J. Bacteriol.-1959-Schubert-648-54

8/3/2019 J. Bacteriol.-1959-Schubert-648-54

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1959, 77(5):648.J. Bacteriol.

RamseyJ. H. Schubert, P. R. Edwards and Carolyn H.

TESTSCARRIERS BY AGGLUTINATIONDETECTION OF TYPHOID

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DETECTION OF TYPHOID CARRIERS BY AGGLUTINATION TESTSJ . H . SCHUBERT, P . R . EDWARDS, AND CAROLYN H . RAMSEY

C o m m u n i c a b l e D i s e a s e C e n t e r , P u b l i c H e a l t h S e r v i c e , U n i t e d S t a t e s D e p a r t m e n t o f H e a l t h , E d u c a t i o n , a n dW e l f a r e , A t l a n t a , G e o r g i aR e c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n O c t o b e r 2 3 , 1 9 5 8

U s e o f t h e V i a g g l u t i n a t i o n t e s t i n t h e d e t e c -t i o n o f c h r o n i c c a r r i e r s o f S a l m o n e l l a t y p h i ( S .t y p h o s a ) f i r s t w a s s u g g e s t e d b y F e l i x e t a l . ( 1 9 3 5 ) .S i n c e t h at t i me s t u d y o f t h e t e s t b y many w o r k e r sh a s r e s u l t e d i n t h e a c c u m u l a t i o n o f a v o l u m i n o u sl i t e r a t u r e w h i c h h a s b e e n r e v i e w e d b y K l e i n( 1 9 4 3 ) , F e l i x ( 1 9 5 1 ) , L a n d y a n d Lamb ( 1 9 5 3 ) ,a n d S p a u n ( 1 9 5 7 ) . B h a t n a g a r e t a l . ( 1 9 3 8 ) r e c o m -m e n d e d t h e u s e i n V i a g g l u t i n a t i o n t e s t s o fS . t y p h i V i 1 o f K a u f f m a n n w h i c h t h e l a t t e rw o r k e r h a d i s o l a t e d a n d f o u n d i n a g g l u t i n a b l e i nO a n d H s e r a f o r S . t y p h i . S i n c e t h a t t i m e t h eV i 1 s t r a i n h a s b e e n u s e d a l m o s t e x c l u s i v e l yi n a g g l u t i n a t i o n t e s t s f o r t h e d e t e c t i o n o f t y p h o i dc a r r i e r s . D e s r a n l e a u ( 1 9 4 3 ) a n d S a i n t - M a r t i na n d D e s r a n l e a u ( 1 9 5 1 ) r e c o m m e n d e d t h e u s e o fa s l i d e t e s t u s i n g a g l y c e r o l a t e d a n t i g e n p r e p a r e df r o m S . t y p h i V i 1 .

T h e r e s u l t s o b t a i n e d b y d i f f e r e n t w o r k e r s i na g g l u t i n a t i o n t e s t s d i f f e r e d w i d e l y i n t h e p e r -c e n t a g e o f c a r r i e r s d e t e c t e d a n d i n t h e n u m b e r o fr e a c t i o n s o b t a i n e d w i t h s e r a o f a p p a r e n t l y n o r m a lp e o p l e . S i n c e t h e V i 1 s t r a i n i s q u i t e r o u g h , a g -g l u t i n a t i o n t e s t s d o n e w i t h t h e c u l t u r e a r e s u b j e c tt o t h e d i f f i c u l t i e s i n h e r e n t i n t h e u s e o f a r o u g hc u l t u r e f o r a n t i g e n i n a g g l u t i n a t i o n t e s t s . U s eo f o t h e r c u l t u r e s o f S . t y p h i o r o f c u l t u r e s o f t h eC i t r o b a c t e r ( E s c h e r i c h i a f r e u n d i i ) g r o u p w h i c hc o n t a i n e d V i a n t i g e n w a s r e j e c t e d e i t h e r b e c a u s et h e y r e a c t e d w i t h 0 a n d H a g g l u t i n i n s f o r S .t y p h i o r b e c a u s e t h e y w e r e i n s u f f i c i e n t l y s e n s i t i v et o V i a g g l u t i n i n s . T h i s u n s a t i s f a c t o r y c o n d i t i o nl e d S p a u n ( 1 9 5 1 ) , B i e r ( 1 9 5 1 ) , C o r v a z i e r ( 1 9 5 2 ) .L e M i n o r e t a l . ( 1 9 5 2 ) , a n d T o m a s i c e t a l . ( 1 9 5 3 )t o i n v e s t i g a t e t h e s e n s i t i z a t i o n o f r e d c e l l s w i t hv a r i o u s p r e p a r a t i o n s o f V i a n t i g e n . T h e d e t e c t i o no f t y p h o i d c a r r i e r s b y V i h e m a g g l u t i n a t i o n t e s t sw a s i n v e s t i g a t e d b y S t a a c k a n d S p a u n ( 1 9 5 3 )u s i n g h e a t e d e x t r a c t s o f V i c u l t u r e s o f S . t y p h if o r s e n s i t i z a t i o n a n d b y L a n d y a n d Lamb ( 1 9 5 3 )u s i n g p u r i f i e d V i a n t i g e n f o r s e n s i t i z a t i o n . Humant y p e 0 r e d c e l l s w e r e e m p l o y e d i n b o t h i n s t a n c e s .T h e n u m b e r o f c a r r i e r s t e s t e d b y t h e s e i n v e s t i g a -t o r s w a s n o t l a r g e , a n d s o m e c o n t r o l s e r a , p a r -

t i c u l a r l y t h o s e o f v a c c i n a t e d i n d i v i d u a l s , g a v ep o s i t i v e r e s u l t s w h e r e a s a s m a l l n u m b e r o f knownc a r r i e r s y i e l d e d n e g a t i v e t e s t s . T h e c o n f l i c t i n gr e s u l t s o b t a i n e d i n b a c t e r i a l a g g l u t i n a t i o n t e s t sa n d h e m a g g l u t i n a t i o n t e s t s i n t h e s e r o l o g i c a li n v e s t i g a t i o n o f t y p h o i d c a r r i e r s s t i m u l a t e d t h ew o r k h e r e r e p o r t e d .

