Lab. de Microfar

7/21/2019 Lab. de Microfar

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Procedimientos para la correcta toma y transporte de muestras

micolgicas

Objetivos:

Realizar anlisis micolgicos de muestras clnicas de animales, de ambiente,

alimentos y de sustancias industriales usadas para control de hongos.

Promover en el estudiante el inters por la investigacin cientfica mediante la

revisin de literatura, presentacin de casos, y desarrollo de trabajos cortos de

investigacin en micologa.

Marco Teorico:os hongos pueden causar enfermedad aun cuando no estn presentes...!lgunas especies de hongos filamentosos producen to"inas como metabolitossecundarios #ue al ser inhalados, ingeridos o absorbidos por va cutnea, y encantidades suficientes pueden causar enfermedad y hasta la muerte de laspersonas y animales. $in embargo, cuando los profesionales de salud realizan lab%s#ueda de la causa de las enfermedades no encuentran el hongo sino los da&osen el organismo causados por la micoto"ina.

1. Consideraciones previas a la toma de muestras:

!ntes de tomar y enviar una muestra clnica a un laboratorio para estudio

micolgico debe considerar lo siguiente'

aboratorio especializado' es conveniente remitir material a un laboratorio

familiarizado con el procesamiento de muestras veterinarias, pues el

diagnstico ser ms certero de esta manera.

(orario de recepcin de muestras' es importante conocer esta informacin

para contar con un lapso de )* horas m"imo para remitir el material, de

esta manera se debe evitar tomar muestras al inicio del fin de semana o

cuando el da siguiente sea feriado.

$ervicios ofrecidos por el laboratorio' con esto se pretende cerciorar #ue la

muestra enviada va a ser procesada y se cuenta con los reactivos

necesarios para su diagnstico final +p.e. medios de cultivo especiales.

!nimal sin tratamiento antif%ngico, cremas o champ%s' el uso de

antif%ngicos tpicos o sistmicos, ciertas cremas o champ%s pueden

repercutir negativamente en el diagnstico micolgico, por lo tanto se debe

procurar #ue el animal no se le apli#ue nada tpico o sistmico por al

menos * semanas previas a la toma de muestra.

(istopatologa y citologa' las biopsias, lavados y aspirados deben ser

enviadas tambin a un laboratorio especializado en histopatologa y

citologas animales para complementar y corroborar el diagnstico

micolgico.


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2. Hoja de datos:

Para realizar un mejor diagnstico se recomienda completar una hoja de datos

con informacin relevante sobre'

-atos del propietario yo mdico veterinario remitente' nombre, telfono,

fa", correo electnico, direccin, fecha de recepcin de la muestra.

-atos epidemiolgicos del animal' edad, se"o, raza, proveniencia,

identificacin, cantidad de animales afectados.

(allazgos clnicos e historia mdica' signos clnicos, tiempo de

presentarlos, tipo, cantidad y distribucin de la o las lesiones,

tratamientos recibidos y duracin de los mismos, si est en cuadra o en

potrero, alimentacin, situaciones de estrs, traslados o salidas de

la finca recientes, enfermedades crnicas o condicin de portador de

las mismas, si hay secreciones describir el color, consistencia y olor de las

mismas, presencia de signos respiratorios, ganglios linfticos aumentados,

etc. Rotular el recipiente con la identificacin del animal, la fecha y hora de

la toma de muestra, el tipo de muestra y nombre del mdico veterinario

remitente.

$obre la muestra' tipo, cantidad, tiempo transcurrido desde la toma de la

misma, medio de transporte utilizado.

$obre los e"menes de laboratorio' indicar si se desea e"amen directo yo

cultivo

. Tipos de muestras cl!nicas" toma y transporte:

os tipos de muestras biolgicas dependen de la presentacin clnica y agente

sospechado, en el siguiente cuadro, se resumen los diferentes tipos de muestras

clnicas, cmo tomarlas y transportarlas correctamente.

#s importante el uso de guantes para protegerse de posibles

in$ecciones mientras se tome la muestra.


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/0P1 -2 342$/R! 5

4/00-!-

6131 $2 /13! /R!7$P1R/2

Micosis super$iciales

Raspados' para lesionesplanas, %lceras y

onicomicosis.

$e desinfecta el rea conalcohol de 89:, se realiza

con una hoja de bistur ;

*9, raspando el borde de

la lesin +no es necesario

#ue sangre y

recolectando la mayor

cantidad de escamas y

pelos.

