Lapi

12/5/2014 ARDIANSYAH:LaporanIsolasidanInokulasi

http://addhyardhy.blogspot.com/2013/07/laporanisolasidaninokulasi.html 1/8

ARDIANSYAH

J u m a t , 1 2 J u l i 2 0 1 3

Laporan Isolasi dan Inokulasi

BABI

PENDAHULUAN

A.LatarBelakang

Isolasimikroorganismeadalahmemisahkanmikrobayangberasaldarilingkungan

danmembuahkannyasebagaikulturmurnidalamsuatumedium.Prosespemindahan

mikrobadarimediumlamakemediumbaruharusdilaksanakansecarateliti.Terlebih

dahuluharusdiusahakanagarsemuaalatalatyangberhubungandenganmediumdan

pekerjaaninokulasi(penanaman)itubenarbenarsteril,haliniuntukmenghindari

kontaminasidenganmikroorganismeyangtidakdiinginkan(Indah,2013).

Mikrobatidakmemilikicirianatomiyangnyata,sehinggaidentifikasididasarkan

padamorfologi,sifatbiakandansifatbiokimiawi.Morfologimikroorganisme

berdasarkanbentuk,ukurandanpenataanbiasanyatidakcukupuntukmelakukan

identifikasi.Cirilainnyasepertipewarnaan,polapertumbuhankolonireaksi

pertumbuhanpadakarbohidratdanpenggunaanasamaminosangatmembantudalam

identifikasimikroba(Caray,2013).

Adapunyangmelatarbelakangidilakukannyapraktikuminiadalahuntuk

mengetahuidenganjelasbagaimanacaramemisahkanmikrobadarilingkungannya

untukmemperolehbiakanmurniatausatujelasmikrobasaja.Selainitu,mahasiswa

jugaharusdapatmengatahuiteknikteknikpenggoresanyangdapatdigunakan

mengisolasibakteri,baikitubentukdanjenisdaripenggoresantersebut.

B.TujuanPercobaan

Adapuntujuandiadakannyapraktikuminiyaituuntukmengetahuidanmemahami

caramengisolasibakteri.

Ardhy Addhy Ikuti 0

Lihat profil lengkapku

Mengenai Saya

Oktober (2)September (1)Juni (5)Mei (12)November (5)Juli (26)

Ardhy Best

1 More NextBlog CreateBlog SignIn



BABII

TINJAUANPUSTAKA

Isolasimikroorganismeadalahmemisahkanmikrobayangberasaldarilingkungandan

membuahkannyasebagaikulturmurnidalamsuatumedium.Prosespemindahanmikroba

darimediumlamakemediumyangbaruharusdilaksanakansecarateliti.Terlebihdahulu

harusdiusahakanagarsemuaalatalatyangberhubungandenganmediumdanpekerjaan

inokulasi(penanaman)itubenarbenarsteril.Haliniuntukmenghindarikontaminasidengan

mikroorganismeyangtidakdiinginkan(TimDosen,2011).

InokulasiPenanamanbakteriataubiasadisebutjugainokulasiadalahpekerjaan

memindahkanbakteridarimediumyanglamakemediumyangbarudengantingkat

ketelitianyangsangattinggi.Untukmelakukanpenanamanbakteri(inokulasi)terlebih

dahuludiusakanagarsemuaalatyangadadalamhubungannyadenganmediumagartetap

steril,haliniagarmenghindariterjadinyakontaminasi(Dwijoseputro,1998).

Pentingnyamengisolasisuatumikrobadarilingkungankitasepertipadamakanan

(subtratpadat),minuman(subtratcair)ataupadadirikitasendirikarenabanyaknya

mikroba/bakteriyangsulituntukdiamatiataudibedakansecaralangsungolehpanca

indera.Sehinggadenganisolasiakanmempermudahkitauntukmelihatdanmengamati

bentukbentukpertumbuhanmikrobapadabeberapamediumyangberbedabedaserta

melihatmorfologidarimikrobatersebut.Selainteknikpertumbuhanbakteriatauteknik

isolasidiatas,dikenaljugaadanyateknikisolasimikrobayaituinokulasiyangmerupakan

suatuteknikpemindahansuatubiakantertentudarimediumyanglamakemediumyang

barudengantujuanuntukmendapatkansuatubiakanyangmurnitanpaadanyakontaminasi

darimikrobayanglain(Ghoni,2013).

