LABORATORIO NACIONAL DE DIAGNÒSTICO VETERINARIO (LNVD)

Facultad de Bacteriología y Laboratorio Clínico

Universidad de Santander UDES

BRUCELOSISBRUCELOSISEnfermedad zoonótica, intracelular, afecta a diferentes Enfermedad zoonótica, intracelular, afecta a diferentes

especies de animales domésticos y silvestres.especies de animales domésticos y silvestres.

Barreras en comercialización de los Barreras en comercialización de los animales y sus productos. animales y sus productos.

Altera desarrollo socioeconómico del Altera desarrollo socioeconómico del sector rural más vulnerable. sector rural más vulnerable.

Distribución mundial. Incidencia variable de unas áreas a otras. Algunos países del centro y del norte de Europa han conseguido su erradicación. En Sudamérica y países mediterráneos, (europeos y africanos) la Enf. continúa siendo frecuente.

División BXII. Proteobacteria

Clase I Alphaproteobacteria

Orden I Rhodospirillales

Familia II AcetobacteraceaeGénero I Acetobacter Género IX Gluconobacter

Orden II Rickettsiales

Familia I Rickettsiaceae Género I Rickettsia

Orden VI Rhizobiales

Familia I RhizobiaceaeGénero I RhizobiumGénero II Agrobacterium

Familia III BrucellaceaeGénero I Brucella

POBLACIÒN SUSCEPTIBLEPOBLACIÒN SUSCEPTIBLE

Microbiólogos, Bacteriólogos, Microbiólogos, Bacteriólogos, Auxiliares de laboratorioAuxiliares de laboratorio

CConsumidores de leche cruda o de subproductos Consumidores de leche cruda o de subproductos lácteos o cárnicos contaminados con la lácteos o cárnicos contaminados con la Brucella.Brucella.

Población Población infantil rural infantil rural

y urbana y urbana marginalmarginal

Veterinarios, manejadores Veterinarios, manejadores de ganado, vacunadores, de ganado, vacunadores, operarios en matadero.operarios en matadero.

AGENTE CAUSAL AGENTE CAUSAL Brucella spp.Brucella spp.

Gram negativa, Facultativa, IntracelularCapaz de sobrevivir y multiplicarse en las clls del S. RENo móvil, No esporulado, No posee cápsulaVariable en su forma (bacilos muy cortos, cocos o cocobacilos, con una longitud de 0.5 a 0.7 u A por 0.5 a 1.5 L

Crece lentamente en medios aeróbicos (parcialmente dependiente de tensiones bajas de CO2)

Colonias de tipo mucoso T. Op. crecimiento 37 °C, pH entre 6,6 a 7,4.

Es catalasa +, Reacciones bioquímicas según cepa sea lisa o rugosa

“A pesar de ser considerado un organismo fastidioso por sus requerimientos en el cultivo puede crecer en medios nutritivos

mínimos”

ESPECIES DEL GÉNERO Brucella spp.

Especies lisas

Especies rugosas

Brucella melitensis Brucella abortus

Brucella suis Brucella neotomae

Brucella maris

Brucella ovis

Brucella canis

Lipopolisacári

do (sLPS)

Proteínas (porinas)

•Brucella Brucella melitensismelitensis

Agente responsable de la mayoría de Agente responsable de la mayoría de los casos humanos. Biotipos (1-3) los casos humanos. Biotipos (1-3) La especie más patógena e invasiva La especie más patógena e invasiva en el en el humanohumano. Afecta comúnmente a . Afecta comúnmente a las cabras, pero puede afectar a las cabras, pero puede afectar a bovinos y cerdos.bovinos y cerdos.

•Brucella Brucella abortusabortusPrincipal responsable de la brucelosis bovinaPrincipal responsable de la brucelosis bovinaOcho biotipos (1-7 y 9)Ocho biotipos (1-7 y 9)Menor patogenicidad para los Menor patogenicidad para los humanoshumanos. . Afecta principalmente a bovinos, puede afectar Afecta principalmente a bovinos, puede afectar

a búfalos, alces, jabalíes, zorros, caballos, a búfalos, alces, jabalíes, zorros, caballos, ciervos, camellos, perros y cerdos.ciervos, camellos, perros y cerdos.

