CROMATOGRAFIA EM CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADACAMADA DELGADA

Leonardo Leonardo GodoiGodoi

Watson Watson BeckBeck JuniorJunior

Origem do termoOrigem do termo

Do grego: Do grego: chrom = cor *graphe = escrever

1903 1903 –– Michael Michael SemenovichSemenovich TswettTswett

MMéétodo Ftodo Fíísicosico--ququíímico demico deSeparaSeparaççãoãoIdentificaIdentificaçção (comparaão (comparaçção com padrões)ão com padrões)QuantificaQuantificaçção dos componentes de uma misturaão dos componentes de uma mistura

DistribuiDistribuiçção dos componentes entre duas ão dos componentes entre duas fasesfases

Fase estacionFase estacionáária (FE) ria (FE) –– contcontéém o adsorventem o adsorventeFase mFase móóvel (FM) vel (FM) –– contcontéém o solventem o solvente

A TA Téécnicacnica

A TA Téécnicacnica

GGáás s –– SSóólidolido

GGáás s –– LLííquidoquido

LLííquido quido –– SSóólidolido

LLííquido quido –– LLííquidoquido

FE FE ssóólidolidoFM FM ggááss

FE FE llííquido não volquido não voláátiltilFM FM ggááss

FE FE ssóólidolidoFM FM llííquidoquido

FE FE llííquidoquidoFM FM llííquidoquido

ClassificaClassificaççãoão

TiposTipos

Fase NormalFase NormalPolaridade: FE > FMPolaridade: FE > FMFE utilizada: SFE utilizada: Síílica Glica G

Fase reversaFase reversaPolaridade: FE < FMPolaridade: FE < FMFE utilizada: SFE utilizada: Síílica Clica C1818

Uma outra classificaUma outra classificaççãoão

< polaridade

> polaridade

> polaridade

< polaridade

Cromatografia em camada Cromatografia em camada DelgadaDelgada -- CCDCCD

1938 1938 –– IzmailovIzmailov e e ShraiberShraiber

ApApóós 1960 s 1960 –– maior utilizamaior utilizaççãoão

LLííquido quido –– ssóólidolido

SeparaSeparaçção de misturasão de misturasAnAnáálise qualitativalise qualitativa

MigraMigraçção diferencialão diferencialDiferenDiferençça de afinidade dos compostos pela FEa de afinidade dos compostos pela FE

Fundamentado no fenômeno de Fundamentado no fenômeno de adsoradsorççãoão

CCDCCD

IdentificaIdentificaçção de compostos orgânicos com p. f. ão de compostos orgânicos com p. f. prpróóximosximosEstudos preliminares da complexidade dos Estudos preliminares da complexidade dos componentes de um extrato orgânicocomponentes de um extrato orgânicoInvestigaInvestigaçção de ão de

casos de envenenamentocasos de envenenamentoIngestão de estimulantes por atletasIngestão de estimulantes por atletas

Estudos de reaEstudos de reaççõesõesPresenPresençça de intermedia de intermediáários estrios estááveisveis

AnAnáálise da pureza de compostoslise da pureza de compostosAnAnáálise da eficiência delise da eficiência de

DestilaDestilaççõesõesCristalizaCristalizaççõesões

AplicaAplicaççõesões

VantagensVantagens

Uso de pequenas quantidades do analitoUso de pequenas quantidades do analito

FFáácil compreensãocil compreensão

FFáácil execucil execuççãoão

RapidezRapidez

VersatilidadeVersatilidade

Boa resoluBoa resoluçção (distância mão (distância míínima entre 2 nima entre 2 manmancchashas))

Baixo custoBaixo custo

CCDCCD

AcAcúúmulo de uma substância (mulo de uma substância (adsorvatoadsorvato) ) sobre a superfsobre a superfíície de outra (adsorvente)cie de outra (adsorvente)

