Upload
others
View
9
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE MEDICINA Y HOMEOPATÍA
SECCIÓN DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACIÓN ESPECIALIDAD EN TERAPÉUTICA HOMEOPÁTICA
“Efecto de Mercurius vivus sobre el crecimiento in
Vitro de Streptococcus pyogenes”
TESINA
QUE PARA OBTENER EL DIPLOMA DE LA ESPECIALIDAD EN TERAPEUTICA HOMEOPATICA
Presenta Jaqueline González Cortés
Asesora: Dra. María de Lourdes Cruz Juárez Co-asesor: C.D. José M. Delgado Ruiz
Agosto 2009
Índice
1. INTRODUCCIÓN..........................................................................................................................................1
1.1 STREPTOCOCCUS PYOGENES .................................................................................................................................. 1 1.1.1. Cepas de Streptococcus β hemolíticos .................................................................................................. 2
1.2. FARINGOAMIGDALITIS ESTREPTOCÓCICA ................................................................................................................. 6 1.2.1. Etiología ................................................................................................................................................ 6 1.2.2. Epidemiología ....................................................................................................................................... 6 1.2.3. Patogenia.............................................................................................................................................. 7 1.2.4. Cuadro Clínico ....................................................................................................................................... 7 1.2.5. Diagnóstico ........................................................................................................................................... 9
1.2.5.1. Diagnóstico Laboratorio ..................................................................................................................................9 1.2.6. Pronóstico ........................................................................................................................................... 10 1.2.7. Tratamiento ........................................................................................................................................ 11
1.3. MERCURIO ..................................................................................................................................................... 11 1.3.1. Historia del uso de Mercurio en la Medicina....................................................................................... 11 1.3.2 Mercurio............................................................................................................................................... 13 1.3.3. Características fisicoquímicas ............................................................................................................. 14 1.3.4. Estado natural y obtención ................................................................................................................. 15 1.3.5. Usos..................................................................................................................................................... 15 1.3.6. Forma de penetración en el organismo, distribución, metabolismo y eliminación (Toxicocinética)... 17 1.3.7. Intoxicación aguda.............................................................................................................................. 18 1.3.8. Intoxicación subaguda ........................................................................................................................ 18 1.3.9. Intoxicación crónica ............................................................................................................................ 19 1.3.10. Efectos teratógenos, mutágenos y cancerígenos.............................................................................. 20 1.3.11. Exploraciones complementarias de acuerdo con la tóxico cinética para establecer el diagnóstico .20 1.3.12. Datos de laboratorio ......................................................................................................................... 21 1.3.13 .Tratamiento ...................................................................................................................................... 22
1.4. HOMEOPATÍA.................................................................................................................................................. 22 1.5. BACTERIOLOGÍA............................................................................................................................................... 25 1.6. EVIDENCIA CIENTÍFICA DE SUSTANCIAS NATURALES SOBRE STREPTOCOCCUS PYOGENES .................................................. 30
2 METODOLOGÍA ......................................................................................................................................... 32
2.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ........................................................................................................................ 32 2.2. JUSTIFICACIÓN................................................................................................................................................. 32 2.3. HIPÓTESIS ...................................................................................................................................................... 33 2.4. OBJETIVOS...................................................................................................................................................... 33
2.4.1. Objetivo General ................................................................................................................................. 33 2.4.2. Objetivos Particulares ......................................................................................................................... 34
2.5. TIPO DE INVESTIGACIÓN .................................................................................................................................... 34 2.6. DELIMITACIÓN DE LA MUESTRA........................................................................................................................... 34
2.6.1. Criterios de inclusión ........................................................................................................................... 34 2.6.2. Criterios de exclusión .......................................................................................................................... 34 2.6.3. Criterios de eliminación....................................................................................................................... 34 2.6.4. Tamaño de la muestra ........................................................................................................................ 35
2.7. MATERIAL Y MÉTODO ....................................................................................................................................... 35 2.7.1. Recursos humanos .............................................................................................................................. 36 2.7.2. Recursos físicos ................................................................................................................................... 36
2.8. MÉTODO........................................................................................................................................................ 37
2.9. RECOPILACIÓN DE DATOS .................................................................................................................................. 44 2.10. RESULTADOS................................................................................................................................................. 44
3.0 DISCUSIÓN ............................................................................................................................................. 46
4. CONCLUSIONES ........................................................................................................................................ 47
5. RECOMENDACIONES Y SUGERENCIAS PARA TRABAJO FUTURO................................................................. 47
6. BIBLIOGRAFÍA .......................................................................................................................................... 50
i
Relación de Figuras y Tablas
Fig. 1 Streptococcus pyogenes 1Fig. 2 Factores de virulencia 3Fig. 3 Enfermedades supurativas y no supurativas 4Fig. 4 Faringoamigdalitis 4Fig. 5 Escarlatina 5Fig. 6 Pioderma 5Fig. 7 Erisipela 5Fig. 8 Fascitis necrotizante 5Fig. 9 Absceso periamigdalino 5Fig. 10 Endocarditis post-estreptococica 5Fig. 11 Faringoamigdalitis en grados diferentes 8Fig. 12 Grafica para medir inhibición de CIM 29Fig. 13 Muller Hinton preparados en placas 36Fig. 14 Caldo de soya Tripticosena 36Fig. 15 Frasco de sangre de carnero 37Fig. 16 Mercurius vivus 37Fig. 17 Inoculación de S. pyogenes ATTC 19615 en Todd Hewitt 38Fig. 18 Esterilización de sensidiscos de papel filtro 38Fig. 19 Ordenamiento de sensidiscos 38Fig. 20 Impregnación de sensidiscos con medicamento homeopático 39Fig. 21 Sensidiscos impregnados 39Fig. 22 Celdas de Espectrofotometría 39Fig. 23 Espectrofotometría 39Fig. 24 Medición de longitud de onda 39Fig. 25 Peso medio de cultivo en polvo 40Fig. 26 Agregación de medio en 250 ml de agua 40Fig. 27 Mezcla de agua con medio 40Fig. 28 Esterilización de preparación 40Fig. 29 Enfriado de mezcla por 20 min 41Fig. 30 Agregar sangre de carnero 41Fig. 31 Mezcla del medio con la sangre de carnero 41Fig. 32 Llenado de placas Petri 41Fig. 33 Medio preparado en cajas Petri 41Fig. 34 Toma de S. pyogenes de Tod Hewitt 42Fig. 35 Inoculo de placas 42Fig. 36 Colocación de sensidicos impregnados 43Fig. 37 Colocación de sensidicos impregnados 43Fig. 38 Crecimiento bacteriano 43Fig. 39 Crecimiento bacteriano sin inhibición 45Fig. 40 Control positivo antibiograma 45 Tabla 1 Factores de virulencia 3Tabla 2 Densidad óptica para espectrofotometría 28Tabla 3 Densidad óptica 39Tabla 4 Rsultados de las 8 muestras usadas en los experimentos 45 Cuadro 1 Clasificación de Streptococcus pyogenes 2
ii
Glosario y Abreviaturas
1. ADNasas: Enzima que hidroliza el ácido desoxirribonucleico.
2. Aglutinación: Proceso de unión en la curación de una herida. Colección de masas celulares o bacterias distribuidas en un líquido producida por sustancias específicas llamadas aglutinas, cuyas moléculas se unen a las células.
3. Antiflogístico: Adj. Antiinflamatorio.
4. Antifagocítico: Proceso en el que se evita la fagocitosis (proceso por el cual
determinadas células embullen y desechan microorganismos y detritus celulares).
5. Antiséptico: Agente que tiende a inhibir el crecimiento y la reproducción de los
microorganismos.
6. Anuria: Incapacidad para orinar, supresión de la producción de orina o excreción urinaria menor de 100 a 250 ml al día.
7. Argentíferos: que contiene plata, mineral argentífero, plomo argentífero.
8. Ataxia: Trastorno caracterizado por la disminución de la capacidad de coordinar
movimientos. Falta o irregularidad de la coordinación especialmente de los movimientos musculares sin debilidad o espasmos de estos.
9. Auríferos: Adj. Que lleva oro (terreno).
10. β lactamasa (betalactamasa): Enzimas cuyo diversos tipos son producidos o
componentes de la mayoría de las bacterias. Pueden inactivar teóricamente todos los antibióticos del grupo de las penicilinas y de las cefalosporinas.
11. Capnofílicos: Dícese de las bacterias que se desarrollan mejor en presencia de
anhídrico carbónico.
12. Calomelanos: Protocloruro de mercurio usado como purgante.
13. Eritrodermia: Afección cutánea caracterizada principalmente por enrojecimiento o eritema.
14. Estreptolisinas: Hemolisina producida por estreptococos del grupo A. Sustancia
filtrable producida por algunos estreptococos que libera hemoglobina de la sangre.
15. Excoriante, excoriación: Pérdida superficial de sustancia que sólo interesa la
epidermis, como la producida por rascadura.
iii
16. Exotoxinas: Toxina microbiana que ejerce una acción fuera e independiente de la bacteria productora y que es posible aislar sin destruir ésta.
17. Faneras: Término general para las producciones aparentes y persistentes de la
piel como el pelo, uñas, etc.
18. Fuerza Vital: espíritu de vida autocrática, que dinámicamente anima al cuerpo material (organismo), gobierna con poder irrestricto, y subordina todas las partes del organismo en admirable y armoniosa operación vital.