MATERIALS AMD METHODST h r o u g h t h e c o o p e r a t i o n o f a n u m b e r o f s t a t eh e a l t h d e p a r t m e n t s a n d a n a r m y l a b o r a t o r y a

n u m b e r o f s e r a o f k n o w n t y p h o i d c a r r i e r s a n d o fp e r s o n s who w e r e n o t k n o w n t o b e t y p h o i dc a r r i e r s w e r e c o l l e c t e d . T h e c o n t r o l s e r a w e r e o ft w o l o t s . T h e f i r s t c o n s i s t e d o f 1 0 0 s e r a f r o mp e r s o n s s u b j e c t e d t o p r e m a r i t a l t e s t s f o r s y p h i l i s .T h e s e c o n d l o t w a s c o l l e c t e d f r o m 1 0 0 p e r s o n sb e i n g t e s t e d f o r s y p h i l i s b e f o r e d i s c h a r g e f r o mt h e a r m y . T h i s l o t w a s i n c l u d e d b e c a u s e i t w a sk n o w n t h a t t h e p e r s o n s f r o m w h o m t h e s e r aw e r e d e r i v e d h a d b e e n v a c c i n a t e d r e p e a t e d l y .T h e c a r r i e r s e r a w e r e c o m p o s e d o f s e r a f r o m 1 8 3p e r s o n s w h o w e r e k n o w n t o h a v e e x c r e t e d S .t y p h i f o r l o n g p e r i o d s . S t o o l o r s t o o l a n d u r i n es p e c i m e n s w e r e o b t a i n e d f r o m 7 0 o f t h e s e p e r s o n sa t t h e t i m e t h e b l o o d w a s d r a w n a n d S . t y p h iw a s i s o l a t e d f r o m 5 5 ( 7 8 p e r c e n t ) o n t h e s i n g l ee x a m i n a t i o n . S e r a f r o m 3 3 p e o p l e , w h o w e r ei n v o l v e d 6 m o n t h s p r e v i o u s l y i n a s h a r p l y c i r -c u m s c r i b e d o u t b r e a k o f t y p h o i d f e v e r , a l s o w e r et e s t e d . S . t y p h i h a d b e e n i s o l a t e d f r o m a l l t h e s ec o n v a l e s c e n t s d u r i n g t h e c o u r s e o f t h e o u t b r e a ka n d n o n e w a s f o u n d t o b e a c a r r i e r o n s u b s e q u e n tr e p e a t e d e x a m i n a t i o n s .

T h e s e r a w e r e s u b j e c t e d f i r s t , t o t h e V i a g -g l u t i n a t i o n t e s t o f F e l i x ( 1 9 5 1 ) u s i n g a n t i g e np r e p a r e d b y t h e S t a n d a r d s L a b o r a t o r y , C e n t r a lP u b l i c H e a l t h L a b o r a t o r y , L o n d o n ; s e c o n d , t ot h e V i s l i d e a g g l u t i n a t i o n t e s t p e r f o r m e d b y t h em e t h o d o f S a i n t - M a r t i n a n d D e s r a n l e a u ( 1 9 5 1 ) i nw h i c h a n t i g e n f u r n i s h e d b y M A r . J . M. D e s r l a n e a uw a s e m p l o y e d ; a n d t h i r d , t o t h e V i h e m a g g l u t i n a -t i o n t e s t . We w i s h e d t o u s e a m e t h o d i n h e m a g g l u -

