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Algoritmos bacterianos
QBP. JUAN SALVADOR SUASTEGUI MORENO
HOSPITAL GENERAL RAYMUNDO ABARCA ALARCON
CHILPANCINGO GRO.
I.-Puntos a tomar en cuenta en las marchas bacterianas
1.-Toma de muestra
2.-Transporte de la muestra
3.- Análisis Microscopico
4.- Cultivo y primoaislamiento
5.- Identificación Bacteriana
II.- Origen de muestras clínicas
1.- Las muestras para el estudio bacteriológico, se dividen en dos tipos:
a).- las que proceden de sitios en los que no hay flora bacteriana normal presente.
b).- aquellas que se toman de lugares
que tienen flora bacteriana normal.
Flora bacteriana
Es importante que el bacteriólogo tengaconocimiento de los siguientes
aspectos:
cuales son los agentes etiológicos aislados con mayor frecuencia en procesos infecciosos de sitios anatómicos normalmente estériles.
cuales son los microorganismos, presentes, bajo condiciones normales, en la piel y en las mucosas.
Presencia de biota normal en diferentes zonas corporales del humano.
ZONAS CORPORALES LIBRES DE BIOTA NORMAL
ZONAS CORPORALES CON DE BIOTA NORMAL
Aparato respiratorio inferior-Laringe-Traquea-BronquiolosAparato genitourinario-Ureteros-Vejiga-Riñón-ÚteroLíquidos-Sangre-Médula ósea-L.C.R.-Líquido seroso-Líquido sinovial-Líquido pleural-OrinaTejidos
PielMucosas -Boca-Orofaringe-NasofaringeOído externoOjoAparato genitourinario-Uretra anterior-VaginaAparato gastrointestinal-Estómago-Intestino delgado-Intestino grueso
III.- TRANSPORTE DE LA MUESTRA
1.-La cantidad de material debe ser adecuado.
2.-La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso (por ejemplo, expectoración, no saliva; pus de la lesión subyacente, no de su trayecto fistuloso; una muestra de lo profundo de la herida, no de la superficie).
3.-Se debe evitar la contaminación de la muestra utilizando sólo equipo estéril y precauciones asépticas.
4.-Las muestras para ser enviadas al laboratorio deben colocarse en un medio de transporte, el cual tiene como propósito mantener la viabilidad de las bacterias presentes en la muestra e impedir su multiplicación. Se han diseñado diferentes medios de transporte, el que más se utiliza es el de Stuart.
Medios de transporte de uso en Bacteriología Médica.
MEDIO PROPOSITO
STUARTSTUART REDUCIDO
Aerobios y anaerobios facultativosAnaerobios estrictos
CARY-BLAIRAMIESGLICEROLSOLUCIÓN SALINAAMIES Y DOUGLASHAJNA
Shigella y Campylobacter
CARBÓN ACTIVADOCASREGAN-LOWE2SP
Streptococcus pyogenesBordetella pertussisBordetella pertussisChlamydia
TRANSGROWNPIKECALDO UREACAMPYTIOSP4
Neisseria gonorrhoeaeStrptococcus pyogenesHelycobacter pyloriCampylobacter jejuniMicoplasma
IV.- Condiciones apropiadas para el transporte de muestras
1.-La orina, las expectoraciones y el material de absceso, se pueden colocar en frascos estériles de boca ancha.
2.-Los líquidos corporales como el Líquido Cefalorraquídeo en tubos estériles (la sangre se coloca en frascos diseñados ex profeso).
3.-Los trozos de tejido se pueden colocar en frascos estériles.
V.-Criterios para el rechazo en la evaluación de las muestras
a) Muestras no aptas para su procesamiento: Punta de sonda foley Orina de bolsa de sonda Líquidos coagulados Cultivos para anaerobios enviados en medio de
transporte inadecuado.
b).-Muestras remitidas en condiciones inadecuadas.
c).-Solicitud de estudios especiales innecesarios.
VI.- MICROSCOPIAEste procedimiento evidencia lo siguiente:1.- La presencia de bacterias, cantidad,
morfología y agrupación.2.-Permite evaluar el grado de respuesta
inmunológica con la presencia de células fagocíticas, cuyo quimiotactismo esté orientado hacia un morfotipo bacteriano en particular (Criterios de Bartlett), donde se observen células bacterianas adheridas a la membrana de los PMN y dentro de las vacuolas digestivas formadas en el citoplasma de la células inflamatorias.