19. Gingivitis: Anomalía caracterizada por enrojecimiento, tumefacción y
hemorragia de las encías.
20. Homogenizar: Volver homogéneo.
21. Mononucleosis: Presencia de gran número de leucocitos mononucleares en la sangre.
22. Neutrófilos: Que se tiñe por los colorantes neutros. Leucocito polinuclear de
granulaciones neutrófilas.
23. Opsonización: Proceso por el cual las opsoninas confieren a las bacterias mayor susceptibilidad a la fagocitosis por los leucocitos.
24. Parestesias: Trastorno de la sensibilidad subjetiva, como hormigueos,
adormecimiento, quemazón, etc.
25. Pirogenicidad: Pirógeno: Dícese de cualquier sustancia o agente que tiende a provocar un aumento de la temperatura corporal, como algunas toxinas bacterianas.
26. Proteinuria: Presencia de cantidades excesivas de proteína en orina,
generalmente albumina.
27. Teratógena, teratogénesis: Desarrollo de defectos físicos en el embrión.
iv
Fórmulas
1. AsF6: Hexafluoruro de arsénico
2. Cl-Hg-Cl: Cloruro mercúrico
3. Cl-Hg-Hg-Cl: Cloruro mercuroso
4. Hg: Mercurio
5. Hg (ClO4)2: Perclorato mercúrico
6. Hg (CN)2: Cianuro mercúrico
7. Hg (NO3)2: Nitrato mercúrico
8. HgS: Sulfuro mercúrico
9. LDH: Deshidrogenasa láctica
10. VIH: Virus de Inmunodeficiencia Humana
11. VSG: Velocidad de Sedimentación Glomerular
v
Resumen
En el estudio del Mercurius vivus, medicamento homeopático importante en el
tratamiento de algunas faringoamigdalitis con cuadro clínico característico, se buscó
una posible actividad inhibitoria sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes. Se
realizó estudio por duplicado utilizando el método de difusión, se impregnaron
sensidiscos con Mercurius vivus en cuatro diferentes dinamo-diluciones o potencias
(6c, 12c, 30c y 200c), además se colocaron sensidiscos impregnados unos con
alcohol homeopático y otros con agua destilada como controles negativos,
previamente a su colocación se dejaron evaporar. Como control positivo se colocó
sensidisco con antibióticos para bacterias Gram positivas. Se preparo medio de
cultivo Agar caldo de Soya Tripticasa y se vertió en cajas de Petri, donde
posteriormente fueron sembrada la cepa de la bacteria Streptococcus pyogenes
ATTC 19615, el inoculo fue tomado del medio de cultivo líquido Todd Hewitt, en el
cual se dejo llegar a una concentración bacteriana estandarizada, siguiendo la
técnica de Kirby-Bauer, con una densidad óptica de DO 550 nm = 0.125. Las cajas
de Petri fueron rotuladas para control negativo, positivo y cada potencia de Mercurius
vivus con la que se valoro su efecto. Se colocaron los sensidiscos sobre las siembras
y se incubaron a 37ºC por 18 horas.
Se recogieron resultados 18 horas después, observando un adecuado
crecimiento bacteriano sin existir evidencia de inhibición del mismo con ninguna de
las dinamo-diluciones de Mercurius vivus teniendo el mismo resultado con los
controles negativos, siendo el control positivo el único en manifestar inhibición. Esto
pudo deberse a que la acción de los medicamentos homeopáticos es dinámica y se
vi
manifiesta en el paciente pero no en estudios in vitro, sin embargo se deja abierta la
posibilidad de realizar cambios en el método, el uso de otras bacterias, así como de
otros medicamentos.
vii
Abstract
In the study of the Mercurius vivus, an important homeopathic medicine for the
treatment of some pharyngitis with certain clinical characteristics , an inhibitory
activity over the growth of the Streptococcus pyogenes was searched. Study was
performed in duplicate using the diffusion method, in four different is permeated with
sensidiscos Mercurius vivus in four different dilutions or dynamo-power (6c, 12c, 30c
y 200c), some sensidiscos were treated with homeopathic alcohol and other with
distilled water as a negative control. They were left to evaporation. As a positive
control, was placed sensidisco with antibiotics for Gram-positive bacteria. An Agar
culture with Tripticasa Soy broth was put into Petri cases. A strains of the
Streptococcus pyogenes ATTC 19615 bacteria was cultivated. The inoculum was
take from the liquid culture means Todd Hewitt, which was left to a bacteria
standardized concentration, following the Kirby-Bauer technique, with an optic density
of DO 550 nm = 0.125. the Petri cases were labeled for negative and positive control,
and every potency of Mercurius vivus as well. Sensidiscos were placed on the
planting and incubated at 37 ° C for 18 hours.
As a result and adequate bacteria growth was observed, without evidence of
inhibition with none of the dynamo-dilutions. The same result was obtained with the
negative controls. Only the positive control showed growth inhibition. This could be
because the action of the homeopathic drugs is dynamic and shows in the patient, but
not in vitro studies. Nonetheless, it is possible to change the method of analysis, the
use of different bacteria, and other medicines.
1
1. Introducción
1.1 Streptococcus pyogenes
El género Streptococcus es un grupo formado por diversos cocos gram
positivos que normalmente se dispone en parejas o en cadenas, son ovales o
esféricos de 0.5 a 1.0 µm de diámetro, se caracterizan por formar cadenas largas
cuando se cultivan en caldo, carecen de enzimas citocromo, son inmóviles. La
mayoría de las especies crecen en una atmósfera enriquecida con dióxido carbono
(crecimiento capnofílico, anaerobios facultativos), con metabolismo fermentativo
(hidratos de carbono) en el que producen ácido láctico o fórmico, etanol y CO2. Sus
requerimientos nutricionales son complejos, necesitando para su aislamiento el uso
de los medios enriquecidos con sangre o suero. Su crecimiento óptimo es a 37 °C. Al
contrario que las especies de Staphylococcus, los estreptococos son catalasa-
negativos (Figura 1).
Figura 1. Streptococcus pyogenes
2
1.1.1. Cepas de Streptococcus β hemolíticos
Los es treptococos se clasifican β-hemolíticos y β-no hemolíticos, α no
hemolíticos. Dentro de los β-hemolíticos están los del grupo A (S. pyogenes, S.
anginosus) y los del grupo B (S. agalactiae). Cuadro 1
Clasificación de los estreptococos más frecuentes
Clasificación bioquímica
Clasificación serológica Patrón de hemólisis
S. pyogenes A Beta
Grupo S. anginosus A,C,F,G, no agrupables Beta no hemolítico, ocasionalmente alfa
S. agalactiae B Beta ocasionalmente no hemolítico
S. dysgalactiae C,G Beta
S. bovis D Alfa ocasionalmente no hemolítico
Estreptococos del grupo viridans No agrupable Alfa no hemolítico
S. pneumoniae No agrupable Alfa
Cuadro 1
La virulencia de los estreptococos del Grupo A está determinada por la
capacidad que tienen las bacterias de adherirse a la superficie de las células del
huésped, invadir las células epiteliales, evitar la opsonización y la fagocitosis, y
producir una variedad de toxinas y de enzimas. En la Tabla 1 se enumeran y en la
(Figura 2) se esquematizan los factores de virulencia de Streptococcus pyogenes
(Murray, 2000).
3
Factores de virulencia
Factores de virulencia Efecto biológico
Cápsula Antifagocítica
Ácido lipoprotéico Se une a las células epiteliales
Proteína M Adhesina, antifagocítica, degrada el componente C3B del complemento
Proteínas del tipo M Se une a las inmunoglobulinas M y G y a la α2 –macroglobulinas (inhibidor de la proteasa)
Proteína F Media en la adherencia a las células epiteliales
Exotoxinas pirógenas
Median la pirogenicidad, el aumento de la hipersensibilidad retardada y la susceptibilidad a la endotoxina, la citotoxicidad, la mitogenicidad, inespecífica de las células T, la inmunosupresión de la función de las células B, y la producción de un exantema escarlatiniforme
Estreptolisina S Lisa leucocitos, plaquetas y eritrocitos; estimula la liberación de enzimas lisosomales; no inmunogénica
Estreptosina O Lisa leucocitos, plaquetas y eritrocitos, estimula la liberación de enzimas losomales, inmunogénica
Estreptocinasa Lisa los coágulos sanguíneos, facilita la diseminación de las bacterias a los tejido
ADNasa Despolimeriza el ADN libre de la célula en el material purulento
C5a peptidasa Degrada el componente C5a del complemento
Tabla 1
Figura 2 Factores de virulencia de S. pyogenes
4
El Streptococcus pyogenes clínicamente es causante de muchas
enfermedades supurativas y no supurativas como son (Figura 3) faringitis,
faringoamigdalitis (Figura 4), escarlatina (Figura 5), pioderma (Figura 6), erisipela
(Figura 7), fascitis necrotizante (Figura 8), abscesos periamigdalinos (Figura 9),
Síndrome de shock tóxico estreptocócico, sepsis puerperal, bacteriemia, endocarditis
(Figura 10), fiebre reumática, glomerulonefritis.
