Upload
gnius-chemical-zhereg-art
View
199
Download
8
Embed Size (px)
Citation preview
BAB I
PENDAHULUAN
1.1. Tujuan Percobaan Praktikum
Pemisahan senyawa dengan metoda High Performance Liquid
Chromatography (HPLC).
1.2. Prinsip Kerja
HPLC menggunakkan kolom yang mengandung partikel-partikel
kecil-kecil dari fase tetap dan kkarena luas permukaan yang lebih besar dari
fase tetap maka sampel dalamHPLC terpisah dengan sangat baik dengan
efisiensi yang tinggi. Mekanisme pemisahan yang berbeda dengan cepat
dilakukan mengikatkan gugus-gugus kimia yang berbeda pada permukaan
partikel silika yang disebut dengan fase terikat. Secara teoritis HPLC itu
identik dengan Liquid Solid Chromatography. Liquid Chromatography dan
ion Exchange Chromatography.
1.3. Landasan Teori
1.3.1. Separation and Characterization of The Vanillin
Coumpound from Soda Lignin
Pendahuluan
Para guineensis Elaesis atau yang biasa dikenal sebagai kelapa sawit
diperkenalkan untuk berbagai bagian daerah tropis untuk buah
minyak memproduksi. Diperkirakan 2,28 juta ha tanah
yang sedang ditanami dengan pohon kelapa sawit di Malaysia.
Selain memproduksi sawit minyak, industri kelapa sawit juga menghasilkan
sejumlah besar residu lingo selulosa seperti
sebagai batang, daun dan tandan kosong (TKS). TKS telah diakui sebagai
berpotensi menjadi bahan baku alternatif untuk industri kertas dan pulp [2, 3, 4].
Tujuan dari proyek ini adalah untuk mengidentifikasi cara yang lebih efisien
mengelola pembuangan lingo selulosa residu dan pada saat yang
sama mengubah residu menjadi produk yang bermanfaat seperti lignin.
Sumber utama lignin di Malaysia adalah dari luar negeri dimana awalnya
diekstrak dari pohon pinus dan akasia sebagai produk sampingan dari kayu dan
industri pulp.
Namun, metode ini kurang efektif karena mata uang asing hilang dalam
mengimpor produk asing . Ada kebutuhan untuk mencari alternatif
sumber lignin yang dapat berasal dari bahan limbah dan pada saat yang sama
membantu melestarikan harta alami untuk masa depan generasi.
Salah satu sumber tersebut adalah kelapa sawit tandan buah kosong (TKS). ini
adalah karena jumlah besar TKS dikumpulkan setiap hari lebih dari kelapa
sawit 300 pabrik pengolahan yang tersebar di seluruh Malaysia.
Lignin merupakan bahan amorf polifenol yang timbul dari suatu enzim yang
dimediasi dehydrogenates polimerisasi monomer tiga fenilpropanoid utama, yaitu
coniferyl, sinapyl dan p-coumaryl alkohol. Elemen struktur lignin terkait
oleh ikatan karbon-karbon dan eter untuk membentuk tri-dimensi jaringan yang
terkait dengan hemiselulosa polisakarida di dalam dinding sel .
Lignin biasanya tidak larut dalam semua pelarut dan hanya dapat mengalami
degradasi oleh proses pulping fisik atau kimia di hightemperature dan
tekanan tinggi. Reaksi delignifikasi melibatkan pembelahan non-fenolik PO-
4 linkage, fenolik a-0-4 keterkaitan dan melepaskan dari yang terkait dengan
polisakarida [8, 9].Karena kompleksitas tinggi makromolekul lignin,
lignin perlu untuk diuraikan melalui proses oksidasi untuk monomer, yang
memiliki berat molekul lebih rendah sebelum mereka dianalisis.
Oksidasi nitrobenzena digunakan sebagai metode untuk memecah lignin ke
monomer sebelum mengidentifikasi mereka menggunakan kromatografi cair
kinerja tinggi (KCKT) analisis.