VI.- Microscopia
3.-La observación microscópica es el primer paso, el cual permitirá orientar el método a desarrollar en el estudio bacteriológico para el diagnóstico clínico.
4.-Se pueden realizar preparaciones en fresco para la observación en campo oscuro, ( treponemas y leptospiras), preparaciones en fresco de muestras de vagina para la observación de células indicativas de vaginosis bacteriana.
VII.- Tinciones
1. Simples: Azul de metileno
Fucsina fenicada
Verde de malaquita
2. Diferenciales:• Gram
• Ziehl-Neelsen
• Tan Thiam-Hok
• Machiavello
• Jiménez
VIII.- Tinciones Estructurales:a) Flagelos
- Rhodes- Tribondeau
- Leifsonb) Esporas
- Shaeffer-fulton- Moeller
c) Cápsula- Hiss- Tinta china
d) Gránulos metacromáticos- Ernst-Neisser- Albert- Loeffler
Tinción Gram (cultivo fresco)
+ + + + + + + + – – – – –
Forma coco coco coco coco bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón coco
Agrupación racimos racimos cadenas tetradas pares
Crecimiento aerobio
+ + + + + – + + + + + + +
Crecimiento anaerobio
– + + + + + + – – – + + –
Esporas – – – – – + + + – – – – –
Movilidad – – – – – + o – + o – + o – + o – + o – + o - + –
Catalasa + + – – – – + + + + + + +
Oxidasa + + – + +
Fermentación de glucosa a acido o a acido+gas
– + + + + + (o –) + – – – + + –
O/F – O F F O
Micrococcus X
Staphylococcus X
Streptococcus X
Lactococcus X
Enterococcus X
Leuconostoc X
Pediococcus X X
Aerococcus X
Lactobacillus X
Clostridium X
Bacillus X X
Alcaligenes X
Pseudomonas X
Enterobacterias X
Aeromonas X
Chromobacterium
X
Neisseria X
IX.-Características fenotipicas para la identificación bacteriana A).- Criterios Generales:
Requerimientos de Oxigeno (atmósfera) y temperatura de incubación.
Morfología colonial. Tipo de hemólisis en GS carnero al 5%. Requerimientos nutricionales. Producción de pigmentos. Tinciones: Afinidad a la tinción de Gram. Morfología bacteriana. Presencia de enzimas. Reacciones inmunoserológicas. Sensibilidad antimicrobiana.
X.- Criterios de Cowan y Steel
B).- Pruebas de selección Primaria :
Reacción de catalasa Reacción de oxidasa Prueba de movilidad Pruebas de O/F de carbohidratos Presencia de Esporas Tinción de Ziehel Neelsen Tinción de Gram
XI.-Requerimientos nutricionales
1.-Conocer que suplementos nutricionales que requiere MO para crecer óptimamente.
2.-Ejemplo: dependencia de factor NAD (V) o factor Hemina (X) ó ambos en el género Haemophilus.
3.-Familia Enterobacteraceae: no son organismos nutricionalmente exigentes.
XII.- Atmósfera
1.-Conocer cuales son los requerimientos de O2 de los MO.
2.-Aerobios.
3.-Microaerofílicos.
4.-Anaerobios facultativos.
5.-Anaerobios estrictos
XIII.- Temperatura1.-Conocer la temperatura ideal para su
desarrollo.
2.-Mesofílicos (35 a 37ºC): la mayoria de las especies bacterianas de interés clínico.
3.-Termofílicos (>37ºC): Pseudomonas aeruginosa (41ºC), Campylobacterias (42ºC).
4.-Psicrofílicos(<ATM): Yersinia enterocolítica (4ºC), Listeria monocytogenes (ATM)
Morfología colonial
Tipo de hemólisis en GS carnero al 5%
XIV.-Producción de pigmentos
1.-Los pigmentos insolubles en agua incluyen los carotenoides (amarillo-naranja), la violaceína (violeta o púrpura) y las fenazinas (rojo, castaño, marrón).
2.-Los pigmentos hidrosolubles y difusibles incluyen las fluoresceínas (pioverdina), piocianinas, piorrubina, melanina y otros varios subproductos pigmentados, que cambian el color del medio de cultivo.
Pigmentos insolubles en agua
Carotenoides (amarillo-naranja)
Fenazinas (rojo, castaño, marrón)
Pigmentos hidrosolubles y difusibles
Fluoresceínas (pioverdina- piocianinas) Lampara de Wood (UV)
XV.-Tinciones: Afinidad a la tinción de Gram.
