4
American Journal of Medical Genetics Neuropsychiatric Genetics) 114:343±346 2002) Is There a Relationship Between Wolfram Syndrome Carrier Status and Suicide? Joanna Crawford, 1,2 * Marta A. Zielinski, 1 Laura J. Fisher, 3 Grant R. Sutherland, 1,2 and Robert D. Goldney 3 1 Department of Cytogenetics and Molecular Genetics, Women's and Children's Hospital, North Adelaide, Australia 2 Department of Pediatrics, Adelaide University, Adelaide, Australia 3 Department of Psychiatry, Adelaide University, Adelaide, Australia Wolfram syndrome WFS) is a rare, autoso- mal recessive neurodegenerative disorder. An increased risk of psychiatric disorders and suicide has been reported for hetero- zygote carriers. In this study we investigated whether mutations in the WFS gene are associated with suicide in the general popu- lation. The gene for WFS WFS1) has recently been mapped to chromosome 4p16.1, and its genomic structure has been characterized. We screened the entire WFS1 ORF in a panel of 100 completed suicides, 60 blood donors not known to have psychiatric illness, and 100 donors with a negative history of dep- ression or suicidal behavior. We did not ®nd evidence of an increased incidence of WFS carriers in the suicide panel and concluded that WFS1 carrier status is not a signi®cant contributor to suicide in the general popu- lation. Screening of this highly polymorphic gene resulted in the detection of 33 variants, 13 of which cause amino acid changes. Seven of these changes have not been previously reported and six were unique to our suicide panel. ß 2002 Wiley-Liss, Inc. KEY WORDS: Wolfram syndrome; suicide; juvenile-onset diabetes melli- tus; progressive optic atrophy INTRODUCTION Suicide is a signi®cant cause of mortality worldwide. It has been the most common external cause of death in Australian males since 1990 and has recently become the most frequent external cause of death in Australian females, with over 2,700 people in a population of approximately 18 million) committing suicide each year [Harrison and Moller, 1998]. Over 90% of those who commit suicide are suffering from some form of mental illness at the time [Tanney, 2000]. It is well established that genetic factors play an important role in many common psychiatric disorders, but predisposing genes are yet to be identi®ed. Elucidating genetic factors that predispose to psychiatric illness would not only create a means of identifying individuals at risk, but also enable a more precise diagnosis and thus more effective treatment. Wolfram syndrome WFS), de®ned as the occurrence of juvenile-onset diabetes mellitus and progressive optic atrophy, is an autosomal recessive neurodegen- erative disorder with an incidence in the United States of 1/100,000 [Kinsley et al., 1995]. WFS1 has recently been mapped to 4p16.1 using a positional cloning approach [Inoue et al., 1998; Strom et al., 1998]. The approximately 3.7-kb transcript predicts an 890-amino- acid polypeptide that contains hydrophyllic C- and N-terminal domains and a central hydrophobic core consisting of approximately 10 transmembrane seg- ments. The gene appears to be ubiquitously expressed as expected from the plethora of phenotypic effects resulting from mutations in this gene) and has been localized to the endoplasmic reticulum [Takeda et al., 2001]. However the function of wolframin is yet to be characterized [Inuoe et al., 1998]. Many WFS patients develop paranoid delusions, progressive dementia, severe depression and attempt suicide. Carriers of the disease have also been reported to have an increased incidence of clinical depression and suicide, with family studies showing a 26-fold increase in psychiatric morbidity in heterozygotes, compared to noncarriers [Swift et al., 1998]. It is therefore of great social signi®cance to determine whether carrier status for WFS predisposes individuals Grant sponsor: Australian National Health; Grant sponsor: Medical Research Council. *Correspondence to: Joanna Crawford, Department of Cyto- genetics and Molecular Genetics, Women's and Children's Hospital, North Adelaide, SA, 5006, Australia. E-mail: [email protected] Received 10 October 2001; Accepted 21 November 2001 DOI 10.1002/ajmg.10256 ß 2002 Wiley-Liss, Inc.

Is there a relationship between Wolfram syndrome carrier status and suicide?