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AGGLUTINATION TESTS FOR TYPHOID CARRIERSt i n a t i o n t e s t s w h i c h c o u l d b e a p p l i e d r e a d i l y i np u b l i c h e a l t h l a b o r a t o r i e s s o t h e m e t h o d o f L a n d ya n d Lamb ( 1 9 5 3 ) w a s m o d i f i e d i n t h r e e w a y s : ( a )S h e e p c e l l s w e r e u s e d , i n s t e a d o f h u m a n t y p e 0c e l l s , b ec au s e t h e y a r e m o r e r e a d i l y a v a i l a b l e i nt h e a v e r a g e p u b l i c h e a l t h l a b o r a t o r y . A c o n t r o lw i t h u n s e n s i t i z e d c e l l s w a s i n c l u d e d i n e a c h t e s ta n d t h o s e s e r a w h i c h c on ta in ed s h ee p c e l l a g -g l u t i n i n s w e r e a d s o r b e d w i t h u n s e n s i t i z e d c e l l sa n d r e t e s t e d . I t w a s n e c e s s a r y t o a d s o r b t h es e r a f r o m 1 4 o f t h e p r e m a r i t a l s p e c i m e n s , 2 2 o ft h e a r m y d i s c h a r g e e s , 1 5 o f t h e c a r r i e r s , a n d 6 o ft h e c o n v a l e s c e n t s . ( b ) T e s t s w e r e i n c u b a t e d f o r1 h r a t 3 7 C i n t h e w at e r b a t h i n s t e a d o f f o r 2 h ra s r e c o m m e n d e d b y L a n d y a n d L a m b . ( e ) Ac r u d e V i e x t r a c t w a s u s e d i n s t e a d o f p u r i f i e d V ia n t i g e n a s e m p l o y e d b y L a n d y a n d L a m b .I n p r e l i m i n a r y e x p e r i m e n t s , e x t r a c t s o f t h e V if o r m s o f S . t y p h i 2 o f F e l i x a n d o f t h e C i t r o b a c t e rc u l t u r e s g e n e r a l l y r e f e r r e d t o a s B a l l e r u p a n dC o l i 5 3 9 6 - 3 8 o f K a u f f m a n n , a s w e l l a s p u r i f i e da n t i g e n s u p p l i e d b y D r . L a n d y w e r e u s e d . I ng e n e r a l , i t may b e s a i d t h a t c o m p a r a b l e r e s u l t sw e r e o bt ai ne d w i t h t h e f o u r p r e p a r a t i o n s . T h eo b s e r v a t i o n o f L a n d y a n d Lamb t h a t 1 0 , u gp e r m l o f p u r i f i e d V i a n t i g e n w a s o p t i m u m f o rs e n s i t i z a t i o n o f human t y p e 0 c e l l s a p p l i e d a l s ot o s h e e p c e l l s . A s a r u l e , t i t e r s o b t a i n e d w i t hp u r i f i e d V i a n t i g e n w e r e o n e d i l u t i o n l o w e r t h a nt h o s e o b t a i n e d w i t h c r u d e e x t r a c t s o f t h e a b o v e -m e n t i o n e d o r g a n i s m s . A f t e r a n u m b e r o f c a r r i e rs e r a w a s e x a m i n e d i t w a s d e c i d e d t h a t s l i g h t l ym o r e c o n s i s t e n t r e s u l t s w e r e o bt ai ne d w it h t h eB a l l e r u p e x t r a c t t h a n w i t h t h o s e o b t a i n e d f r o mS . t y p h i 2 o r C o l i 5 3 9 6 - 3 8 . T h e r e a f t e r , t h eB a l l e r u p e x t r a c t w a s u s e d e x c l u s i v e l y t h r o u g h o u tt h e c o u r s e o f t h e w o r k .

T h e p r e p a r a t i o n a n d s t a n d a r d i z a t i o n o f t h ee x t r a c t w e r e a s f o l l o w s . T h e B a l l e r u p s t r a i n w a sp l a t e d o n i n f u s i o n a g a r ' a n d a V i c o l o n y s e l e c t e d .T h i s p r o c e s s w a s r e p e a t e d u n t i l o n l y V i c o l o n i e sa p p e a r e d u p o n t h e p l a t e s . O n e s u c h c o l o n y w a si n o c u l a t e d i n t o i n f u s i o n b r o t h , i n c u b a t e d f o r5 h r , a n d u s e d t o s e e d t h i c k l y p o u r e d p l a t e s .A f t e r o v e r n i g h t i n c u b a t i o n , 3 m l o f 0 . 8 5 p e r c e n ts a l i n e w e r e u s e d t o s u s p e n d t h e g r o w t h f r o me a c h p l a t e . T h e r e s u l t i n g h e a v y s u s p e n s i o n w a ss t e a m e d i n a n A r n o l d s t e r i l i z e r a t 1 0 0 C f o r 1 h r .A f t e r c o o l i n g , t h e s u s p e n s i o n w a s c e n t r i f u g e dt o c l a r i t y a n d t h e s u p e r n a t a n t p r e s e r v e d w i t h

1 T h e b l o o d a g a r b a s e medium w i t h o u t a d d i t i o no f b l o o d s u p p l i e d b y B a l t i m o r e B i o l o g i c a l L a b o r a -t o r i e s was u s e d t h o r o u g h o u t t h e w o r k .