Morfología bacteriana
XVI.-Reacción de catalasa
Esta prueba detecta la presencia de citocromooxidasas en las Micrococcaceae.
La prueba se hace con peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3% sobre un portaobjetos. La producción inmediata y abundante de burbujas indica la conversión del H202 en agua y oxígeno gaseoso.
La prueba de la catalasa debe realizarse a
partir de un medio que no contenga sangre porque los eritrocitos pueden producir una reacción de catalasa débil.
Prueba de la catalasa
Reacción de citocromo oxidasa
Los citocromo son hemoproteinas que contienen hierro y actuan como último eslabón de la cadena de la respiración aerobia ; transfireren electrones de Hidrógeno al Oxígeno, con la formación de agua.
El sistema citocromo se encuentra presente en microorganismos aerobios, microaerofílicos y en algunos anaerobios facultativos, pero nunca en anaerobios estrictos.
Dimetil-p-fenilendiamina al 1%
Prueba de movilidad
En agar semisólido ó por gota pendiente
Pruebas de fermentación de carbohidratos
1.-El medio OF de Hugh y Leifson contiene peptona al 0,2% y 1,0% de hidratos de carbono, de tal forma que la relación entre peptona e hidrato de carbono es 1:5, a diferencia de la relación 2:1 que existe en los medios utilizados para fermentación de hidratos de carbono.
2.-La disminución de la peptona minimiza la formación de productos de oxidación a partir de los aminoácidos, que tienden a elevar el pH del medio y pueden neutralizar los ácidos débiles producidos por los bacilos no fermentadores.
Medio O/F
Los microorganismos oxidativos producen ácido sólo en el tubo abierto expuesto al oxígeno atmosférico.
Los microorganismos fermentadores producen ácido
en ambos tubos.
Medio O/F
Izquierda tubo de OF inoculado con un organismo de metabolismo no fermentador y no oxidativo para la glucosa.
Observe el ligero vire a alcalino (azul) debido a la utilización de proteinas (peptonas) del medio.
XVII.-Pruebas de fermentación de carbohidratos
XVIII.-Presencia de enzimas
Detección de enzimas y vías metabólicas
a) RM-VP (KOH + Alfa-naftol).
b) O.N.P.G.
Prueba de la ONPG (o-Nitrofenil- β-D-
galactopiranósido) Es un compuesto
estructuralmente similar a la lactosa, excepto en que la glucosa ha sido reemplazada por un grupo o-nitrofenilo.
Esta prueba permite detectar con mayor rapidez la fermentación de la lactosa, al evidenciar la enzima β-galactosidasa más rápidamente.
XIX.Reacciones inmunológicas
Utilización de antisueros específicos para determinar el fenotipo antigénico de grupo y tipo (seroagrupar, serotipificar)
MARCHAS BACTERIOLÓGICAS.1.- Sistema gastrointestinal
1.-Coprocultivo rutina:
A).- Salmonella sp
B).- Shigella sp
2.-Coprocultivo específico
A).- E. coli patógenas.
B).- Campylobacter sp.
C).- Vibrios.
D).- Otras entidades .
A).- Coprocultivo Las enfermedades infecciosas del aparato
gastrointestinal representan una de las principales causas de mortalidad y morbilidad infantil por la diarrea aguda de niños menores de cinco años.
La patogénesis de la diarrea involucra a varios microorganismos como agentes causales, pertenecientes en su mayoría a la familia Enterobacteriaceae, entre los que destacan: Salmonella, Shigella, Yersinia y Escherichia coli.
Escherichia coli
Escherichia coli forma parte de la biota normal, sin embargo las cepas patógenas se clasifican de acuerdo con su mecanismo de patogenicidad en seis grupos:
1. Enteropatógena EPEC2. Enterohemorrágica EHEC3. Enterotoxigénica ETEC4. Enteroagregativa EaggEC5. Enteroadherente difusa DAEC6. Enteroinvasiva EIEC
Algunas especies de Campylobacter y Helicobacter se incluyen como causantes de enfermedad en el aparato gastrointestinal, al igual que Vibrio, Aeromonas y Plesiomonas.
Recolección de la muestra
Las muestras se recolectan directamente en un frasco limpio y de boca ancha con tapa hermética, al inicio de la enfermedad y preferentemente antes de iniciar tratamiento antimicrobiano.
Cuando se sospecha de la posible recuperación de Shigella y Campylobacter, es necesario tomar dos hisopos rectales impregnados de materia fecal, los cuales se colocan en medio de transporte Cary-Blair (se pueden usar otros medios de transporte como Stuart o Amies).
