ISOLASI, IDENTIFIKASI, DAN PENENTUAN JUMLAH BAKTERI ASAL TAMBAK TANAH GAMBUT

7/22/2019 ISOLASI, IDENTIFIKASI, DAN PENENTUAN JUMLAH BAKTERI ASAL TAMBAK TANAH GAMBUT

1/4

Buletin Teknik Pertanian Vol. 6. Nomor 2, 2001 77

Ciri utama tanah gambut adalah kandungan bahanorganik yang tinggi (lebih dari 12%) sehinggamenyebabkan tingkat produktivitas tambak tanah gambut

relatif rendah (Mustafa, 1998). Untuk meningkatkan

produktivitasnya, bahan organik tersebut perlu diuraikan.

Salah satu cara yang dapat dilakukan untuk mempercepat

proses penguraian bahan organik adalah penguraian secara

mikrobiologis.

Mikroorganisme tanah yang banyak dijumpai pada

tambak tanah gambut adalah bakteri. Bakteri yang

diharapkan terdapat pada tambak tanah gambut adalah

bakteri yang dapat menguraikan bahan organik agar

produktivitas tambak tanah gambut dapat ditingkatkan.

Bakteri yang akan diisolasi dari tambak tanah gambut

dapat berupa biakan murni atau populasi tercampur. Bila

biakan yang akan di identi fikasi ini tercampur, perlu

dilakukan pemurnian terlebih dahulu. Setelah diperoleh

biakan murni dapat di lakukan serangkaian uj i untuk

memperoleh ciri morfologi dan biokimia dari isolat.

Identifikasi bakteri tanah merupakan salah satu tugas

yang lazim dilakukan di laboratorium mikrobiologi tanah.Bakteri tidak memiliki ciri anatomi yang nyata, sehingga

identifikasi bakteri didasarkan pada morfologi, sifat biakan,

dan sifat biokimiawi (Lay, 1994).

Untuk menentukan jumlah bakteri dapat dilakukan

melalui penghitungan jumlah bakteri yang hidup (viable

count). Penghitungan disebut juga sebagaistandard plate

count, yang didasarkan pada asumsi bahwa setiap sel

bakteri yang hidup dalam suspensi akan tumbuh menjadi

satu koloni setelah diinkubasi dalam media biakan dengan

lingkungan yang sesuai. Setelah masa inkubasi, jumlah

koloni yang tumbuh dihitung dan merupakan perkiraan ataudugaan dari jumlah bakteri dalam suspensi. Jumlah bakteri

merupakan salah satu faktor penting untuk diketahui, karena

dapat menentukan kinerja dari bakteri tersebut. Berdasarkan

pendapat tersebut, maka penelitian mengenai isolasi,

identifikasi, dan penentuan jumlah bakteri yang berasal dari

tambak tanah gambut ini dilakukan.

BAHAN DAN METODE

Percobaan dilakukan pada bulan Juli-Agustus 1998.

Contoh tanah untuk isolasi bakteri diambil dari tanah

gambut yang berlokasi di Delta Tampinna, Kecamatan Malili,

Kabupaten Luwu Utara, Propinsi Sulawesi Selatan. Contoh

tanah diambil pada tambak tanah gambut berumur 2, 4, dan

8 tahun masing-masing pada kedalaman 0-10 dan 100-110 cm

dengan menggunakan bor gambut. Contoh tanah dimasukkan

ke dalam tabung efendorf yang telah disterilkan dalam

autoclavedengan bantuan sendok spatula steril. Contoh

tanah selanjutnya disimpan dalam cool boxyang berisi es

mengikuti petunjuk Benson (1985).

Untuk pembuatan media triptone soya agar(TSA),

maka ke dalam 400 ml akuades dimasukkan 6 g NaCl dan 16

g TSA. Bahan tersebut dicampur dengan menggunakan

pemanas yang di lengkapi dengan pengaduk sampai

mendidih, kemudian disterilkan dengan autoclavepada suhu

121oC selama 15 menit. Campuran yang masih hangat

tersebut (suhu 60-70oC) selanjutnya dituangkan ke dalam

petr id ish steril dan didinginkan. Kemudian campuran

dikeringkan dalam inkubator pada suhu 37oC dengan posisi

petr idish terbuka dan terbalik dan disimpan dalam suhu

kamar. Setelah 24 jam, media tersebut dapat dipergunakan.