m e r t h i o l a t e ( 0 . 1 i n g p e r m l ) a n d s t o r e d a t 4 C .U s i n g t h e m e t h o d o f L a n d y a n d L a m b , s h e e pc e l l s w e r e s e n s i t i z e d w i t h d i l u t i o n s o f t h e e x t r a c te x t e n d i n g f r o m 1 : 1 0 t o 1 : 1 0 0 0 a n d t h e s e w e r et i t r a t e d w i t h B a l l e r u p V i s e r u m . I n r e p e a t e dt e s t s i t w a s f o u n d t h a t a 1 : 4 0 0 d i l u t i o n o f t h ee x t r a c t g a v e m a x i m a l t i t e r s . C e l l s s o t r e a t e dw e r e a g g l u t i n a t e d t o a t i t e r o f 1 : 1 0 , 2 4 0 i n as e r u m w h i c h h a d a V i a g g l u t i n i n t i t e r o f 1 : 1 0 0 0f o r S . t y p h i V i 1 . T e s t e d i n a B a l l e r u p 0 a n t i -s e r u m ( t i t e r 1 : 6 4 0 ) , t h e c e l l s w e r e a g g l u t i n a t e do n l y i n a d i l u t i o n o f 1 : 2 , c o n f i r m i n g t h e o b s e r v a -t i o n s o f S p a u n ( 1 9 5 1 ) a n d L a n d y a n d C e p p e l i n i( 1 9 5 5 ) o n t h e 0 - i n a g g l u t i n a b i l i t y o f e r y t h r o c y t e st r e a t e d w i t h V i a n t i g e n . N u m e r o u s l o t s o f c e l l st r e a t e d i n t h i s m a n n e r t h r o u g h o u t t h e c o u r s e o ft h e w o r k y i e l d e d i d e n t i c a l r e s u l t s . I n i n t e r p r e t i n gt h e r e s u l t s o f b a c t e r i a l V i a g g l u t i n a t i o n t e s t s , t h er e c o m m e n d a t i o n s o f t h e i r o r i g i n a t o r s w e r ef o l l o w e d . A t i t e r o f 1 : 1 w a s c o n s i d e r e d p o s i t i v ei n s l i d e t e s t s . A t i t e r o f 1 : 5 i n t u b e t e s t s w a sr e c o r d e d a s p o s i t i v e . H e m a g g l u t i n a t i o n t e s t sw h i c h h a d a t i t e r o f 1 : 1 0 o r m o r e w e r e c o n s i d e r e dp o s i t i v e . T h i s i n t e r p r e t a t i o n i s d i s c u s s e d s u b -s e q u e n t l y .S i n c e 0 a n d H a g g l u t i n a t i o n t e s t s o c c a s i o n a l l yh a v e b e e n r e c o m m e n d e d i n t h e e x a m i n a t i o n o fc a r r i e r s o f S . t y p h i , s u c h t e s t s w e r e i n c l u d e d i nt h e w o r k . T h e 0 a n t i g e n e m p l o y e d w a s a h e a t e d ,p h e n o l i z e d s u s p e n s i o n o f S . t y p h i 0 9 0 1 . T h e Ha n t i g e n w a s p r e p a r e d b y p a s s i n g S . t y p h i H 9 0 1t h r o u g h s e m i s o l i d a g a r u n t i l m a x i m a l m o t i l i t yw a s a t t a i n e d , i n o c u l a t i n g t h e o r g a n i s m s i n t oi n f u s i o n b r o t h , i n c u b a t i n g o v e r n i g h t a t 3 3 C , a n da d d i n g t o t h e c u l t u r e a n e q u a l a m o u n t o f s a l i n ew h i c h c o n t a i n e d 0 . 6 p e r c e n t f o r m a l i n .

RESULTSU n f o r t u n a t e l y , t h e a m o u n t s o f s e r a r e c e i v e dd i d n o t p e r m i t t h e p e r f o r m a n c e o f a l l t e s t s w i t h

e a c h s p e c i m e n . F o r t h i s r e a s o n t h e t o t a l n u m b e ro f s e r a o f e a c h g r o u p t e s t e d b y v a r i o u s m e t h o d sd i f f e r s s l i g h t l y f r o m o n e t e s t t o a n o t h e r b u t t h e s ed i f f e r e n c e s a r e n o t s o g r e a t a s t o i n t e r f e r e w i t hi n t e r p r e t a t i o n o f r e s u l t s . The r e s u l t s o b t a i n e di n t h e t e s t s f o r 0 a n d H a g g l u t i n i n s a r e i n c l u d e di n t a b l e s 1 a n d 2 . No m a r k e d d i f f e r e n c e s w e r eo b s e r v e d i n t h e 0 t i t e r s o f t h e s e r a o f t h e v a r i o u sg r o u p s a n d i t s h o u l d b e n o t e d t h a t t h e h i g h e s tp r o p o r t i o n o f s e r a w h i c h h a d a n 0 t i t e r o f l e s st h a n 1 : 4 0 w a s f o u n d a m o n g t h e s e r a o f c a r r i e r s .On t h e c o n t r a r y , t h i s g r o u p c o n t a i n e d t he l o w e s tp e r c e n t a g e o f s e r a w h i c h h a d H t i t e r s o f l e s s

1 9 5 9 ] 6 4 9


http://jb.asm.org

/

Downlo

adedfrom


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SCHUBERT, EDWARDS, AND RAMSEYTABLE 1

T i t e r s o f sera a g a i n s t S a l m o n e l l a t y p h i 0 9 0 1

[ V O L . 77

D i l u t i o n s o f S e r aG r o u p


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AGGLUTINATION TESTS FOR TYPHOID CARRIERS

T i t e r s o f s e r aTABLE 4

( s l i d e a g g l u t i n a t i o n ) a g a i n s t S a l m o n e l l a t y p h i V i 1D i l u t i o n s o f S e r a

G r o u p


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SCHUBERT, EDWARDS, AND RAMSEYTABLE 6

R e s u l t s o f V i a g g l u t i n a t i o n t e s t sTube S l i d e H e m a g g l u t i n a t i o n

Group _ + - ++ +-+P r e m a r i t a l 1 3 8 7 6 9 4 0 1 0 0( 1 3 . 0 ) ( 8 7 . 0 ) ( 6 . 0 ) ( 9 4 . 0 ) ( 0 . 0 ) ( 1 0 0 . 0 )

Army d i s c h a r g e e s 2 0 8 0 8 8 9 0 9 3( 2 0 . 0 ) ( 8 0 . 0 ) ( 8 . 2 ) ( 9 1 . 8 ) ( 0 . 0 ) ( 1 0 0 . 0 )C a r r i e r s 1 1 5 5 7 1 5 1 2 8 1 6 4 1 5( 6 6 . 9 ) ( 3 3 . 1 ) ( 8 4 . 4 ) ( 1 5 . 6 ) ( 9 1 . 6 ) ( 8 . 4 )C o n v a l e s c e n t s 8 2 5 2 2 1 0 2 3 1