HISOPADO RECTAL CARY BLAIR
2.-Tracto genitourinario
I.V.U : Urocultivo
Vaginitis : Cultivo Vaginal
Vaginosis: Cultivo vaginal
Uretritis: Cultivo sec. uretral
A).- Urocultivo La orina de personas sanas es estéril debido a su
vaciado frecuente, lo cual evita la colonización.
La acidez inhibe algunos microorganismos, y en los pacientes masculinos, la secreción prostática contiene espermita y zinc que impiden el desarrollo de algunas bacterias.
Cuando la orina es turbia debido a la presencia de leucocitos (piuria), en ocasiones de eritrocitos (hematuria) y de bacterias, es sugestivo de infección de las vías urinarias (IVU).
La bacteriuria puede ser asintomática o presentarse como una enfermedad crónica o aguda.
En la colonización de las vías urinaria, intervienen varios factores predisponentes que pueden ser de origen local como por ejemplo: la contaminación fecal del meato urinario, el cateterismo, la patología urinaria congénita o adquirida y el reflujo vesical.
Entre los factores generales se mencionan: la diabetes mellitus, el transplante de órganos, el SIDA, el embarazo, la hipertensión arterial y la terapia con fármacos de amplio espectro.
Escherichia coli es el agente etiológico en más del 80% de estas infecciones; ocasionalmente pueden encontrarse dos o más especies bacterianas involucradas.
La muestra de elección, es la primera orina de la mañana; sin embargo en la IVU aguda la carga bacteriana es representativa a cualquier hora del día.
En pacientes femeninas se indica que deben lavarse el área periuretral y la periferia del meato urinario, utilizando una gasa estéril humedecida con agua y jabón, con movimientos de adelante hacia atrás.
posteriormente se limpiará el área con una gasa estéril humedecida con agua o solución salina estéril.
la recolección de la orina debe hacerse separando los labios mayores con una mano, la otra mano sostiene el frasco donde se deposita la muestra.
A los pacientes masculinos se les indica que se limpien el glande y la periferia del meato urinario con una gasa impregnada con solución salina estéril antes de la micción.
En ambos sexos la muestra debe tomarse por el método del “Chorro medio”, que consiste en que el paciente debe desechar la primera porción de orina y recolectar la parte media del chorro en un frasco de boca ancha estéril.
En recién nacidos, niños y ancianos la muestra puede recibirse en una bolsa de plástico estéril; las muestras tomadas en esas condiciones fácilmente se contaminan de biota fecal, en un resultado positivo debe considerarse la posibilidad de una contaminación.
El criterio que se aplica para evaluar la presencia de bacterias en la orina es el de Kass (1957) y Sanford (1956), el cual considera que las bacterias provenientes de las porciones superiores aparato urinario durante su residencia en la vejiga, utilizan la orina como medio de cultivo, alcanzando un población superior a 100,000 UFC/ml de muestra.
Por el contrario las bacterias que son arrastradas durante la micción, nunca llegan a esas cifras por lo que en estos casos se les considera como contaminantes.
Cuentas menores de 100,000 UFC/ml podrían corresponder a infecciones en las vías superiores en pacientes que han recibido antimicrobianos, o en aquellos cuya orina está muy diluida por la terapia hidratante; por último cuentas menores de 10,000 UFC/ml se toman como contaminantes.
Criterios para el diagnóstico de IN
6.5 Infecciones de vías urinarias. (Sintomáticas, cont.....)Independientemente de los hallazgos de urocultivo:6.5.1.11 Chorro medio: muestra obtenida con asepsia previa, mayor
de 50,000 UFC/ml (una muestra).
6.5.1.12 Cateterismo: más de 50,000 UFC/ml (una muestra).
6.5.1.13 Punción suprapúbica: cualquier crecimiento es diagnóstico.
6.5.1.14 El aislamiento de un nuevo microorganismo en urocultivo es diagnóstico de un nuevo episodio de infección urinaria.6.5.2 Asintomáticas.
Pacientes asintomáticos de alto riesgo con un sedimento urinario que contenga 10 o más leucocitos por campo más cualquiera de los siguientes:
6.5.2.1 Chorro medio: muestra obtenida con asepsia previa mayor de 50,000 UFC/ml (una muestra).
6.5.2.2 Cateterismo: mayor de 50,000 UFC/ml (una muestra).6.5.2.3 Punción suprapúbica: cualquier crecimiento es diagnóstico.