•Brucella suisBrucella suis

•Brucella Brucella neotomaeneotomae

Se subdivide en 4 biotipos (1-Se subdivide en 4 biotipos (1-4). Afecta principalmente a los 4). Afecta principalmente a los cerdos. También puede afectar cerdos. También puede afectar a losa los humanoshumanos..

AAfecta a roedores silvestres fecta a roedores silvestres “rata del desierto”“rata del desierto”

•Brucella ovisBrucella ovis

•Brucella canisBrucella canis

AAfecta a ovinos. Estos no se infectan fácilmente con B. abortus pero pueden portarla y excretarla 40 meses después de la infección

Afecta a caninos. Su afección en humanos es rara vez reportada.

•Brucella marisBrucella maris (B. Pinnipediae, B. Cetaceae) no hay (B. Pinnipediae, B. Cetaceae) no hay reporte de capacidad zoonótica. Ha reporte de capacidad zoonótica. Ha

extendido el rango ecológicoextendido el rango ecológico

TRANSMICIÒNTRANSMICIÒN

RESERVORIO SALVAJE (liebre,

rata, jabalí, venado)

RESERVORIO DOMÉSTICO (vaca, búfalo, cabra, cerdo, oveja)

Contacto

Directo

Contacto Indirecto Ambiente

Vía digestiva

Vía inhalatoria

LECHE Y DERIVADOS

INGESTIÓN

Se adquiere por contacto con Se adquiere por contacto con secreciones infectadas secreciones infectadas producidas durante los producidas durante los

abortos o por ingestión de abortos o por ingestión de productos cárnicos o lácticos productos cárnicos o lácticos

contaminadoscontaminados

PRINCIPAL Y MÁS COMÚN RUTA DE PRINCIPAL Y MÁS COMÚN RUTA DE TRANSMISIÓNTRANSMISIÓN

BRUCELOSIS BOVINABRUCELOSIS BOVINAEnfermedad reproductiva caracterizada por

aborto, retención de placenta y problemas de fertilidad en el hospedador principal.

Transmisión B. abortus en BovinosTransmisión B. abortus en Bovinos

VÌA ORAL: al lamer fetos y descargas genitales de abortos partos e ingestión de pastos contaminados. Exposición in utero o cuando terneros nacidos de vacas sanas, son alimentados con calostro o leche de vacas infectadas

Excreción bacterias en descarga vaginal hasta 40 días post exposición y pre-aborto. En secreciones, excreción masiva , hasta por 15 días después del aborto. Después de expulsión de membranas fetales el número de microorganismos eliminados disminuye.La descarga cesa 2-3 meses después de la infección. Quedan portadoras que excretan bacterias intermitentemente por muchos años

Produce importantes Produce importantes pérdidas económicas: pérdidas económicas: En Colombia se han En Colombia se han

estimado alrededor deestimado alrededor de

44.000 millones de 44.000 millones de pesos/año.pesos/año.

En los bovinos, puede cursar

asintomática o severa

La dosis, raza, edad, sexo, La dosis, raza, edad, sexo, tiempo de gestación, y la tiempo de gestación, y la resistencia natural a la resistencia natural a la enfermedad, influencian la enfermedad, influencian la evolución de la infección.evolución de la infección.

RESISTENCIA / RESISTENCIA / SUSCEPTIBILIDAD SUSCEPTIBILIDAD

A LA INFECCIÓNA LA INFECCIÓN

Condiciones de Condiciones de supervivencia de supervivencia de Brucella abortusBrucella abortus

Suelo: frío 48-73 díasAgua: 8-37 C 1-57 díasHeces: 1-120 díasDesperdicios 12C 1-8 mesesConcentrado > 100 díasLana: 12 C 110 días

DETECCIÒN DE LA INFECCIÒNDETECCIÒN DE LA INFECCIÒN

• Análisis en suero de hembras >18 meses. Machos > 8 mesesAnálisis en suero de hembras >18 meses. Machos > 8 meses

• Serología para animales en movilización (venta, exportación, Serología para animales en movilización (venta, exportación, ferias, matadero)ferias, matadero)

• Si hay reactores positivos aislar y solo movilizar para matadero.Si hay reactores positivos aislar y solo movilizar para matadero.