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: Is there a relationship between Wolfram syndrome carrier status and suicide?

�������� ����� ������� �������� ���������������� ��������� ����������� �� ��

!� "���� � #���������� $��%��� &� ��� '������(������ '����� ��� '������)

���� (��% ��*�*�+ ����� �, -������.�*� /���� , 0�����*� ����� #, '���������*�*�

��� #1��� 2, �������

���������� � � �������� �� �������� �������� ����� �� ��������� �������� ���� ��������� ������������������� � ����������� �������� �!����� � ��������� ���������"��������� � �� ������ � �������� �!����� � ��������� ���������

&� ��� ������� �&0'� �� � ����* ����3��� �������4� ������5�������4� �������,�� ��������� ���. ����������� ����������� ������� ��� 1��� ������� � �����36�5�� ��������, !� ���� �����%� ��4����5����%������ �������� �� ��� &0' 5��� ������������ %��� ������� �� ��� 5������ ���3�����, "�� 5��� �&0' �&0'�� ��� ��������1��� ������ � ������� ����,�* ��� ���5����� ��������� ��� 1��� ����������6��,&� �������� ��� ������ &0'� 7#0 �� � ����� � �������� ��������* � 1�� ������ .�%� � ��4� ����������� �������* ���� ���� %��� � ��5���4� ������ ���3������ � �������� 1���4��, &� ��� �� 8���4������ �� ��������� ��������� &0'�������� �� ��� ������� ����� ��� ������������ &0'� ������� ������ �� �� � ��5��8���������1��� � ������� �� ��� 5������ ���3�����, '�������5 ���� ��5��� ���������5��� �������� �� ��� �������� �� 4�������*�� %���� ����� ���� ���� ����5��, '�4�� ����� ����5�� ��4� �� 1��� ���4������������ ��� ��9 %��� ���:�� � �� ������������, � � � &����3/���* !��,

;<= &7#2'� &� ��� �������> �������>?�4�����3���� ���1���� �����3���>��5�����4�����������

!�"#72@("!7�

������� �� � ������� ����� � � ������� � ���������� ��� ��� ��� � �� � �� ������� ����� � ����� ���������� ����� ���� ���� �� ��� ������� ��� ����� � �� ������� ������� ����� � ����� � ����������������� ���� ��� �!�� "� "�� #� � " "����� ��""� �������� �$����� % � ������ ������� ���� ����&'����� �� ( ����� ���$)� *��� ��+ � �� �� �� � ���� ������� ��� ������� �� � � �� � �� � ����������� �� ��� ���� &,���� ���)� �� �� ���� ��������������� ����� ���� �� "��� � ��" ���� � �� � ���� �� "���������� ��� ������ ��� "�����" �� ������ ��� � �� ��������� -�������� ����� ���� �� ����"�����" �� � "���������� ������ � ��� � �� ������� ���� � �������� ���������� �� ���.� ��� ��� ����� � � �� "������ ��� ��� �� ���� � �� ������������������/ ����� ���� �� #/0�%� ����� �� ��� ��������

� 1������2 ��� �������� �������� �� "� ������� "��� ��� "��� �� � ��� � ��� ��������� ��� ���2������� ��� ���� ���� � ������� � ��� 3���� ������ � �4������� &5����� �� ���� ���6)� /0�� ��� ���������� ��""�� � 7"�8�� ��� � " ���� �� �� ��""� ��� &� �� �� ���� ���$9 ��� � �� ���� ���$)� ,���""� �������� :�!2.� �������"� "������� � $��2��� 2���� " ��"�"���� ���� � ���� ���� "������ ;2 ��<2������� � ���� �� � ������ ���� "� ��� � ��� ����� � �""� �������� �� ����������� ��2����� ,�� �� �""���� � �� ������� ���� ��"������#�� ��"����� �� � ��� "���� �� � "�� ��"�� �������������� �� � ������ � � ���� ��% �� ��� ���� ����=�� � ��� �� "������ ��������� &,�.��� �� ���� ���)� ' ����� ��� ����� � � ������ �� ��� � ������������=�� &�� � �� ���� ���$)�(�� /0� "������ ����� " "��� �� ������ ��

"� ������� �������� ������ ��"����� �� �����"��������� ;������� � ��� ������� ���� ��� ��� ��" ����� ���� � �������� ������� � ������� ��"����� �� �������� ���� ������ ������� �� �� � 82� ��������� � "���������� � ������� � ����� =� ����� �"���� � �������� &����� �� ���� ���$)� �� �������� �� � ���� � ���� �������� � ��������������� ������� ������ � � /0� "�����" ��� ����������

>��� �" � �? ��������� <��� �� '�����9 >��� �" � �?(������ @������� ; �����

A; ����" ���� � ? B �� ;���� ��� C�"������ � ;�� 2������ �� ( ������� >������� / ��D� �� ;������D�' �"����� < ��� ��������� ��� 6��8� ����������-2����? 1����� �E������ ������ ����

@������� �� *�� ��� ���9 ����"��� � < ������ ���

C*� ������ 4�1���� 68

� � � &����3/���* !��,

Page 2: Is there a relationship between Wolfram syndrome carrier status and suicide?

� ��� ����� " "����� � "���������� ������ ���������� ;�������� ������ � � � /0� ���� ����������� ��� �� �� ��� ��� ���� ������ �� � ��" �� ��" ����� *�� ������ ������ �� �� �"�������� ����� /0�� � �� ��� � , ������ ������������� � � ��� �� ����� /0� ���� � � �� �������� � ��� ����� " "����� � �� ������� ���� ��� � ������ � ��� � �"����� �������� �� ������ � � ��������� ������� � /0�� ������ � � ���� � �"�� �"���� ���� �""� "����� � �� � " "����� ��

��"<#!�/' ��2 �<"A72'

'������

G���� �� "���� �� � � �"����� �������� ���� �������� � � � ��� ��� "���� #� ��� ��������� ; � ��D�*����%� *�� "������ ���� ��� �� � 86 ����� ���� ������� ���� ������� �� ���� ������� �� ��������� ��� ����� � ����� ���� ������� � ���� � �"�� ������ � �� � � �" ��� �� �� � �� ��"��2

�������� � ��� ����� " "���� �� � ������ � 8���� ��� �������� �� � � ��� ' ������ �� �""� ��2������ �+ � ���������� � ��� ����� " "����� ������ �� � � �� � �� � ��"����� � � "�����" �������� � �� � � �� " "����� � ��� ���� �������������� �� � ��� ���� ��� � ��� "������ ���� � �� � � �"� � ��� � ������� � �� � � �"� � 2����� � ��� �� � � �� ���� � ������ ���� �� � ��"������� ������ � �������� ������ �� ��� ����������� � ������=� ��� ����� � ��� �=� � ��2����� � ������� � , ���� ���� ������ � �" �������� � ����2�������� ���"�� � �� � � �� ������ "������"��� � �� �������� � � �"���� �� ����2�� ����� �� ���" � � ������� ������ �� ,�������� ����� ���� ���� ��� $2���� >����� '�����H����� ���� #>'H% &> ����� �� '������� ��!�) ����� �02� '����� ������ (������ &/��� �� ���� ���8����$)� ,�� � ���� ��� � ��� �� �� �� #746% � � �����"���� � ���� � ������� �� ��� ��� �� � ������ ��"2����� �������� � �� �������� � ������ � 7 � ��� $ ����� �"��������� ����� � ������ � � ��������������� � ����� &> ���� �� ���� ���)� ,�� �02� � �"����� � ������ � �� ������ � ������� ��"�����

��� �� �� �� ���������� ���1���� �� �� ��� " �������� ��� ������ ��"����� �������� � ��� >'H� �� ���� ���" ��� " �������� � � � � �� � ��� � ��>'H ����� �"��������� ������� � �������� ������ �� � �� �� �� �� ��� � ��� ������� ��"����� ��� ��� �02� ���� �������� �� � ��� ������ � �� � � �"�,�� � �"����� ������� �� �� � �� � � �"� ����

������ �� � ��� ������ ;������� � ��� ���������" "����� � C<� �� � ����� ��� ��������� �� � ����"�� �4��� � � �� �������� "� ������� C<� ������2�� � �� � �� � ���� "��� ���� ��� ��� H����"C<� I� � (��� 5�� #H��>-<� '����� >�����%� ���C<� ��� ������� � �� �. � ������� � � �� 4���

'�������5 ��� &0'� ����

, ����� ��� /0�� �� �� �����=�� "������"���� ���� ��" ���� �� ������ -� � �J7 �� 8 ������"����� ��� "������ ��������� �� �� � �� ��� &���$)�-� � 6� !� �� $ #��� ������ � ����� � ���� ��"2��� �% ���� ��"����� ��� "������ ��������� �� ��� ��� ��� &���$)� F������ ���� K� �������� 6D2������� � 2K� ������ #'-L% �������� �� ������� "� ��������� ���� � ��=� �� � 7!J::! �"� ����2�������� � ����� �� " ��� �"���� #��;F% ������� ���"��� ���� 7+ ���������� ��� ��� ��� >-G2�;�< ��� ����2���� ������ #; ����� @�������� ( ����.��<�/� ���������%� M������ ���� � ��� � �� ������������������ ���� �� ���������� ����"����� � ���"������ � �: F �;,F �� �� (C- #0(; I� 2"� ������ @ �.���� (-%� 8+ �� ��+ ���������� ����I��� �� �� ������� � ������ �� ������ ��������"����� ��� �������� "������� ��� "� ������������� ��� ������� I�C�� ������� � ������2��� �� ����=�� � �I� :!�� ��� ����� ��������#F- I� �������%�

#<'@/"'

,����� �J��� �� � ������ ���������� � � ��� ::�������� ������� � � �"����� �������� �� ��� �� � �� � � �"�� ,���� � � ���� ������� ����� ��� ���� ������ ��� � ����� ���� � �� $� �������.����� ��� ! "���� ���� ���" ���� ������� ������,���� �� �� �� ����� ������� � �� � �� � � 8� �� $�

,�IG- �� ��� ���� ;����

<���� ���� ������� ��������

������ ����������

���������������� �� ��

3��������� �� ��

A�!!;�, �: 8M �4 �7 #��6+% �4 �� #�+% �4��� #�+%��!��> �:::M 6�4 �7 # 6+% 684 �� # $+% : 4��� # �+%A��$���, -:�7M �4 � #��6+% �4 �� #�+% �4�� #�+%� �7;�> G7: M �4 � #��6+% �4 �� #��6+% �4�� #�+%�:8!>�� @768' $4 � #7+% 64 �� # �6+% $4�� #!+%A�7�6;�, G7��0 �4 � #��6+% �4 �� #�+% �4��$ #�+%A�6�!;�, F6::� �4 � #�+% �4 �� #�+% �4��$ #�+%�8!6��> �66�, �4 �7 #��6+% �4 �� #�+% �4�� #�+%�$: >�� @8��' ��!4 �7 #6 +% ���4 �� #66+% 6�4�� #7�+%A��87��> -866> �4 � #�+% �4 �� #�+% �4�7 #�+%A �� ;�, �8!�M �4 � #��6+% �4 �� #�+% �4�7 #�+%A �6:;�, @8$6; �4 � #��6+% �4 �� #��6+% �4�7 #�+% 8��>�� M$!�( 4 �� #�+% �4 �� #�+% �4��� #�+%

��� (��% �� �� ��,

Page 3: Is there a relationship between Wolfram syndrome carrier status and suicide?