B).- Exudado cérvico vaginal En las mujeres con signos y síntomas
de infección genital aguda las muestras más comunes son de cuello uterino y de uretra.
Este estudio es util para determinar el
posible agente causal de la vaginitis e incluso de la vaginosis bacteriana.
Las muestras cervicales se obtienen con un espéculo, después de eliminar el moco cervical con una torunda seca y esteril.
Agentes potencialmente patógenos:
Vaginitis Neisseria
gonorrhoeae Streptococcus
agalactiae Candida albicans Mycoplasmas y
ureaplasmas Chlamidia Trichomonas
vaginalis
Vaginosis Gardnerella
vaginalis Mobiluncus Bacteroides Peptostreptococcus
Toma del producto Con la paciente en posición ginecológica se
introducirá un espéculo lubricado con agua ó sol. salina estéril.
Recoger la muestra, bajo visión directa, con un hisopo de dalcrón, de la zona con mayor exudado, o en su defecto, del fondo del saco vaginal posterior. Repetir la operación con la segunda torunda.
Se obtendrán 3 hisopados, uno destinada al estudio microscópico del Gram, otro para cultivo y el tercero para el fresco.
El envío de la muestra debe ser inmediato siempre que sea posible.
El medio de transporte de Stuart-Amies, mantiene viables a los MO hasta por 3-6 horas.
C).-Exudado uretral masculino El diagnóstico de gonorrea puede establecerse en los
hombres que se presentan con uretritis supurativa aguda, en quienes es posible identificar los diplococos intracelulares gramnegativos.
Cuando la descarga uretral es escasa y los diplococos intracelulares no aparecen en una muestra al azar, la toma de la primera muestra de la mañana, antes de orinar, suele ser útil.
La incidencia de C. trachomatis excede la de N. gonorrhoeae como causa de infecciones supurativas agudas en los genitales.
Los signos y síntomas son indistinguibles; C. trachomatis tiende a generar menos exudado y menor concentración de neutrófilos segmentados que N. gonorrhoeae.
Hasta un 20% de hombres y un 40% de las mujeres con gonorrea pueden estar coinfectados por C. trachomatis.
En muchos casos pueden requerirse procedimientos de cultivo para recuperar ambos microorganismos, en particular cuando el tratamiento falla.
Con frecuencia, tanto en hombres como en mujeres la infección es asintomática, en particular cuando el agente infeccioso es C. trachomatis.
Toma del producto Limpiar cuidadosamente la mucosa
circundante con gasas estériles.
Introducir el hisopo suavemente con un movimiento de rotación hasta penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigación de Chlamydia trachomatis) y depositar en el medio 2SP.
Repetir operación con un segundo hisopo para tinción Gram.
El medio de transporte de Stuart-Amies, mantiene viables a los MO hasta por 3-6 horas.
3.- Vías respiratorias A).- Infecciones de las VRS Exudado faringeo : Diagnóstico de Faringo
amigdalitis, amigdalitis, epiglotitis. Portadores de patógenos oportunistas
Exudado nasal. Exudado Otico: Diagnóstico de otitis
media.
B).- Infecciones de las VRI Cultivo de Expectoración. Cultivo de Lavado Bronco Alveolar. Cepillado Bronquial (CB).
A).- Exudado faringeo Este estudio bacteriológico esta encaminado
como una herramienta para el diagnostico confirmatorio de la faringo amigdalitis de origen piógena,
La confirmación de patologías “complejas”, tales como la difteria, la angina de Vincent, la faringitis clamidiana y micoplásmica, así como las infecciones virales, no pueden ser evidenciadas por este procedimiento.
El clínico debe de formular el cuadro diagnóstico complementario cuando esto sea necesario.
Los microbiólogos deben orientar a los médicos para realizar un diagnóstico adecuado entre "investigación de estreptococos" y cultivos de rutina.
La confusión surge cuando los médicos ordenan cultivos de rutina de garganta para faringitis agudas y el laboratorio reporta la presencia de Staphylococcus aureus, Enterobacterias y BGN no fermentadores, Haemophilus influenzae y otros microorganismos que no causan faringoamigdalitis primaria.
Bajo visión directa, con la ayuda de un depresor lingual, se tocará con un hisopo de dacrón en todas las partes con exudado, membranas o inflamación.
Se deben frotar las criptas tonsilares y la faringe posterior.
No tocar nunca la mucosa oral, lengua o úvula.