AdsorAdsorçção fão fíísica (sica (vanvan der der WaalsWaals, dipolo, dipolo--dipolodipolo, lig. de H), lig. de H)AdsorAdsorçção quão quíímica (ligamica (ligaçções quões quíímicas)micas)

AdsorAdsorççãoão

≠

Adsorção Absorção

Atuam como FEAtuam como FE

Atividade varia em funAtividade varia em funçção do teor de ão do teor de ááguagua

AtivaAtivaçção por altas temperaturasão por altas temperaturas

ExemplosExemplosSSíílica (Slica (SiiOO22))Alumina (AlAlumina (Al22OO33))Terra diatomTerra diatomááceaceaCeluloseCelulosePoliamidaPoliamida

AdsorventesAdsorventes

Mais utilizado em CCDMais utilizado em CCDSSóólido branco e amorfolido branco e amorfoAtivaAtivaççãoão

10105 a 110 5 a 110 ººC por 30C por 30--60 min60 min

Diversos tiposDiversos tipos (Merck(Merck))G G –– contcontéém aglutinantesm aglutinantesH H –– não contnão contéém aglutinantesm aglutinantesP P –– uso em camada preparativauso em camada preparativaF F –– com substâncias fluorescentescom substâncias fluorescentesR R –– extra puro (sem aditivos)extra puro (sem aditivos)

PreparaPreparaççãoão30g em 6030g em 60--70 mL de H70 mL de H22O = 5 placas de 20 x 20 x 0,03 cmO = 5 placas de 20 x 20 x 0,03 cm

SSíílicalica

CuidadoCuidadoSua asSua aspirapiraççãoão pode pode causacausarr SILICOSE!SILICOSE!

Segundo mais utilizado em CCDSegundo mais utilizado em CCDPode apresentar caracterPode apresentar caracteríísticassticas

ÁÁcidascidasBBáásicas (mais comum)sicas (mais comum)NeutraNeutra

Pode catalisar reaPode catalisar reaçções diversas orgânicasões diversas orgânicasAtivaAtivaçção: 105ão: 105--110 110 ººC por 30C por 30--60 min60 minDiversos tiposDiversos tipos

E E –– superfsuperfíície especcie especíífica de 120fica de 120--180 m180 m22.g.g--11

T T –– superfsuperfíície especcie especíífica de 60fica de 60--90 m90 m22.g.g--11

PreparaPreparaççãoão30 g em 40 mL de H30 g em 40 mL de H22O = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cmO = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cm))

AluminaAlumina

Menos adsorvente que a sMenos adsorvente que a síílica e a aluminalica e a aluminaMenor poder de resoluMenor poder de resoluççãoão

Pode Pode ser misturado a sser misturado a síílicalicaDiminuiDiminuiçção do poder adsorventeão do poder adsorvente

TiposTiposCom aglutinantesCom aglutinantesSem aglutinantesSem aglutinantes

Utilizada em cromatografia por partiUtilizada em cromatografia por partiççãoão

AtivaAtivaçção: 105ão: 105--110 110 ººC por 30C por 30--60 min60 min

Terra DiatomTerra Diatomááceacea

Cromatografia por partiCromatografia por partiçção ou troca iônicaão ou troca iônica

TiposTiposPEI PEI –– celulose (nucleotcelulose (nucleotíídeos e nucleosdeos e nucleosíídeos)deos)CM CM –– celulose (protecelulose (proteíínas)nas)DEAE DEAE –– celulose (protecelulose (proteíínas e nas e áácidos nuclcidos nuclééicos)icos)ECTEOLAECTEOLA--celulose (protecelulose (proteíínas e nas e áácidos nuclcidos nuclééicos)icos)Microcristalina (cromatografia em papel)Microcristalina (cromatografia em papel)

PreparaPreparaççãoão25 g em 90 mL de H25 g em 90 mL de H22O = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cmO = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cm))