( 1 9 . 4 ) ( 8 0 . 6 ) ( 6 8 . 8 ) ( 3 1 . 2 ) ( 6 . 1 ) ( 9 3 . 9 )TABLE 7

t e s t s w i t h s e r a o f t y p h o i d c a r r i e r sT u b e S l i d e H e m a g t i u N o .t i n a t i o n+ + + 9 3_ + + 4 0_ _ + 1 0+ _ + 1 1+ + -7_ + _ 6_ _ - 1

T o t a l 1 6 8I n c lu d e s o n l y t h o s e c a r r i e r s e r a o n w h i c h a l l

t h r e e V i a g g l u t i n a t i o n t e s t s w e r e p e r f o r m e d .d e c i d e d l y s u p e r i o r t o t h o s e o b t a i n e d w i t h t h eo t h e r t e s t s , b o t h i n t h e f a c t t h a t i t d e t e c t e d t h eh i g h e s t p e r c e n t a g e o f c a r r i e r s a n d i n t h a t n op o s i t i v e t e s t s w e r e o b t a i n e d w i t h c o n t r o l s e r a .T h e r e s u l t s o b t a i n e d w i t h c o n v a l e s c e n t s e r a w i t ht h e t h r e e t e s t s d i f f e r e d m a r k e d l y . W h e r e a s o n l y6 . 1 p e r c e n t o f t h e s e p e r s o n s , w h o u p o n r e p e a t e ds t o o l e x a m i n a t i on s w e r e f o u n d n o t t o b e c a r r i e r s ,w e r e p o s i t i v e i n h e m a g g l u t i n a t i o n t e s t s , 1 9 . 3 6p e r c e n t w e r e p o s i t i v e i n t u b e a g g l u t i n a t i o n t e s t s ,a n d n o l e s s t h a n 6 8 . 7 5 p e r c e n t w e r e p o s i t i v e i ns l i d e a g g l u t i n a t i o n t e s t s i n w h i c h S . t y p h i V i 1w a s u s e d a s a n t i g e n . R e s u l t s o b t a i n e d i n t h et e s t i n g o f c a r r i e r s e r a c o n f i r m e d t h e o b s e r v a t i o no f L a n d y a n d Lamb t h a t t h e r e w a s n o c o r r e l a t i o ni n t h e V i t i t e r s o f s e r a d e t e r m i n e d b y b a c t e r i a la g g l u t i n a t i o n a n d b y h e m a g g l u t i n a t i o n .

T h e c o m p a r a t i v e r e s u l t s o b t ai ne d w it h t h e

t h r e e t e s t s f o r V i a g g l u t i n i n s i n t h e s e r a o f c a r r i e r sa r e r e c o r d e d i n t a b l e 7 . I n s p i t e o f t h e g r e a t e re f f i c i e n c y o f t h e h e m a g g l u t i n a t i o n t e s t i n t h ed e t e c t i o n o f c a r r i e r s , s e r a o f 1 3 o f t h e s e p e o p l er e a c t e d p o s i t i v e l y i n o n e o r b o t h o f t h e b a c t e r i a la g g l u t i n a t i o n t e s t s b u t f a i l e d t o r e a c t i n t h eh e m a g g l u t i n a t i o n t e s t . I t s h o u l d b e r e m e m b e r e d ,h o w e v e r , t h a t t h e h e m a g g l u t i n a t i o n t e s t d e t e c t e da g r e a t e r n u m b e r o f c a r r i e r s t h a n e i t h e r o f t h eb a c t e r i a l a g g l u t i n a t i o n t e s t s a l o n e . I t i s o f i n -t e r e s t t h a t t h e s e r u m o f o n l y 1 c a r r i e r o f 1 6 8t e s t e d b y a l l t h r e e m e t h o d s w a s n e g a t i v e i n t h et h r e e t e s t s . I t i s b e y o n d t h e p r o v i n c e o f t h ea v e r a g e d i a g n o s t i c l a b o r a t o r y t o u s e a l l t h r e em e t h o d s .

DISCUSSIONFrom t h e d a t a p r e s e n t e d , t h e r e i s n o q u e s t i o no f t h e s u p e r i o r i t y i n t h i s s e r i e s o f t e s t s o f t h e

h e m a g g l u t i n a t i o n t e s t o v e r t h e o t h e r m e t h o d su s e d i n t h e s e r o l o g i c a l d e t e c t i o n o f t y p h o i dc a r r i e r s . I n t h i s r e s p e c t , t h e r e s u l t s c o n f i r mt h o s e o f L a n d y a n d Lamb ( 1 9 5 3 ) . T h e t o t a l l a c ko f p o s i t i v e r e a c t i o n s i n c o n t r o l s e r a c o n t r a s t sw i t h t h e s m a l l n u m b e r o f p o s i t i v e s f o u n d b yL a n d y a n d Lamb i n u n v a c c i n a t e d p e r s o n s a n dt h e l a r g e r n u m b e r f o u n d b y t h e m a m o n g v a c -c i n a t e d i n d i v i d u a l s . I n c o n t r a s t t o t h o s e w o r k e r s ,S t a a c k a n d S p a u n ( 1 9 5 3 ) f o u n d t h a t s e r a o f f e w e rv a c c i n a t e d p e o p l e r e a c t e d i n V i h e m a g g l u t i n a t i o nt e s t s t h a n s e r a o f i n d i v i d u a l s n o t r e c e n t l y v a c -c i n a t e d . T h e s e c o n f l i c t i n g r e s u l t s d i s c o u n t t h ei m p o r t a n c e o f v a c c i n a t i o n i n h e m a g g l u t i n a t i o nt e s t s a n d i n t h i s r e s p e c t c o n f i r m t h e r e s u l t s o b -t a i n e d b y t h e w r i t e r s .