Teknikinokulasimerupakansuatupekerjaanmemindahkanbakteridarimediumyang

lamakemediumyangbarudengantingkatketelitianyangsangattinggi.Dengandemikian

akandiperolehbiakanmikroorganismeyangdapatdigunakanuntukpembelajaran

mikrobiologi.Padapraktikuminiakandilakukanteknikinokulasibiakanmikroorganisme

padamediumsteriluntukmempelajarimikrobiologidengansatukulturmurnisaja(Emma,

2013).

Mikroorganismedapatditumbuhkandalamkeadaancairataupadat.Dalambiakan

cair,mikroorganismemenunjukkanciripertumbuhantersendiri.Kekeruhanyandilihat

padamediumterjadiakibatpertumbuhanmikroorganisme.Jumlahmikroorganismeyang

diperlukancukupbanyakagarterlihatkeruh(lazimnyasekitar106sel/ml)Bila

pertumbuhanmikroorganismemenumpukmakadibagiandasartabungakanterlihat

sedimen.sebaliknya,bilapertumbuhanmikroorganismeinisedikitmakaterlihatsebagai

partikelberupalapisantipispadapermukaan,Kadangkalapertumbuhanyangterlihatpada



mediummerupakangabungandarikekeruhan,sedimen,pelikel(Oetomo,1990).

Penanamanbakterimerupakanpekerjaanmemindahkanbakteridarisuatumediumke

mediumbaru.Dilingkungansekitarkitaterdapatberbagaimacamjenismikrobayang

sangatberanekaragamdalamjumlahyangsangatbanyak.Secaraalamibakteriakan

ditemukandalampopulasicampuran,dimanadalampopulasitersebutterdapatbanyak

macamdanjenisbakteri.Hanyadalamkeadaantertentusajapopulasiiniditemukandalam

keadaanmurni.Untukdapatmempelajarisifatsifatbiakan,morfologidansifatfaalinya

makamikrobayangakanditelitiharusdapatdipisahkan.Iniberartibahwaharusdiperoleh

biakanmurniyanghanyamengandungsatumacambakteri(Djide,2011)

Bakteridialamumumnyatumbuhdalampopulasiyangterdiridariberbagaispesies.

Olehkarenaitu,untukmendapatkanbiakanmurni,sumberbakteriharusdiperlakukan

denganpengenceranagardidapathanya100200bakteriyangditransferkemedium,

sehinggadapattumbuhmenjadikoloniyangberasaldaribakteritunggal(Pelczar,1986).

Prosespemisahan/pemurniandarimikroorganismelainperludilakukankarena

semuapekerjaanmikrobiologis,misalnyatelaahdanidentifikasimikroorganisme,

memerlukansuatupopulasiyanghanyaterdiridarisatumacammikroorganismesaja.

TekniktersebutdikenaldenganIsolasaiMikroba.Terdapatberbagaicaramengisolasi

mikroba,yaituisolasipadaagarcawan,isolasipadamediumcair,danisolasiseltunggal

(Yazurah,2013).

Identifikasibiakanmikroorganismeseringkalimemerlukanpemindahankebiakan

segartanpaterjadipencemaran.Pemindahanmikroorganismeinidilakukandenganteknik

asepticuntukmempertahankankemurnianbiakanselamapemindahanberulangkali.

Mikroorganismedapatditumbuhkandalambiakancairataupunpadat.Dalammelakukan

isolasimikroba,terlebihdahulukitaharusmemperhatikanalatalatyangdigunakanapakah

sudahsteril,agartidakterkontaminasiolehudaraluaryangdapatmerangsangpertumbuhan

mikrobayangtidakkitainginkanpadasuatumedium.Untuktujuantersebutdigunakan

mediaaseptisuntukmencegahkontaminasi(Indah,2013).