CeluloseCelulose

SeparaSeparaçção de fenão de fenóóis e is e ÁÁcidos Carboxcidos Carboxíílicoslicos

LigaLigaçções de hidrogênio com o analitoões de hidrogênio com o analito

Baixa aderência ao vidroBaixa aderência ao vidroDificuldade de preparaDificuldade de preparaçção das placasão das placas

TiposTipos11 11 –– áácido poliaminoundecancido poliaminoundecanóóico (Nylon 11)ico (Nylon 11)6 6 –– aminopolicaprolactama (Perlon)aminopolicaprolactama (Perlon)

PreparaPreparaççãoão15 g em 60 mL de metanol = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cm15 g em 60 mL de metanol = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cm))

PoliamidaPoliamida

Escolha da fase EstacionEscolha da fase Estacionááriaria

PreparaPreparaçção das placasão das placas

AtivaAtivaçção das placasão das placas

SeleSeleçção da fase mão da fase móóvelvel

AplicaAplicaçção das amostrasão das amostras

PreparaPreparaçção da cubaão da cuba

Desenvolvimento da tDesenvolvimento da téécnicacnica

RevelaRevelaçção do ão do cromatogramacromatograma

CCáálculo do fator de retenlculo do fator de retençção (ão (RRff))

Etapas da tEtapas da téécnicacnica

Liofilicidade e liofobicidadeLiofilicidade e liofobicidadeInteraInteraçção com os componentes (polaridade)ão com os componentes (polaridade)

Necessidade de aditivosNecessidade de aditivosAglutinantesAglutinantesSubstâncias fluorescentesSubstâncias fluorescentes

Capacidade adsorvedoraCapacidade adsorvedora

Escolha da fase estacionEscolha da fase estacionááriaria

Limpeza da placa (facilitar aderência)Retirada de compostos gordurosos

DeposiçãoImersão da placa em uma suspensão do adsorventeUtilização de espalhadores (uniformidade)

Secagem ao ar livre ou em uma estufa.

DificuldadesObtenção de solução com viscosidade adequada

Placas prPlacas préé--fabricadasfabricadasMais uniformes e homogêneasMais uniformes e homogêneasMaior reprodutibilidade do RMaior reprodutibilidade do Rff

PreparaPreparaçção das placasão das placas

EspalhadoresEspalhadores

PreparaPreparaçção das placasão das placas

Riscar as placasRiscar as placas

Determinar altura deDeterminar altura deInInííciocioFim da cromatografiaFim da cromatografia

PreparaPreparaçção das placasão das placas

FinalidadeRetirar substâncias interferentesEliminar H2O

MétodoVaria de um adsorvente para outroPara a sílica e alumina, estufa a 105-110 ºC por 30-60 min.Para celulose, 105 ºC por 10 min.

AtivaAtivaçção das placasão das placas

Dela depende Dela depende a eficiênciaa eficiênciaa resolua resoluçção do ensaio cromatogrão do ensaio cromatográáficofico

CompetiCompetiçção entre amostra e solvente pela ão entre amostra e solvente pela superfsuperfíície da FEcie da FE

Natureza quNatureza quíímica do compostomica do compostoPolaridade da fase mPolaridade da fase móóvelvel

Pode ser utilizado uma mistura de solventesPode ser utilizado uma mistura de solventes

SeleSeleçção da fase mão da fase móóvelvel

MMéétodo de seletodo de seleççãoão

SeleSeleçção da fase mão da fase móóvelvel

SoluSoluçções ões 0,10,1--1%, dependendo da sensibilidade do revelador1%, dependendo da sensibilidade do reveladorSolvente volSolvente voláátiltil

AplicadorAplicadorMicropipetasMicropipetasSeringasSeringasCapilares de vidro (pouca precisão)Capilares de vidro (pouca precisão)

