MALDI TOF METODA MASENE SPEKTROMETRIJEDusanka Golo 26/09

Masena spektrometrija Tehnika kojom se analiziraju

molekuli na osnovu njihove mase i naboja.

 Prvi korak pri analizi molekula je njihova jonizacija u jonizatoru.

Nastali joni se provode kroz analizator, koji razdvaja jone u prostoru i/ili vremenu.

Iz analizatora, joni idu na detektor gde proizvode električni signal koji se može registrovati na osciloskopu,printeru, racunaru.

Maseni spektrometar

Elektrosprej

MALDI TOF matrix-assisted laser-desorption / ionization time-

of-flightMatrica potpomognuta laserskom desorpcijom

/jonizacijom.Slabo invanzivna metoda za jonizaciju molekula.Kao matrica se koriste rastvor određenih

materija u smeši vode i organskog rastvarača. Analit je rastvoren u matrici. Na matricu se deluje laserom, najčešće azotnim

laserom. Matrica štiti analit od lasera, a njenim

isparavanjem i jonizacijom, ona prenosi deo naboja na analit, jonizujući ga.

MALDI tehnika je pogodna za jonizaciju biomolekula i velikih organskih molekula.

U pocetku je ova metoda primjenjivana samo na male biomolekule.

Pri tome je otparavanje uzorka vrseno laserom, kao izvorom energije.

Doprinos razvoju tehnike dao je Tanaka, koji je zajedno sa saradnicima pripremio specificnu metodu prireme uzorka, koja se zasniva na mesanju ispitivanog polimera sa ultrafinim metalnim prahom(cestice kobalta velicine 30nm) i glicerinom 1,2.

Tanaka je uspeo da bez fragmentacije desorbuje i jonizuje biomolekule velicine(Mr=35 000g/mol).

Za doprinos i za konstrukciju odgovarajuceg instrumenta za MALDI TOF MS, Tanaka je 2002 god dobio Nobelovu nagradu za hemiju.

Medjutim zbog velike cene i komplikovane primene metalni prah koji je nazvan Japanski prah se sve manje koristi za pripremu uzorka a umesto njega danas se koriste organska jedinjenja male molekulske mase, koja su sposobna da apsorbuju svetlost lasera odgovarajuce talasne duzine.

MALDI TOF

Visoko osetljiv i visoko rezultivan maseni spektrometar sa analizatorom na bazi vremena preleta. Pogodan za jonizaciju polarnih i biomelekula uključujući denderimere, nukleinske kiseline, proteine, peptide, karbohidrate, lipide. Posebno je praktican za identifikaciju proteina i posttranslacione modifikacije. Moguća detekcija molekulskih vrsta masa preko 200000 Daltona.  

Ispitivanje sastava lizofosfolipida u

humanim neutrofilima maldi-tof masenom spektrometrijom

   MALDI TOF masena spektrometrija je do sada bila

uglavnom korišćena za analizu proteina, ugljenih hidrata i oligonukleotida.

Iako poseduje niz prednosti za analizu lipida, MALDI-TOF masena spektrometrija se retko primenjuje u ovoj oblasti.

U organskom ekstraktu humanih neutrofila su MALDI-TOF masenom spektrometrijom detektovane kvalitativne promene u zavisnosti od uslova stimulacije.

Ovaj metod sluzi za određivanje koncentracije individualnih lipida u smesama biološkog porekla (kao što je organski ekstrakt humanih neutrofila).

Pokazano je da je MALDI-TOF masena spektrometrija pogodan i jednostavan metod za određivanje sastava smese raznih lipida i u vezi toga za studije signalnih molekula u humanim ćelijama. 

MALDI TOF maseni spektar Ig proteina u linearnom modu rada

Osnovni principi MALDI TOFSastoji se iz tri stupnja:Prvi stupanj predstavlja

prevodjenja molekula polimera u gasnu fazu i njihovu jonizaciju.

Drugi stupanj predstavlja razdvajanje jonizovanih molekula polimera na osnovu odnosa mase I naeektrisanja (m/z).

Treci stupanj predstavlja detekciju jona.

HVALA NA PAZNJI!!! :D