Rev Med Inst Mex Seguro Soc 2006; 44 (Supl 2): 31-37 S31

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Deteccin, anlisis y resolucinde discrepancias en el gruposanguneo ABO

AraceliNieto-Rodrguez

Tcnica Laboratorista.Banco de Sangre delHospital Gonzalo

Castaeda, Instituto deSeguridad y Servicios

Sociales de losTrabajadores del Estado.

Comunicacin con:Araceli Nieto-RodrguezDireccin electrnica:

aranjicapo@yahoo.com.mx

Palabras clave:! grupo sanguneo! sistema ABO! discrepancias

Key words:! blood groups! ABO system! discrepancies

Primera versin: 6 de julio de 2006Versin definitiva: 20 de julio de 2006Aceptado: 27 de julio de 2006

RESUMENLa mayora de los grupos sanguneos ABOque se determinan en el banco de sangrecumplen con las leyes establecidas de ant-genos y anticuerpos recprocos para ese sis-tema, pero hay una poblacin que presentadiscrepancias que deben ser resueltas paradefinir el grupo exacto. Estas diferencias sepueden presentar por detectarse gruposdbiles de A: A3, Am, Ax, Ael, Aend y de B: B3,Bx y Bm que se resuelven generalmente contcnicas de adsorcin-elusin e investiga-cin de sustancias A, B y H en la saliva desecretores que presentan estas incongruen-cias. Otro tipo de discrepancias se presen-tan en personas con anticuerpos naturalesirregulares como anti-A1, anti-H, -M, -N, -P1,Lea, Leb; anticuerpos inmunes que se de-tectan en medio salino como producto deuna reaccin primaria o en pacientes conanemia hemoltica autoinmune y en sujetoscon complejos inmunes relacionados aSIDA o con protenas anormales como en elmieloma mltiple.

SUMMARYMost of the ABO blood groups dealt with atthe blood bank comply with the establishedlaws of reciprocal antigen and antibody forthat system, but there is a population thatshows some discrepancies that must be sort-ed out in order to define the exact group.These differences can arise from the detec-tion of weak groups of A (A3, Am, Ax, Ael, Aend)and B (B3, Bx, Bm), that are generally solvedwith adsorption-elusion techniques and in-vestigation of A, B and H substances in sali-va of patients with such incongruencies.Another type of discrepancies takes place inpeople with natural irregular antibodies (suchas anti-A1, anti-H, -M, -N, -P1, Lea, Leb), im-mune antibodies that are detected in a sa-line medium as the result of a primaryreaction, or in patients with AutoimmuneHemolytic Anemia and patients with ImmuneComplexes related to AIDS, or with abnormalproteins, such as Multiple Myeloma.

Discrepancias en los grupossanguneos

El sistema ABO es el nico en el que los anti-cuerpos recprocos estn presentes en el suerode las personas normales que no han tenidoexposicin a eritrocitos humanos.1 La determi-nacin de los grupos ABO difiere de la de otrosgrupos sanguneos porque es el nico en quepueden predecirse generalmente los antgenospresentes en los eritrocitos, si se conocen losanticuerpos que existen en el suero.

El mtodo estndar para determinar el gru-po ABO de una muestra es examinar los he-mates frente a anti-A, anti-B, anti-AB y elsuero frente a hemates del grupo A1, A2 y B.En la prctica, se incluye el estudio de los he-mates frente a suero del grupo O, con el finde detectar aquellas muestras raras del grupoA que no son aglutinadas por un anti-A pro-cedente de un donante del grupo B y paradetectar anticuerpos irregulares que estn cau-sando discrepancia entre el grupo directo y elinverso.

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grupo sanguneo ABO

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sustradode-m.e.d.i.g.r.a.p.h.i.ccihpargidem ed odabor

:rop odarobale FDP

VC ed AS, cidemihparG

arapacidmoiB arutaretiL :cihpargideM

sustradode-m.e.d.i.g.r.a.p.h.i.c

Los anticuerpos del sistema ABO existenen el individuo desde el momento en que soncapaces de tener una respuesta inmunolgica yse producen contra los antgenos A y B de loscuales carece el individuo: anticuerpos antitti-cos que son anticuerpos naturales regulares, deamplio rango trmico (4 a 37 C), son unamezcla de IgG, IgM, e IgA.

En el cuadro I se observa el agrupamientodel sistema ABO de rutina.