Figura 3 Enfermedades supurativas y no supurativas
Figura 4 Faringoamigdalitis
5
Figura 5 Escarlatina Figura 6 Pioderma
Figura 7 Erisipela Figura 8 Fascitis necrotizante
Figura 9 Absceso periamigdalino Figura 10 Endocarditis postestreptocica
6
1.2. Faringoamigdalitis estreptocócica
La mayoría de las faringitis tiene un origen probablemente viral. Muchos se
asocian al resfriado común. La causa bacteriana de la faringitis más frecuente es el
estreptococo del Grupo A (Streptococcus pyogenes). Este microorganismo es
responsable del 15% de los casos de faringitis y puede ocasionar complicaciones
importantes tanto supurativas (absceso perimigdalar y retrofaringeo) como no
supurativas (escarlatina, síndrome del shock tóxico por estreptococos, fiebre
reumática, glomerulonefritis postestreptocócica aguda) (Harrison, 1998).
1.2.1. Etiología
Los estreptococos son bacterias gram positivas de forma esférica u ovoidea
que de forma característica forman cadenas cuando crecen en medios líquidos. Son
anaerobios facultativos aunque algunos son anaerobios estrictos. Es la única
especie que pertenece al Grupo A y se caracteriza por ser β hemolítico (Harrison,
1998).
1.2.2. Epidemiología
La faringitis producida por S. pyogenes es una enfermedad fundamentalmente
de niños entre 5 y 15 años, aunque los lactantes y adultos también son susceptibles.
El patógeno se extiende de persona a persona a través de gotitas respiratorias. El
hacinamiento como el caso de las aulas y las guarderías, aumentan las
oportunidades que tiene el microorganismo de diseminarse, fundamentalmente en
7
los meses de invierno (Murray, 2000). Es responsable de entre el 20% y el 40% de
los casos de faringitis exudativa (Harrison, 1998).
1.2.3. Patogenia
Los estreptococos de Grupo A elaboran un cierto número de componentes
superficiales y productos extracelulares importantes tanto para la patogenia de la
infección como para la respuesta inmunitaria del huésped humano. La pared celular
contiene un antígeno de carbohidratos, la reacción de estos extractos con el
antisuero específico del Grupo A es la base de la identificación definitiva de S.
pyogenes. Las moléculas de proteínas M se relacionan con la capacidad de la cepa
de resistir la fagocitosis en sangre, también interfiere la activación del complemento y
el depósito de fragmentos opsónicos del complemento sobre la célula bacteriana.
Los estreptococos del Grupo A originan un elevado número de productos
extracelulares que pueden ser importantes en la toxicidad local y sistémica y en la
diseminación de la infección por los tejidos. Entre estos productos se incluyen las
estreptolisinas S y O, toxinas que lesionan las membranas celulares y que son
responsables de la hemólisis que producen estos microorganismos; la
estreptocinasa, ADNasas, proteasa; y las exotoxinas pirógenas A, B y C (Harrison,
1998; Murray, 2000).
1.2.4. Cuadro Clínico
El periodo de incubación es de 1 a 4 días. Un porcentaje de los casos
permanecen asintomáticos, otros presentan sólo fiebre o faringitis leve (similar a la
8
faringitis vírica) o desarrollan síntomas inespecíficos como cefalea, malestar general,
náuseas, vómitos (especialmente en niños) o taquicardia (Harrison, 1998). En los
niños también se ha observado la presencia de exantema escarlatiforme (fino,
eritematoso, en piel de lija) (Strange, 2000).
Los síntomas y signos son bastante variables, desde una leve molestia de
garganta con mínimos hallazgos en la exploración, hasta fiebre alta e intenso dolor
faríngeo, con eritema llamativo, tumefacción de la mucosa faríngea y la presencia de
un exudado purulento sobre la parte posterior de la faringe y los pilares amigdalinos
(Figura 11) (Merck, 2000).
Frecuentemente se encuentran adenopatías cervicales y submaxilares
incrementadas de tamaño e hipersensibles acompañando a la faringitis exudativa
(Harrison, 1998; Merck, 2000).
Figura 11 Faringoamigdalitis en grados diferentes
9
1.2.5. Diagnóstico
El diagnóstico diferencial de la faringitis estreptocócica incluye las otras
muchas causas bacterianas y virales. Entre otras infecciones que causan faringitis
exudativa figuran la mononucleosis infecciosa y la infección por adenovirus, entre
causas de faringitis sin exudado, figuran los virus coxackie, de la gripe, micoplasmas
o Neisseria gonorrhoeae, así como la infección aguda por VIH (Harrison, 1998).
1.2.5.1. Diagnóstico Laboratorio
El cultivo faríngeo sigue siendo el método fundamental en el diagnóstico de la
faringitis estreptocócica. Cuando se toma (con hisopo estéril enérgicamente sobre
ambos pilares amigdalinos) y se procesa correctamente, el cultivo faríngeo es el
medio más sensible y específico de realizar el diagnóstico definitivo.
La VSG (Velocidad de Sedimentación Glomerular) suele ser >50 mm/h en la
infección aguda, con cifras de leucocitos entre 12.000 y 20.000/ml, y 75% a 90% de
neutrófilos, muchos de ellos formas jóvenes. La orina no muestra en general
anomalías específicas, excepto las atribuibles a la fiebre (p. ej., proteinuria) (Merck,
2000).
La presencia de estreptococos en muestras tomadas de la zona infectada
(faringe, heridas de piel, secreciones, etc.) se puede demostrar mediante incubación
durante una noche en placa de agar sangre de carnero o, para los gérmenes del
Grupo A, por tinción inmediata con anticuerpos fluorescentes.
10
Actualmente se dispone de reactivos de diagnóstico rápido de estreptococos
mediante aglutinación en látex o inmunoensayo enzimático (Strange, 2000). El
método de anticuerpos fluorescentes evita la necesidad de pruebas serológicas para
diferenciar entre estreptococos del Grupo A y otros estreptococos b-hemolíticos, pero
son frecuentes las falsas reacciones positivas con estafilococos hemolíticos (Merck,
2000).
1.2.6. Pronóstico
La evolución habitual de la faringitis estreptocócica no complicada es la
resolución de los síntomas trascurridos entre 3 y 5 días. El curso se acorta
ligeramente para evitar las complicaciones supurativas y la fiebre reumática.
Las complicaciones supuradas de la faringitis estreptocócica se han hecho
infrecuentes con el uso generalizado de antibióticos en la mayoría de los casos.
Estas complicaciones aparecen como resultado de la diseminación de la infección a
partir de la infección a partir de la mucosa faríngea a tejidos más profundos tanto por
extensión directa como por diseminación hematógena o linfática.
Se debe considerar la posibilidad de que existan complicaciones locales, como
la formación de un absceso en el espacio periamigdalino o parafaríngeo en pacientes
que presentan síntomas inusualmente intensos o prolongados o que presentan un
dolor localizado asociado a fiebre elevada y aspecto de toxicidad.
11
1.2.7. Tratamiento
El tratamiento alopático consiste en administración de antibiótico según la
sensibilidad del streptococcus pyiogenes.
1.3. Mercurio
1.3.1. Historia del uso de Mercurio en la Medicina
El Mercurio es un elemento conocido desde la antigüedad. Los
descubrimientos en las tumbas faraónicas prueban que los egipcios ya lo empleaban,
y hay referencias de que se extraía mercurio de las minas de Kwichan, en China
hacia el año 1200 a.C. Los fenicios, setecientos años antes de la era cristiana, lo
utilizaban para extraer y purificar el oro. Aristóteles (384-322 a.C.) fue el primero en
mencionar el empleo profesional del metal.
Dioscórides, grabador griego del siglo I a.C. lo llamó hydrargyros (planta
líquida) término del que se deriva el símbolo químico actual Hg. El latino Plinio, en su
Historia naturalis, lo designó con el nombre de argentum vivum, es decir, planta viva.
Los árabes lo conocían como azoc, que significa movimiento, y de ahí el término
azogue con que también se conoce.
En el siglo XVII se acostumbraba a relacionar los metales conocidos con los
planetas y el azogue por sus características de movimiento se le relacionó con
Mercurio, nombre que ha prevalecido hasta la actualidad.
12
Su verdadero carácter metálico fue definitivamente admitido en 1759, año en
que Braun lo encontró en estado sólido durante un riguroso invierno en San
Petersburgo, en que la temperatura descendió por debajo de los -39°.
La introducción del Mercurio en la Medicina se debe a los árabes, quienes lo
utilizaban en aplicaciones externas contra la lepra, su utilización como medicamento
interno parece provenir del XV y se le atribuye a J. Widman cuyo tratado sobre la
sífilis apareció en 1497. Empleado desde entonces en las más diversas
enfermedades ha sido considerado hasta nuestros días como el específico de la
sífilis, aunque recientemente ha tenido que ceder parte de su dominio a los
arsenobenzoles. No obstante, se consideró como un medicamento de gran valor
como antisifilítico, antiséptico y antiflogístico (Uribe, 1990). Como anti-luético
actualmente ya no se le emplea, pero aún es útil como antiséptico y antiflogístico en
algunos casos.
El Mercurio es un metal blanco plateado, muy brillante, líquido a temperatura
ordinaria y extremadamente móvil. En la naturaleza se lo encuentra raramente en
estado natural, más bien se halla en estado de sulfuro rojo de Mercurio o cinabrio.