Pemindahanbakteridarimediumlamakemediumyangbaruatauyangdikenaldengan

istilahinokulasibakteriinimemerluaknbanyakketelitian.Terlebihdahulukitaharus

mengusahakanagarsemuaalatalatyangakandigunakanuntukpengerjaanmediumdan

pengerjaaninokulasibenarbenarsteril.Haliniuntukmenghindariterjadinyakontaminasi,

yaitumasuknyamikroobalainyangtidakdiinginkansehinggabiakanyangtumbuhdidalam

mediumadalahbenarbenarbiakanmurni(Dwidjoseputro,1998).

Dialambebastidakadabakteriyanghidupsendiriterlepasdarispesieslainnya.Di

laboratorium,supayakitahanyamendapatsatuspesiessajadalamsuatubiakancampuran

menjadibiakanmurnimemerlukanteknikteknikuntukmengisolasi.Populasicampuran

menjadisatupopulasisel.Biakanmurniadalahbiakanyanghanyaterdiridarisatupopulasi

jenismikrobayangsemuanyaberasaldarisatuselinduk.Isolasibakteriartinya

memisahkansatujenisbakteridaribiakancampuranmenjadibiakanmurni(Caray,2013).

Pekerjaanmemindahkanmikrobadarimediumlamakemediumyangbaruharus

dilakukansecarateliti.Terlebihdahuluharusdiusahakanagarsemuaalatalatyangsangkut

pautdenganmediumdanpekerjaaninokulasiitubenarbenarsteril,haliniuntuk

menghindariterkontaminasi,yaknimasuknyamikroorganismeyangtidakkitainginkan.



Beberapalangkahpadapekerjaaninokulasidanisolasimikrobayaitumenyiapkanruangan,

karenatidaksembarangtempatdilakukanisolasidaninokulasidimanaruangantersebut

harusbersihdanbebasangin.Dindingruangyangbasahmenyebabkanbutirbutirdebu

menempel.Padawaktumengadakaninokulasibaiksekalibiladilakukandidalamsuatu

kotakberkaca.Kemudianmemindahkandengankawatinokulasiyangsebaiknyaterbuat

dariplatinaataunikrom(Indah,2013).

Isolasibakteriadalahprosesmengambilbakteridarimediumataulingkunganasalnya

danmenumbuhkannyadimediumbuatansehinggadiperolehbiakanyangmurni.Bakteri

dipindahkandarisatutempatketempatlainnyaharusmenggunakanproseduraseptik.

Aseptikberartibebasdarisepsis,yaitukondisiterkontaminasikarenamikroorganismelain.

Teknikaseptikinisangatpentingbilabekerjadenganbakteri.Beberapaalatyang

digunakanuntukmenjalankanproseduriniadalahbunsendanlaminarairflowBilatidak

dijalankandengantepat,adakemungkinankontaminasiolehmikroorganismelainsehingga

akanmenggangguhasilyangdiharapkan.Teknikaseptikjugamelindungilaborandari

kontaminasibakteri(Ghoni,2013).

Adabeberapametodeuntukmenginokulasibakterisesuaidenganjenismedium

tujuannya.Padamediumagartegak,dilakukanmetodetusukmenggunakanjarumose.

Padamediumagarmiring,dilakukanmetodegoresdenganmenggunakanloopose.Pada

mediumpetridisk,dapatdigunakanmetodestreakplate(metodegores),pourplate

(metodetuang)atauspreadplate(metodesebar)Setelahinokulasi,dilakukanproses

inkubasi,yaitumenyimpanmediumpadaalatataukontaineradatemperaturtertentudan

periodetertentu,sehinggaterciptalingkunganyangmenyediakankondisicocokuntuk

pertumbuhanbakteri.

Metodegoresataustreakplatemenggunakanlooposedanmenggoreskannyake

permukaanmediumagardenganpolatertentudenganharapanpadaujunggoresan,hanya

selselbakteritunggalyangterlepasdariosedanmenempelkemedium.Selselbakteri

tunggaliniakanmembentukkolonitunggalyangkemudiandapatdipindahkankemedium

selanjutnyaagardidapatkanbiakanmurni(Oetomo,1990).