Los genes de tres loci separados (ABO, Hhy Sese) controlan la aparicin y la localizacinde los antgenos H, A y B. Tres alelos comunes(A, B y O) se localizan en locus ABO del cro-mosoma 9.

Los glucoesfingolpidos, que portan oligosa-cridos A o B, son partes integrales de las mem-branas de eritrocitos, clulas epiteliales y clulasendoteliales y tambin en forma soluble del plas-ma. La saliva contiene molculas de glucopro-tenas que pueden, si la persona posee el gensecretor (Se), portar idnticos oligosacridos.

Subgrupos2

Los subgrupos son fenotipos ABO que difie-ren en la cantidad de antgeno presente en loseritrocitos y en la saliva de los secretores. Sehallan con mayor frecuencia y tienen ms rele-vancia clnica los de A, que los de B. Al utilizarlectinas se definen los subgrupos: A1 y A2: conel extracto de Dolichos biflorus se aglutinan loseritrocitos A1, pero no los de A2; y el anti-H,

proveniente de la semilla Ulex europeus, aglutinalos eritrocitos que tienen antgeno H.

Los eritrocitos de recin nacidos que son ge-nticamente A1 reaccionan de forma relativa-mente dbil con el anti-A1 humano. Loseritrocitos fetales A2 se comportan como losAx adultos porque las transferasas actan demanera lenta en los RN. Cuando se comparanlas reacciones de los eritrocitos de los nios yadultos de grupo A con sueros anti-A, slo seencuentran pequeas diferencias en cuanto laaglutinacin de los eritrocitos suspendidos enmedio salino, pero las diferencias son ms evi-dentes en la prueba de antiglobulina indirecta(anti-IgG) y las pruebas de LISS (Low IonicStrength Solution).

Variaciones de antgenosdbiles3

Los subgrupos ms dbiles de A2 aparecen demanera infrecuente y en general se caracteri-zan por nmeros decrecientes de sitios antig-nicos A en los eritrocitos y un incrementorecproco en la actividad del antgeno H.

La clasificacin de los subgrupos A dbil sebasa en:

1. Grado de aglutinacin eritrocitaria por anti-A y anti-A1.

2. Grado de aglutinacin eritrocitaria por anti-A,B.

3. Grado de aglutinacin eritrocitaria poranti-H.

Cuadro IAgrupamiento de ABO de rutina

Reaccin delas clulas Reaccin del suero Frecuenciainvestigadas con investigado contra Interpretacin (%) poblacin

anti-A anti-B anti-AB cel. A1 cel. A2 cel. B cel. O Grupo ABO D.F.

0 0 0 + + + 0 O 72.02+ 0 + 0 0 + 0 A 19.750 + + + + 0 0 B 7.01+ + + 0 0 0 0 AB 1.22

+ = aglutinacin0 = no aglutinacin

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4. Presencia o ausencia de anti-A1 en el suero.5. Presencia de sustancias A y H en la saliva

de secretores.

Los eritrocitos de los subgrupos Ax, Ael,Aint o A3 se observa rara vez en la prcticatransfusional.

Los grupos principales de A dbil son:Aint: Clulas: tipo de A intermedio, su reac-

cin con anti-A y anti-A1 es ms dbil que loseritrocitos A1 y ms fuerte con antiH que loseritrocitos A2, producen un patrn de campomixto caracterstico de pequeos aglutinatosentre muchas clulas libres en las pruebas conanti-A y anti-B.

Ax: Las clulas tienen una reaccin muydbil con anti-A, o no la presentan. Buena re-accin con anti-A,B. En el suero, el anti-A noexiste o es muy dbil y habitualmente contieneanti-A1. En saliva, cuando es secretor, slo sedetecta el antgeno H. La adsorcin-elusin conanti-A es positiva.

Am: Clulas: reaccin negativa o dbil conanti-A y anti A,B. En suero, no se detecta anti-A o anti-A1; en saliva de secretor se encuen-tran antgenos A y H. Aparece por lo general

como del grupo O, las clulas adsorben anti-Acomo se demuestra por su elusin posterior.

Aend: A dbil debido en apariencia a un ale-lo de ABO, pero que no se cataloga como Ax,ni Am. La saliva contiene H, pero no A.

Ael: No son aglutinados por anti-A ni poranti-A,B de ningn origen, Ael es an ms d-bil que Aend; al antgeno A se puede demos-trar slo con absorcin-elusin. La saliva delos secretores contiene H pero no A.