Sebuah penelitian sebelumnya [10] melaporkan bahwa 8 komponen oleh ligninter
degradasi.Mereka adalah vanillin , syringaldehyde, 4-hydroxybenzaldehyde,
asam syringic, 4 hydroxybenzoic asam, asam vanilat, asam p-coumaric dan
asam ferulat.
Diantara 8 senyawa, vanilin ditemukan menjadi komponen utama of
soda lignin. Vanili, sebuah komponen utama vanili, banyak digunakan sebagai
bahan dalam rasa makanan, dalam farmasi dan sebagai wewangian di parfum
dan bau-masking produk .
Dalam studi ini persentase hadir vanillin dalam sampel lignin soda akan
ditentukan. Selanjutnya, senyawa vanilin akan dipisahkan dari soda lignin melalui
kristalisasi teknik.
Bahan
Kelapa sawit tandan buah kosong (TKS) bahan baku dalam penelitian ini telah
diberikan oleh Sabutek (M) Sdn. Bhd, Teluk Intan, Malaysia, sebuah perusahaan
lokal yang mengkhususkan diri dalam daur ulang TKS.
Cairan hitam TKS itu dipasok oleh Fakultas Teknologi Industri, Universiti Sains
Malaysia (USM). Penelitian ini dilakukan dari Mei 2005 sampai Maret 2006
di Sekolah Ilmu Kimia, Universiti Sains Malaysia (USM).
nitrobenzena oksidasi Oksidasi nitrobenzena dilakukan dengan menambahkan 50
mg lignin sodakering menjadi campuran 7 ml 2M NaOH dan 4 mL
nitrobenzena dalam autoklaf baja 15 mL.
Kemudian, otoklaf dipanaskan sampai 165 ° C selama 3 jam dalam penangas
minyak termostat dipanaskan. Setelah otoklaf didinginkan sampai suhu kamar,
campuran tersebut kemudian ditransfer ke cair-cair ekstraktor untuk ekstraksi
kontinyu dengan kloroform (5 x20 ml)· untuk menghapus setiap produk
reduksi nitrobenzena nitrobenzena dan berlebih.oksidasi campuran kemudian
diasamkan dengan HCl pekat sampai pH 3-4 dan selanjutnya diekstraksi dengan
kloroform (5 x 15 mL).
Pelarut dari larutan kloroform kedua kemudian diangkat dengan menggunakan
rotary evaporator pada suhu 40 ° C di bawah tekanan dikurangi agar memperoleh
nitrobenzena oksidasi campuran. Campuran tersebut kemudian dilarutkan ke
dalam dicloromethane dan yang disusun sampai dengan 10 mL. Campuran
ini kemudian digunakan sebagailarutan stok untuk kinerja tinggi
kromatografi cair (HPLC) analisis [6].
Nitrobenzena Para · campuran oksidasi dianalisa dengan menggunakan metode
HPLC. 0.2 mL larutan stok yang dipipet ke dalam labu volumetrik 25 mL
asetonitril dan air (1:2 v / v) ditambahkan untuk itu. Sekitar 20 ~ L dari larutan
sampel adalahinjectedinto berikutnya HPLC sistem (Shimatzu) dilengkapi dengan
kolom ikatan CIS Hypersil (partikelsize5J.11,25 mm x 4,6 mm Ld.) Untuk secara
kuantitatif menentukan komponen vanilin sementara yang lain komponen
ditentukan secara kualitatif. Asetonitril-air (1:8) yang mengandungasetat 1%
asam digunakan sebagai eluen dengan laju alir 2 mL / menit. Eluen ini
kemudiandipantau dengan detektor (ultraviolet) UV pada 280 om .
Kristalisasi Proses
Produk oksidasi nitrobenzena digunakan dalam proses ini. Campuran adalah
dilarutkan dalam aseton dan disusun sampai
dengan 10 mL. Selanjutnya,campuran tersebut dipanaskan sampai 60 ° C untuk
10 menit menggunakan hot plate. Endapan kemudian disaring dan dicuci dengan
menggunakan aseton.
Kemudian, endapan dianalisis menggunakan Transformasi Fourier infra merah
(FT-IR), inti magnetik resonansi (IH-NMR) dan kromatografi cair kinerja
tinggi (KCKT).