V i a g g l u t i n a t i o n

6 5 2 [ V O L . 7 7


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Downlo

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AGGLUTINATION TESTS FOR TYPHOID CARRIERSI n a n y c o n s i d e r a t i o n o f t h e v a l u e a n d u s e f u l -n e s s o f v a r i o u s m e t h o d s o f d e t e r m i n i n g V i a g -g l u t i n i n l e v e l s , i t i s n e c e s s a r y t o t a k e i n t o a c c o u n tt h e e a s e w i t h w h i c h t h e n e c e s s a r y r e a g e n t smay b e p r e p a r e d . T h e V i e x t r a c t s u s e d h e r e t os e n s i t i z e s h e e p c e l l s w e r e e a s i l y p r e p a r e d a n dr e a d i l y r e p r o d u c i b l e . F u r t h e r , t h e y w e r e s t a b l e

w h e n s t o r e d f o r 1 0 m o n t h s a t 4 C o r a t - 2 0 C .S p a u n ( 1 9 5 8 , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) f o u n d n od e t e r i o r a t i o n i n V i e x t r a c t s o f S . t y p h i s t o r e di n t h e f r o z e n s t a t e f o r 3 y e a r s . T h e V i 1 a n t i g e nf o r t u b e t e s t s w a s p r e p a r e d r e p e a t e d l y b y t h em e t h o d o f F e l i x ( 1 9 5 1 ) a n d s e v e r a l l o t s w e r e o fa c c e p t a b l e q u a l i t y . H o w e v e r , i t m u s t b e s a i dt h a t a n t i g e n s p r e p a r e d b y t h e w r i t e r s w e r e n o tc o n s i d e r e d b y t h e m t o b e q u i t e a s s a t i s f a c t o r y a st h a t o b t a i n e d f r o m t h e S t a n d a r d s L a b o r a t o r y .V i a n t i g e n p r e p a r e d b y t h i s m e t h o d d e t e r i o r a t e so n s t o r a g e a n d u s u a l l y i s u s e d f o r o n l y 2 t o 3m o n t h s a f t e r p r e p a r a t i o n . L i k e w i s e , n u m e r o u sl o t s o f s l i d e a n t i g e n w er e p r e p ar ed c a r e f u l l yf o l l o w i n g d i r e c t i o n s s u p p l i e d b y D e s r a n l e a u( 1 9 4 3 ) . N o n e o f t h e s e a n t i g e n s w a s o f a c c e p t a b l eq u a l i t y a n d o f n e c e s s i t y a n t i g e n s p r o v i d e d b yM r . D e s r a n l e a u w e r e u s e d e x c l u s i v e l y .

T h e t o t a l l a c k o f p o s i t i v e h e m a g g l u t i n a t i o nt e s t s a m o n g t h e c o n t r o l s e r a i n t h i s s e r i e s c o n -t r a s t s w i t h t h e p o s i t i v e s n o t e d b o t h b y L a n d ya n d Lamb ( 1 9 5 3 ) a n d S t a a c k a n d S p a u n ( 1 9 5 3 ) .No o b v i o u s e x p l a n a t i o n o f t h i s d i f f e r e n c e c a n b eo f f e r e d . I t c a n b e s a i d o n l y t h a t s l i g h t l y d i f f e r e n tm e t h o d s w e r e u s e d i n t h e p r e s e n t w o r k , t h a t c o n -t r o l s o f u n s e n s i t i z e d s h e e p c e l l s w e r e i n c l u d e d i na l l t e s t s , a n d t h a t t h o s e s e r a w h i c h a g g l u t i n a t e ds u c h c e l l s w e r e f u l l y a b s o r b e d a n d r e t e s t e d .

F r o m t h e p r e s e n t s e r i e s o f t e s t s a s w e l l a s f r o mt h e r e s u l t s o f o t h e r s , i t i s o b v i o u s t h a t h e m a g -g l u t i n a t i o n t e s t s , a s t h e y h a v e b e e n d o n e t o t h i st i m e , w i l l n o t d e t e c t a l l c a r r i e r s o f S . t y p h i . T h ew r i t e r s o b t a i n e d 9 1 . 6 p e r c e n t p o s i t i v e r e s u l t s a n dt h i s f i g u r e i s i n g o o d a g r e e m e n t w i t h t h e 9 0 p e rc e n t f o u n d b y L a n d y a n d Lamb a n d t h e 8 7 . 9p e r c e n t r e p o r t e d b y S t a a c k a n d S p a u n i n e x a m i -n a t i o n s o f s m a l l e r s e r i e s o f c a r r i e r s . I n t h i s s e r i e so f t e s t s , t h e l o w e s t d i l u t i o n c o n s i d e r e d p o s i t i v ew a s 1 : 1 0 . I n r e t r o s p e c t , i t m i g h t h a v e b e e n m o r ea d v a n t a g e o u s t o u s e a d i l u t i o n o f 1 : 5 . T h e w o r kc a n n o t b e r e e v a l u a t e d f u l l y o n t h a t b a s i s s i n c et h e p r e m a r i t a l s e r a w e r e n o t t e s t e d a t 1 : 5 . T h es e r a o f c a r r i e r s w h i c h w e r e n e g a t i v e a t 1 : 1 0 w e r er e t e s t e d a t 1 : 5 a n d t h e s e r a o f a r m y d i s c h a r g e e sa n d c o n v a l e s c e n t s w e r e t e s t e d a t 1 : 5 . T h e s e r a o ft h r e e c a r r i e r s , w h i c h w e r e n e g a t i v e a t 1 : 1 0 , w e r e