Se investigará rutinariamente la presencia de Streptococcus beta-hemolítico del grupo A (S. Pyogenes), la posible presencia de los Streptococcus beta-hem. De los grupos C y G.
Se le solicita al paciente que abra bien la boca y que emita un "ah".
La lengua se abate suavemente con una espátula y se guía un hisopo hacia la faringe posterior.
La mucosa detrás de la úvula y entre los pilares amigdalinos es recolectada con un movimiento suave de barrido de atrás hacia delante.
Seroagrupar preferentemente
Realizar susceptibilidad (CLSI)
B).- Cultivo nasal Es la muestra indicada para la
investigación de Bordetella pertussis y de otros patógenos oportunistas (S. pneumoniae, H. influenzae, Neisseria meningitidis).
En pacientes inmuno comprometidos se evaluara la colonización de:
K. pneumoniae subesp. Rhinoscleromatis
K. pneumoniae subesp. ozaenae
Toma del producto Las muestras nasofaríngeas se obtienen usando
iluminación por encima del hombro. Con el pulgar de la mano, se eleva delicadamente
la punta de la nariz, se humedece la punta de un hisopo nasofaríngeo delgado de alambre flexible con agua o solución salina estéril y se lo inserta con suavidad en uno de los orificios nasales.
El hisopo se guía hacia atrás y hacia arriba a lo largo del septo hasta encontrar resistencia, que indica que se ha llegado a la faringe posterior, se retira con delicadeza y se deposita en el medio de transporte Stuart.
C).- Otitis media Se define otitis
media como la presencia de exudado en la cavidad media del oído.
Los lactantes y niños pequeños son los más propensos a padecer otitis media,
Los dos principales patógenos son:
Cocos gram positivos como: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus.
Bacilos Gram negativos como: E. coli o Pseudomonas aeruginosa,Haemophilus influenzae y anaerobios
Cultivo de secreción de oído El Cultivo bacteriológico de aspirado de
oído medio adecuadamente recolectados, permite determinar cuáles son los microorganismos responsables de la otitis media aguda.
La timpanocentesis para obtener líquido para cultivos, solo es útil si existe exudación.
Puede ser necesario el cultivo simultáneo e LCR y sangre, si existen signos y síntomas sistémicos.
D).-Cultivo de expectoración Las infecciones del tracto respiratorio
inferior son de las más frecuentes dentro del conjunto de las infecciones,tanto entre las adquiridas en el ambiente comunitario como en el medio nosocomial.
La bronquitis crónica se define, como un proceso caracterizado por un descenso de los flujos espiratorios que no cambian de manera significativa tras varios meses de seguimiento.
El diagnóstico viene sugerido por el cuadro clínico, por lo que el cultivo no es la herramienta de Dx de mayor utilidad para esta patología.
Un gran número de los pacientes son fumadores,o están expuestos de forma prolongada a substancias nocivas para la mucosa bronquial, y que refiere tos y expectoración habitual; según la definición clásica, durante un mínimo de 3 meses y hasta por dos años consecutivos.
Esputo inducido No es el tipo de muestra más
representativa de las inefcciones VRI, por su mezcla con secreciones procedentes de todo el arbol traqueo-bronquial y con la flora saprófita de la orofaringe.
El resultado dependerá en gran medida de su correcta obtención, control de calidad antes de iniciar su proceso, tipo de agente que se pretenda detectar.
Obtención del producto.
Enjuagar la boca con agua estéril o solución salina.
Obtener el esputo tras una expectoración profunda, preferentemente matinal.
De no producirse expectoración espontánea, puede inducirse el esputo con nebulizaciones de suero fisiológico estéril (15 ml durante 10 minutos.
Recolectar en un frasco de boca ancha esteril por lo menos 2 ml de la secreción.
Procesar lo antes posible. Muestra de calidad =>25 PMN CE <=10 en
promedio de 30 campos a 10x.
Criterios para el diagnóstico de INInfecciones del tracto respiratorio.
6.1.2 Infecciones de vías respiratorias bajas. CIE-10 (J12-J18, J20, J86.9, J98.5).
6.1.2.1 Neumonía. CIE-10 (J12-J18).
Cuatro criterios hacen el diagnóstico.
Criterios 6.1.2.1.4 y 6.1.2.1.5 son suficientes para el diagnóstico de neumonía.