Este mineral que se presenta en masas cristalinas de un rojo vivo, se encuentra y es
explotado en España y California (Lathoud, 2003), en nuestro país lo hay en Sonora,
Chihuahua, Durango, Zacatecas, Nuevo León, San Luis Potosí, Nayarit, Jalisco,
Guanajuato e Hidalgo (Mendiola, 1974). Para obtenerlo se tuesta el cinabrio en
horno especial, se forma entonces ácido sulfuroso y mercurio que se condesa en
compartimientos dispuestos entre horno y chimenea, y por ésta escapa el ácido
13
sulfuroso. Las tres primeras dinamizaciones se preparan por trituración
Hahnemanniana. Las dinamizaciones más elevadas se obtienen por nuevas
trituraciones, o por procedimientos de trituración habitual (Lathoud, 1974).
1.3.2 Mercurio
Elemento químico, símbolo Hg, número atómico 80 y peso
atómico 200.59. Es un líquido blanco plateado a temperatura
ambiente (punto de fusión -38.4ºC o -37.46ºF); tiene su punto
de ebullición de 357ºC (675.05ºF) a presión atmosférica. Es
un metal noble, soluble únicamente en soluciones oxidantes.
El Mercurio sólido es tan suave como el plomo. El metal y sus compuestos son muy
tóxicos. El mercurio forma soluciones llamadas amalgamas con algunos metales (por
ejemplo: oro, plata, platino, uranio, cobre, plomo, sodio y potasio).
La tensión superficial de mercurio líquido es de 484 dinas/cm, seis veces
mayor que la del agua en contacto con el aire. Por consiguiente, el Mercurio no
puede mojar ninguna superficie con la cual esté en contacto. En aire seco el Mercurio
metálico no se oxida, pero después de una larga exposición al aire húmedo, el metal
se cubre con una película delgada de óxido. No se disuelve en ácido clorhídrico libre
de aire o en ácido sulfúrico diluido, pero sí en ácidos oxidantes (ácido nítrico, ácido
sulfúrico concentrado y agua regia).
14
1.3.3. Características fisicoquímicas
El Mercurio es el único metal líquido a la temperatura ambiente y presión
ordinaria. De aspecto blanco plateado brillante, goza de gran movilidad a pesar de su
elevada densidad.
En sus compuestos, el Mercurio se encuentra en los estados de oxidación 2+,
1+ y más bajos; por ejemplo, HgCl2, Hg2Cl2 o Hg3 (AsF6)2. A menudo los átomos de
mercurio presentan dos enlaces covalentes; por ejemplo, Cl-Hg-Cl o Cl-Hg-Hg-Cl.
Algunas sales de mercurio (II), por ejemplo, Hg (NO3)2 o Hg (ClO4)2, son muy
solubles en agua y por lo general están disociadas. Las soluciones acuosas de estas
sales reaccionan como ácidos fuertes a causa de la hidrólisis que ocurre. Otras sales
de Mercurio (III), como HgCl2 o Hg (Cn)2, también se disuelven en agua, pero en
solución sólo están poco disociadas. Hay compuestos en que los átomos de mercurio
están directamente enlazados a átomos de carbono o de nitrógeno; por ejemplo,
H3C-Hg-CH3 o H3C-CO-NH-Hg-NH-CO-CH3. En complejos, como K2 (HgI4), a
menudo tiene tres o cuatro enlaces.
El Mercurio se encuentra comúnmente como su sulfuro HgS, con frecuencia
como rojo de cinabrio y con menos abundancia como metal cinabrio negro. Un
mineral menos común es el Cloruro de Mercurio. A veces los minerales de Mercurio
contienen gotas pequeñas de Mercurio metálico.
15
1.3.4. Estado natural y obtención
Aunque el Mercurio se encuentra libre en la naturaleza en pequeñas
cantidades, se extrae principalmente del cinabrio (sulfuro de Mercurio), pero también
forma parte de diversos minerales (riolita, serpentina, andesita).
Los principales yacimientos se encuentran en España (Almadén), Italia,
Yugoslavia, Rusia, Estados Unidos y la India. De España se extrae
aproximadamente el 50% de la producción europea y el 25% de la mundial
(Mercadal, 1993).
1.3.5. Usos
Las aplicaciones industriales del Mercurio y sus compuestos minerales
orgánicos son muy diversas. Se emplea en el tratamiento de minerales auríferos y
argeníferos. En la fabricación y reparación de termómetros, barómetros, bombas de
Mercurio, lámparas de incandescencia, lámparas radiofónicas, tubos radiográficos,
rectificadores de corriente y otros aparatos similares (Mercadal, 1993).
El principal uso del Mercurio es en la manufactura de instrumentos de control,
tubos, rectificadores, termómetros, barómetros, baterías y aparatos eléctricos. Se
utiliza en celdillas de salmuera para la producción electrolítica de cloro y sosa
cáustica, y como catalizador en espuma de poliuretano (LaDou, 1980).
Se utiliza el Mercurio o sus compuestos como catalizadores para ciertas
síntesis, como la del aldehído acético o la del alcohol sintético. En la electrólisis de
los cloruros de álcalis (cloro y sosa cáustica) actúa de electrodo.
16
En la fabricación de pigmentos y pinturas anticorrosivas a base de cinabrio. En
la preparación de amalgamas y compuestos del Mercurio. En la preparación de
fieltros. En el dorado, plateado, estañado, bronceado y masquinado de metales.
En la preparación de fungicidas para la conservación de los granos y también
para evitar la proliferación de limo en la pasta de papel. Para la fabricación de cebos
de fulminato de Mercurio y fuegos artificiales.
Así mismo se emplea en las prótesis dentales, en algunos procesos de
taxidermia. En la fabricación de seda artificial a base de cloruro de Mercurio. En
ciertos trabajos de laboratorio fotográfico.
En la industria farmacéutica su uso casi es histórico: preparación de
calomelanos, mercurocromo, diuréticos mercuriales, etc. (Mercadal, 1993).
Exposición laboral y ambiental
Todos los trabajadores que participan en la extracción y recuperación de
Mercurio tienen un riesgo de exposición a sus vapores. El trabajo de mantenimiento
en hornos, cañones de chimenea y retortas es una fuente potencial de exposición.
Los trabajadores que manufacturan equipo eléctrico que requiere Mercurio
pueden exponerse por escape o manejo descuidado. Los trabajadores que
recuperan metales llegan a exponerse al Mercurio y otros metales pesados. Puede
ocurrir exposición elevada en corto plazo durante ciertos procedimientos dentales.
17
Han ocurrido varias epidemias por envenenamiento con Mercurio orgánico
resultado de la contaminación ambiental por escapes industriales y uso inadecuado
de fumigantes de granos. Se han observado envenenamientos con compuestos de
Mercurio alquilo.
La contaminación con Mercurio inorgánico del aire y agua por la combustión
de carbón y en plantas de cloro ha tenido consecuencias menos espectaculares,
pero ha sido una fuente importante de antecedentes de exposición (LaDou, 1980).
1.3.6. Forma de penetración en el organismo, distribución, metabolismo y
eliminación (Toxicocinética)
La principal vía de absorción profesional es la respiratoria (polvo o vapores).
La vía cutánea, aunque poco frecuente, es posible cuando el Mercurio se halla
finamente dividido e incorporado a una grasa en forma de pomada, en especial si
existen lesiones de la piel.
El Mercurio inorgánico, una vez absorbido, pasa al torrente circulatorio y es
trasportado preferentemente por las fracciones proteicas del plasma, el Mercurio
orgánico que lo es por los hematíes. Atraviesa fácilmente por las membranas
celulares y se deposita en el hígado, intestinos, riñones, tejido nervioso, vísceras en
general y en las faneras (pelos y uñas).
Una parte del Mercurio inhalado se elimina por el aire espirado y el resto por
orina y en menor cuantía por las heces, saliva y sudor (Mercadal, 1993).
18
1.3.7. Intoxicación aguda
La intoxicación aguda por el Mercurio metal es poco frecuente en el medio
industrial. Si la vía de penetración es la respiratoria, aparece traqueobronquitis y
posteriormente bronconeumonía. Si el acceso es digestivo, provoca nausea y
diarrea.
Reviste mayor gravedad la ingestión accidental de sales mercúricas. Su
carácter cáustico provoca lesiones ulcerosas en la boca y el esófago, vómitos
profusos, diarreas, melenas y deshidratación. También se observa un cuadro de
insuficiencia renal anúrica por nefrosis tubular necrótica con intensa uremia, que
puede evocar a la muerte de 8 a 12 días.
En otros casos, el óbito se produce en un plazo de 24 horas por shock grave o
por complicaciones de tipo respiratorio. En los episodios no fatales la recuperación
suele ser total.
El tratamiento será el de las tubulopatías anúricas, prestando especial
atención al equilibrio hidroelectrolítico y recurriendo a técnicas de depuración renal si
es preciso. Para la eliminación especifica del tóxico, debe administrarse 2 a 3
dimercaptopropanol (BAL) con la mayor rapidez posible (Mercadal, 1993).
1.3.8. Intoxicación subaguda
También infrecuente en el medio laboral, acostumbra a ser el resultado de una
intoxicación medicamentosa, generalmente por calomelanos (cloruro mercuroso), y
19
se caracteriza por la aparición de nefritis, alteraciones digestivas (estomatitis,
enteritis) y cutáneas (eritrodermia mercurial) (Mercadal, 1993).