p o s i t i v e a t 1 : 5 ; w h e r e a s 1 2 f a i l e d t o r e a c t a t t h a td i l u t i o n . T h e s e r u m o f o n e d i s c h a r g e e w a s p o s i t i v ea t 1 : 5 . T h i s i n d i c a t e s t h a t t h e t e s t c o u l d b ep o i s e d a t a l ow er d i l u t i o n t h a n w a s d o n e h e r e a n dt h a t a f e w m o r e c a r r i e r s w o u l d b e d e t e c t e d w i t h -o u t a g r e a t i n c r e a s e o f r e a c t i o n s a m o n g n o n -c a r r i e r s . H o w e v e r , i n t h i s s e r i e s t h e r e w e r ep r o v e d c a r r i e r s t h e s e r a o f w h i c h f a i l e d t o r e a c ta t 1 : 5 . F o r t h i s r e a s o n . r e l i a n c e c an n o t b e p l a c e do n t h e h e m a g g l u t i n a t i o n t e s t a l o n e i n t h e d e -t e c t i o n o f t y p h o i d c a r r i e r s . I t w o u l d p r o v i d e am o s t u s e f u l a d j u n c t t o t h e b a c t e r i o l o g i c a l s e a r c hf o r c a r r i e r s , i n d i c a t i n g w h e n r e p e a t e d b a c t e r i o -l o g i c a l e x a m i n a t i o n s s h o u l d b e d o n e . E m p l o y e di n t h i s w a y , i t s h o u l d b e much m o r e u s e f u l t h a nt h e u s u a l b a c t e r i a l V i a g g l u t i n a t i o n t e s t w h i c hL i e e t a l . ( 1 9 5 7 ) r e c e n t l y f o u n d v e r y i n e f f i c i e n t a sa s c r e e n i n g t e s t f o r t h e d e t e c t i o n o f t y p h o i dc a r r i e r s i n I n d o n e s i a .

ACKNOWLEDGMENTST h e w r i t e r s w i s h t o e x p r e s s t h e i r s i n c e r e a p -p r e c i a t i o n t o D r . P a t r i c i a B r a d s t r e e t , M r . J . - M .

D e s r a n l e a u , a n d D r . M a u r i c e L a n d y f o r f u r n i s h -i n g a n t i g e n s u s e d i n t h e w o r k . We a r e e q u a l l yi n d e b t e d t o M r s . I r m a A d a m s , D r . J . 0 . B o n d ,D r . I . H . B o r t s , D r . A . S . B r o w n e , D r . G . H .H a u s e r , D r . L . G . M a d d r y , M a j . A r t h u r N e w t o n .D r . H . J . S h a u g h n e s s y , D r . E . J . S u n k e s , a n dD r . J o s e p h i n e Van F l e e t f o r p r o v i d i n g t h e s e r au s e d i n t h i s s t u d y .

S U M M A R YT h e s e r a o f a p p r o x i m a t e l y 2 0 0 a p p a r e n t l y

n o r m a l i n d i v i d u a l s a n d 1 8 0 c h r o n i c t y p h o i dc a r r i e r s w e r e t e s t e d f o r 0 a n d H a g g l u t i n i n s f o rS a l m o n e l l a t y p h i ( S . t y p h o s a ) a n d a l s o w e r et e s t e d f o r V i a g g l u t i n i n s u s i n g b a c t e r i a l a g g l u t i n a -t i o n t e s t s d o n e o n s l i d e s a n d i n t u b e s u s i n g S .t y p h i V i 1 a s a n t i g e n . H e m a g g l u t i n a t i o n t e s t su s i n g s h e e p c e l l s s e n s i t i z e d w i t h h e a t e d e x t r a c t so f t h e B a l l e r u p s t r a i n a l s o w e r e d o n e . T e s t s f o r 0a n d H a g g l u t i n i n s w e r e o f n o v a l u e i n t h e d e -t e c t i o n o f c a r r i e r s . O f t h e V i a g g l u t i n a t i o n t e s t s ,h e m a g g l u t i n a t i o n w a s f o u n d t o b e m o s t u s e f u ls i n c e i t g a v e n o r e a c t i o n w i t h s e r a o f c o n t r o lg r o u p s a n d w a s p o s i t i v e w i t h 9 1 . 6 p e r c e n t o fs e r a f r o m t y p h o i d c a r r i e r s . I t i s e m p h a s i z e d t h a tn o s e r o l o g i c a l t e s t n o r c o m b i n a t i o n o f t e s t s y e td e v i s e d c a n b e r e l i e d u p o n t o d e t e c t a l l c a r r i e r so f S . t y p h i .

1 9 5 9 ] 6 5 3


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SCHUBERT, EDWARI)S, AND RAMSEYREFERENCES

BHATNAGAR, S . S . , S P E E C H L Y , C . C . G . , AND S I N G H ,M. 1 9 3 8 A V i v a r i a n t o f S a l m o n e l l a t y p h iand i t s a p p l i c a t i o n t o t h e s e r o l o g y o f t y p h o i df e v e r . J . H y g . , 3 8 , 6 6 3 - 6 7 2 .