,���� ��� � ���� ��� �� �������� C�"������ �� ���� '����2/����� ����������� #'/-% ��� ��������� �� ������� ��� � �� � � �"� ��� ��� � ����2 �2�� ����� ������ �� � ��"� ���������� � ���� �� ����"����� �� '����2/����� ������� � ��� � �"� � ���� ��������

2!'(@''!7�

�� �� ������ ����"��� ���� ����� ��� ����� �� ���2� ����� � �" ��� � �������� �� �� �������������� ���� ��� ����� � ������� �� � ��� � � �������������� ��� @������ �� �""���� � �� ��� ���������������� � �����"�� ����� ������ /0� ������ �������� ����� ��� "��� �� "�� ������� ������ �� � ������������ �� ������ � ��� � "���������� ��� ������ � �� "������ ���� ��� ������� �� ����� =� ����������� ,���� �������� � ����� /0�� �� � �""�2��� �������� � � ����� "�����" ���� � �������� ��� ����� " "����� � ������� ���� ������� �������������� /0�� �� � �������� � � ��"����� � ���2����� ������ �� ����= "������ �� ��" ��� �� ��" ������������ ��� ����� &0��� �� ���� ����9 -��� �� ���� ���9 (����� �� ���� ���9 *����.� �� ���� ���9 , ������ ���� ���)� *� ������ �� 0��� �� ��� &����) ��" �2

��� � " ������ " ������ ��� ����� ������ � ���� /0�������� �� ��������� ��� ����� ,��� ���� ���� ��������66�,� ��� �������� � �� ����� � � ���������� ��� ������� " "����� �� � �� ��� ��" ���� ��, ���� �� ��� & ���) � � "����� ���� ����= "������� � ���� ���� ��1 � ��"����� �, ������ ������� ������ � � ��� �� �����

/0� ���� � � �� � �������� �� ������� ��� /0�� *@0�� ������ � � � �������� ������� � ������ � ���� ������� � �"� � �"���� ���� � �� � " "����� ��� � ��� � :: ������� ������� ���� �������� ��� ��2 �� ��� /0�� *@0� < � � ����� ����� ����"���� ���� ��� �������� �� ��������� ������ � �"������ ���� /0�� ,�� ��1 ���� � . � �������2����� /0� ������ � ��� ���� � ���������������� �� ����� ������ "�������� �������� ���� "� ���� < ����� � ���� ����� ���� ��������� �� �����9 � ������ �� �������� �: ������ � ���������� � ��� ���� ������ ! � ����� ��� "���� �������" ����� ,���� ���� ������� ����� #�������.��� ,���� �% ��� ���� � �� $ � /0��� 0 �� � ������������ #�: 8M� -:�7M� G7��0� �� �8!�M% �������� � �� ������� " "����� � M$!�(� "���� ������" ���� �� , ���� �� ��� & ���)� �� �66�,� ��" ���� ��0��� �� ��� &����)� ���� ��� �������� � ���� � ��

,�IG- ��� ����� F ��� �"�����

<���� ���� ����

������ ����������

������� �������� � �� �� 3�������� � �� ��

�>�, �4��$ #��6+% �4 �� #�+% �4� #�+%8$7>�; !�4 �7 #:7+% 8 4 �� #:�+% :$4��$ #: +%$$ ;�, �4 �7 #�+% �4 �� #�+% �4��� #�+%�!6;�, �4 �7 #�+% �4 �� #�+% �4��� #�+%�� :;�, �84 �7 #$+% � 4 �� #8+% � 4��� #��+%��:7;�� �4 � #��6+% �4 �� #�+% �4�� #�+%��$6,�; $64 � #7 +% $:4 �� #7��6+% 6:4�� #7!+%�:�$;�, �4 � #�+% :4 �� #��6+% :4�� #:+%�6��,�; $�4 � #7�+% !$4 �� #:�+% 784��$ #7:+%�! 6;�, �74 � #!+% ��4 �� #6�6+% ��4�� #��+% �6 >�� �4 � #�+% �4 �� #�+% �4�7 #�+% � 7;�, �4 � #��6+% �4 �� #�+% �4�7 #�+% : >�� ��4 �7 #6+% ��4 �� #6�6+% �4��� #$+% 7::>�� ��:4 �7 #6��6+% ���4 �� #6�+% 664��� #6�+% 686��> �:74 �� #8!+% �:64 �� #8!�6+% !74��� #8!+%