Untuk membuat larutansaline solution 0,85%, ke dalam

1.000 ml akuades dimasukkan 8,50 g NaCl. Saline solution

dimasukkan ke dalam tiap tabung reaksi sebanyak 9 ml lalu

ditutup dengan kapas dan disterilkan.

Contoh tanah gambut 1 g berat basah (kadar air tanah

harus diketahui karena jumlah bakteri dinyatakan dalam

colony forming unit/gram per tanah kering) dimasukkan ke

dalam botol volume 50 ml yang berisi 9 ml larutan saline

so lution 0,85% dan diaduk. Selanjutnya, dibuat seri

pengenceran 10-1, 10-2, 10-3, dan 10-4dengan bahan pengencer

berupa trisalt(larutan tiga garam). Larutan yang berupa

tanah dan sa line so lu tion diambil 1 ml selanjutnya

dimasukkan ke dalam tabung yang berisi 9 ml trisaltpada

berbagai seri pengenceran. Dari setiap pengenceran diambil

ISOLASI, IDENTIFIKASI, DAN PENENTUAN JUMLAH BAKTERI

ASAL TAMBAK TANAH GAMBUT

Nurjanna1

1Asisten Teknisi Litkayasa pada Balai Penelitian Perikanan Pantai. Jln.

Makmur Dg. Sitakka No. 129 Maros 90512. Telp. (0411) 371544, Faks.

(0411) 371545, E-mail: [email protected]


2/4

78 Buletin Teknik Pertanian Vol. 6. Nomor 2, 2001

1 ml pada tiap-tiap tabung untuk ditaburkan ke media TSA

sebanyak 0,10 ml, kemudian diratakan dengan menggunakan

hockey stickyang telah disterilkan. Media diinkubasi selama

24-48 jam pada suhu 25-28oC dalam inkubator dengan posisi

pe tr id ish tertutup dan terbalik yang pada akhirnya ter-

bentuk koloni bakteri dan selanjutnya dilakukan perhitungan

terhadap koloni yang tumbuh.

Isolasi bakteri tanah gambut dilakukan dengan cara

penggoresan agar menggunakan teknik goresan T. Pada

teknik goresan T, lempengan agar dibagi atas tiga bagian

membentuk huruf T pada bagian luar dasar cawan. Jarum ose

yang telah dipijarkan hingga merah dan kemudian didingin-

kan, digunakan untuk mengambil koloni bakteri dalam

petridish. Lempengan agar pada daerah 1 digores dengan

mengusahakan tidak melukai lempengan agar dengan jarum

ose. Proses ini diulangi pada kuadran 2 dan 3 dari lempengan

agar. Penggoresan yang sempurna akan menghasilkan

koloni yang terpisah.

Identifikasi bakteri asal tanah gambut dilakukan dengan

berbagai macam kri ter ia pengamatan, mel iputi morfologi

bakteri dan uji biokimia. Pada pengamatan morfologi bakteri

dilakukan pengenalan warna, sifat tembus cahaya,

pinggiran, si fat permukaan, dan bentuk koloni. Setelah

diperoleh koloni yang terpisah dapat dilakukan berbagai uji

Tabel 1. Morfologi bakteri asal tambak tanah gambut Delta Tampina, Luwu Utara, Sulawesi Selatan pada media triptone soya agarUmur tambak Kedalaman

Ulangan Morfologi Persentase(tahun) (cm)