• Tomar medidas conjuntas para su control y prevención entre Tomar medidas conjuntas para su control y prevención entre Propietario y Veterinario.Propietario y Veterinario.

DIAGNÒSTICODIAGNÒSTICOCultivo y pruebas

bioquímicas:Biología molecular:

PCR

ELISAs ELISAs indirecta y indirecta y competitivacompetitiva

Fijación de Fijación de ComplementComplement

ooRosa de BengalaRosa de Bengala

Detección directa

Detección indirecta

ELISA indirecta en ELISA indirecta en suerosuero y y lecheleche en en bovinosbovinos

ELISA competitivaELISA competitivaFijación de complementoFijación de complementoRosa de bengala en Rosa de bengala en suerossueros PCR (PCR (tejidos, leches, tejidos, leches,

cultivoscultivos))

BRUCELOSIS HUMANABRUCELOSIS HUMANA

Síntomas,1 ~ gripe, puede incluir fiebre, sudoración, cefaleas, mialgias artralgias y debilidad física. Los

sistemas osteoarticulares son los más afectados, pero en las fases agudas de la enfermedad, el corazón y el sistema nervioso se pueden afectar. También puede

causar síntomas crónicos que incluyen fiebres recurrentes, dolores comunes y fatiga TransmisiónTransmisión

• Inoculación por cortes o abrasiones de piel en contacto con placenta o secreciones vaginales contaminadas.

• A través de conjuntivas.• Inhalación de aerosoles.• Consumo de leche cruda, derivados lácteos no

pasteurizados, carne cruda.• Inoculación accidental de la vacuna animal C19.

Dosis infectiva 10 a 100 bacterias• Ha sido sugerida la transmisión sexual .

BRUCELLASBRUCELLAS QUE CAUSAN QUE CAUSAN LA INFECCIÓN EN HUMANOSLA INFECCIÓN EN HUMANOS

Brucella melitensis Brucella abortus Brucella suis

Brucella canis

Sin tratamiento, la tasa de letalidad es Sin tratamiento, la tasa de letalidad es menor al 2% y por lo común, sucede como menor al 2% y por lo común, sucede como consecuencia de la endocarditis. consecuencia de la endocarditis.

Como la duración de la enfermedad varía Como la duración de la enfermedad varía desde una pocas semanas a varios meses, desde una pocas semanas a varios meses, se necesitan pruebas de laboratorio para se necesitan pruebas de laboratorio para confirmar el diagnóstico clínico.confirmar el diagnóstico clínico.

BRUCELOSIS HUMANABRUCELOSIS HUMANA

DIAGNÒSTICO EN HUMANOSDIAGNÒSTICO EN HUMANOSCultivo y pruebas

bioquímicas:Biología molecular:

PCR

ELISA ELISA CompetitivaCompetitiva

Fijación de Fijación de ComplementComplement

ooRosa de BengalaRosa de Bengala

Detección: Aislamiento Sangre o MO

TRATAMIENTOTRATAMIENTO

La terapia antibiótica óptima está aún en discusión.

Debido a la localización intracelular de la Brucella, se requiere la asociación de varios antimicrobianos

durante varias semanas.

CONTROL Y PREVENCIÓN DE BRUCELOSIS EN CONTROL Y PREVENCIÓN DE BRUCELOSIS EN HUMANOSHUMANOS

Control y eliminación de la infección de los Control y eliminación de la infección de los reservorios animales. (Resolución ICA 000119)reservorios animales. (Resolución ICA 000119)

Exigencia de pasteurización de leche.Exigencia de pasteurización de leche.