Gotas Gotas Aplicadas a uma distância d da borda inferiorAplicadas a uma distância d da borda inferiord > altura atingida pelo solvente na cubad > altura atingida pelo solvente na cuba~ 1,0 cm entre as gotas~ 1,0 cm entre as gotasAlinhamento horizontal uniformeAlinhamento horizontal uniforme

AplicaAplicaçção das amostrasão das amostras

AplicaAplicaçção das amostrasão das amostras

Cuba de vidroCuba de vidro com fundo planocom fundo plano

SaturaSaturaçção da cubaão da cuba1,5 cm de altura da FM1,5 cm de altura da FMPapel de filtroPapel de filtroFechamento hermFechamento hermééticotico

ColocaColocaçção da placa ão da placa na cubana cubaRRáápida pida (evitar evapora(evitar evaporaçção)ão)VerticalVertical

PreparaPreparaçção da cubaão da cuba

EluiEluiççãoãoPProcessorocesso de de dessordessorççãoão que ocorre que ocorre devido a um fluxo de ldevido a um fluxo de lííquido atravquido atravéés de s de um um adsorventeadsorvente. .

AscenAscençção da FM por capilaridadeão da FM por capilaridade

TTéérmino: solvente atinge rmino: solvente atinge uma altura uma altura estabelecida (antes de chegar estabelecida (antes de chegar àà parte parte superior da placasuperior da placa))..

Desenvolvimento da tDesenvolvimento da téécnicacnica

Tornar visTornar visííveis as substâncias incolores veis as substâncias incolores presentes na amostrapresentes na amostra

Nem sempre Nem sempre éé necessnecessááriorio

Formas de visualizaFormas de visualizaççãoãoFFíísicasicaQuQuíímicamicaBiolBiolóógicagica

RevelaRevelaçção do cromatogramaão do cromatograma

ExposiExposiçção ão àà radiaradiaçção ão U.V.U.V. para compostos para compostos fluorescentes.fluorescentes.

CromCromóóforosforosEx: clorofila.Ex: clorofila.

FFíísicasica

Agentes cromogênicosAgentes cromogênicosBorrifaBorrifaççãoãoAdsorAdsorçção sobre o composto, tornandoão sobre o composto, tornando--o coloridoo colorido

Exemplos de agentes cromogênicosExemplos de agentes cromogênicosAlcalAlcalóóides: ides: DragendorffDragendorff, , iodoplatinatoiodoplatinatoAntiAnti--oxidantes: oxidantes: ββ--carotenocarotenoFlavonFlavonóóidesides: NP: NP--PEGPEGSaponinasSaponinas, terpenos e , terpenos e esteresteróóidesides: : anisaldeanisaldeíídodosulfsulfúúricoricoFenFenóólicos, licos, saponinassaponinas e e terpenterpenóóidesides: vapor de iodo e : vapor de iodo e solusoluçção de ão de CeSOCeSO44Compostos fenCompostos fenóólicos: FeCllicos: FeCl33

QuQuíímicamica

QuQuíímicamica

UtilizaUtiliza--se rease reaçções enzimões enzimááticas ticas ou bacterianasou bacterianas

ExemploExemplosubstância antisubstância anti--ffúúngicangica

BiolBiolóógicagica

RelaRelaçção entre velocidades de deslocamentoão entre velocidades de deslocamentoDo analitoDo analitoDa fase mDa fase móóvelvel

Razão entreRazão entreDeslocamento do analito (dDeslocamento do analito (dRR))Deslocamento da fase mDeslocamento da fase móóvel (dvel (dMM))

Rf= vR / vM = dR/dM

Fator de RetenFator de Retençção (Rão (Rff))

dR1

dR2

dM

Fator de RetenFator de Retençção (ão (RRff))

EficiênciaEficiêncian = 16 (dr n = 16 (dr –– WsWs))22

ResoluResoluççãoãoRsRs = 2(dr= 2(dr11 –– drdr22) / (Ws) / (Ws11 + Ws+ Ws22))