Persentase vanillin
Komponen oflignin diperoleh tercantum dalam Tabel 1 dan diberi label menurut
abjad pada Gambar 1. Solusi standar untuk setiap komponen yang
diharapkan untuk hadir dalam lignin disuntikkan ke dalam 3 konsentrasi yang
berbeda, 10 ppm, 100 ppm dan 1000ppm. Ini dilakukan untuk memastikan bahwa
solusi untuk setiap komponen yang samapada konsentrasi yang berbeda memiliki
waktu retensi yang sama. Dari kromatogram HPLC, 6 komponen yang terdeteksi
dalam lignin soda.
Mereka adalah vanilin, syringaldehyde, hydroxybenzaldehyde, 4hydroxybenzoic
asam, asam vanilat dan asam syringic. Dari analisis kami menemukan bahwa
konsentrasi vanilin dalam 50 mg lignin adalah 0,8032 ppm atau setara dengan1,6
bahkan meskipun hanya ada persentase yang rendah yang hadir vanilin dalam
lignin, itu adalah cukup sebagai penelitian menggunakan sampel lignin
dari limbah industri, yaitu lindi hitam. Selain itu, penelitian ini bertujuan untuk
menghasilkan produk baru dari item yang umumnyadiperlakukan sebagai limbah.
Pemisahan proses melalui teknik kristalisasi digunakan untuk memisahkan vanili
dari komponen lain yang ada di lignin. Endapan yang diperoleh dari proses ini
merilis bau mirip dari jenis yang sama untuk vanilin. Analisis dilakukan untuk
menentukan apakah endapan yang diperoleh adalah vanilin. Ini melibatkan
penggunaan infra merah (IR) analisis spektrometri untuk menentukan kelompok
fungsional hadir dalam mengendap.
Pendekatan ini dipilih sebagai pelet endapan mudah dibentuk dan
tidak hancur ketika IR analisis dilakukan di atasnya. Puncak terbentuk dari IR
analisis juga lebih mudah untuk ditelusuri dan diamati. Karakterisasi · fungsional
untuk sampel endapan ini dilakukan pada 4000-400 cm-! rentang frekuensi.
Spektrum IR jelas menunjukkan karakterisasi fungsi utama beberapa
kelompok dalam struktur vanilin. Sebuah spektrum IR khas sampel endapan dari
proses kristalisasi ditunjukkan pada Gambar 2. Band yang kuat dan luas pada
3471,25 cm-I adalah karakteristik dari kelompok OH atau senyawa fenolik.
Sebuah bagian dari ini, C-H peregangan cincin aromatik berada
di band cm'l 3230,12. Namun, frekuensitidak menunjukkan puncak yang
sangat jelas. Band di 1636,19 cm'l sesuai dengan yang karbonil yang
kelompok (C == O). Band Peregangan di 1399.83cm, 1 dan 1338,6 em ')
merupakan karakteristik OFC-H getaran pada gugus metil. Sedangkan getaran
untuk C == C pada cincin aromatik berada pada 692,77 cm'l pita [14]. Gambar
3 menggambarkan struktur vanilin(4-hidroksi-3methoxybenzaldehyde).
Dengan demikian, spektrum dari produk endapan dari kristalisasi diidentifikasi
sebagai vanilin sebagai kelompok fungsi utama dari struktur adalahvanilin
terungkap melalui analisis IR.
Endapan kemudian dianalisis menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi
(KCKT) untuk menegaskan kembali hasil sebagai dicirikan oleh analisis IR.
Endapan adalah dikumpulkan dan dilarutkan dalam larutan aseton dengan air
(1:2 v/v) bertindak sebagai pelarut sebelum analisis dilakukan.
Akhirnya, 1,0 ppm sampel pekat disuntikkan ke sebuah
mesin HPLC. Kromatogram menunjukkan puncak pada waktu retensi <Rt) yang
hampir sama dengan waktu retensi standar vanilin dengan konsentrasi yang sama.
Gambar 4 menyajikan kromatogram HPLC dari sampel vanilin dan standar
vanilin.