1.3.9. Intoxicación crónica
Constituye el dominado Hidrargirismo y es la forma más habitual de la
intoxicación profesional. En una primera fase (periodo de absorción) aparecen signos
poco precisos, anorexia, astenia, cefalea, vértigos, insomnio, dolores en los
miembros y masticación dolorosa. El periodo de intoxicación propiamente dicho se
caracteriza por:
• Alteraciones digestivas: nauseas, vómitos y diarreas, estomatitis mercurial
(sialorrea, hipertrofia de glándulas salivales, gingivitis, ulceraciones de mucosa
oral, en encías un ribete gris azulado).
• Alteraciones oculares: se puede detectar un reflejo parduzco en la cápsula
anterior del cristalino (signo de Akitson), constituye un signo precoz de
intoxicación mercurial. Escotomas de restricción concéntrica del campo
visual, dato patognomónico de la intoxicación mercurial.
• Alteraciones del sistema nervioso: Son las más importantes. Trastornos
psíquicos: irritabilidad, tristeza, ansiedad e insomnio, temor y depresión
(eretismo mercurial). Puede evolucionar a la demencia y a la caquexia. El gran
síntoma del hidrargirismo es el temblor. Suele iniciarse en la lengua, labios,
párpados y dedos, en forma de temblor fino. En cara se producen tics. Este
temblor, con características típicas del temblor de origen cerebeloso, se
asocia frecuentemente a ataxia, adiadococinesia, marcha cerebelosa y en
20
ocasiones nistagmos. Son poco frecuentes las contracciones dolorosas. El
temblor parece guardar relación con la gravedad de intoxicación y la
concentración del Mercurio en los tejidos.
• Otras alteraciones: Dermografismo. Dermatitis de contacto, papulosas e
hiperqueratosicas, así como rinitis y conjuntivitis (Mercadal, 1993).
1.3.10. Efectos teratógenos, mutágenos y cancerígenos
Aunque el Mercurio puede atravesar la barrera placentaria y producir
intoxicación en el feto, no está clara su posible acción teratógena. En trabajadores
expuestos al Mercurio se dan casos de oligoespermia y de esterilidad atribuibles a la
inhibición de la síntesis del ADN en los testículos. Los producen tanto el mercurio
inorgánico como el orgánico. Todos los derivados mercuriales tienen capacidad
mutágena, pero hasta la fecha no se ha podido demostrar acción cancerígena
(Mercadal, 1993).
1.3.11. Exploraciones complementarias de acuerdo con la tóxico cinética
para establecer el diagnóstico
El diagnóstico clínico no suele presentar dificultades cuando se ha realizado
una buena anamnesis laboral. Pueden surgir problemas de diagnóstico diferencial
con ciertas formas de esclerosis en placas. Es necesario recurrir entonces a la
punción lumbar, que en caso de intoxicación mercurial no revelará ninguna alteración
en el líquido cefalorraquídeo (Mercadal, 1993).
21
Mercurio inorgánico:
• Insuficiencia respiratoria aguda
• Gingivitis
• Temblor
• Eretismo (Timidez, labilidad emocional)
• Proteinuria, insuficiencia renal
Mercurio orgánico (compuestos de Mercurio alquilo):
• Trastornos mentales
• Ataxia, espasticidad
• Parestesias
• Trastornos visuales y auditivos
1.3.12. Datos de laboratorio
El diagnóstico se basaba hasta hace poco en la determinación del Mercurio
excretado por la orina durante 24 horas, pero actualmente, es posible determinar el
Mercurio en sangre (espectrometría de absorción atómica). Como prueba específica
puede tener interés la determinación de la lacticodeshidrogenasa (LDH) urinaria, que
con la exposición al Hg puede estar aumentada mientras es normal en suero, y la
determinación de la aminoaciduria (Mercadal, 1993).
22
1.3.13 .Tratamiento
Después de exposición aguda al Mercurio, debe instituirse el tratamiento
inmediato con dimercaprol (5 mg/kg intramuscular). Las insuficiencias respiratoria y
renal deben de tratarse de manera adecuada. En el envenenamiento agudo también
es eficaz la penicilamina (LaDou), aunque es controversial debido a las reacciones
secundarias (Mercadal, 1993).
Los mejores resultados se obtienen con el BAL (2-3 dimercaptopropanol,
sustancia para combatir las intoxicaciones por arsénico y algunos metales) por vía
intramuscular, a dosis de 250 mg durante periodo de 15 días, hasta la completa
remisión de los síntomas. Como medidas coadyuvantes para el tratamiento del
temblor, se administrará vitamina B6 y sedantes (Mercadal, 1993). Las secuelas
neurológicas del envenenamiento por Mercurio alquilo son irreversibles, resaltando
así la necesidad de prevenirlos (LauDou, 1980).
1.4. Homeopatía
La OMS (Organización Mundial de la Salud) establece que la Homeopatía es
el segundo sistema médico más utilizado a nivel internacional, puesto que se
destinan más de mil millones de dólares para este tipo de terapia (Tierney, 1998). Ha
sido causa de gran debate tanto la elaboración de los medicamentos homeopáticos
como la práctica de la misma. La homeopatía es una terapéutica médica utilizada en
los últimos 200 años “perfectamente simple manteniéndose firme en sus principios
(primon non nose, ley de semejante, dosis mínima, individualidad morbosa,
23
individualidad medicamentosa, experimentación pura, dinamismo vital) como en su
práctica” (Organón de la Medicina, 5ª y 6ª edición). La cual busca restablecer la salud
de una forma rápida, suave y permanente (§ 2, Organón de la Medicina).
La homeopatía sabe que las enfermedades no son causadas por sustancia
alguna, ni por ninguna acrimonia, es decir, ninguna materia-enfermedad, sino que
son solamente desórdenes (dinámicos) del principio vital que anima al cuerpo
humano. Así como también sabe que una curación sólo puede ser realizada por la
reacción de la fuerza vital provocada por la administración del remedio correctamente
elegido, y que la curación será segura y rápida en proporción a la fuerza con que la
fuerza vital se mantenga en el paciente. De aquí que la homeopatía evite todo cuanto
debilita aún el más ínfimo grado, y únicamente emplea en la curación a aquellas
medicinas cuya facultad de alterar y deteriorar (dinámicamente), a la salud le sea
conocida con certeza y de entre éstas selecciona una cuyo poder patógeno (su
enfermedad medicinal) sea capaz de eliminar por similitud (similia similibus), a la
enfermedad natural en cuestión y la administra al paciente en forma simple en pocas
y diminutas dosis que sean suficientes para eliminar la enfermedad natural (Prefacio
6ª edición, Organon).
Los principios fundamentales de la homeopatía son completamente diferentes
de la medicina moderna, la farmacología y la química. La homeopatía cuenta con 3
premisas muy importantes: ley de los similares, individualidad de la terapia en
sentido amplio de los síntomas y la utilización de muy pequeñas dosis (Johson,
2007).
24
Es muy bien sabido que en homeopatía contamos con medicamentos útiles
para el tratamiento de cuadro faríngeo y/o amigdalino, uno de los que pueden ser
utilizados es Mercurius vivus, nosotros los homeópatas nos basamos en la
sintomatología (en la totalidad de los síntomas) del paciente y así compararla con
una serie de datos para encontrar el medicamento más adecuado respetando la ley
de los semejantes (similares).
Dentro de la patogenesia de Mercurius vivus encontrada en la bibliografía nos
dice que a nivel faríngeo puede haber dolor punzante, excoriante o ardiente, que
agrava al tragar, de noche, por el frío o por hablar, el dolor se extiende hasta oído,
tendencia a supuración, ulceración y destrucción de tejidos en este caso de faringe,
el moco es verde algunas veces con estrías de sangre, hay sialorrea fétida, sabor
metálico, ganglios cervicales dolorosos, así como sensación de cuerpo extraño en la
garganta, hay hinchazón y enrojecimiento de garganta o es de color cobrizo o
púrpura con acumulación de mucosidades espesas y adherentes (Vijnosvky, 1978).
El estado general del paciente se agrava, se encuentra con fiebre poco
elevada, transpiración abundante por la noche. Localmente la faringe está inflamada,
amígdalas y regiones periamigdalinas tienen un color “rojo oscuro” con una o varias
ulceraciones poco profundas, salivación profusa y fétida con necesidad de deglutir
constante y se acompaña de “dolores agudos” (Varnnier, 1957, 2004).
Hay que recordar que el Mercurio fue experimentado homeopáticamente por
primera vez por el Dr. Samuel Cristiano Federico Hahnemann, a partir del óxido
negro de Mercurio o Mercurio soluble (de ahí su nombre en latín Mercurius solubilis).
25
El mercurio actúa sobre todos los tejidos pero de manera especial el sistema
linfático, la sangre, las mucosas, las glándulas, la piel, el sistema nervioso, el
periostio, los huesos largos, el riñón, el hígado y los intestinos.
Y es en la Medicina Homeopática donde tiene preciosas indicaciones, en
unión de gran parte de sus óxidos y sales que constituyen el gran grupo
medicamentoso de los mercuriales (Mendiola, 1974).
Los sinónimos con los que encontramos a Mercurius vivus son Mercurio
soluble de Hahnemann. Hydrargirum oxidulatum nigrum ammoniatum,
Dimercurosammonium nitrate. Oxido negro de Mercurio (Uribe, Farmacopea
Mexicana). Otros sinónimos, Mercurio vivo. Mercurio metálico. Azogue. Plata viva Hg
(Mendiola, 1947).
La preparación homeopática de este mineral es por medio de la regla 7 de
preparación homeopática:
Regla 7 Trituración de sustancias sólidas.- Las trituraciones se obtienen por
divisiones sucesivas de la sustancia base incorporando lactosa como vehículo.