6.1.2.1.1 Fiebre, hipotermia o distermia.
6.1.2.1.2 Tos.
6.1.2.1.3 Esputo purulento o drenaje purulento a través de cánula endotraqueal que al examen microscópico en seco débil muestra <10 células epiteliales y > 20 leucocitos por campo.
6.1.2.1.4 Signos clínicos de infección de vías aéreas inferiores.
6.1.2.1.5 Radiografía de tórax compatible con neumonía.
6.1.2.1.6 Identificación de microorganismo patógeno en esputo, secreción endotraqueal o hemocultivo.
E).- Neumonía adquirida en la comunidad (NAC).
Constituye una causa muy importante de morbilidad y mortalidad.
La mortalidad varia desde el 5% a más del 30%, según el agente causal y diversos factores de riesgo individuales.
En los países industrializados, la NAC es la primera causa infecciosa de muerte y la sexta de mortalidad general.
El número de personas que fallecen cada año en el mundo como consecuencia de esta infección se cifra en aproximadamente 5 millones.
Neumonía nosocomial: La mayoría de los estudios consideran la neumonía nosocomial como la segunda causa de las infecciones adquiridas en el hospital.
La neumonía nosocomial se adquiere a través de tres mecanismos: la aspiración, la inhalación de aerosoles y la diseminación hematógena a partir de otro foco de sepsis.
La flora orofaríngea normal está formada principalmente por cocos grampositivos.
F).- Cultivo de LBA ó CB
La colonización de la orofaringe por BGN se observa en menos del 10% de los individuos sanos, aumenta con hospitalizaciones prolongadas y alcanza el 60-75% en enfermos críticos ingresados en unidades críticas.
La implicación de los bacilos gramnegativos (enterobacterias como Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Serratia marcescens, Enterobacter spp., y Pseudomonas aeruginosa) en la neumonía nosocomial es muy frecuente (20-60%).
En el enfermo ventilado, Staphylococcus aureus se situaría en segundo lugar (10-30%), mientras que otros microorganismos más prevalentes en la comunidad, como Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae o Chlamydia pneumoniae serían menos frecuentes.
Muestras sistémicas
LCR Sangre Médula ósea Líquidos diversos:a) L. Pleuralb) L. Sinovial c) L.Peritonial
4.- Líquido cefalorraquídeo (LCR)
El líquido cefalorraquídeo (LCR) es la muestra clínica representativa cuando hay sospecha de meningitis séptica.
Los agentes infecciosos más comunmente identificados incluyen N. meningitidis, S. pneumoniae , H. influenzae, S. agalactiae
Otros agentes menos frecuentes son: Enterobacterias, C. neoformans, C. albicans, algunos BGNF, S. aureus entre otros.
Obtención de líquido cefalorraquídeo (LCR)
La colección del LCR solamente debe ser tomada por personal especializado y bajo condiciones de estricta asepsia.
Por lo general, se sacan tres tubos de LR para química, microbiología y citología.
Si solamente hubiera disponible un tubo, este debe enviarse al laboratorio de microbiología para su inmediato análisis.
Transporte de las muestras de LCR
Enviar inmediatamente al laboratorio de microbiología para su análisis (en un plazo no mayor de 1 hora a partir del momento de la obtención de la muestra
No refrigerar ni exponer a calor extremo o a la luz solar.
5.- Sangre (Hemocultivo)
El estudio bacteriológico de la sangre debe realizarse principalmente en pacientes con neumonía, meningitis o fiebre de origen desconocido, entre otros síndromes.
DEFINICION
Bacteriemia: es la presencia de bacterias viables en el torrente sanguíneo, evidenciada por la obtención de cultivos en sangre, sea por punción venosa o por aspiración a través de un catéter intravascular.
DEFINICION (NOM-045-SSA2–2005 )
Este diagnóstico se establece en un paciente con fiebre, hipotermia o distermia con hemocultivo positivo.
El diagnóstico de bacteriemia nosocomial (BN) puede darse aun en pacientes con menos de 48 horas de estancia hospitalaria si se les realizan procedimientos de diagnóstico invasivos o reciben terapia intravascular.
Interpretación del Hemocultivo Positivo.
Un hemocultivo positivo para Gramnegativos,
Grampositivos u hongos es suficiente para hacer el
diagnóstico.
En caso de aislamiento de un bacilo Grampositivo o
estafilococo coagulasa-negativo, puede considerarse
bacteriemia si se cuenta con dos o más de los
siguientes criterios:• Alteraciones hemodinámicas.• Trastornos respiratorios.• Leucocitosis o leucopenia no inducida por fármacos.• Alteraciones de la coagulación (incluyendo trombocitopenia).• Aislamiento del mismo microorganismo en otro sitio anatómico.