Spektrum FT-IH-NMR diperoleh dari operasi Broker Avance 300 di
modus FT pada 400 MHz dalam kondisi jumlah proton dipisahkan. Spektrum itu
direkam pada 40° C dari 200 mg sampel vanilin dilarutkan dalam 1
mL CDChsetelah 3.000scan. Sebuah ° 90 pulsa membalik sudut,seorang 26,6 leba
r JLS pulsa danwaktu akuisisi 1.74s dipekerjakan. Tidak ada perbedaan yang
signifikan dalam struktur vanilin diendapkan dari proses kristalisasi
dan vanilin standar berdasarkan LH NMRanalisis(Gambar 5).
Tidak lengkap pembubaran sampel karena mungkin dari tinggi tak terduga
sinyal / noise ratio. Puncak menunjukkan bahwa pergeseran kimia untuk kedua
vanillins sangat serupa.
1.3.2. Kromatografi
Kromatografi berasal dari kata chroma (warna) dan graphein (penulisan),
Merupakan suatu teknik pemisahan fisika yang memanfaatkan perbedaan yang
kecil dari sifat-sifat fisika komponen yang akan dipisahkan. Teknik kromatografi
telah dikembangkan dan telah digunakan untuk memisahkan dan
mengkuanntifikasi bernagai macam komponen yang kompleks, baik komponen
organic maupun komponen anorgsnik. Kromatografi adalah teknik pemisahan
fisika suatu campuran zat-zat kimia yang berdasarkan pada perbedaan
perpindahan masing-masing komponen campuran yang terpisah pada fase diam
yang dipengaruhi pergerakan fase yang bergerak. Beberapa sifat fisika umum dari
molekul yang dipakai sebagai asas tteknik pemisahan kromatografi adalah:
1. Kecenderungan molekul untuk teradsorbsi oleh partikel-partikel
padatan yang halus.
2. Kecenderungan molekul untuk melarut pada fase cair.
3. Kecenderungan molekul untuk teratsirikan.
1.3.3. Jenis-jenis Kromatografi
Kromatografi dapat dibedakan atas berbagai macam tergantung pada
pengelompokannya. Berdasarkan pada mekanisme pemisahannya, kromatografi
dibedakan menjadi:
1. Partisipasi Kromatografi
2. Adsorbsi Kromatografi
3. Ion Exchanger Kromatografi
4. Gel kromatografi
Berdasarkan alat yang diigunakan, kromatografi dibedakan menjadi:
1. Kromatografi kertas
2. Kromatogari Lapis tipis yang keduanya sering disebut dengan
kromatoggrafi planar
3. Colom Kromatografi
1.3.4. HPLC
HPLC secara mendasar merupakan perkembangan tingkat tinggi dari
kromatografi kolom. Selain dari pelarut yang menetes melalui kolom dibawah
grafitasi,didukung melalui tekanan tinggi sampai dengan 400 atm. Ini
membuatnya lebih cepat. HPLC memperbolehkan penggunaan partikel yang
berukuran sangat kecil untuk material terpadatkan dalam kolom yang mana akan
memberi luas permukaan yang lebih besar berinteraksi antara fase diam dan
molekul-molekul yang melintasinya. Hal ini memungkinkan pemisahan yang
lebih baik dari komponen-komponen dalam campuran. Perkembangan yang lebih
luas melalui kromatografi kolom mempertimbangkan metode pendeteksian yang
dapat digunakan. Metode-metode ini sangat otomatis dan sangat peka.
Kolom dan pelarut.
Membingungkan, ada dua perbedaan dalam HPLC, yang mana tergantung
pada polaritas relatif dari pelarut dan fase diam.
Fase normal HPLC
Ini secara esensial sama dengan apa yang sudah anda baca tentang
kromatografi lapis tipis atau kromatografi kolom. Meskipun disebut sebagai
dengan partikel silika yang sangat kecil dan pelarut non polar misalnya heksan.
Sebuah kolom sederhana memiliki diameter internal 4.6 mm (dan mungkin
kurang dari nilai ini) dengan panjang 150 sampai 250 mm.Senyawa-senyawa
polar dalam campuran melalui kolom akan melekat lebih lama pada silika yang
polar dibanding degan senyawa-senyawa non polar. Oleh karena itu, senyawa
yang non polar kemudian akan lebih cepat melewati kolom
Fase balik HPLC.