Eficiência e resoluEficiência e resoluççãoão

FatoresFatoresInsolubilidade na FMInsolubilidade na FM

Forte adsorForte adsorçção na FEão na FE

Quantidade de amostra aplicadaQuantidade de amostra aplicada

VedaVedaçção da cubaão da cuba

VariaVariaçção de temperatura (< 5 ão de temperatura (< 5 ººC)C)

Alinhamento do ponto de aplicaAlinhamento do ponto de aplicaçção da amostraão da amostra

Falta de ReprodutibilidadeFalta de Reprodutibilidade

CCD aperfeiCCD aperfeiççoadaoadaParâmetros controladosParâmetros controlados+ R+ Ráápidapida+ Eficiente+ Eficiente+ Sens+ Sensíívelvel

AplicaAplicaçções ões qualitativaqualitativaquantitativaquantitativa

CCD de Alta EficiênciaCCD de Alta Eficiência

ParâmetroParâmetro CCDCCD CCDAECCDAETamanho usual da placaTamanho usual da placa 20 x 20 20 x 20 cmcm 10 x 10 10 x 10 cmcm

Volume aplicado da amostraVolume aplicado da amostra 11--5 5 μμLL 0,10,1--0,2 0,2 μμLL

NNúúmero de amostras por placamero de amostras por placa 77--1010 1010--2020

Diâmetro da manchaDiâmetro da mancha 33--6 6 mmmm 1 1 mmmm

Distância de migraDistância de migraçção do solventeão do solvente 1010--15 15 cmcm 33--6 6 cmcm

Tempo de corridaTempo de corrida 3030--200 200 minmin 33--20 20 minmin

Diâmetro mDiâmetro méédio da partdio da partíícula de scula de síílicalica 20 20 μμmm 2 2 μμmm

Limites de detecLimites de detecççãoão

Por absorPor absorçção de luzão de luz ~ 5 ~ 5 ngng ~ 0,5 ~ 0,5 ngng

Por fluorescênciaPor fluorescência ~ 0.1 ~ 0.1 ngng ~ 0.01 ~ 0.01 ngng

CCD x CCDAECCD x CCDAE

SubstânciaSubstância DensidadDensidadee((gg//mLmL))

p.fp.f((ººC)C)

p.ep.e..((ººC)C)

M.MM.M(g/(g/molmol))

FFóórmularmulamolecularmolecular

ToxicidadeToxicidade

EtanolEtanol 0,7890,789 --114,1114,1 78,478,4 46,0746,07 CC22HH55OHOH Causa nCausa nááusea, vômito e usea, vômito e depressãodepressão

ÁÁcido accido acééticotico 1,0491,049 16,716,7 118118 60,0560,05 CC22HH44OO22 Se ingerido causa vômito, Se ingerido causa vômito, diarrdiarrééia e colapso circulatia e colapso circulatóóriorio

DiclorometanoDiclorometano 1,3261,326 --2525 39,7539,75 84,9384,93 CHCH22ClCl22 Causa fadiga, nCausa fadiga, nááusea, irritausea, irritaçção ão nos olhos e cabenos olhos e cabeççaa

1,2 1,2 --dicloroetanodicloroetano 1,2571,257 --4040 8383--8484 98,9698,96 CC22HH44ClCl22 Depressão do sistema nervoso Depressão do sistema nervoso centralcentral

AspirinaAspirina 1,401,40 135135 -- 180,16180,16 CC99HH88OO44 NNááusea, vomito e irritausea, vomito e irritaççãoão

AcetaminofenolAcetaminofenol 1,2931,293 170,5170,5 -- 151,16151,16 CC88HH99NONO22 [Anti[Anti--ttéérmico]rmico]

CafeCafeíínana 1,231,23 238238 -- 194,19194,19 CC88HH1010NN44OO22 Estimulante do sistema nervoso Estimulante do sistema nervoso centralcentral

Acetato de EtilaAcetato de Etila 0,9020,902 --8383 7777 88,1088,10 CC44HH88OO22 IrritaIrritaçção nos olhos, pele, nariz ão nos olhos, pele, nariz e garganta.e garganta.