Métodos diagnósticos sensibles y específicos Métodos diagnósticos sensibles y específicos disponibles disponibles


Control y eliminación de la infección de los Control y eliminación de la infección de los reservorios animales. (Resolución ICA 000119)reservorios animales. (Resolución ICA 000119)

Exigencia de pasteurización de leche.Exigencia de pasteurización de leche.

Métodos diagnósticos sensibles y específicos Métodos diagnósticos sensibles y específicos disponibles disponibles


Prevención en grupos ocupacionales: Prevención en grupos ocupacionales: capacitación, educación continuada, uso de capacitación, educación continuada, uso de

equipo de protección.equipo de protección.

Vacunas en humanos tienen eficacia limitada. Vacunas en humanos tienen eficacia limitada. Las vacunas vivas, se asocian con potencial de Las vacunas vivas, se asocian con potencial de

reactivación de patogenicidad. reactivación de patogenicidad.


Prevención en grupos ocupacionales: Prevención en grupos ocupacionales: capacitación, educación continuada, uso de capacitación, educación continuada, uso de

equipo de protección.equipo de protección.

Vacunas en humanos tienen eficacia limitada. Vacunas en humanos tienen eficacia limitada. Las vacunas vivas, se asocian con potencial de Las vacunas vivas, se asocian con potencial de

reactivación de patogenicidad. reactivación de patogenicidad.

TÈCNICAS DE DIAGNOSTICOTÈCNICAS DE DIAGNOSTICO

DIRECTAS

INDIRECTAS

Cultivos

PCR

•Cultivo de especimenes para el aislamiento

•Cultivo masivo de bacterias para la

preparación de reactivos diagnósticos

•Amplificación de DNA por PCR

•Rosa de Bengala

•Fijación de Complemento

•Elisa Indirecta

•Elisa Competitiva.

ROSA DE BENGALA

Antígeno: células completas e inactivadas de Brucella abortus

Anticuerpos anti Brucella abortus

presentes en suero

Positiva:

FORMACION DE UNA RED DE

AGLUTINACIÓN

Tinción con el colorante Rosa de Bengala a pH 3 para favorecer la actividad de la IgG1

Homogenización

e incubación (Antígeno + suero)

Negativa: No Formación de la red de aglutinación.

FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

Antígeno Brucella abortus inactivada

Anticuerpos presentes en suero

Complemento : factor sérico presente en el

suero. Función: lisis del complejo antígeno-

anticuerpo. (Fuente: suero de cobayo)

Glóbulos Rojos Ovinos (GRO)

Hemolisina : anticuerpos anti- GRO

TBC BOVINATBC BOVINA

Es una de las enfermedades más importantes del ganado bovino, tanto por su impacto en salud pública como por sus consecuencias económicas para

un país.

Su incidencia limita el desarrollo de la ganadería y sus productos asociados, incluyendo las exportaciones.

Enfermedad infecto-contagiosa crónica

causada por bacterias del genero

Mycobacterium.


De acuerdo con lo informado recientemente por la Organización Mundial de la Salud, el número de

casos de tuberculosis, en el hombre, supera los 8 millones al año y va en aumento. Los programas de control y eliminación de animales infectados,

junto con la pasteurización de la leche, han reducido drásticamente la incidencia de la

enfermedad causada por M. bovis, tanto en el hombre como en los animales. Sin embargo, este patógeno está presente en animales de países en

desarrollo donde no existen medidas de control adecuadas.

IMPACTO SOCIALIMPACTO SOCIAL


Mycobacterium bovis Afecta, además del bovino, a varias especies animales como caprinos, ovinos cerdos, perros, gatos, monos y al

hombre por lo tanto es una enfermedad zoonotica. Otras micobacterias, como el M. tuberculosis (humano) y el M. avium (aviar), también pueden infectar al bovino. Las micobacterias son sensibles a los desinfectantes a

base de fenoles, y son resistentes al medio ambiente y a los desinfectantes solubles en el agua.