Los grupos dbiles de A como Ax, Am y Aelno pueden ser identificados en forma confiableslo sobre la base de las pruebas tipificacin desangre. Los estudios de la saliva, de absorcin-elusin, transferasas y los estudios familiares sonconfirmatorias.

El cuadro II muestra las caractersticas se-rolgicas de los subgrupos de A y B.

Los subgrupos de B4 son an menos co-munes que los subgrupos de A. Las clulas re-accionan dbilmente o nada con anti-B yanti-A,B. Se pueden dividir en:

1. Anti-B en suero; B en saliva. De carcterdominante, encontrado en familias inglesas,el anti-B reacciona con todas las clulas Bprobadas excepto las propias.

Cuadro IICaractersticas serolgicas de subgrupos de A y B

Fenotipo Reaccin de clulas con Reaccin de suero Saliva deeritrocitario antisuero contra contra eritrocitos secretores

A B A, B H A1 A1 A2 B O

A1 4+ 0 4+ 0 4+ 0 0 4+ 0 A&HAint 4+ 0 4+ 3+ 2+ 0 0 4+ 0 A&HA2 4+ 0 4+ 2+ 0 ** 0 4+ 0 A&HA3 2+cm 0 2+cm 3+ 0 ** 0 4+ 0 A&HAm 0/ 0 0/ 4+ 0 0 0 4+ 0 A&HAx 0/ 0 1+/2+ 4+ 0 2+/0 0/1+ 4+ 0 HAel 0 0 0 4+ 0 2+/0 0 4+ 0 HB 0 4+ 4+ 0 4+ 4+ 0 0 B&HB3 0 1+cm 2+cm 4+ 4+ 4+ 0 0 B&HBm 0 0 0/ 4+ 4+ 4+ 0 0 B&HBX 0 0/ 0/2+ 4+ 4+ 4+ 0 0 HBel 0 0 0 3+ 1+ 1+ 0 0 H

1+ a 4+ aglutinacin de intensidad creciente; aglutinacin dbil; cm aglutinacin de campo mixto, 0no hay aglutinacin.++ la aparicin de anti-A1 es variable en estos fenotipos. Las personas A2 con frecuencia tienen anti-A1; las personas A2 suelen no tenerlo, pero se han hallado algunos individuos A3 con anti A1 en elsuero.

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2. No anti-B en el suero (o muy dbil anti-Bfro); B en la saliva, un carcter dominante,llamado Bw, encontrado en raza negra, yen japoneses llamado Bm.

3. No anti-B en el suero; H pero no (o dudo-so) B en la saliva. Un carcter dominantellamado B3, encontrado en familias indias,francesas.

Antgeno B adquirido por losindividuos A15

El B adquirido podra deberse a la accin dela desacetilasa bacteriana, que convierte la N-acetilgalactosamina en -galactosamina, la cuales muy similar a la galactosa, el principal deter-minante de B. Las clulas B adquiridas se hacenms reactivas frente al extracto de Dolichus biflo-rus. Tambin pueden presentar activacin T oTk, estando mediadas todas esas alteraciones porenzimas bacterianas en pacientes que cursan conuna infeccin importante como la de colon. Otromecanismo de produccin de grupo B adquiri-do secundario a la absorcin de sustancias bac-terianas semejante al grupo B se observa enpersonas infectadas por Proteus vulgaris o Escheri-chia coli. Tambin se ha descrito un grupo B ad-quirido que se detecta slo en clulas del grupoA de expresin dbil.

Debilitamiento de antgenos A, By H6

El debilitamiento de la expresin de antgenos ABpuede observarse en las personas de edad avan-zada (aparentan ser grupo O); los anticuerpos anti-AB tambin pueden sufrir cambios en estossujetos. En pacientes que estn recibiendo qui-mioterapia inmunodepresora la concentracin deanticuerpos disminuye significativamente. Enocasiones la sangre parece contener una mezclade clulas de los grupos A y O o de A1 y A dbil;en otros casos, los eritrocitos reaccionan dbil-mente con el anti-A y se comportan de maneraparecida al A3 o al Am.

Secretores y no secretores

Los genes secretores Se y se controlan la secre-cin de H, A y B. Alrededor de 80 % de los

individuos son secretores y segregan la sustan-cia H, independientemente de su grupo ABO;as la saliva de secretores de grupo O contieneH y la de secretores de grupo A contiene A yH. Veinte por ciento de los individuos que nosegregan sustancia H (no secretores) tampocosegregan A ni B.

