RT 4.8 4.8 4.8 4.3 NSNS = No Specifi cation Established 46

18

VitaminsProduct Number Product Description Product Notes Package

SizeC149 CHU N6 VITAMIN SOLUTION (1000x)

Contains the vitamins as described by Chu (1975).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL

E330 ERIKSSON VITAMIN SOLUTION (1000x)Contains the vitamins as described by Eriksson (1965).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL

G249 GAMBORG VITAMIN POWDER (1000x)Contains the vitamins as described by Gamborg, et al. (1968).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL

G219 GAMBORG VITAMIN SOLUTION (1000x)Contains the vitamins as described by Gamborg, et al. (1968).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL

K421 KAO & MICHAYLUK VITAMIN SOLUTION (100x)Contains the vitamins described by Kao & Michayluk (1975).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL500 mL

1 L

M533 MURASHIGE & SKOOG VITAMIN POWDER (1000x)Contains the vitamins as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL250 mL

M553 MURASHIGE & SKOOG VITAMIN SOLUTION (1000x)Contains the vitamins as described by Murashige & Skoog (1962).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL

M547 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED VITAMIN POWDER (1000x)Murashige & Skoog (1962) vitamins modifi ed with additional Thiamine•HCl.Plant Tissue Culture Tested

100 mL250 mL

M557 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED VITAMIN SOLUTION (1000x)Murashige & Skoog (1962) vitamins modifi ed with additional Thiamine•HCl.Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL

N608 NITSCH & NITSCH VITAMIN POWDER (1000x)Contains the vitamins as described by Nitsch & Nitsch (1969).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL250 mL

N603 NITSCH & NITSCH VITAMIN SOLUTION (1000x)Contains the vitamins as described by Nitsch & Nitsch (1969).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL

S826 SCHENK & HILDEBRANDT VITAMIN POWDER (100x)Contains the vitamins as described by Schenk & Hildebrandt (1972).Plant Tissue Culture Tested


2-6° CWater

100 mL1 L


Chu

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x)COMPONENT C149 E330 G249 G219 K421 M533 M553 M547 M557 N608 N603 S826

p-Aminobenzoic Acid 2.0L-Ascorbic Acid 200D-Biotin 1.0 50 50D-Calcium Pantothenate 100Choline Chloride 100Cyancobalamin, Vit B12 2.0Folic Acid 40.0.0 500 500Glycine (Free Base) 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000myo-Inositol 100000 100000 10000 100000 100000 100000 100000 100000 100000 100000Nicotinamide 100Nicotinic Acid (Free Acid) 500 500 1000 1000 500 500 500 500 5000 5000 500Pyridoxine•HCl 500 500 1000 1000 100 500 500 500 500 500 500 50.0Ribofl avin 20.0Thiamine•HCI 1000 500 10000 10000 100 100 100 1000 1000 500 500 500Vitamin A 1.0Grams of powder to prepare 1 L N/A N/A 112 N/A N/A 103.1 N/A 104 N/A 108.55 N/A 101.05

Rev 11/2005

47

Documents

Manual CTV May2009