2 0- 1 0 1 Kuning-putih, melebar, bulat 50

Kuning-putih, cembung, mengkilap, bulat 50

2 Kuning-putih, cembung, mengkilap, bulat 25

Oranye muda, cembung, mengkilap, bulat 25

Merah jambu, cembung, mengkilap, bulat 25

Kuning, cembung, mengkilap, bulat 25

100-110 1 Kuning-putih, melebar, bulat 50


Kuning, cembung, mengkilap, bulat 30

2 Kuning-putih, cembung, mengkilap bulat 25

Kuning, cembung, mengkilap, bulat 30Merah jambu, cembung, mengkilap, bulat 40

4 0- 1 0 1 Kuning-putih, cembung basah, bulat 50

Kuning-putih, cembung rata, transparan, bulat 50

2 Kuning-putih, cembung, basah, bulat 40

Kuning-putih, rata, melebar, bulat 40

Putih, cembung, agak kering, bulat 10

Oranye muda, cembung mengkilap, bulat 10

100-110 1 Kuning-putih, cembung, basah, bulat 40

Kuning, cembung, basah, mengkilap, bulat 60

2 Kuning, cembung, basah, mengkilap, bulat 30

Kuning-putih, cembung, basah, mengkilap, bulat 30

Kuning-putih, transparan, melebar, bulat 40

8 0- 1 0 1 Kuning, cembung, mengkilap, bulat 20Kuning-putih, melebar, bulat 70


2 Kuning-putih, cembung basah, mengkilap, bulat 50

Kuning, transparan bulat 50

100-110 1 Kuning-putih, cembung basah, mengkilap bulat 30

Oranye muda, cembung, mengkilap bulat 20

Merah jambu, cembung mengkilap, bulat 10

Kuning-putih, rata, melebar, bulat 30

Putih, agak kering, bulat 10

2 Kuning-putih, cembung, mengkilap, bulat 50

Kuning, cembung, basah, mengkilap, bulat 30

Kuning-putih, cembung, basah, mengkilap, bulat 20


3/4

Buletin Teknik Pertanian Vol. 6. Nomor 2, 2001 79

biokimia. Untuk uji biokimia dilakukan beberapa pengujian

seperti Uji Oksidase, Uji Katalase, Uji Hugh-Leifson (O/F),

dan Uji Penggunaan Gula. Identifikasi bakteri sampai ke

genus dilakukan menurut petunjuk Lewis (1973).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Berdasarkan pengamatan morfologi bakteri asal tanah

gambut yang meliputi peubah warna, sifat tembus cahaya,

pinggiran, sifat permukaan, dan bentuk koloni, didapatkan 13

kombinasi dari peubah morfologi bakteri (Tabel 1). Namun

demikian, setelah diuji lanjut dengan uji biokimia hanya

didapatkan 7 genus bakteri asal tanah gambut (Tabel 2). Hal

ini menunjukkan bahwa morfologi bakteri asal tanah gambut

belum dapat digunakan secara tepat untuk menentukan

genus bakteri. Lay (1994) menyatakan bahwa jarang sekali

suatu genus bakteri dapat ditentukan berdasarkan sifat

morfologi atau biakan saja. Ini berarti bahwa penentuan

suatu genus menuntut penggunaan berbagai sifat biokimia

dari suatu organisme. Sifat biokimia yang dipelajari di

laboratorium merupakan ciri yang penting untuk identifikasi.

Ketujuh genus bakteri asal tanah gambut adalah

Aeromonas sp., Ac inetobacter sp., Bacillus sp.,

Flavobacterium sp., Micrococcussp., Pseudomonassp.,

dan Vibrio sp. (Tabel 2). Kecuali genus pertama, enam

genus lainnya tergolong bakteri pengurai bahan organik

(Brock et al., 1994; Subba-Rao, 1994). Banyaknya genus

bakteri yang di temukan ini lebih rendah dibandingkan

dengan temuan Mustafa (1998) yang mendapatkan 12 genus

bakteri asal tanah gambut di mana 8 genus di antaranya

tergolong bakteri pengurai bahan organik.

Secara umum terlihat bahwa jumlah bakteri cenderung

lebih tinggi didapatkan pada tambak tanah gambut berumur

8 tahun yaitu sangat melimpah (too numerous to count =

tntc) dibandingkan dengan tambak tanah gambut berumur 2

dan 4 tahun. Jumlah bakteri asal tambak tanah gambut pada

kedalaman 0-10 cm lebih tinggi dibandingkan kedalaman 100-

110 cm. Hal ini diakibatkan oleh tingginya kandungan bahan

organik pada permukaan tanah gambut yang merupakan

makanan bagi bakteri.