Dalam kasus ini, ukuran kolom sama, tetapi silika dimodifikasi menjadi
non polar melalui pelekatan rantai-rantai hidrokarbon panjang pada
permukaannya secara sederhana baik berupa atom karbon 8 atau 18. Sebagai
contoh, pelarut polar digunakan berupa campuran air dan alkohol seperti metanol.
Dalam kasus ini, akan terdapat atraksi yang kuat antara pelarut polar dan
molekul polar dalam campuran yang melalui kolom. Atraksi yang terjadi tidak
akan sekuat atraksi antara rantai-rantai hidrokarbon yang berlekatan pada silika
(fase diam) dan molekul-molekul polar dalam larutan. Oleh karena itu, molekul-
molekul polar dalam campuran akan menghabiskan waktunya untuk bergerak
bersama dengan pelarut.Senyawa-senyawa non polar dalam campuran akan
cenderung membentuk atraksi dengan gugus hidrokarbon karena adanya dispersi
gaya van der Waals. Senyawa-senyawa ini juga akan kurang larut dalam pelarut
karena membutuhkan pemutusan ikatan hydrogen sebagaimana halnya senyawa-
senyawa tersebut berada dalam molekul-molekul air atau metanol misalnya. Oleh
karenanya, senyawa-senyawa ini akan menghabiskan waktu dalam larutan dan
akan bergerak lambat dalam kolom.Ini berarti bahwa molekul-molekul polar akan
bergerak lebih cepat melalui kolom.Fase balik HPLC adalah bentuk yang biasa
digunakan dalam HPLC.
Diagram alir HPLC
Injeksi sampel.
Injeksi sample seluruhnya otomatis dan anda tidak akan mengharapkan
bagaimana mengetahui apa yang terjadi pada tingkat dasar. Karena proses ini
meliputi tekanan, tidak sama halnya dengan kromatografi gas.
Waktu retensi.
Waktu yang dibutuhkan oleh senyawa untuk bergerak melalui kolom
menuju detektor disebut sebagai waktu retensi. Waktu retensi diukur berdasarkan
waktu dimana sampel diinjeksikan sampai sampel menunjukkan ketinggian
puncak yang maksimum dari senyawa itu. Senyawa-senyawa yang berbeda
memiliki waktu retensi yang berbeda. Untuk beberapa senyawa, waktu retensi
akan sangat bervariasi dan bergantung pada: tekanan yang digunakan (karena itu
akan berpengaruh pada laju alir dari pelarut). kondisi dari fase diam (tidak hanya
terbuat dari material apa, tetapi juga pada ukuran partikel), komposisi yang tepat
dari pelarut, temperatur pada kolom.
Itu berarti bahwa kondisi harus dikontrol secara hati-hati, jika anda
menggunakan waktu retensi sebagai sarana untuk mengidentifikasi senyawa-
senyawa.
Detektor.
Ada beberapa cara untuk mendeteksi substansi yang telah melewati kolom.
Metode umum yang mudah dipakai untuk menjelaskan yaitu penggunaan serapan
ultra-violet.Banyak senyawa-senyawa organik menyerap sinar UV dari beberapa
panjang gelombang. Jika anda menyinarkan sinar UV pada larutan yang keluar
melalui kolom dan sebuah detektor pada sisi yang berlawanan, anda akan
mendapatkan pembacaan langsung berapa besar sinar yang diserap.
Jumlah cahaya yang diserap akan bergantung pada jumlah senyawa
tertentu yang melewati melalui berkas pada waktu itu. Anda akan heran mengapa
pelarut yang digunakan tidak mengabsorbsi sinar UV. Pelarut menyerapnya!
Tetapi berbeda, senyawa-senyawa akan menyerap dengan sangat kuat bagian-
bagian yang berbeda dari specktrum UV. Misalnya, metanol, menyerap pada
panjang gelombang dibawah 205 nm dan air pada gelombang dibawah 190 nm.