Mediaadalahsuatubahanyangterdiridaricampuranzatzatharayangbergunauntuk

membiakkanmikroba.Denganmenggunakanbermacammacammediadapatdilakukan

isolasi,perbanyakan,pengujiansifatfisiologisdanperhitungansejumlahmikroba.Supaya

mikrobadapattumbuhbaikdalamsuatumedia,makamediumtersebutharusmemenuhi

syaratsyarat,yaituharusmengandungsemuazatharayangmudahdigunakanoleh

mikroba,harusmempunyaitekananosmosis,teganganpermukaandanpHyangsesuai

dengankebutuhanmikrobayangakantumbuh,tidakmengandungzatzatyangdapat

menghambatpertumbuhanmikroba,harusberadadalamkeadaansterilsebelum

digunakan,agarmikrobayangditumbuhkandapattumbuhdenganbaik(Emma,2013).

BABIII



METODEPRAKTIKUM

A. Waktu dan Tempat

Adapun waktu dan tempat dilaksanakannya praktikum ini adalah:

Hari/Tanggal:Senin/3Juni2013

Pukul:08.3012.00Wita

Tempat:LaboratoriumMikrobiologiSekolahTinggiPenyuluhan

Pertanian(STPP)Gowa

B.AlatdanBahan

1.Alat

Adapunalatalatyangdigunakandalampraktikuminiyaitubatanggelas

bengkok,cawanpetri,inkubator,laminarairflow,spiritusdanose.

2.Bahan

AdapunbahanyangdigunakandalampraktikuminiyaituBacillussubtilisdan

EscerchiacolidanmediaMBA(MediaBrothAgar).

C.ProsedurKerja

Adapunprosedurkerjadalampraktikuminiadalah:

1.Lempenganmembagimenjadi3bagianyaitudenganhurufTpadabagian

luardasarcawanpetri.

2.Menginokulasikandaerah1sebanyakmungkindengangerakansinambung.

3.Memanaskanosedanmembiarkandinginkembali.

4.Melakukanpenggoresandengancarayangsamapadadaerah2dan3.

5.Menutupsecepatnyamediacawanpetriyangtelahdiinokulasikemudian

memanaskanjarumosekembalisampaimembarauntukmeemusnahkan

mikroorganismeyangmasihmenempel.

6.Menyimpanbiakanyangbarudiinokulasidalamincubatorpadasuhu37c

selama24jam.

BABIV



HASILDANPEMBAHASAN

A.HasilPengamatan

Adapunhasilpengamatandaripraktikuminiadalah:

MetodeGoresanT

No LaboratoriumMikrobiologi Keterangan

1. Spesimen:Bacillussubtilis

1.Bentuk:Bacil

2.Permukaan:Cembung

3.Tepi:Bulat

4.Warna:Ungu

2

Spesimen:Escerciacoli

1.Bentuk:Coccus

2.Permukaan:Cembung

3.Tepi:Bergerigi

4.Warna:Putih

Pucat

Sumber:LaboratoriumPraktikumMikrobiologiSTTPGowaB.Pembahasan

Metodegoresataustreakplatemenggunakanlooposedanmenggoreskannyake

permukaanmediumagardenganpolatertentudenganharapanpadaujunggoresan,

hanyaselselbakteritunggalyangterlepasdariosedanmenempelkemedium.Selsel

bakteritunggaliniakanmembentukkolonitunggalyangkemudiandapatdipindahkanke

mediumselanjutnyaagardidapatkanbiakanmurni.

Teknikinilebihmenguntungkanjikaditinjaudarisudutekonomidanwaktu,tetapi

memerlukanketrampilanketrampilanyangdiperolehdenganlatihan.Penggoresanyang

sempurnaakanmenghasilkankoloniyangterpisah.Inokulumdigoreskandipermukaan

mediaagarnutriendalamcawaanpetridenganjarumpindah(lupinokulasi).Diantara

garisgarisgoresanakanterdapatselselyangcukupterpisahsehinggadapattumbuh

menjadikoloni.Carapenggarisandilakukanpadamediumpembiakanpadatbentuk

lempeng.Biladilakukandenganbaikteknikinilahyangpalingpraktis.Dalam

pengerjaannyaterkadangberbedapadamasingmasinglaboratoriumtapitujuannya

samayaiituuntukmembuatgoresansebanyakmungkinpadalempengmedium

pembiakan.