Colocar en un mortero, de preferencia mecánico y otra máquina similar, una parte de
la sustancia por dinamizar, finamente pulverizada y noventa y nueve partes de
lactosa. Tritura por espacio de una hora y media o hasta obtener la fineza y
homogeneidad requeridas. La trituración obtenida constituye la trituración 1C
(Farmacopea, SEP,).
1.5. Bacteriología
26
El cultivo y aislamiento de Streptococcus pyogenes deberá de realizarse en
medios con pH entre 7.0-7.4 con sangre de carnero y CO2 entre 5%y 10%. No se
debe descartar la existencia de especies exigentes que requieren de nutrientes y
condiciones atmosféricas más estrictas CO2 más N2 entre 85-90%. La temperatura
óptima es de 35-37ºC. La inmunofluorescencia se hace a partir de un cultivo en caldo
Todd Hewitt o caldo cerebro corazón (BHI), incubando a 37ºC durante 4 horas (Cona,
2002).
Existen dos técnicas o métodos por los que se puede realizar ese estudio son
el Método de difusión y el Método de dilución (K. Bosio, C. Avanzini, A. D’Avolio, O.
Ozino and D. Savoila, 2000).
Método de dilución
El método de dilución se lleva acabo mezclando (el momento de la
preparación del medio de cultivo que contenga 5% sangre de carnero) el
medicamento (a estudiar o experimentar) para posteriormente formar las placas en
las que se hará la siembra de bacteria en estudio, posteriormente se incuba a 37°C,
de 24 a 48 horas. En una atmósfera de CO2 al 5%, para posteriormente realizar la
medición de halo de inhibición (de haberlo), recolección de datos, análisis
estadísticos de los datos arrojados y reporte de resultados.
27
Método de difusión
Este método se realiza mediante la colocación de sensodiscos impregnados
con el medicamento de estudio a diferente sobre placas de medio de cultivo base en
sangre ya sembrados con la bacteria. Al igual que con el método de dilución se
incubarán a 37°C, de 24 a 48 horas. En una atmósfera al 5% de CO2, también se
realizarán mediciones de la posible inhibición, recolección de datos, análisis
estadísticos de los datos arrojados y reporte de resultados.
McFarland Standard es una serie de patrones de turbidez directa que permite
realizar una estimulación de la densidad de las sustancias microbianas. Estos
patrones están designados por el número de los tubos de la escala descrita por
McFarland. El principio de esta prueba es la comparación de la densidad de la
suspensión microbiana con una ampolla de turbidez conocida y que tiene el mismo
diámetro.
Técnica:
• Tomar el patrón elegido como referencia
• Preparar una suspensión bacteriana en una ampolla del mismo diámetro
(homogenizar bien)
• Agitar lentamente la ampolla
• Comparar la turbidez colocando dos ampollas delante de un fondo negro o
un espectrofotómetro
28
• Si es necesario ajustar la suspensión bacteriana, agitar de nuevo el patrón
antes de proceder a una nueva comparación.
• La interpretación de dichas equivalencias se hace por medio de la siguiente
tabla:
Densidad óptica para espectrofotometría
Patrón Concentración Bacteriana (1) X 10²/Ml
Densidad Optica Teórica (2) A 550 Nm
0.5 150 0.125 1 300 0.25 2 600 0.50 3 900 0.75 4 1200 1.00 5 1500 1.25
Tabla 2
• La concentración bacteriana varía con el tamaño de los microorganismos.
Las cifras indicadas representan una media variable para las bacterias
• Los valores corresponden a las densidades ópticas de las suspensiones
bacterianas
La determinación de la susceptibilidad de los microorganismos in vitro, debe
realizarse con métodos estandarizados de laboratorio y aprobados en estudios
colaborativos, como el de Kirby-Bauer que quedó asentado en los documentos de la
NCCLS M2-T4 de 1988 y M-2 A-5 de 1994. Los métodos incluidos en el documento
M100-S9 de 1999 son los que se emplean actualmente como patrones de referencia
(Giono, 2003).
29
El Método de Kirby-Bauer determina el crecimiento rápido de bacterias
utilizando discos de papel filtro y practicar la determinación de beta lactamasa. El
fundamento de la prueba de susceptibilidad de Kirby-Bauer es la utilización de discos
de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano, de esta manera se
obtienen halos que corresponden a la zona de inhibición cuyos diámetros se miden
en mm y son proporcionales a la concentración inhibitoria mínima (CMI) (Giono,
2003).
Si se grafica el diámetro de la zona de inhibición, contra el logaritmo de la
CMI, se obtiene casi siempre una recta que constituye una línea de regresión que
puede ser calculada matemáticamente (Figura 12).
R= Resistencia I= Susceptibilidad Intermedia S= Susceptibilidad
Figura 12 Grafica para medir inhibición de CIM
30
La interpretación de los términos sensible, intermedio y resistente, se obtiene
de la línea de regresión cuya pendiente depende de cada antibiótico y varía para
cada grupo de microorganismos.
1.6. Evidencia científica de sustancias naturales sobre
Streptococcus Pyogenes
Existe evidencia científica del efecto antibacteriano de sustancias o principios
naturales, en forma particular aceites esenciales derivados de plantas (Larrono et al.
1995; Nelson 1997; Cosentino et al 1999; Mangena y Muyima 1999) y propóleos,
sustancia resinosa natural o cérea recogida por las abejas a partir de exudados y
secreciones de árboles (Marcucci 1995, Cheng y Wong 1996; Park y Ikegaki 1998);
como ejemplo de este ultimo mencionare la información publicada en el artículo “In
Vitro activity of propolis against Streptococcus pyogenes” donde se demostró la
inhibición de crecimiento in vitro de Streptpcoccus pyogenes utilizando 2 extractos de
propóleos tomados de dos zonas diferentes de Piamonte al noroeste de Italia.
En este estudio recopilaron información de la composición de propóleos y
propiedades antimicrobianas, en donde por lo general se encuentra compuesto, el
50% resina y bálsamo vegetal, el 30% cera, 10% más de aceites aromáticos
esenciales, 5% de polen y 5% de otras sustancias en las que se incluye desechos
orgánicos. Las propiedades antimicrobianas de esta mezcla de sustancias naturales
se le atribuye a los flavonoles pinocembrin, flavonoides galangin y al acido cafeico
fenil éster, con un probable mecanismo de acción de inhibición de la ARN-polimerasa
bacteriana.
31
Los objetivos de dicho estudio fueron la comprobación del efecto
antibacteriano de extractos de propóleos contra Streptococcus pyogenes y la
determinación de la forma más eficaz para lograrlo, las técnicas que se utilizaron son
el Método de dilución y el Método le difusión. Para la determinación de la
concentración mínima inhibitoria (CMI) y concentración mínima bactericida (CMB) de
los dos propóleos se utilizaron estas dos técnicas.
En el método de dilución se realizo en Agar TH y diluciones de serie doble (de
1:2 a 1:8192), de cada extracto se añadieron en el mismo volumen del medio
fundido. Como control se utilizo placas con el medio y etanol. Después del enfriado y
el secado de las placas fueron inoculadas con Streptococcus pyogenes (10 ml de
caldo a O.D. 660=0.5). Las placas se incubaron a 37ºC en 5% de CO2 por 48 horas.
La CMI es la concentración más baja de propóleos que inhibe el crecimiento
bacteriano con visibles halos. La CMB representa la concentración donde el 99.9% o
más del inoculo inicial muere. Todos los ensayos los realizaron tres veces y se
determinaron los valores de CMI y de CMB.
Mientras que por el método de difusión se prepararon placas de 9 mm de
diámetro, con una capa base (6 ml) de agar TH fundido y una capa (15 ml) de medio
inoculado de cultivo de microorganismo conteniendo 108 cfu ml-1. Después de
secado, discos de 6 mm de diámetro fueron remojados con 25 µl del extracto a
diferentes diluciones de propoleo y se colocaron sobre el agar. Se incubo durante 1
día a 37ºC en atmosfera al 5% CO2, la zona de inhibición se midieron. El ensayo se
realizo por triplicado.
32
En donde sus resultados fueron la comprobación de actividad antibacteriana
de extractos propóleos a concentraciones baja. La inhibición del crecimiento se
observo aproximadamente 50% de las cepas por soluciones que contengan 58.5 µg
ml-1 de propóleos, lo que corresponde a 1:2048 dilución del extracto etanólico al
12%. Todas las cepas murieron con 234 µg ml-1 de propóleos, correspondiente a
0.023% de material sólido resinoso. Estudios controlados demostraron que la
cantidad residual de los extractos en etanol inhibió el crecimiento bacteriano solo 1:4
de dilución. Además demostraron que el método de difusión es el que arroja
resultados más claros y de mejor comprobación.
2 Metodología
2.1. Planteamiento del problema
En homeopatía se trata al paciente buscando cumplir con los principios que la
rigen, los cuales son fundamentales para la administración del medicamento, dos de
ellos son la individualidad morbosa y la ley de semejantes.
Identificar si los remedios homeopáticos en bajas potencias son capaces de
inhibir el crecimiento de bacterias causantes de enfermedad y así encaminarnos a
una posible explicación de su mecanismo de acción.
