LAPORAN PRAKTIKUM MIKROTEKNIK PEMBUATAN PREPARAT APUS DARAHDisusun guna memenuhi tugas mata kuliah MikroteknikDosen pengampu Dra. Ely Rudyatmi,M.Si

Disusun olehElita Anggraini Setyobudi4401412054Rombel 1 Pendidikan Biologi

JURUSAN BIOLOGIFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAMUNIVERSITAS NEGERI SEMARANG2015PEMBUATAN PREPARAT APUS DARAHTanggal 20 Mei 2015A. Tujuan1. Membuat preparat apus darah manusia dengan metode apus dan metode pewarnaan Romanowski.2. Menganalisis hasil pembuatan preparat apus darah manusia dengan metode apus dan metode pewarnaan Romanowski.

B. Landasan TeoriDarah adalah suatu suspensi sel dan fragmen sitoplasma yang dapat dianggap sebagai jaringan pengikat dalam arti luas, karena pada dasarnya darah terdiri atas unsur-unsur sel dan substansi interseluler yang berbentuk plasma. Fungsi utama dari darah adalah mengangkut oksigen yang diperlukan oleh sel-sel diseluruh tubuh. Darah manusia bisa dijadikan suatu preparat untuk diamati, prosedur yang paling sering dilakukan dalam pembuatan preparat atau jaringan sediaan histology atau irisan jaringan yang dapat dipelajari dengan bantuan mikroskop cahaya. Di bawah mikroskop cahaya, jaringan diamati melalui berkas cahaya yang menembus jaringan. Karena jaringan dan organ biasanya terlalu tebal untuk ditembus cahaya, jaringan tersebut harus diiris menjadi lembaran-lembaran tipis yang translusendan kemudian diletakkan diatas kaca objek sebelum jaringan tersebut diperiksa (Mescher, 2012).Darah tersusun atas plasma dan sel darah. Sel darah mencakup eritrosit, leukosit, dan trombosit. Plasma darah mengandung sekitar 90% air dan berbagai zat terlarut / tersuspensi di dalamnya (Isnaeni, 2006).Jenis sel darah:1. Eritrosit, berbentuk sebagai cakram bulat bikonkaf dengan diameter sekitar 7,2 m tanpa memiliki inti.2. Leukosit, mempunyai fungsi utama dalam sistem pertahanan. Berdasarkan ada tidaknya butir-butir dalam sitoplasma dibedakan:a. Granulosit yaitu adanya butir-butir spesifik yang mengikat zat warna dalam sitoplasma.1) Neutrofil, berlobus berjumlah 25 lobi atau lebih, berwarna biru atau ungu.2) Eosinofil, inti terdiri atas 2 lobi, berwarna merah atau orange.3) Basofil, separuh sel dipenuhi inti, berwarna biru tua dan kasar memenuhi sitoplasma.b. Agranulosit, tidak mempunyai butir-butir spesifik1) Limfosit, inti gelap berwarna ungu2) Monosit, inti berbentuk oval seperti tapal kuda.3. Trombosit, berbentuk seperti kepingan-kepingan sitoplasma berukuran 25m (Subowo, 2002).Pembuatan preparat apus darah ini menggunakan suatu metode yang disebut metode oles (metode smear) yangmerupakan suatu sediaan dengan jalan mengoles atau membuat selaput (film) dan substansi yang berupa cairan atau bukan cairan di atas gelas benda yang bersih dan bebas lemak untuk kemudian difiksasi, diwarnai dan ditutup dengan gelas penutup (Handari, 2003).Untuk melihat struktur sel darah dengan menggunakan mikroskop cahaya pada umumnya dibuat sediaan apus darah. Sediaan apus darah ini tidak saja untuk mempelajari bentuk masing-masing sel darah, tetapi juga dapat digunakan untuk menghitung perbandingan antara masing-masing jenis sel darah (Subowo, 2002).Pada masa kini sering digunakan pewarnaan metoda Giemsa dan Wright yang merupakan modifikasi metoda Romanowsky. Pada dasarnya bahan pewarna selalu terdiri atas zat warna basa dan zat warna asam (Subowo, 2002).Pewarna giemsa sebagai pewarna yang umum digunakan dalam pembuatan sediaan apus, agar sediaan terlihat lebih jelas. Pewarnaan ini sering disebut juga pewarnaan Romanowski. Metode pewarnaan ini banyak dipakai untuk mempelajari morfologi darah, sel-sel sumsum dan juga untuk identifikasi parasit-parasit darah misalnya dari jenis protozoa. Giemsa ini memberikan warna biru (Mescher, 2012).