RHOVE-DGE
Los gérmenes identificados como causales de
Bacteriemia Nosocomial según la bibliografía
internacional son principalmente:
1.- Cocos gram positivos:• Estafilococo Coagulasa-Negativo• Staphylococcus aureus• Enterococcus spp.
2.- Hongos levaduriformes:• Candida spp
3.- Bacilos Gramnegativos:Pseudomonas sppE. coliKlebsiella pneumoniaeEnterobacter cloacaeAcinetobacter sppSerratia spp
Material necesario
Guantes, jeringuilla, aguja, ligadura, torundas, contenedor de punzocortantes, botella de cultivo, tintura de yodo, alcohol isopropílico al 70%.
El tamaño de la aguja dependerá del lugar de la del tamaño de la vena y la edad del paciente.
Venopución1) Seleccione el brazo y aplique el torniquete para restringir el
paso de la sangre venosa. 2) Normalmente se selecciona la vena más prominente para la
punción.3) Limpie completamente la piel con alcohol al 70%; y a
continuación limpie con solución yodo povidona, frotando el área seleccionada y deje secar.
4) Introduzca en la vena la aguja con el bisel hacia arriba. Una vez que la vena se haya canalizado, extraiga la sangre jalando el émbolo de la jeringuilla de manera lenta y con continuidad.
5) Una vez que se ha obtenido la cantidad de sangre necesaria, retire el torniquete y coloque un algodón con alcohol sobre el sitio de Inserción.
6) Retire la aguja y haga que el paciente sostenga firmemente el algodón hasta que cese el sangrado.
7) Inocule el medio de cultivo con los volúmenes de sangre que recomienda el fabricante.
6.- Piel y tejidos blandos
Cultivo de secreción de herida
Cultivo de absceso
Cultivo para anaerobios
A).- Cultivos de secreción de Heridas, úlceras y abscesos
Lavar cuidadosamente la superficie de la herida. La aspiración percutánea requiere una desinfección
severa, previa similar a la realizada en la toma de hemocultivos.
Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas.
Esta técnica también es adecuada para obtener muestras de celulitis, úlceras, escaras o abscesos abiertos y heridas superficiales.
Cuando la muestra sea insuficiente, instilar solución salina estéril y aspirarlo nuevamente en la jeringa.
Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podrá efectuarse un frotis de las partes profundas de la herida con un hisopo para tinción de Gram.
Criterios para el diagnóstico de IN
6.8 Infección de piel y tejidos blandos.6.8.2 Infecciones de tejidos blandos. CIE-10 (L04, L08).
Fascitis necrosante, gangrena infecciosa, celulitis, miositis y linfadenitis.Con tres o más de los siguientes criterios:
6.8.2.1 Dolor localizado espontáneo o a la palpación.6.8.2.2 Inflamación.6.8.2.3 Calor.6.8.2.4 Rubor, palidez o zonas violáceas.6.8.2.5 Crepitación.6.8.2.6 Necrosis de tejidos.6.8.2.7 Trayectos linfangíticos.6.8.2.8 Organismo aislado del sitio afectado.6.8.2.9 Drenaje purulento.
6.8.2.10 Absceso o evidencia de infección durante la cirugía o por examen histopatológico.
B).- Cultivo de catéter Desinfectar con alcohol una zona de piel de unos 10
cm correspondiente a la zona de entrada del catéter.
Hacerlo en forma de círculos comenzando par el centro.
Repetir la misma operación, pero con el alcohol iodado o iodopovidona.
Retirar el catéter con la máxma asepsia.
Con pinzas y las tijeras estériles, cortar los 3 cm distales del catéter que corresponden a la porción intravascular.
Introducir el segmento de catéter en un recipiente estéril correctamente identificado.
Criterios para el diagnóstico de IN Bacteriemias.
6.9.6 Bacteriemia relacionada a líneas y terapia intravascular.Hemocultivo positivo periférico y a través del catéter con dos o más de los siguientes criterios:
6.9.6.1 Relación temporal entre la administración de terapia intravascular y la aparición de manifestaciones clínicas.
6.9.6.2 Ausencia de foco evidente.6.9.6.3 Identificación de contaminación de catéter o solución endovenosa.6.9.6.4 Desaparición de signos y síntomas al retirar el catéter o la
solución sospechosa.6.9.6.5 Cultivo de punta de catéter >15 UFC/ml.