AGENTE CAUSAL AGENTE CAUSAL


Generalmente tiene un curso crónicoSíntomas variados afectados. La pérdida progresiva de peso y la reducción en la producción de leche o carne son constantes.Con alguna frecuencia se observa una tumefacción no dolorosa de los ganglios explorables clínicamenteCuando hay infección hepática o intestinal se presenta diarrea, al igual que infertilidad por endometritisAlgunas veces la tuberculosis pulmonar cursa con signos respiratorios inespecíficos como tos crónica, casi nunca fuerte, sin mucha fuerza.Las lesiones predominan en pulmón y ganglios linfáticos, en forma de nódulos o granulomas o tubérculos de material purulento-caseoso

SINTOMATOLOGIASINTOMATOLOGIA

TBC BOVINATBC BOVINALa eliminación del M. bovis por parte de los animales afectados es intermitente. Puede

suceder en las etapas tempranas de la enfermedad, cuando aún no son detectables por la

prueba de diagnóstico.

Vía más frecuente (80 a 90%) de infección: vía aerógena. Aerosoles, toses y secreciones de

animales enfermos que expelen gran cantidad de microgotitas que contienen la bacteria.

Vía digestiva (10 a 20% de los casos): por el consumo de pastos y alimentos contaminados con

secreciones nasales, materia fecal y orina que contienen el agente causal.


Otras vías no usuales pero probables son: la vía cutánea, congénita y genital.

Vía congénita (madre-feto) puede ocurrir hasta en 5% de las vacas afectadas

Vía genital, los toros se infectan sirviendo vacas con metritis tuberculosa

La transmisión más importante se produce por medio de la inseminación

artificial, al utilizar semen de toros infectados


Hay tres razones claves para controlar y/o erradicar la TBC: Porque se transmiten al hombre, principalmente a los que trabajan en

contacto con animales infectados (veterinarios, trabajadores rurales y personal de frigoríficos).

Porque limitan el comercio internacional de productos cárnicos y lácteos, influyendo negativamente en la rentabilidad de las explotaciones.

Porque estas enfermedades generan importantes pérdidas económicas en la producción de carne y leche.

¿POR QUÉ CONTROLAR LA ENFERMEDAD?

TBC BOVINATBC BOVINADIAGNÒSTICO DIAGNÒSTICO

En las plantas de sacrificio la inspección de canales es una actividad básica en la vigilancia

epidemiológica de la tuberculosis bovina, ya que es allí donde se detectan en los bovinos las lesiones

macroscópicas que se ven a simple vista.

La presencia de tumoraciones en los diferentes órganos

El foco de necrosis presenta una coloración amarillenta con apariencia caseificada y es posible detectar la

presencia de calcio; durante la necropsia se perciben como pequeñas granulaciones blanquecinas que crepitan

al cortar con el cuchillo.

También puede observarse exudado de apariencia purulenta en meninges.

METODOS DIRECTOS

Ganglios medianísticos medios aumentados de

tamaño y múltiples tubérculos pequeños de

tipo caseoso


1) Coloración de Ziehl Nielsen: identifica la presencia de bacilos acido alcohol resistentes, no formadores de esporas inmóviles y no encapsulados, características del género Mycobacterium.

2) Histopatalogía, proporciona resultados presuntivos. En cualquiera de las formas en que se presenta la tuberculosis, esta se caracteriza por la formación de granulomas. Se pueden detectar bacilos ácido alcohol resistentes libres en el citoplasma de los macrófagos, histiocitos y células gigantes de la lesión granulomatosa.

METODOS DIRECTOS


El cultivo bacteriológico proporciona el diagnóstico definitivo de la enfermedad.

Las micobacterias son aerobios obligados que crecen en medios sintéticos simples, pero para el aislamiento primario a partir de muestras clínicas se requiere de un

medio más complejo como el medio Löwestein-Jensen, o como el medio Middlebrook.

El cultivo dura de 3 a 6 semanas en desarrollarse, las colonias son pequeñas, secas y con aspecto escamoso.