,�IG- ���� ��� �� M������

<���� ���� ���� F ����

������ ����������

������� �������� � �� �� 3�������� � �� ��

��� #�%� #>% �� �" � ������� �� � �� �:� � �� ���9 $ �" �"������ � ������� "�����

$�4��$ #7�+% $ 4 �� #7�+% 784� #6�+%

��� 7 #�%� #>% : �" � ������� � � �����"������ � ����� �"������ �6� � �� ���

664 �7 # !+% 884 �� #::+% :84��8 #:�+%

��� 8 #>%� #>4�% �8 �" � ������� �� � :� �� � � �� ���

�4 �7 #��6+% 74 �� # +% �4��$ #�+%

��� 8 #�%� #�4>% 6 �" � ������� � � �����"�����9 $! �" �"������ � 6�� �� ���

�4 � #�+% �4 �� #��6+% �4� #�+%

��� 8 7 �" ������ 7J$ �" � ������� � � �2���� "�����

�4 � #��6+% :4 �� #��6+% �4� #�+%

&� ��� '������ (������ '����� ��� '������ ��B

Page 4: Is there a relationship between Wolfram syndrome carrier status and suicide?

������� " "����� � , ���� �� ��� & ���) ��� � ������� �� � � �" � �"���� �� ��� �������� M$!�( � 4�:$ "������ ���� "���������� ��� ������ 0��� �� ���&����) ������� : � ���������� ���� ��������� ��� ������ :�7 � �� �� �� �������� ��� �66�, ���� � ������������ ��� ���� � �" ��� ���� � �������� � 74: ��*� ��� ��� ��� ���� ����� � �� � ���� � ��� � �2"����� ������� "��� � ���� ������ �� #-:�7M ���66�,% ���� � ����� �� ���� ����� � ������ �����"����� � ����� � ���� ���� �� ��������� ,���������� M$!�(� �: 8M� �� G7��0� ��� ���� � ��2������ � ������ � ����� � ���� �� ���� ����������� � ��������� ������� ��� ��� ������8!�M� �""���� � � �� � ������ ������ �"�������� �� � " ������� � ������ � � ����� �� � �� �����

���� �� � ��� ���� ������� ����� � ��� �������" "����� "�����" �� � � �������� ���. � ������� ���"������� ������� ,�� ���������� � ����� ��� ���������� ���� � �� ���� �� � ��������� # � � � ������ % �������� �� ��������� /0�� �� � ����� " ��� �"������ ���� ���� �� ����� �������� ��� �������� ���� ������ � �� ���� �� ����� �� ����2����� , ����� ���� � ���������� ������ � ����� ��� ������ ����� ����� "� ��� ����� ���� ����������� �� � / ����� ��������� ���� �� � �� ���� ��� �������2�"����� ������� �������� � ���� ����� ���� � ����� � ������ �� ��� � �� ��� �����2� �� "��������� ���� ��� ����� �� � ����������� �� ������ ����� �� ��� ���� � �� � � �2����� �� �� �������� � " ������� ����� �� ��"������ � � ����� ���� ������� ������ ��

�(;�7&/<2��<�"'

/� ���. ��� � ��� ��������� � � ��� /���;������� � � ������ � C<� ���"��� �� � ��� � �"������������� �� C���� ��=� � � "� ����� ����� ���"����,��.� ��� � ��� �������� ����� � ��� ���������@�� ;� �� I� � ������� � � ����� ���" � ������ �� � � �" ���"����

#<0<#<�(<'

-��� 5G� G��� C� (������ ,,� I���.� � C'@� F ��� �� CB� ����(����� ������� � ��� / ����� ���� �� �� � �� �������� ������� � � �� 7"2��.�� ��" ��� ��������� ��� ����� �� B (�� >����8?�6$J�8��

0��� @�� ' G/� @����=��� B�� (������ �� /���� ;� F��.�� -��@����=��� C;� ����� � ���� � �� ������ ����� ��� � ������ ��

� ��" ��� �� ��" ��� ��������� ��� ���� ������ <��� ��� G��� !!?� :J� 8�

> ����� CF� '������ M0� ��!�� � ������ ����� � ��� >����� '�����H����� ����� F���� � (�� �?�:�J�76�

> ���� @C� 0����� GB� /��� C� C�� >���� -� (�0����� �;� ������������ ������ � � ��� � � ������ ���"��? ������������ ���. ���� ��"����� �� "���� � ���� �� ��������� ������ ���� < N BF��������� :7?�$J��8�

'����� B� ( ���� B� ���$� G���� �� � ��"������? � ����� "������ ��? ����� '� ���� �� ,�� ������ ���� .� G���������? 0������� F����� ;��"��� �7� " �$J 7�

� �� '� ,��=��� O� /��� B� I�� F� 5������ 5� I����2(�=����� -�(���.��� (� (������� '� C ��25����� '� ;� �. F� @ ��� C� (�.�� (�5������� '� '����� 5� � ��� >� *.� O� F������ (�� ���$� � ���� �� � ����������� "� ��� �� ������� � "������ ���� ���������������� �� "��� ��� "�� #/ ����� ���� ��%� <�� >��� �?�7:J�7$�

5����� I,� ����� (� C�� � @'� ����� @>� ���6� ( ������� �� � �������� ��� / ����� ���� ��� C������� ;��� �$?�688J�6!��

(����� 0� B �� �� (�;������ 0� I������ ,� 5���� 0� *�� (B� G�� ;� ;���� �. <� ���� I�" ��� ��� ���� �� ������� �� � � �� " ��� �"���� #��$: >% ����� �� $ � ��� / ����� ��� �� B (��>��� �8?�67J�6!�

*����.� ,� ������ '� O ���.��� ,� ������ ,� ���� /0�� �������� ������ � ��"������� "������? ������� � ��� �������" ��� �"����� ��� ��� ����� ���� ��"����� � ��" ��� ������������ ����� B ������ C�� �� 6$?��J�!�

@ � �� ���� <G� �������" � (� ���6� �����"��� ������� �� �� ����� 2���� � ��� ������� �������� �� B F��������� �6 ?��!6J��!8�

��� � ,�� ' ����� 5� ' ��� �� >�.���� 0� ������� ;� @��� /� >�����=5C� (������ ,� ���$� C������� ���"����� �������� ��������� "������ "�� �� ������� #C�C(*�C% ������ �� ������ � � � ��� ��##������% � �� � � � "�������� ����������� "� ���� '�� ( �>��� �:? � �J � $�

����� @>� F ����� " �� � ('� , ���� @� ����� (� ���$� F�����" ���� �/ ����� ���� �� ����� =� ��� � "���������� ������� ( � F���������:?$8J���

,�.��� 5� �� � '� ,��=��� O�(����=�.� O� *�� B�/������ O� ��� ��5� *.� O� ���� /0�� #/ ����� ���� �� �% �� "� ����? "��� ��2�� ����������� � ����=��� � �� "������ ��������� � �������� ������� ��� �� ��"����� � ��� ����� '�� ( � >��� ��?7!!J7$7�

,��� IG� ���� F���������� ��� ��� �� �������� ����� �? (���� @/�I���� �G� �������� (<� ���� ��� ; �"�������� ����� . ������� � �� <�� O �.? >���� �� F����� ;��"��� �:� " :��J:7��

, ���� @� G�� � -� '� L� 5������ � �� > ��=�� F� F�"�����= " �� � ������������ � �� I������ �� ; ����� C� F ����� " �� �� ('� ����(����� ������ � ��� / ����� ���� �� �� � "����������"������� ( � F��������� 8?:�J7:�

/��� B-� 5 ���.� (� 5����� �C� ���8� � � 2���� �� ��20 �� '�����������? � ������� � ������ �� "��������� ����� � ����������� ����������� (�� ;��� :7? �J ::�

/��� B-� 5 ���.� (� 5����� �C� ���$� ' � � �� �� ��� �02� "������� ������� ������� ������� :�� ��� I �� ? H������ (������

��� (��% �� �� ��,