Aglutinacin de campo mixto

Trmino que trata de describir la presenciade eritrocitos aglutinados y no aglutinadosen suspensiones tratadas con una aglutinina.Esto quiere indicar que existen dos pobla-ciones fenotpicamente distintas, como su-cede en pacientes transfundidos, en mujeresque contienen en circulacin eritrocitos fe-tales, o cuando alguno de los eritrocitos deun sujeto ha sufrido transformacin T o Tn.Puede verse una morfologa similar en mez-clas de suspensiones eritrocitarias de un ni-co fenotipo, cuando los eritrocitos tienenpocos lugares antignicos (por ejemplo, va-riantes dbiles de A), o cuando la aglutininaes de ttulo bajo.

Discrepancias entre pruebas coneritrocitos y suero7

Los resultados de las pruebas con eritrocitos ycon suero pueden ser discrepantes debido alos problemas intrnsecos de los eritrocitos odel suero, debido a problemas relacionados conla prueba, o a errores tcnicos, ya sea que sehan obtenido resultados negativos cuando seesperaban positivos o viceversa.

Negativos falsos

Pueden tener lugar debido a la omisin de:

1. Agregar reactivo o suero de prueba a untubo.

2. Identificar la hemlisis como una reaccinpositiva.

3. Uso de una relacin apropiada entre suero(reactivo) y eritrocitos.

4. Centrifugar suficientemente las pruebas.

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5. Incubar las pruebas a temperaturas de 20-24o C o menores.

6. Interpretar o registrar correctamente losresultados de las pruebas.

Positivos falsos

Los resultados pueden ocurrir por:

1. Sobrecentrifugacin de los tubos.2. Uso de reactivos, eritrocitos o solucin sa-

lina contaminados.3. Uso de material de vidrio sucio.4. Autoaglutinacin de los eritrocitos del pa-

ciente y realizacin slo del grupo directosin autotestigo.

5. Interpretacin o registros incorrectos de losresultados de las pruebas.

Resolucin de discrepancias ABO

El primer paso debe ser la repeticin de laspruebas en la misma muestra. Si las pruebasiniciales fueron efectuadas con eritrocitos sus-pendidos en suero o plasma, se debe repetir laprueba, usando una suspensin salina de clu-las lavadas. Si persiste la discrepancia se proce-de a lo siguiente:

1. Obtener una nueva muestra (donante o re-ceptor) y someter sta a prueba; esto re-suelve las discrepancias debidas a unrotulado equivocado o contaminacin demuestra.

2. Lavar los eritrocitos varias veces para eli-minar componentes sricos o qumicos quepuedan estar causando reacciones positivas.

3. Someter a prueba los eritrocitos con anti-A, B, anti-A1 o anti-H, segn corresponda.

4. Si se sospecha anti-A1, examinar el suerocontra varios ejemplos de eritrocitos delgrupo A2.

5. Revisar los resultados de la prueba de in-vestigacin de anticuerpos contra eritroci-tos del grupo O para detectar efectos deinterferencia por aloanticuerpos fros ines-pecficos.

6. Incubar las pruebas durante 30 minutos atemperatura ambiente para facilitar la de-teccin de antgenos o anticuerpos dbiles.

Resolucin de discrepanciasdebidas a la ausencia deantgenos esperados

La causa de una discrepancia puede ser inferi-da a veces de la fuerza de las reacciones obte-nidas en las pruebas de agrupacin coneritrocitos o suero.

Se pueden usar los siguientes procedimien-tos para intensificar la deteccin de antgenosdbilmente expresados:

1. Incubar eritrocitos lavados con anti-A yanti-A, B durante 30 minutos a temperatu-ra ambiente para incrementar asociacin deanticuerpos con escasa cantidad de antge-no. Incubar a 4 C puede intensificar anms la fijacin del anticuerpo, pero debenser controladas con eritrocitos de grupo Oy autlogos para asegurar que las reaccio-nes son debidas a anti-A y anti-B y no aotras aglutininas fras.

2. Tratar los eritrocitos del paciente con unaenzima proteoltica, como ficina, papana,o bromelina. El tratamiento enzimtico in-crementa la reaccin antgeno-anticuerpocon anti-A o anti-B. Paralelamente se de-ben incluir eritrocitos del grupo O tratadoscon enzimas como control de la especifici-dad de la reaccin ABO.

3. Realizar adsorcin-elusin con anti-A oanti-B humanos para adsorber el anticuer-po a los correspondientes antgenos eri-trocitarios. No se debe usar anti-A1 oreactivos monoclonales y debe hacerse enparalelo con eritrocitos de grupo O paracontrol.