Jika anda menggunakan campuran metanol-air sebagai pelarut, anda sebaiknya
menggunakan panjang gelombang yang lebih besar dari 205 nm untuk mencegah
pembacaan yang salah dari pelarut.
Interpretasi output dari detektor.
Output akan direkam sebagai rangkaian puncak-puncak, dimana masing-
masing puncak mewakili satu senyawa dalam campuran yang melalui detektor
dan menerap sinar UV. Sepanjang anda mengontrol kondisi kolom, anda dapat
menggunakan waktu retensi untuk membantu mengidentifikasi senyawa yang
diperoleh, tentunya, anda (atau orang lain) sudah mengukur senyawa-senyawa
murninya dari berbagai senyawa pada kondisi yang sama.
Anda juga dapat menggunakan puncak sebagai jalan untuk mengukur kuanti?tas
dari senyawa yang dihasilkan. Mari beranggapan bahwa tertarik dalam senyawa
tertentu, X. Jika anda menginjeksi suatu larutan yang mengandung senyawa murni
X yang telah diketahui jumlahnya pada instrumen, anda tidak hanya dapat
merekam waktu retensi dari senyawa tersebut, tetapi anda juga dapat
menghubungkan jumlah dari senyawa X dengan puncak dari senyawa yang
dihasilkan.
Area yang berada dibawah puncak sebanding dengan jumlah X yang
melalui detektor, dan area ini dapat dihitung secara otomatis melalui layar
komputer. Area dihitung sebagai bagian yang berwarna hijau dalam gambar
(sangat sederhana). High-performance liquid chromatography ( HPLC) adalah
suatu format kolom chromatography yang sering digunakan di ilmu kimia organik
dan biokimia. HPLC digunakan untuk memisahkan komponen dari suatu
campuran menggunakan berbagai interaksi kimia antara unsur yang sedang
dianalisa dan chromatography column. RP-HPLC bekerja dengan prinsip
hydrophobic interaksi yang diakibatkan oleh kakas tolak antara suatu bahan
pelarut non-polar, analyte non-polar, dan fase keseimbangan non-polar.
HPLC, yang dalam bahasa Indonesia berarti ‘Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi’ memiliki fasa gerak cair dan fasa diam cair amupun padat. Laju aliran
fasa gerak pada HPLC ini dipercepat dengan pompa bertekanan tinggi. Sebelum
1970′s, hanya sedikit chromatographic yang di pakai oleh masyarakat umum,
hanya tersedia untuk ilmuwan laboratorium. Selama 1970, kebanyakan separasi
kimia dilaksanakan menggunakan berbagai teknik mencakup open-column
chromatography, kertas chromatography, dan thin-layer chromatography.
Bagaimanapun, kromatografi ini tidak cukup untuk hitungan resolusi dan
campuran antara campuran yang serupa. Selama waktu ini, cairan tekanan
chromatography mulai untuk digunakan untuk mengurangi flowthrough waktu,
kemudian mengurangi pemurnian jam campuran yang sedang terisolasi oleh
kolom chromatogaphy. Bagaimanapun, laju alir tidaklah konstant, dan pertanyaan
apakah menjadi lebih baik untuk mempunyai tekanan tetap atau laju alir tetap
diperdebatkan.
Sekarang ini, orang mempunyai pilihan dalam mempertimbangkan jenis
kolom untuk pemisahan campuran, seperti halnya berbagai detektor untuk
menghubungkan dengan HPLC dalam rangka mendapatkan analisa optimal
(menyangkut) campuran itu. Kita berharap tinjauan ulang ini akan menyediakan
suatu acuan semua tingkat HPLC para pemakai yang akan mampu menemukan
jawab cepat mengenai permasalahan permasalahan HPLC. Walaupun HPLC
secara luas dianggap sebagai suatu teknik utama untuk biotechnological,
biomedical, dan riset biokimia seperti halnya untuk industri yang berkenaan
dengan farmasi, bidang ini saat ini berisikan hanya sekitar 50% Hplc Users.
Sekarang Ini HPLC digunakan oleh berbagai bidang yang mencakup kosmetik,
energi, makanan, dan industri.
. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) atau High Pressure Liquid
Chromatography (HPLC) merupakan salah satu metode kimia dan fisikokimia.
KCKT termasuk metode analisis terbaru yaitu suatu teknik kromatografi dengan
fasa gerak cairan dan fasa diam cairan atau padat. Banyak kelebihan metode ini
jika dibandingkan dengan metode lainnya. Kelebihan itu antara lain:
• mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran
• mudah melaksanakannya
• kecepatan analisis dan kepekaan yang tinggi
•dapat dihindari terjadinya dekomposisi / kerusakan bahan yang dianalisis
• Resolusi yang baik
• dapat digunakan bermacam-macam detektor
• Kolom dapat digunakan kembali
• mudah melakukan "sample recovery"
BAB II
PROSEDUR KERJA
2.1. Alat dan Bahan
a. Alat yang digunakan
Seperangkat alat Hight Liquid Performance Chromatography yang
dilengkapi:
- Wadah fase gerak
- Pompa
- Unit injeksi
- Kolom
- Detektor
- Corong buchner
- pump reset
b. Bahan yang digunakan
- Campuran CH3-Buffer KH2PO4 0,005 M, pH 4,8 perbandingan 12:88
2.2. Prosedur Kerja
Cara pembuatan fase gerak yaitu :
- Fase gerak dicampur (campuran CH3-Buffer KH2PO4 0,005 M, pH 4,8
perbandingan 12:88)
- Disaring dengan Buchner filter.
- Digasing dengan ultrasonik cleaner untuk menghilangkan gas pada fase
gerak.
Set semua alat
- Kecepatan aliran pada 0 ml permenit
- Tekanan pada 0 kgf/cm2.
- Diset UV-Visible spektrofotometry detector pada panjang gelombang 254
nm.
- Dipakai lamp D2.
- Ditekan tombol absorbansi dan reson standart (kepekaan absorbabsi 0,02 )
- Dihubungkan sisitem dengan arus listrik.
- Power detector UV-Visible spektrofotometry ke posisi ON.
- Power recorder ke posisi ON.
- Drain valve diputar ke kiri.
- Pada ujung pipa pembuangan dipasang disposable syringe.
- Flow rate diatur pada 5 ml/menit.
- Pump pada posisi ON sambil diisap dengan disposible syringe untuk
mempece pat keluarnya udara dari pada cairan pembawa.
- Setelah 10 ml pump dimatikan.
- Dispossible syringe dilepaskan dari ujung pipa.
- Ujung pipa dimasukkan ke dalam erlenmeyer.
- Pump ke posisi ON lagi untuk memastikan udara tidak ada lagi dalam pipa
aliran.
- Lalu pimp diset ke OFF.
- Katup pembuangan ditutup (diputar ke arah kanan).
- Lalu flow rate dinaikkan ke 1 ml/menit.
- Hidupkan pump, tekanan akan naik sampai kira-kira 1 X 100 kgf/cm2,
cairan carrier mengalir injector
- Analisa dilakukan pada flow rate 2 ml/menit
Mencheck stabil tidaknya alat
- Dicari base line dengan menekan tombol ZERO pada detektor.
- Diturun kan posisi pen.
- Posisi drive ke ON.
Injeksi Fase Gerak
- Ditekan tombol ZERO.
- Ditekan tombol MARK.
- Untuk injeksi, injektor diputar ke posisi LOAD.
- Dimasukkan fase gerak ke dalam injektor ke posisi inject.
- Dihidupkan chart drive.
Injeksi Serum
- Ditekan tombol ZERO.
- Ditekan tombol MARK.
- Injektor diputar ke posisi LOAD.
- Dimasukkan serum ke dalam injektor dengan syringe.
- Injektor diputar ke posisi inject.
- Dihidupkan chart drive.
Mematikan Alat
- Recorder ke posisi OFF.
- UV-Visible spektrophotometry ke posisi OFF.
- RID ke posisi OFF.
- Pump ke posisi OFF.
- Flow rate diturunkan 1 ml/menit.
- Pump dihidupkan lagi kemudian diatur ke OFF lagi.
- Flow rate diturunkan perlahan-lahan hingga 0 ml/menit.
