UNIVERSIDAD DE LA FRONTERA

FACULTAD DE INGENIERÍA CIENCIAS Y ADMINISTRACIÓN

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA

IIQ 434

MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

INFORME DE LABORATORIO

“MEDIOS DE CULTIVO: MEDIOS NUTRITIVOS, MEDIOS SELECTIVOS, MEDIOS DIFERENCIALES”

17 de Julio de 2013

Integrantes: Solhzetniczi Fritz Peña

Alejandro Parra Mena

Sebastián Rocha Mella

Alejandra Rubio Valenzuela

Profesores: Dr. César Burgos Díaz

Paulina Torres Corales

Carrera: Ingeniería Civil en Biotecnología

RESUMEN

1 INTRODUCCION

2 OBJETIVOS

Producir un yogurt mediante una fermentación láctica. Determinar los productos de fermentación responsables del descenso de pH durante

la fermentación y la concentración microbiana final.

3 MATERIALES Y METODOS

3.1 MATERIALES

Cultivo iniciador (cultivo de yogurt termófilos FD-DVS YC-380 - Yo-Flex, CHR HANSEN.Cultivo de la cepa mixta definida que contiene Streptococcus thermophilus y Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus mezclado en una forma liofilizada conveniente para producir yogurt.YC-380 va a producir yogurt con una viscosidad media y fuerte sabor. El cultivo es ideal para la fabricación de los siguientes tipos de yogur: movido y congelado.Cultivos liofilizados deben ser almacenados a -18 ° C (0 ° F) o menos. Si los cultivos se almacenan a -18 ° C (0 ° F) o menos, la vida útil es de al menos 24 meses. Si se almacenan a 5 ° C (41 ° F), la vida útil es de al menos 6 semanas.Retire los cultivos del congelador justo antes de su uso. No descongele ESTOS Cultivos. Sanear la parte superior de la bolsa con cloro. Abra la bolsa y verter la gránulos liofilizados directamente en el producto pasteurizado mediante agitación lenta. Agitar la mezcla durante 10-15 minutos para distribuir uniformemente el cultivo.

Tubos de ensayo con 9 ml solución salina: NaCl 0,85. 500ml de leche entera, marca Lider 500ml de leche entera sin lactosa, marca Loncoleche Vaso precipitado de 1L, estéril Sensor de pH (pH metro) Agitador magnético Baño de agua a 45°C Tubos de ensayo con 9 ml de solución salina, NaCl 0,85, estériles Pipeta de 1 ml, estéril Placas Petri, estériles Agar de soja tripticasa (TSA):

Peptona de caseína 15 g

Peptona de soya 5 gCloruro de sodio 5 gAgar-agar 15 gAgua destilada 1000 mlpH final : 7,3. Se esteriliza en autoclave a 121°C durante 20 min.

Termómetro Estufa de incubación Termómetro Microscopio Reactivos para la tinción de Gram

Fig 1. Información nutricional de la leche con lactosa (izquierda) y sin lactosa (derecha).

3.2 METODOLOGÍA

1. En primera instancia se realizó la pasteurización de la leche, depositando y calentando la leche en una olla hasta alcanzar una temperatura de 90°C.

2. Para la inoculación, se vertió la leche en un vaso de precipitado de un 1 L, provisto de una sonda de pH. Se dejó enfriar la leche hasta que tenga una temperatura de 45°C. Se adicionó el cultivo starter del yogurt (cepas de bacterias Streptococcus thermophilus y Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), agitando la leche por 2 min para distribuirlo homogéneamente.

3. En el proceso de incubación, el vaso precipitado se sometió a una temperatura de 45°C durante 8 h en baño de agua. Transcurrido el tiempo se observó la coagulación del producto adquiriendo una mayor consistencia.

4. Se fue analizando el pH durante 8 horas, con el objetivo de construir un gráfico de tiempo v/s pH.

5. Se realizaron diluciones seriadas hasta 10-2, 10-8 y 10-7 para muestras de leche sin lactosa, yogurt con lactosa y yogurt sin lactosa, respectivamente. Para esto se transfirió 1 ml de la muestra en el primer tubo de ensayo, el cual corresponde a la dilución 10-1, y enseguida se transfirió 1 ml de esa muestra al siguiente tubo de ensayo, y así sucesivamente hasta completar la dilución requerida.

6. Se preparó el agar TSA.

7. Se transfirió 1 ml de la dilución 10-2 de leche sin lactosa en 2 placas Petri, y se agregó agar a una temperatura que sea apta de tocar con la mano, o sea no quemarse. Lo descrito anteriormente corresponde a la siembra en profundidad por duplicado.

8. Se realizó un proceso similar al descrito en el punto 8 para las diluciones de yogurt con y sin lactosa, pero para ellos se consideraron las diluciones 10 -6, 10-7 y 10-8 de yogurt con lactosa y las diluciones 10-5, 10-6 y 10-7 de yogurt sin lactosa para la siembra en profundidad por duplicado.

9. Se incubaron las muestras a 45°C durante 24 horas.10. Se realizó un recuento del cultivo para determinar el crecimiento bacteriano.

4 RESULTADOS

Tiempo (horas) pH yogurt con lactosa pH yogurt sin lactosa0 6,53 6,361 6,44 6,422 5,75 5,873 4,87 4,944 4,43 4,555 4,11 4,186 4,02 4,117 3,95 4,048 3,90 3,98

Tabla 1. pH de yogurt con y sin lactosa obtenido cada 1 hora, durante 8 horas de incubación a 41±2°C.

0 1 2 3 4 5 6 7 8 93

3.5

4

4.5

5

5.5

6

6.5

7

Leche con lactosaLeche sin lactosa

pH

Tiempo (horas)

Gráfico 1. Variación del pH cada 1 hora a 41±2°C en muestras de yogurt con lactosa y sin lactosa.

5 DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN

6 REFERENCIAS