2n un recipiente seco yestril +placa de petri,

tubo de ensayo, etc a

temperatura ambiente.

3antener la muestra lejos

de la luz solar.


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Frotis: se utiliza para

recolectar el material de un

hisopado de lesiones

h%medas, cavidades u

obtenidas por raspado +p.e.levaduras intracelulares.

$e debe rodar el hisopo

sobre la superficie del

portaobjetos dejando al

menos = lneas

impregnadas.

$e puede transportar un

portaA portaobjetos o bien

de la misma manera #ue

la cinta adhesiva, la

viabilidad es la misma y ala misma temperatura.

>ijar en metanol en caso

de sospecha de levaduras

intracelulares.

Barridos de pelambre: se

utiliza para recolectar

esporas de hongos

presentes en la superficie

de los animales y asdeterminar portadores de

dermatofitos.

4n trozo de alfombra

estril o cepillo, se pasa

sobre el pelo del animal.

$e guarda en un

recipiente estril +placa de

petri, papel Braf, a

temperatura ambiente,

lejos de la luz solar.


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Raspados: $irven para

tomar material de lesiones

ulcerativas, supurativas y

polifistulosas.

6on ayuda de una hoja de

bistur ; *9, limpindo el

rea con solucin salina

estril a presin, se retira

la mayor cantidad dematerial posible.

2l material recolectado,

se deposita en un tubo de

ensayo o placa de petri

estril y se desechar el

bistur, pues se o"ida conla sangre y dificulta el

diagnstico. Para #ue la

muestra no se se#ue,

puede adicionarse * cc de

solucin salina estril.

6onservar a @:6.


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$e deben retirar lo ms

aspticamente posible

con ayuda de una pinza

estril y limpiando

previamente el rea consolucin salina estril.

Crnea' para determinar la

presencia de

#ueratomicosis

-ebe retirarse de forma

asptica una porcin de la

crnea afectada,

realizando un raspado

profundo con una hoja de

bistur ; )9.

$e transporta en un

recipiente estril como

placa de petri con E gotas

de solucin salina

fisiolgica estril. levarse

de inmediato al

laboratorio a @:6.


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Biopsias: es la muestra

#ue mayor informacin

provee, sin embargo, en el

animal vivo es difcil de

obtener +p.e. pulmn.

$e toma de manera

asptica, con pinzas

biopsiadoras, aguja

GeasytrapH, sacabocados

o bistur.


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(#)#(#*C+,-

!renas, R. *99=. 3icologa 3dica 0lustrada. *da ed. 3c?raI (ill. 3"ico

-.>., 3e".

6linBenbeard, J.-.,6.?. 3ac!llister, R.. 6oIell, R.-. /yler K $. Leaudin.

*99*. 1ral and 7asal 6avities, Pharyn", ?uttural Pouches, and Paranasal

$inuses. In' 6oIell, R.. K R.-. /yler. -iagnostic 6ytology and (ematology

of the (orse. *nd2d. 3osby. 3issouri, 4.$. Pp' DD.

6orB, $. K R. (alliIell. *99*. /he veterinary laboratory and field manual.

7ottingham 4niversity. 7ottingham, 4.J.

6oIell, R.., R.-. /yler, J.2. -orsey K 3.!. ?uglicB. *99*. ymph7odes. In' 6oIell, R.. K R.-. /yler. -iagnostic 6ytology and (ematology

of the (orse. *nd2d. 3osby. 3issouri, 4.$. Pp' MMA)9).

-rouhet. 2., ?. $egretain y >. 3ariat. )M88. 3icologa 3dica p. =))A@99.

0n' ?olvan, 5.N. y N.6. Petithory +ed. /cnicas en parasitologa y micologa.

Nims. Larcelona, 2spa&a.


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binocular de campo claro +con objetivos de @O, )9O, @9O, )99O, (ojas y mangos de

Listur, pinzas sin dientes de uso clnico.

Por #0uipo:

!gar sangre.

3edio selectivo' !gar $abouraud, agar para seleccin de hongos +agar

micobitico o agar tripticasa de soya.

!gar 3ac6onBey

Lase de rojo de fenol con lactosa, glucosa, manitol, trehalosa, sorbitol y

maltosa.