B I E R , 0. 1 9 5 1 O b s e r v a t i o n s p r e l i m i n a i r e s s u r1 ' h e m a g g l u t i n a t i o n , 1 ' h e m o l y s e e t l a c o n -g l u t i n a t i o n " p a s s i v e s . " A n n . i n s t . P a s t e u r ,8 1 , 6 5 0 - 6 5 6 .

C O R V A Z I E R , P . 1 9 5 2 Etude d e 1 ' a n t i g e n e V ia l ' a i d e d ' u n e t e c h n i q u e d ' h 6 m a g g l u t i n a t i o np a s s i v e . A n n . i n s t . P a s t e u r , 8 3 , 1 7 3 - 1 7 9 .D E S R A N L E A U , J . - M . 1 9 4 3 Th e p r e p a r a t i o n a n dp r e s e r v a t i o n o f t y p h o i d s u s p e n s i o n s f o r t h eV i a g g l u t i n a t i o n t e s t . C a n . J . P u b l i c H e a l t h ,3 4 , 5 0 2 - 5 0 8 .

F E L I X , A . 1 9 5 1 L a b o r a t o r y c o n t r o l o f e n t e r i cf e v e r s . B r i t . Med. B u l l . , 7 , 1 5 3 - 1 6 2 .F E L I X , A . , K R I K O R I A N , K . S . , AND R E I T L E R , R .1 9 3 5 Th e o c cur r e nce o f t y p h o i d b a c i l l ic o n t a i n i n g V i a n t i g e n i n c a ses o f t y p h o i df e v e r and o f V i a n t i b o d y i n t h e i r sera. J .H y g . , 3 5 , 4 2 1 - 4 2 7 .

K L E I N , M . 1 9 4 3 Th e V i a n t i g e n i n t h e d e t e c t i o no f t y p h o i d c a r r i e r s . J . I n f e c t i o u s D i s e a s e s ,7 2 , 4 9 - 5 7 .

L A N D Y , M. AND C E P P E L L I N I , R . 1 9 5 5 P r o -d u c t i o n o f ' O i n a g g l u t i n a b i l i t y ' i n e r y t h r o -c y t e s c o a t e d w i t h t y p h o i d V i a n d 0a n t i g e n s .N a t u r e , 1 7 6 , 1 2 6 6 - 1 2 6 7 .

L A N D Y , M. AND L A M B , E . 1 9 5 3 E s t i m a t i o n o fV i a n t i b o d y e m p l o y i n g e r y t h r o c y t e s t r e a t e d

w i t h p u r i f i e d V i a n t i g e n . P r o c . S o c . E x p t l .B i o l . M e d . , 8 2 , 5 9 3 - 5 9 8 .L E M I N O R , L . , LEMINOR, S . , AND G R A B A R , J .1 9 5 2 R e a c t i o n d ' h e m a g g l u t i n i o n d i r e c t e aumoyen d e g l o b u l e s rouges s e n s i b i l i s e s par d e ss u b s t a n c e s s o l u b l e s 0 e t V i d E n t 6 r o b a c -t e r i a c k e s . A n n . i n s t . P a s t e u r , 8 3 , 6 2 - 7 0 .L I E KIAN J O E , WIRATMADJA, N . S . , HARDJO-WARDOJO, S . D . , KARTAENEGARA, S . , ANDH A R M I A T I , S . 1 9 5 7 Th e v a l u e o f V i a g g l u -t i n a t i o n as an a i d i n t h e d e te c t i on o f t y p h o i dc a r r i e r s i n I n d o n e s i a . Documenta Med.G e o g r a p h . e t T r o p . , 9 , 2 7 - 3 2 .

S A I N T - M A R T I N , M. AND DESRANLEAU, J . - M .1 9 5 1 R e s u l t s o b t a i n e d w i t h a g l y c e r o l a t e d V ia n t i g e n i n t h e d e t e c t i o n o f c h r o n i c t y p h o i dc a r r i e r s . Am. J . P u b l i c H e a l t h , 4 1 , 6 8 7 - 6 9 2 .

S P A U N , J . 1 9 5 1 On t h e d e t e r m i n a t i o n o f V i - a n t i -b o d i e s b y h e m a g g l u t i n a t i o n . A c t a P a t h o l .M i c r o b i o l . S c a n d . , 2 9 , 4 1 6 - 4 1 8 .

S P A U N , J . 1 9 5 7 V i a n t i g e n a n d V i a n t i b o d y . I nT y p h o i d v a c c i n e . C h r i s t t e u s B o g t r y k k e r i ,C o p e n h a g e n .

S T A A C K , H . H . AND S P A U N , J . 1 9 5 3 S e r o l o g i c a ld i a g n o s i s o f c h r o n i c t y p h o i d c a r r i e r s b y V ih e m a g g l u t i n a t i o n . A c t a P a t h o l . M i c r o b i ol .S c a n d . , 3 2 , 4 2 0 - 4 2 3 .

T O M A S I C , P . , C M E L I K , S . , AND U J E V I C . 1 9 5 3S e r o l o g y i n t h e d i s c o v e r y o f t y p h o i d c a r r i e r s .I n t e r n . C o n g r . M i c r o b i o l . , 6 t h C o n g r . R o m e ,3 , 9 6 4 .

6 5 4 [ V O L . 7 7


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J. Bacteriol.-1959-Schubert-648-54