C. Cara KerjaUjung jari kiri bagian tengah disiapkan dengan dikipas-kipaskan kearah kaki kemudian diurut dengan tangan kanan kearah ujung jari. Kemudian ujung jari dan jarum blood lancet pen disterilkan dengan alcohol 70% lalu ujung jari ditusuk dengan jarum dengan bantuan blood lancet pen dan darah dikeluarkan. Tetesan darah pertama diusap dengan kapas beralkohol dan tetesan berikutnya diteteskan pada gelas benda A yang bebas lemak pada posisi 0,5 cm dari tepi kanan gelas benda A (3 menit), selanjutnya gelas benda B yang sisi pendeknya rata diambil dan ditegakkan di sebelah kiri tetesan darah dengan kemiringan gelas benda B sebesar 45 lalu gelas benda B ditarik dengan hati-hati kearah tetesan darah (ke kanan) sehingga terjadi kapilaritas dan tetesan darah merata di ujung sisi pendek gelas benda B. Selanjutnya gelas benda B didorong kearah kiri gelas benda A dengan kuat dan kecepatan yang konstan, sehingga terbentuk film darah yang baik (tipis dan rata) (3 menit), lalu film darah dikeringanginkan pada rak pewarnaan yang datar dan bersih (5 menit). Setelah film darah kering selanjutnya semua permukaan film darah difiksasi dengan fiksatif metil alcohol lalu dikeringanginkan sampai kering (5 menit), kemudian semua permukaan film darah diwarnai dengan ditetesi zat warna giemsa 3% dan dikeringanginkan sampai kering (40 menit) lalu film darah dicuci dengan aquades dingin yang sebelumnya telah dididihkan (1 menit). Label dilekatkan pada ujung kanan gelas benda dengan posisi memanjang. Lalu preparat diamati dengan perbesaran kuat, difoto dan dianalisis hasilnya (30 menit).

D. Hasil Pengamatan

eritrositPerbesaran 40 x 10 = 400Berdasarkan pengamatan terlihat bentuk eritrosit cekung dan bulat, tidak ditemukan basofil, neutrofil, eosinofil, monosit dan limfosit karena sel darah bergerombol dan saling bertumbuk. Hasil apus darah kurang jelas untuk diamati.