/ren de tincin lactofenol azul de algodn

Metodolog!a:

Primer !a -esin no3

Preparacin y ,condicionamiento de la Muestra:

a muestra a utilizar para el aislamiento e identificacin micolgica debe ser

caracterstica, y debe ser tomada bajo las debidas medidas de bioseguridad e"igidas

para este gnero y del tama&o adecuado, y procesarse inmediatamente.

Procedimiento:

). 6on un hisopo estril se toma la muestra y se siembra en una caja de agar

$abouraud o agar micobitico, agar sangre y agar 3c 6onBey, e inocular bajo el

procedimiento de aislamiento en cultivo puro incubando a =9 F6 por *@ a 8* h.

*. $embrado en el microcultivo'

a. -entro de una caja petr estril agregar entre * a @ m de agua bidestilada

estril.b. 6olocar un soporte y poner un portaobjetos con un cuadro de !gar $abouraud

o !gar para hongos de apro"imadamente ) cm*.c. 6on el asa tomar la muestra y sembrar por picadura en cada lado del agar,

posteriormente colocar el cubreobjetos, tapar la caja e incubar de *@ a *C F6

de entre *@ a )*9 h apro".d. 4na vez observado crecimiento se procede a la realizacin del frotis, previa

inactivacin del cultivo.

=. Preparacin del frotis.

a. 0ntroduce un algodn impregnado con formol al )9 en la caja y djalo actuar

durante =9 minutos con el fin de inactivar al hongo.b. 2n un portaobjetos coloca dos gotas separadas de lactofenol azul de algodn.

6on las pinzas toma cada uno de los cubreobjetos y colcalos sobre cada una

de las gotas del colorante.c. 1bsrvese las preparaciones en el microscopio de campo claro con los

objetivos )9 O y @9 O

d. 1bserva las estructuras fungales y sus caractersticas morfolgicas.

-egundo !a -esin os3


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+nterpretacin de (esultados:

a identificacin se lleva a cabo mediante la observacin de las colonias fungales y la

preparacin de frotis h%medos a partir de estas o a partir de microcultivos con el fin de

determinar la morfologa microscpica.

). 0dentificacin en medio de cultivo' las cajas de estos medios deben ser revisadas

peridicamente hasta por )M9A*99 h a *@ a *C F6 y observar la te"tura, tama&o y

pigmento de la superficie y base de las colonias desarrolladas. a mayora de los

dermatofitos producen colonias con micelio de aspecto algodonoso o polvoso.

*. /incin de !zul de !lgdon' los dermatofitos producen dos tipos de aleuriosporasQ

las macroaleuriosporas +multicelulares, septadas y las microaleuriosporas

+unicelulares, no septadas la morfologa caracterstica de dichas estructuras permite

la identificacin de cada una de las especies.

2pidermophyton produce abundantes macroaleuriosporas de pared gruesa ylisas, en forma de ra#ueta y no produce microaleuriosporas.

/richophyton produce pocas macroaleuriosporas con forma alargada +forma de

GbastoH, de pared lisa y delgada, y produce abundantes microaleuriosporas.

3icrosporum produce abundantes macroaleuriosporas en forma de huso, con

pared gruesa y spera +a menudo descritas como GornamentadasH y produce

pocas microaleuriosporas. 1tras estructuras microscpicas #ue

ocasionalmente son %tiles para la identificacin de los dermatofitos son la

presencia de hifas espirales o en forma de GpeineH +hifas pectinadasQ la

presencia de clamidosporas terminalesQ de artrosporas.

(esultados:

6on la informacin obtenida durante la prctica y la posterior investigacin #ue tendr

#ue realizar el alumno, entregara un reporte de prctica tal como lo solicite el docente.

Cuestionario:

). 3enciona las principales diferencias morfolgicas entre las bacterias y los hongos

microscpicosS

*. Tu diferencia hay entre la tincin de ?ram y la tincin actofenol azul de

algodnS

=. Tu medidas de bioseguridad utilizaras para manipular y procesar muestras de

enfermedades micticasS

4+45+O/(,)+,.

-epartamento de 3icrobiologa e 0nmunologa +*99@' 3anual de laboratorio

para bacteriologa y micologa veterinarias. >acultad de 3edicina .

?arca /. R. y 6rdoba P. R. +)MCC' 3anual ilustrado de tcnicas de laboratorio

utilizadas en bacteriologa y micologa veterinarias. 0nstituto 0nternacional de6ooperacin para la !gricultura. 3"ico.


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