2.2. Justificación
Tomando como referencia la frecuencia de Faringoamigdalitis bacteriana
causada por S. pyogenes y ver la presencia de resistencia al tratamiento
33
antimicrobiano así como a los altos costos de los fármacos, es necesario el
conocimiento de otros tratamientos adecuados tanto en eficacia como en
costo accesible.
No existen estudios sistemáticos sobre el mecanismo de acción de los
remedios homeopáticos.
2.3. Hipótesis
Considerando que Streptococcus pyogenes es una bacteria frecuente en la
faringitis sería importante identificar si el medicamento Mercurius vivus a diferentes
potencias es capaz de inhibir el crecimiento in vitro de dicha bacteria.
Mercurius vivus a diferentes potencias homeopáticas es incapaz de causar
inhibición en el crecimiento in vitro de S. pyogenes debido a que los medicamentos
homeopáticos actúan en el organismo de forma diferente, es decir de forma
dinámica.
2.4. Objetivos
2.4.1. Objetivo General
Determinar la acción de diluciones homeopáticas sobre el crecimiento de
Streptococcus pyogenes in vitro.
34
2.4.2. Objetivos Particulares
a) Valorar grado de inhibición del crecimiento bacteriano en presencia de
sensidiscos impregnados con 10 µl de medicamento Mercurius vivus.
b) Aplicar sensidiscos con y sin alcohol homeopático como control negativo.
c) Aplicar sensidiscos con antibióticos (control positivo) para la observación de
halos de inhibición.
2.5. Tipo de Investigación
El estudio a realizar será de tipo longitudinal, prospectivo y experimental.
2.6. Delimitación de la muestra
2.6.1. Criterios de inclusión
• Cepa Streptococcus pyogenes
• Medios de cultivo sembrados con Streptococcus pyogenes
2.6.2. Criterios de exclusión
• Streptococcus β hemolítico diferente a S. pyogenes
2.6.3. Criterios de eliminación
• Medios de cultivo contaminados o que tengan fisuras
• Medios de cultivo que se hayan sobrepasado el tiempo y temperatura de
incubación
35
2.6.4. Tamaño de la muestra
Se realizaron estudios por duplicado, es decir dos cajas sembradas con cada
dinamo-dilución y 2 por cada control (16 cultivos in vitro de Streptococcus pyogenes),
utilizando como control positivo sensidisco con antimicrobianos y dos controles
negativos uno con agua bidestilada y otro alcohol homeopático 87º.
2.7. Material y método
Los presentes experimentos se realizaron en el Laboratorio de Microbiología,
en la Unidad de Posgrado de la Escuela Nacional de Medicina y Homeopatía;
ubicada en Guillermo Massieu Helguera # 239. Fraccionamiento “La Escalera”,
Ticomán, C.P. 07320 México, D.F., y en los laboratorios de análisis clínicos de la
misma escuela.
a) Verificar medios de cultivo para efectuar siembra homogénea de
Streptococcus pyogenes.
b) Preparar sensidiscos impregnados con Mercurius vivus a diferentes dinamo-
diluciones en los cultivos de Streptococcus pyogenes.
c) Preparar sensidiscos impregnados con alcohol homeopático a los cultivos de
Streptococcus pyogenes, como controles positivos.
d) Destinar otros sensIdiscos secos estériles como controles negativos.
36
2.7.1. Recursos humanos
El Maestro Javier Castillo del laboratorio Clínico de la Escuela Nacional de
Medicina y Homeopatía, se encargó de proporcionar el apoyo necesario tanto en el
material requerido como con su valiosa experiencia para la realización de medios de
cultivo Agar caldo de Soya Tripticasa,
El C.D. José M. Delgado y co-asesor del presente experimento proporcionó
cajas Petri estériles para la realización de medios de cultivo así como la preparación
y adquisición del alcohol homeopático utilizado.
2.7.2. Recursos físicos
El laboratorio apoyó con instrumentos necesarios para realizar la siembra de
los cultivos, como son estufa de cultivo, cajas de Petri estériles, mechero, autoclave,
asas para cultivo, hisopos, guantes, etc.
Los medios de cultivo requeridos fueron adquiridos en los laboratorios
DIBICO, S.A. DE C.V., ubicado en Oriente 182 No. 131 Lote-1, Colonia Santa Cruz
Aviación, México D.F., C.P.15540. Las características del medio de cultivo (Figuras
13, 14 y 15) se observan en el Anexo 1.
Figura 13 Muller Hinton preparado en placas Figura 14 Caldo de soya Tripticaseina
37
Figura 15 Frasco de sangre de cordero Figura 16 Mercurius vivus
El medicamento homeopático en solución Mercurius vivus 6c, 12c, 30c y 200c
(Figura 16), se obtuvo en Propulsora de Homeopatía, S.A. de C.V., ubicada en Mirto
26, Colonia Santa María la Ribera, Delegación Cuauhtémoc C.P. 06400, México,
D.F., siendo la característica principal que las 4 potencias provienen de una misma
línea con código 190907.
La cepa bacteriológica Streptococcus pyogenes ATCC 19615 con la que se
trabaja fue adquirida en el Instituto de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos,
INDRE. Prolongación Carpio 470, Colonia Santo Tomás, Delegación Miguel Hidalgo
11340. México, D.F., México. El certificado de dicha cepa se encuentra en el Anexo
2.
2.8. Método
1. Con un asa se tomaron cuatro o cinco colonias del mismo tipo morfológico y
se inoculó cada una en tubo de caldo Todd Hewitt. Se incubaron 24 horas
hasta que la turbidez fue la indicada.
2. Se incubó el caldo Todd Hewitt a 37ºC hasta que apareció una leve opacidad
(dos a cinco horas) (Figura 17).
38
Figura 17 Inoculación de S. pyogenes Figura 18 Esterilización de sensidiscos
ATTC 19615 en medio cultivo Todd Hewitt de papel filtro
3. Se esterilizó papel filtro cortado en forma de sensidiscos dentro de una caja
Petri y pinzas de disección para su manipulación (Figura 18).
4. Se impregnaron sensidiscos con el medicamento Mercurius vivus a las
potencias de 6c, 12c, 30c y 200c. Así como sensidiscos control impregnados
con agua destilada y alcohol homeopático. Esperamos que el alcohol
homeopático se evaporara. Cada sensidisco se impregnó con 10 microlitros de
medicamento (Figura 19, 20 y 21).
Figura 19 Ordenamiento de sensidiscos
39
Figura 20 Impregnación de sensidiscos Figura 21 Sensidiscos impregnados
con medicamento homeopático
5. Preparó el inoculo. Ajustando la turbidez del caldo Todd Hewitt con solución
salina estéril a McF 0,5 con luz adecuada según la tabla de patrones de
McFarland (Figura 22, 23 y 24).
Densidad óptica
Patrón Concentración bacteriana por 10/ml
Densidad óptica teórica a 550 nm
0.5 150 0.125 1 300 0.25 2 600 0.50 3 900 0.75 4 1200 1.00 5 1500 1.25
Tabla 3
Figura 22 Celdas del Figura 23 Espectrofotómetro Figura 24 Medición de
Espectrofotómetro Longitud de Onda
40
6. Se preparó el medio de cultivo Agar caldo de Soya Tripticasa (medio
enriquecido) más sangre de carnero. Se pesaron 10 gr del medio en polvo
(para preparar 250 ml) y se requirió de 12.5 ml de sangre de carnero. Se
mezclaron los 10 gramos de Agar caldo de Soya Tripticasa en 250 ml de agua
embotellada, se llevó a la autoclave por 15 min a 15 libras a 121 ºC,
trascurrido el tiempo se deja enfriar de 15 a 20 min, se le agrega la sangre de
carnero y se vierte el medio a cajas Petri estériles y se deja refrigerar de 1 a 2
horas antes de utilizarlos. Se le realiza pruebas de esterilidad llevándolo a la
incubadora por 24 horas (Figura 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 y 33).
Figura 25 Pesa medio en polvo Figura 26 Agregación de medio en
250 ml de agua
Figura 27 Mezcla de agua con medio Figura 28 Esterilización de preparación
41
Figura 29 Enfriado de mezcla por 20 min Figura 30 Agrega sangre de carnero
Figura 31 Mezcla de medio Figura 32 Llenado de cajas Figura 33 Medio preparado con sangre de carnero Petri en cajas Petri
7. El caldo de cultivo se registró con la absorbencia de 0.125 a una longitud de
onda de 550 nm y así se procedió a la inoculación de placas que contienen
Agar caldo de soya Tripticosa. Esta inoculación se realizó dentro de 15 min de
hecho el ajuste de la turbidez.
• Se humedeció el hisopo en la suspensión bacteriana quitándole el exceso
del caldo presionando y girando sobre la pared interna del tubo por arriba
del nivel del caldo (Figura 34).
42
Figura 34 Inoculación de Streptococcus pyogenes de Todd Hewitt
• La siembra se efectuó en tres direcciones inoculando toda la placa, dando
giros de 60° para obtener un sembrado uniforme sobre toda la superficie de
la placa (Figura 35).
Figura 35 Inoculación de placas
8. Se colocaron sensidiscos desecados. Se ubicaron en una cantidad de 4 a
12 unidades en placas de 150 mm y 5 unidades en placas de 100 mm, con
una separación de 24 mm (del centro de un sensidisco al otro más
cercano), esto se recomienda en los estudios bacteriológicos. En nuestro
experimento sólo se aplicaron cuatro sensidiscos por placa ya que los
cuatro se encontraban impregnados con la misma potencia
medicamentosa. La difusión del fármaco es instantánea por lo cual no se
43
deben reubicar los sensidiscos después de haberlos depositado en la
superficie del Agar (figura 36 y 37).