E. PembahasanPraktikum pembuatan apusan darah manusia ini menggunakan metode apus/ smear/ oles. Darah yang digunakan adalah darah manusia. Berdasarkan foto dari hasil pengamatan preparat apus darah manusia dengan pewarnaan Giemsa diketahui bahwa preparat secara fisik cukup baik, bersih, dan terwarna. Dapat terlihat adanya eritrosit dalam jumlah banyak.Eritrosit teramati terwarna agak bening transparan. Eritrosit berbentuk bulat, dengan bentuk seperti cekungan (cakram) pada sisi dalam (tengah) dan tak berinti. Jika ditemukan leukosit maka ditunjukkan dengan sel yang memiliki inti berwarna ungu.Warna ungu disebabkan oleh inti leukosit yang basa sehingga mudah menyerap zat warna giemsa. Leukosit yang paling banyak dijumpai ialah neutrofil dan monosit berkisar antara 10-15%, serta sedikit eosinofil dengan presentase kurang dari 5%. Presentase neutrofil memang paling banyak dalam darah, yaitu mencapai 50-70% dari jumlah leukosit yang ada. Preparat tampak rapat namun sel-selnya kurang dapat teramati dengan baik karena bertumpuk, hal tersebut menunjukkan bahwa apusan masih terlalu tebal.Tahapan-tahapan dalam pembuatan preparat antara lain pengambilan sampel darah, pembuatan film darah, pengeringan, fiksasi, pengeringan, pewarnaan, pencucian, dan pelabelan. Setiap tahapan mempunyai fungsi dan maksud yang berbeda-beda. Pengambilan sampel darah dimaksudkan untuk mengambil darah probandus dengan bantuan blood lancet pen, kemudian pembuatan film darah untuk membuat hasil apusan darah. Apusan darah harus setipis mungkin agar dapat diamati dan sel darah tidak saling menumpuk dan rapat. Pengeringan dilakukan dengan bantuan kipas angin agar darah hasil apusan cepat kering sehingga ketika dilakukan fiksasi tidak luntur. Fiksasi bertujuan agar elemen-elemen sel mati tetapi tetap mempertahankan bentuk, struktur, maupun ukurannya. Fungsi utama fiksasi yaitu untuk mempertahankan struktur sel darah yang dijadikan obyek, mengubah indeks bias sel darah agar mudah diamati, dan mengubah sel agar mudah menyerap zat warna. Pengeringan dilakukan agar sel terfiksasi dengan sempurna, fiksatif yang tersisa menguap dan hasil apusan tetap kering dan tidak luntur ketika diwarnai. Pewarnaan menggunakan Giemsa yang terdiri atas methylen blue dan eosin yang memberi warna biru pada inti sel. Kemudian dilakukan pengeringan agar warna menempel sempurna dan pencucian dilakukan agar zat warna yang tidak mewarnai sel larut terbawa aliran air. Digunakan akuades steril agar tidak ada mikroorganisme lain yang menempel pada apus darah karena ketika dilakukan pengamatan dapat terjadi kesalahan analisis.Preparat apus darah sebaiknya setipis mungkin agar leukosit dan eritrosit dapat diamati dengan jelas dan sel tidak menumpuk. Hal-hal yang mempengaruhi hasil dari preparat apus darah antara lain:1. Kondisi kaca obyek2. Kemiringan kaca obyek penggeser darah dan kecepatan menggeser mempengaruhi ketebalan sediaan.Ciri-ciri apusan yang baik antara lain:1. Sediaan tidak melebar sampai tepi gelas benda2. Pada sediaan harus ada bagian yang cukup tipis untuk diamati. Pada bagian itu eritrosit tidak menumpuk dan tidak menyusun gumpalan roleaux3. Ujung preparat tidak boleh seperti bendera sobek4. Preparat apus harus rata, tidak boleh ada garis-garis atau berlubang

F. SimpulanBerdasarkan hasil pembahasan dan analisis, dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut:1. Preparat apus darah manusia dapat dibuat dengan metode apus dan metode pewarnaan Romanowski.2. Hasil preparat membedakan eritrosit yang tidak terwarnai giemsa dengan jelas pada bagian tepi dan terwarnai pada bagian cekung, leukosit tidak ditemukan karena preparat kurang jelas dan hasil apusan terlalu tebal.

G. Saran1. Untuk mengapus agar dilakukan setipis mungkin sehingga preparat tidak terlalu rapat.2. Untuk pewarnaan giemsa pastikan giemsa yang dipakai masih bagus (belum rusak atau terkontaminasi) sehingga mewarnai dengan baik.

H. Daftar PustakaMescher, Anthony L, 2012.Histologi Dasar. Jakarta: Buku Kedokteran EGCHandari, S. Suntoro. 1983. Metode Pewarnaan. Jakarta : Bhatara Karya AksaraIsnaeni, Wiwi. 2006. Fisiologi Hewan. Yogyakarta: KanisiusRudyatmi, Ely. 2015. Bahan Ajar Mikroteknik. Semarang: Jurusan Biologi FMIPA Unnes.Subowo. 2002. Histologi Umum. Jakarta: PT Bumi Aksara