4. Buscar en la saliva la presencia de sustan-cias H, A o B.

Resolucin de discrepanciasdebidas a reacciones inesperadascon anti-A y anti-B

Las pruebas de agrupacin de eritrocitos danreacciones inesperadas, pueden ser responsa-bles alelos variantes en el locus ABO o proble-mas no relacionados con los genes ABO.

Para confirmar que los eritrocitos del gru-po A1 portan la estructura adquirida B:

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1. Verificar el diagnstico del paciente. Losantgenos adquiridos B suelen relacionarsecon afecciones hsticas que permiten ingre-sar a las bacterias del colon a la circulacin.

2. Someter a prueba el suero del paciente con-tra eritrocitos autlogos. El anti-B del indi-viduo no aglutina sus propios eritrocitos queportan el B adquirido.

3. Someter a prueba los eritrocitos con sueroanti-B humano que ha sido acidificado apH 6.0. El anti-B humano acidificado noreacciona con el antgeno B adquirido.

4. Si el paciente es secretor, comprobar la pre-sencia de A y B en la saliva. Los secretorescuyos eritrocitos portan estructuras B ad-quiridas tienen sustancias A, pero no B ensu saliva.

Eritrocitos revestidos poranticuerpo

Los eritrocitos de lactantes con EHRN, o adul-tos que padecen de afecciones autoinmunes oaloinmunes, pueden estar tan intensamente re-vestidos de molculas de anticuerpos IgG comopara aglutinarse en forma espontnea en pre-sencia de diluyentes de reactivos que conten-gan altas concentraciones de protenas.

Se puede usar una elusin suave a 45 C ocon glicina a pH cido, para eliminar gran par-te de este anticuerpo de los eritrocitos de modoque se pueda someter a prueba en forma con-fiable con anti-A y anti-B.

Los eritrocitos de una muestra que contengaautoaglutininas IgM reactivas con el fro pue-den aglutinar en forma espontnea en pruebasde solucin salina. Por lo comn, los anticuer-pos pueden ser eliminados incubando la suspen-sin celular a 37 C y luego lavando varias vecescon solucin salina calentada a 37 C. Si la aglu-tinacin relacionada con IgM no es eliminadapor esta tcnica, los eritrocitos pueden ser trata-dos con sulfhidrilo ditiotreitol (DTT).

Resolucin de discrepanciasdebidas a reacciones sricasinesperadas8

Algunos acontecimientos pueden ocasionar re-sultados inesperados o errneos de pruebas ensuero, que pueden ser resueltos.

1. Los pacientes inmunodeficientes pueden noproducir niveles detectable de anti-A y anti-B; estos anticuerpos estn ausentes del sue-ro de recin nacidos, o ser muy dbiles enpersonas seniles normales.

2. Concentraciones anormales altas de anti-Ay anti-B han causado reacciones prozonaque dieron lugar a resultados negativos fal-sos; en estos casos, el grupo ABO se puedeinferir mediante pruebas en eritrocitos pordilucin del suero mediante el uso de suerotratado con EDTA.

3. El anti-A en el suero de individuos A2, A2B uotros subgrupos aglutina eritrocitos testigos A1.

4. Las autoaglutininas fras como anti-I y anti-IH, pueden aglutinar los eritrocitos de todoslos adultos, incluidas las clulas autlogas yeritrocitos testigos, cuando esta reactividadinterfiere en la interpretacin de las pruebas:a) Calentar el suero y los eritrocitos testigos

a 37 C antes de mezclarlos y realizar laspruebas en suero a 37 C y convertirlas ala fase antiglobulina si es necesario.

b) Eliminar la autoaglutinina fra del sueromediante un mtodo de autoadsorcinfra, el suero adsorbido puede ser some-tido contra eritrocitos testigos A1 y B.

c) Tratar el suero con DTT y usar el sue-ro tratado para pruebas de agrupacininversa.

5. Aloanticuerpos inesperados que reaccionana temperatura ambiente como anti-P o anti-M, pueden aglutinar los eritrocitos usadosen las pruebas con suero si portan el co-rrespondiente antgeno, para ver el tipo co-rrecto de ABO de un suero que contengaotros aloanticuerpos fros realizar:a) Elevar la temperatura a 30-37 C antes

de mezclar el suero y las clulas, si latemperatura del aloanticuerpo es infe-rior a la cual reaccionan anti-A y anti-B,esto puede resolver la discrepancia.

Referencias

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