Dalam penentuan jumlah bakteri digunakan seri

pengenceran 10 -1, 10 -2, 10 -3, dan 10-4, tetapi dari Tabel 2

terlihat jumlah bakteri sangat melimpah pada delapan contoh

tanah gambut. Oleh karena itu disarankan untuk menambah

seri pengenceran 10-5dan 10-6dalam penentuan jumlah

bakteri asal tanah gambut.

Tabel 2. Genus dan jumlah bakteri asal tanah gambut Delta Tampina, Luwu Utara, Sulawesi Selatan

Umur tambak KedalamanUlangan Genus bakteri

Jumlah bakteri

(tahun) (cm) (10-6 CFU/g tanah kering)

2 0- 1 0 1 Vibrio sp. t n t c

2 Vibrio sp. 1 9 5

Pseudomona s sp. 7 6

100-110 1 Vibrio sp. t n t c

Micrococcus sp. t n t c

2 Flavobacterium sp. 8

Vibrio sp. 1 9

Bac il lus sp. 7


2 Acine tob acter sp. 2 5

Vibrio sp. 6

Bac il lus sp. 6100-110 1 Bac il lus sp. 6

Vibrio sp. 9

2 Vibrio sp. t n t c



100-110 1 Bac il lus sp t n t c

Acine tob acter sp. t n t c


Vibrio sp. t n t c

CFU: colony forming unit

tntc: too numerous to count (sangat melimpah, > 1.000 CFU/g tanah kering)


4/4

80 Buletin Teknik Pertanian Vol. 6. Nomor 2, 2001

KESIMPULAN DAN SARAN

Dari tambak tanah gambut Delta Tampina, Luwu Utara,

Sulawesi Selatan diperoleh tujuh genus bakteri, yaitu

Aeromonas sp., Ac inetobacter sp., Bacillus sp.,Flavobacterium sp., Micrococcussp., Pseudomonassp.,

dan Vibriosp,. Enam genus yang disebut terakhir tergolong

bakteri pengurai bahan organik.

Jumlah bakteri pada tambak tanah gambut berumur 8

tahun lebih tinggi dibandingkan dengan yang berumur 2 dan

4 tahun. Jumlah bakteri pada kedalaman 0-10 cm lebih tinggi

dibandingkan dengan 100-110 cm. Karena jumlah bakteri

yang didapat sangat melimpah, disarankan untuk melakukan

seri pengenceran yang lebih tinggi, yaitu seri pengenceran

10 -5dan 10-6.

DAFTAR PUSTAKA

Benson, H.J. 1985. Microbiological application: A laboratory

manual in general microbiology. Complete Version Wm.C.

Brown Publisher, Dubuque, Iowa. 450 pp.

Brock, T.D., M.T. Madigan, J.M. Martinko, and J. Parker. 1994.

Biology of Microorganisms. Seventh Edition. Prentice-Hall,

Inc., New Jersey. 986 pp.

Lay, B.W. 1994. Analisis Mikroorganisme di Laboratorium. PT

Raja Grafindo Persada, Jakarta 168 hlm.

Lewis, D.H. 1973. Predominant aerobic bacteria of fish and

shellfish. Texas A & M University, Sea Grant College, Texas.

91 pp.

Mustafa, A. 1998. Budidaya tambak di lahan gambut: Studi kasus

di Sulawesi Selatan. Jurnal Penelitian dan Pengembangan

Pertanian. XVII(3): 73-82.

Subba-Rao, N.S. 1994. Mikroorganisme Tanah dan Pertumbuhan

Tanaman. Edisi Kedua. Diterjemahkan oleh H. Susilo. UI-Press, Jakarta. 353 hlm.

Documents

ISOLASI, IDENTIFIKASI, DAN PENENTUAN JUMLAH BAKTERI ASAL TAMBAK TANAH GAMBUT