Figura 36 y 37 Colocación de sensidiscos impregnados
9. Se invirtieron las placas e incubaron a 37 ºC durante 8 a 18 horas.
10. Se observaron las placas, y se procedió a realizar medición de los halos
de inhibición en mm con regla o plantilla, observando el fondo de la caja en
caso de que aparecieran (figura 38).
Figura 38 Crecimiento bacteriano sin inhibición
44
2.9. Recopilación de Datos
Los datos se recolectaron después de 18 horas de la incubación, midiendo los
halos de inhibición de crecimiento. Los cuales se anotaron en la bitácora para su
posterior análisis.
De acuerdo con los resultados obtenidos se procedió a un análisis estadístico
para valorar la significancia de estos mismos.
2.10. Resultados
Se observó un crecimiento bacteriano uniforme en todas las placas
sembradas con clara hemolisis de la bacteria Streptococcus pyogenes, en ninguna
de ellas se observaron halos de inhibición con sensidisco impregnado a diferentes
dinamo-diluciones (figura 39).
45
Figura 39 Crecimiento bacteriano de Streptococcus pyogenes sin inhibición
El control positivo con sensidisco de antibióticos fue en el que se obtuvo halo
de inhibición de 2.8 cm con ceftriaxona (figura 40).
Figura 40 Control positivo antibiograma
Resultados de las 8 muestras usadas en los experimentos
Medicamento Inhibición Bacteriana en MM Sensidiscos 1 2 3 4 5 6 7 8 Mercurius vivus 6c 0 0 0 0 0 0 0 0 Mercurius vivus 12c 0 0 0 0 0 0 0 0 Mercurius vivus 30c 0 0 0 0 0 0 0 0 Mercurius vivus 200c 0 0 0 0 0 0 0 0 Alcohol homeopático 0 0 0 0 0 0 0 0 Agua destilada 0 0 0 0 0 0 0 0 Antibiótico (ampicilina, ceftriaxona) 28 28 0 0 0 0 0 0
Tabla 4
46
3.0 Discusión
En las Cajas Petri con los sensidiscos impregnados con el medicamento
Mercurius vivus en sus diferentes potencias homeopáticas (6c, 12c, 30c y 200c) no
se observó inhibición del crecimiento bacteriano.
Las cajas que tenían los sensidiscos (alcohol homeopático y agua que con los
medicamentos homeopáticos, es decir, no registraron inhibición de crecimiento
bacteriano, algo que se esperaba).
Se pudo comprobar una de las hipótesis de este experimento ya que en ella
se esperaba que no hubiese inhibición de crecimiento bacteriano con los
medicamentos homeopáticos debido a su actuar dinámico.
Con los resultados obtenidos se pudo comprobar la hipótesis de este estudio
para hacer hincapié sobre la forma de actuar que tienen los medicamentos
homeopáticos, para apoyar un poco más esta aseveración hago presente de forma
textual el parágrafo 16 (§ 16) del Organon de la Medicina: “Nuestra fuerza vital,
siendo un poder dinámico, no puede ser atacada ni afectada por influencias nocivas
sobre el organismo sano y producidas por fuerzas externas hostiles que perturban el
armonioso funcionamiento de la vida, más que de un modo inmaterial (dinámico); y
de igual manera tales perturbaciones mórbidas (enfermedades), no pueden ser
eliminadas del organismo por el médico si no es recurriendo a los poderes
recíprocos de índole espiritual (virtual y dinámico) de las medicinas que
correspondan ser administradas, cuyos poderes actúan sobre nuestra fuerza vital de
47
índole espiritual que los percibe por medio de la facultad senciente de los nervios
distribuidos por todo el organismo; de modo que sólo debido a su acción dinámica
sobre la fuerza vital que los remedios son capaces de restablecer la salud y la
armonía vital y eso por cierto que se logra una vez que los cambios en la salud del
paciente, discernibles por medio de nuestros sentidos (la totalidad de los síntomas),
hayan revelado la enfermedad al médico investigador y cabal observador, tan
íntegramente cuanto sea necesario para que él llegue a ser capaz de curarla.”
4. Conclusiones
Los medicamentos homeopáticos tienen un mecanismo de acción que hasta el
momento es conocido como una acción dinámica o energética, que actúa sobre la
fuerza vital de los seres vivos, es decir, aquella energía que da a la materia
(organismo) la capacidad de sentir y ejecutar todas las funciones vitales y posibilidad
de ser únicos, así como también nos da una forma característica de enfermar.
Por lo anterior no es lógico pensar que sustancias que actúan energéticamente
tenga una función mecánica en este caso bacteriostática o bactericida, motivo por el
cual no es posible observar un efecto físico como la ciencia moderna esperaría, sin
embargo quedan mucho por investigar.
5. Recomendaciones y sugerencias para trabajo futuro
Conforme a los resultados obtenidos en este estudio, sería favorable pensar
en la utilización de otras sustancias (no dinamizadas) como tinturas o sustancias
48
madre tratándose de metales, tal vez, buscar si la acción dinámica de los
medicamentos homeopáticos tiene algún efecto sobre componentes membranales de
ésta u otras bacterias así como de otro tipo de células, e incluso la medición de
potencial de acción de membranas, tal vez al ponerlas en contacto con sustancias
homeopáticas dinamizadas.
49
50
6. Bibliografía
1. Duerden,B., “Microbiología de Enfermedades Infecciosas” Limusa Noriega Editores. Primera edición, México, D.F., 1993. p.p. 239-242.
2. LaDou, J., “Medicina Laboral y Ambiental” Editorial Manual Moderno. Segunda edición en español de la segunda edición en inglés. México, D.F., p.p.407-408, 450-453.
3. Lathud. “Materia Médica Homeopática” Editorial Albatros. Primera edición, tercera reimpresión. Buenos Aires, Argentina, 2003 p.p. 551-556.
4. Mendiola Quezada. “Farmacodinamia Homeopática I” Editorial Altres Costa-Amic. Puebla, México. p.p. 77–78.
5. Mercadal, M., Desoille. “Medicina del Trabajo” Editorial Masson. Segunda
edición. España, 1993. p.p. 139-143, 251-468.
6. Murray, K., Rosenthal, K. “Microbiología Medica”. Editorial Mosby. Cuarta
edición. p.p. 213-230.
7. Secretaría de Salud. “Farmacopea Homeopática de los Estados Unidos
Mexicanos”. México 1998. p.p. 14, 168.
8. Uribe, Jiménez “Farmacopea Homeopática”. México D.F. 1990. Segunda edición. Publishers Pvt. Ltd. p.p. 106.
9. Harrison. Principios de Medicina Interna. Madrid 1998. 14a edición. Mc Graw Hill. Tomo I. p.p 1011-1013.
10. Johnson, T. “Where Does Homeopathy Fit in Pharmacy Practice?” American Journal of Pharmaceutical Education February 15 2007; 71 (1) Article 07.
11. Cona, E. “Condiciones para un buen estudio de susceptibilidad mediante test de difusión en Agar” Rev Chil Infect (2002); 19 (Supl. 2): S 77-81.
12. Vijnosky. “Tratado de Materia Medica Homeopática”. Buenos Aires. 1978. Tomo 2. p.p. 372-375.
13. Strange, Ahnrens, Schafermeyer, Toepper. “Manual de Medicina de Urgencias Pediátricas”. México. 2001. McGraw-Hill. p.p. 632-634.
51
14. Tierney, MacPhee, Papadakis. “Diagnóstico Clínico y Tratamiento 2004”
Editorial. Manual Moderno. Edición 39. México, D.F., p.p. 1335, 1664.
15. Fracklam, R. “Manual de Procedimientos. Aislamiento e Identificación de
Estreptococos”. Public Health Service. Atlanta, Georgia. p.p. 2-30.
16. Merck. Sección de Otorrinolaringología. Manual Merck. Edición 10. Edición Centenario. Sección 7 Faringe, Capitulo 87.
17. Giono, S. “Capitulo 39. Prueba de Susceptibilidad a los Antimicrobianos. Método de Bauer-Kirby”. Bacteriología Médica Diagnostica. IPN. Ediciones Cuellar, Segunda edición, México 2003. p.p. 311– 321.
18. Vannier, L. “Terapéutica Homeopática” Editorial Porrúa. 12a edición. México D.F., 2004. p.p. 57-58.
19. Escamilla, “Capitulo 35. Streptococcus, Enterococcus, Lactococcus,
Pediococcus, Aerocuccus y Gemelia”. Bacteriología Médica Diagnostica. IPN. Ediciones Cuellar, Segunda edición, México, 2003. p.p. 279–285.
20. Diccionario Médico. 3ª edición. 1990. Ediciones Salvat Científicas y Técnicas.
S.A.
21. Diccionario de Medicina. Océano Mosby con CD-ROM.
22. In vitro activity of propolis against Streptococcus pyogenes. K. Bosio 1, C.
Avanzini 1, A. D’Avolio 1, O. Ozino 2 and D. Savoila 1. 1Departamento of Clinical and Biological Sciences and2 di.VA.P.R.A, University of Torino, Italy. 2000 The Society for Microbiology. Recibido 7 March 2000, revisado 16 May 2000 y aceptado 23 Mayo 2000.