El material requerido para aislar el M. bovis debe ser ganglios, pulmones, hígado, bazo, riñón, pleura o cualquier otro tejido donde se aprecien las lesiones

características.

METODOS DIRECTOS


Prueba Tuberculinica Cervical Simple: consiste en la inoculación intradérmica de 0,1 ml de PPD

bovina, previa limpieza con un producto no-irritante, en el tercio medio del cuello, previo corte de pelo a maquina o tijera en el lugar de inyección, en una superficie de 5 a 6 cm. La lectura se hace a las 72 horas (más o menos 6 horas). Las reacciones se consideran negativas cuando no se observa ni palpa ningún cambio en la piel del sitio de aplicación y reactoras cuando es visible y/o palpable un engrosamiento de 4-5 mm.

METODOS NDIRECTOS

Evalúan la Rta mediada por células. El PPD bovino es un derivado proteico purificado producido a partir de cultivos inactivados de Mycobacterium bovis.


Prueba Tuberculinica Ano-Caudal: Eesta prueba se realiza en el pliegue ano-caudal interno a unos 6 cm. de la base

de la cola y en el en el tercio medio del pliegue ano-caudal interno. Esta zona es menos sensible a la tuberculina que la piel del cuello. Se inyectan 0.1 ml de PPD bovina, previa limpieza con un producto no-irritante. La lectura se hace a las 72 horas (más o menos 6 horas). Las reacciones se consideran negativas cuando no se observa ni palpa ningún cambio en la piel del sitio de aplicación y reactoras cuando es visible y/o palpable un engrosamiento de 4-5 mm.

METODOS NDIRECTOS


METODOS NDIRECTOS

Prueba tuberculínica comparativa: La prueba intradérmica comparativa se utiliza para la realización de un diagnostico

diferencial entre animales infectados por Mycobacterium bovis y aquellos sensibilizados a la tuberculina por exposición a otras micobacterias. Esta prueba consiste en la inyección de tuberculina bovina y tuberculina aviar, previa limpieza con un producto no irritante, en diferentes puntos del cuello y en la subsiguiente evaluación de la respuesta transcurridas 72 horas. Para esta prueba comparativa la dosis de tuberculina no debe ser inferior a 2.000 UI de tuberculina bovina ni a 2.00 UI de tuberculina aviar. La distancia entre ambas inyecciones debe ser de aproximadamente 12 a 15 cm. Un animal se considera positivo cuando en la zona de inyección de la tuberculina bovina hay una reacción de 4mm mayor que la tuberculina aviar y se considera dudoso cuando esa reacción es entre 1 y 4mm mayor que la tuberculina aviar. El animal es negativo cuando no hay reacción o cuando la reacción es igual o menor que la tuberculina aviar.


METODOS NDIRECTOS

La prueba de gamma-Interferón Se realiza con sangre completa y tiene mayor sensibilidad y especificidad

que la intradermo reacción. Se emplean los mismos antígenos (PPD) y detecta el mismo grupo de animales infectados. Las ventajas con respecto a la intradermo reacción es que el animal se maneja sólo una vez. Los inconvenientes son su costo y la necesidad de procesar la sangre inmediatamente después de su extracción.

Prueba de ELISA Indirecta Detección de anticuerpos séricos. Posee baja sensibilidad, pero es muy

fiable en la detección de vacas "anérgicas" a las pruebas de la tuberculina y gamma-Interferón.

Otras pruebas que estudian la respuesta de tipo celular detectando la presencia de citocinas circulantes incluyen:


METODOS NDIRECTOS

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Amplificación de secuencias génicas, Su eficacia radica en la rápida identificación de patógenos de difícil cultivo. En ese contexto, el desarrollo de un procedimiento que identifica directamente M. bovis en muestras de tejido y secreción

proveniente de animales tuberculosos debe ser el objetivo de todos los países.

Documents

LABORATORIO NACIONAL DE DIAGNÒSTICO VETERINARIO (LNVD)