ÁÁcido cido AcetilsalicAcetilsalicíílicolico

-- 152152 -- 300,26300,26 CC1616HH1212OO66 [Anti[Anti--ttéérmico]rmico]

MetanolMetanol 0,78660,7866 --97,897,8 64,764,7 32,0432,04 CHCH44OO Dermatite, dor de cabeDermatite, dor de cabeçça, a, nnááusea, vômitos, anorexiausea, vômitos, anorexia

Constantes fConstantes fíísicassicas

FluxogramaFluxograma

COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. IntroduCOLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. Introduçção a ão a mméétodos cromatogrtodos cromatográáficos. 7ficos. 7ªª ed, 1997ed, 1997

BREWSTER, R.Q. Curso prBREWSTER, R.Q. Curso práático de qutico de quíímica mica orgânica. 2orgânica. 2ªª ed, 1970.ed, 1970.

FESSENDEN, R.J. OrganicFESSENDEN, R.J. Organic LaboratoryLaboratoryTechniques. 2Techniques. 2ªª ed, 1993.ed, 1993.

PAVIA, D.L. OrganicPAVIA, D.L. Organic LaboratoryLaboratory Techniques. Techniques. 11ªª ed, 1998.ed, 1998.

BibliografiaBibliografia

Marquinhoooooos (modelo fotogrMarquinhoooooos (modelo fotográáfico)fico)

Daniara (pelo TOUR pela Dep. Orgânica)Daniara (pelo TOUR pela Dep. Orgânica)

Pipoca (fotPipoca (fotóógrafo improvisado)grafo improvisado)

FlFláávia e Mônica (pelo modelo de apresentavia e Mônica (pelo modelo de apresentaçção)ão)

BBóóris (por agris (por agüüentar nosso mauentar nosso mau--humor)humor)

Vocês (pela paciência e atenVocês (pela paciência e atençção)ão)

AgradecimentosAgradecimentos

FIMFIM

Finalmente acabou

Substância Densidade (g/mL)

p.f (ºC)

p.e. (ºC)

M.M (g/mol)

Fórmula molecular

Toxicidade

Etanol 0,789 -114,1 78,4 46,07 C2H5OH Causa náusea, vômito e depressão

Ácido acético 1,049 16,7 118 60,05 C2H4O2 Se ingerido causa vômito, diarréia e colapso

circulatório Diclorometano 1,326 -25 39,75 84,93 CH2Cl2 Causa fadiga, náusea,

irritação nos olhos e cabeça1,2 -dicloroetano 1,257 -40 83-84 98,96 C2H4Cl2 Depressão do sistema

nervoso central Aspirina 1,40 135 - 180,16 C9H8O4 Náusea, vomito e irritação

Acetaminofenol 1,293 170,5 - 151,16 C8H9NO2 [Anti-térmico]

Cafeína 1,23 238 - 194,19 C8H10N4O2 Estimulante do sistema nervoso central

Acetato de Etila 0,902 -83 77 88,10 C4H8O2 Irritação nos olhos, pele, nariz e garganta.

Ácido Acetilsalicílico - 152 - 300,26 C16H12O6 [Anti-térmico]

Metanol 0,7866 -97,8 64,7 32,04 CH4O Dermatite, dor de cabeça, náusea, vômitos, anorexia

FLUXOGRAMA 1) Colocar em uma cuba cromatográfica até atingir 1,5 cm de altura.

2) Colocar uma folha de papel de filtro da altura da cuba .

3) Enquanto a cuba vai saturando

Cuba com o solvente (fase móvel)

Cuba saturada

1,2- diclorometano e ácido acético (12:1) (fase móvel)

4) Preparar separadamente soluções-padrão (cafeína, ácido acetil salicílico e acetominofen) em tubos de ensaio, dissolvendo 0,1g de cada em 5,0mL de mistura de etanol/diclorometano (1:1).