- Lalu kolom dicuci dengan CH3OH.
BAB III
GAMBAR RANGKAIAN
3.1. Gambar Peralatan
Seperangkat alat Hight Liquid Performance Chromatography (HPLC).
3.2. Gambar Rangkaian
3.3. Keterangan Gambar Rangkaian
1. Wadah fase gerak
2. Pompa
3. Unit injeksi
4. Kolom
BAB IV
DATA PENGAMATAN
Tabel Analisis Obat-obatan
Kadar Paracetamol
No
Konsentrasi std
Paracetamol (ppm)
%
Intensitas
Area
X Y
1 1 758
2 2 1540
3 3 2270
4 4 3035
5 5 3775
Kadar Sampel
No
Berat
sampel
(gr)
Nama
sampel
Intensity
Area
1 0.5 Bodrex 3136
2 0.5 Mixagrip 1930
3 0.5 Panadol 4445
4 0.5 Poldanmig 4510
BAB V
PENGOLAHAN DATA
No
Konsentrasi
std
Paracetamol
X
%
Intensitas
Area
Y
XY X2 Y2
1 1 758 758 1 574564
2 2 1540 3080 4 2371600
3 3 2270 6810 9 5152900
4 4 3035 12140 16 9211225
5 5 3775 18875 25 14250625
Σ 15 11378 41663 55 31560914
a. Kurva Kalibrasi
b.1. Koefisien korelasi dan determinasi
X = 3
Ȳ = 2275,6
=
=
=
752,9
Ȳ = a + bX
a = Ȳ – b X
= 2275,6 – 752,9(3)
= 16,9
Maka dari hasil perhitungan yang diperoleh didapat persamaan regresi
Y = a + bX menjadi Y = 16,9 + 752,9X.
b.2. Koefisien korelasi dan determinasi
R =
=
=
R = 0,9999
R2 = 0,9998
b.3. Konsentrasi Parasetamol dalam Sampel
Y = a + bX
X =
Untuk Bodrex
X = = 4,14 ppm
Untuk Mixagrip
X = = 2,54 ppm
Untuk Panadol
X = = 5,88 ppm
Untuk Poldanmig
X = = 5,97 ppm
b.4. Konsentrasi Paracetamol (% )
% = x 100 %
Untuk Bodrex
% = x 100 %
= 0,828 %
Untuk Mixagrip
% = x 100 %
= 0,508 %
Untuk Panadol
% = x 100 %
= 1,176 %
Untuk Poldanmig
% = x 100 %
= 1,194 %
BAB VI
KESIMPULAN DAN SARAN
6.1. Kesimpulan
Dari data percobaan spektofotometer HPLC yang telah dilakukan dapat
diambil kesimpulan bahwa :
1. Dari hasil perhitungan Koefisien Korelasi Konsentration -vs- Emisi
diketahui bahwa hubungan antar variable kuat yaitu semakin besar
konsentrasi unsure dalam larutan maka semakin banyak sinar yang
diabsorbsi oleh unsure tersebut. Dimana didapat harga R = 0,9999 dan
R2 = 0,9998
2. Hasil perhitngan persamaan regresi linier sederhana dimana Y = a +
bX adalah Y = 16,9 + 752,9X.
3. Semakin besar luas permukaan sampel maka kensentrasinya semakin
besar pula sreta emisinya semakin besar.
4. Konsentrasi paracetamol dalam sampel yang paling tinggi adalah pada
obat Poldanmig yaitu sebesar 5,97 ppm.
5. Semakin besar luas area sampel maka semakin besar pula
konsentrasinya.
6.2. Saran
Dalam melakukan praktikum,harus lebih teliti dan hati-hati agar diperoleh
hasil yang maksimal.
DAFTAR PUSTAKA
Ir.Adil Barus. 2012. Chemistry Diktat Kimia Analisa Instrument. PTKI. Medan
Juna, Sihombing. 2012. Penuntun Praktikum Kimia Analisa Instrument. PTKI.
Medan
Mastuti, Retno. 2010. Identifikasi Pigmen Betasianin Pada Beberapa Jenis
Inflorescence Celosia. The University of Hongkong.