BerdasarkanhasilpengamatanyangdiamatibahwaBacillussubtilisdapat

diketahuibentuknyaberbentukbacil,permukaannyacembung,tepibulatdanwarnanya

warnaungu.SedangkanpadaEscherciacolibentuknyacoccus,permukaannya

cembung,tepinyabergerigidanwarnaputihpucat.

JikamaudibandingkandenganliteraturmakadapatdiketahuibahwamenurutTryana,



S.T (2008) menyatakan bahwa Bacillus subtilis merupakan bakteri gram positif akan

mempertahankanzatpewarnakristalvioletdankarenanyaakantampakberwarnaungutua

dibawahmikroskopdanhalinisamadenganhasilpengamatanyangtelahdiamatidibawah

mikroskop dengan warna ungu. Bacillus subtilis merupakan bakteri grampositif yang

berbentuk batang dan secara alami sering ditemukan di tanah dan vegetasi. Sedangkan

Escerchia termasuk dalam famili Enterobacteraceae yang termasuk gram negatif dan

berbentukbatangyangfermentatif

BABV

PENUTUP

A.Kesimpulan

Berdasarkanhasilpengamatanyangtelahdilakukanmakadapatdisimpulkan

bahwabakteriBacillussubtilismerupakanbakterigrampositifyangdiisolasidandapat

diketahuibentuknyaberbentukbacildenganpermukaancembung,tepinyabulatdan

warnanyaberwarnaungu.SedangkanpadaEscerchiacolimerupakanbakterigram

negatifdansetelahdiisolasidapatdiketahuibentuknyabebentukcoccusdengan

permukaancembung,tepinyabergerigidanberwarnaputihpucat.

B.Saran

Adapunsarandaripraktikuminiadalah:

1.Sebelummelakukanpraktekdilaboratoriumsebaiknyapraktikan

mempelajariterlebihdahuluteoriteknikisolasidaaninokulasiagartidak

terjadikesalahanpadasaatpraktikumberlangsung.

2.Agarkiranyaasistenmengawasidanmembimbingpraktikandemi

kelancaranpraktikumtanpaadahambatan.

DAFTARPUSTAKA

Caray.2013.PembuatanMediaAgardansterilisasi.http://makalahdanskripsi.blogspot.com.(4Juni2013).Djide,M.Natsir.PenuntunPraktikumMikrobiologiFarmasiDasar.



Posting Lebih Baru Posting LamaBeranda

Langganan: Poskan Komentar (Atom)

Diposkan oleh Ardhy Addhy di 07.03

Makassar:Unhas.2011

Dwidjoseputro.DasardasarMikrobiologi.Jakarta:Djambatan.1998.Emma,Kharisma.2013.IsolasidanInokulasi.http://emmakharisma.blogspot.com/2011/06/isolasidaninokulasi.html.(4Juni2013).Ghoni,Achmad.2013.IsolasidanInokulasiBakteri.http://www.nvtech.ac.id/isolasidaninokulasibakteri/2007/com.(4Juni2013).

Indah.2013.Isolasi.http://isolasimikroorganismedalamproses.html.(4Juli2013).

OetomoHadi,Ratnasari.MikrobiologiDasar.Jakarta:PTGramedia.1990.Pelczar,MichaelJ.DasardasarMikrobiologi.Jakarta:UniversitasIndonesia.1998.TimDosen.PenuntunPraktikumMikrobiologiTernak.UINAlauddin.Makassar.

2011.Yazurah,Verani.2013.InokulasiBakteri.http://yazura08.blogspot.com/2012/03/laporan

inokulasibakteri.html.(4Juni2013).

+1 Rekomendasikan ini di Google

MasukkankomentarAnda...

Berikomentarsebagai: GoogleAccount

Publikasikan

Pratinjau

Tidak ada komentar:

Poskan Komentar

Ardhy Best. Template Simple. Diberdayakan oleh Blogger.

Documents

Lapi