5) Aquecer rapidamente em banho-maria (evitando a perda de solventes).

6) Pipetar 1 ml de cada solução-padrão p/ o mesmo tubo de ensaio.

7)Agitar bem e homogeneizar a solução e, assim, obter a mistura de referência

Cafeína, acetominofen e Ácido acetil salicílico

(soluções padronizadas)

11) ativar a placa de sílica para retirar toda a água da placa ativando-a em uma estufa.

12) Preparar a placa com sílica, riscando-a em 4 colunas (com espessura de 1,0 cm) p/ aplicação das soluções-padrão e da mistura de referência (cafeína, ac. acet. salicílico e acetominofen).

8) Triturar um comprimido de cada um dos analgésicos a serem analisados e transferir p/3 béqueres de 10 mL.

9) Adicionar 5 ml de solução a cada béquer

de (etanol/diclorometano 1:1) 10)Aquecer rapidamente em banho-maria. p/ evitar evaporar a mistura de solventes

Placa de vidro (com sílica)

Análise de analgésicos (3 comprimidos)

3 comprimidos triturados

Mistura de referência

Comprimidos solubilizados

13) Aplicar c/ um capilar cada

solução no centro de cada coluna a 2,0 cm da base sem furar a silica.

14) Aplicar a solução de referência e as 3 frações de analgésico.

15) Colocar dentro da cuba cromatográfica e esperar até que toda fase móvel atinja o limite pré-estabelecido.

16) Não deixar a cuba saturada muito tempo aberta para não evaporar o solvente. 17) Aguardar a evaporação do solvente e com o auxílio da luz ultravioleta, marcar c/ um riscador (lápis).

Placa de sílica ( ativada)

Placa com o resultado Cromatograma)

Placa úmida com solvente

Placa com as soluções aplicadas

18) Medir a distância dos centros de massa das manchas até a origem e determinar o R.f..

19) Determinar a composição de cada analgésico.

Método 2

1) Reagentes e soluções Padrão: - Solução de acido acetilsalicílico, preparada em metanol a 2%. - Solução de acetaminofen preparada em metanol a 2%. - Solução de cafeína preparada em água a 2%. - Fase estacionária: Placa de sílica gel G, com espessura de 0,25 mm. - Fase móvel: acetato de etila: hidróxido de amônia:água 10:0,25:0,25.

Reveladores: a) Solução aquosa de FeCl3 a 10%. b) Solução de Dragendorff: Solução A: 0,17 g de subnitrato de bismuto + 2mL de ácidoacético + 8 mL de água. Solução B: 4 g de KI em 10 ml de água. Solução de uso: 0,5 mL da solução A + 0,5 mL da solução B + 2 mL de ácido acético + 10 m\l de água.

2) Procedimentos:

a) Preparação da amostra: Triturar um comprimido e pesar 0,1g. Transferir esta quantidade para um tubo de ensaio e adicionar 0,5 mL de metanol. Agitar vigorosamente por 01 minuto. Centrifugar 05 minutos. Transferir o sobrenadante para um tubo limpo.

b) Análise cromatográfica: - Ativar a placa de sílica a 110°C durante 10 minutos. Dividir a placa em 04 colunas. A seguir aplicar, com o auxilio de capilares, as soluções dos padrões e da amostra. - Preparar a fase móvel e transferir para uma cuba cromatográfica (saturar a cuba). - Desenvolver o cromatograma.

- Retirar a placa da cuba, secar com secador de cabelos, revelar com solução de cloreto férrico e aquecer a 110°C por 10 minutos. - Marcar a posição das manchas reveladas e a seguir, revelar com solução de Dragendorff. - Com base nos valores de Rf e nas cores das manchas, identificar os fármacos presentes nos comprimidos analgésicos.