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IL RISULTATO OTTIMALE DI QUESTO ESAME DIPENDE DA MOLTEPLICI FATTORI TRA CUI : IL MOMENTO DEL PRELIEVO L’INTERVALLO ED IL NUMERO DI PRELIEVI IL VOLUME DEL CAMPIONE L’ACCURATEZZA DEL PRELIEVO LE CARATTERISTICHE DEL MEZZO DI COLTURA Test di laboratorio nel quale il sangue raccolto dal paziente viene inoculato in flaconi contenenti terreno di coltura che consente la crescita e la rilevazione di microrganismi causa di infezioni. Si SERVIZIO SANITARIO REGIONALE EMILIA-ROMAGNA Azienda Ospedaliero – Universitaria di Ferrara

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IL RISULTATO OTTIMALE DI QUESTO ESAME DIPENDE DA

MOLTEPLICI FATTORI TRA CUI :

� IL MOMENTO DEL PRELIEVO

� L’INTERVALLO ED IL NUMERO DI PRELIEVI

� IL VOLUME DEL CAMPIONE

� L’ACCURATEZZA DEL PRELIEVO

� LE CARATTERISTICHE DEL MEZZO DI COLTURA

���������Test di laboratorio nel quale il sangue raccolto dal paziente viene

inoculato in flaconi contenenti terreno di coltura che consente la

crescita e la rilevazione di microrganismi causa di infezioni.

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� Prima della terapia antibiotica

� Prima della nuova somministrazione di antibiotico

� 60-90 minuti prima del rialzo febbrile (quando prevedibile)

� Se questo non è prevedibile, allora eseguire il prelievo

all’inizio del rialzo febbrile

Molti pazienti possono essere ipotermici anche nella fase

batteriemica pertanto la febbre da sola non è un utile

indicatore, tenere sotto controllo i globuli bianchi, la

presenza/assenza di brivido, marcatori biologici come la

proteina C reattiva ( PCR )

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Eseguire 2 massimo 3 prelievi in rapida successione purché da

diversi siti anatomici

�Tre prelievi ottimizzano la sensibilità dell’esame (96-99%)

�Tre prelievi facilitano l’interpretazione dei risultati nel caso

di isolamento di germi di dubbio significato: patogeno o contaminante?

�Un solo flacone positivo di emocoltura indicherà la presenza di un

contaminante , mentre se si positivizzano più set di emocolture provenienti

da differenti siti anatomici, questo indicherà la presenza di un’infezione del

torrente circolatorio

�Mai effettuare un solo prelievo nell’adulto: lo scarso volume di sangue

analizzato potrebbe dar luogo a falso negativo, in caso di positività

sarebbe di difficile interpretazione: patogeno o contaminante?

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Per ogni prelievo utilizzare una coppia di flaconi:

FLAC AEROBIO + FLAC ANAEROBIO

Adulti: il volume ottimale da inoculare nel flacone aerobio FA e nel flacone anaerobio FN è di 10 ml di sangue ciascuno

Pazienti pediatrici: il volume ottimale di sangue da inoculare nel flacone pediatrico PF non èstato definito con esattezza varia da 1 ml a 4 ml (basato sul peso corporeo del paziente)

� Se il prelievo viene eseguito utilizzando la siringa inoculare prima il Flac ANAEROBIO e successivamente il Flac AEROBIO

� Se il prelievo viene eseguito utilizzando il set di prelievo, inoculare prima il Flac AEROBIO e successivamente il Flac ANAEROBIO

ANAEROBIO

AEROBIOPEDIATRICO

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VOLUME DEL CAMPIONEIl volume di sangue prelevato è la causa della significativa variabilità nel recupero di

microrganismi da pazienti con infezioni del circolo ematico perciò è importante non

inoculare nei flaconi una quantità di sangue superiore a quella consigliata.

Tali quantità sono stabilite sulla conoscenza che un’emocoltura, perché diventi

positiva, deve contenere almeno ������ ���� �������� ��������������Nei pazienti batteriemici la concentrazione per ml di sangue è di norma 0,1-1 UFC/ml,

il recupero di batteri dal sangue aumenta del 3% per ogni ml di campione raccolto,

quindi negli adulti sono necessari 10 ml per flacone, mentre sono sufficienti 1- 2 ml

nel flacone pediatrico, per la più alta carica riscontrabile nelle batteriemie di neonati

e infanti.

Inoltre è necessario rispettare tali quantità di inoculo per �������� �� ���������� ��� ��������������� specialmente per quanto riguarda i batteri anaerobi, poiché i

leucociti presenti nel sangue producono una quantità di CO2 sufficiente a indicare

positività nella coltura .

I flaconi BacT/ALERT® possono essere utilizzati per valutare la presenza di

microrganismi nel sangue e in tutti i fluidi biologici (es.liquor,liquido

pleurico,liquido ascitico,liquido pericardico etc.) fatta eccezione per le urine. I flaconi _BacT/ALERT® hanno ottenuto l’autorizzazione ufficiale (510(k) notification) dalla FDA (Food and Drug

Administration) Americana e marcati CE per l’utilizzo nello screening di fluidi biologici

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EMOCOLTURA : Modalità di prelievo

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Praticare una pulizia sul

sito cutaneo identificato

per un diametro di circa

7 -8 cm con alcool etilico

al 70% procedendo dal

centro alla periferia

Lasciare asciugare prima

della tecnica di antisepsi

del sito di prelievo

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Disinfettare la cute

lasciando in sede per

almeno 30 secondi un

impacco con clorexidina al

2% in alcool isopropilico

al 70%, o alcool

isopropilico al 70%

Il sito di prelievo sarà

perfettamente pulito solo

se il disinfettante sarà

completamente evaporato

Disinfettare la membrana di gomma

con : clorexidina al 2% in alcool

isopropilico al 70%, o alcool

isopropilico al 70% o tintura di iodio

(utilizzando tamponi o ovatta nuovi)

Far asciugare la membrana di gomma

del flacone per ottenere una

disinfezione totale

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10 ml di campione per flacone

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Introdurre l’ago senza

ripalpare la zona

disinfettata, se fosse

necessario utilizzare

guanti sterili

Durante il prelievo

mantenere il flacone in

posizione verticale,

posizionandolo su un piano

d’appoggio in modo da

controllare la quantità di

sangue aspirata

Terminato il prelievo

agitare delicatamente il

flacone per consentire al

liquido di mescolarsi al

sangue e per evitare la

formazione di coaguli

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� Mantenere i flaconi a temperatura ambiente

� Consegnare possibilmente entro 2 ore;

� E’ possibile consegnare in qualsiasi momento al laboratorio emocolture accettate come routine

La data di accettazione deve essere quella del giorno in cui viene eseguito il prelievo

anche se festivo

Non appena i campioni arrivano in laboratorio

vengono alloggiati nel sistema analitico di

rilevazione microbica BacT/ALERT 3D che inizia

il monitoraggio della crescita batterica

Se il flacone non viene caricato tempestivamente

potrebbe verificarsi una mancata rilevazione da

parte dello strumento di positività, poiché la

crescita batterica ha già raggiunto il plateau

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Principio di rilevamentoIl cuore del sistema BacT/ALERT 3D è il sensore colorimetrico contenuto nel flacone di coltura in grado di determinare

la crescita batterica all’interno del flacone di coltura mediante sistema di lettura non invasivo e completamente

automatico.

In caso di crescita batterica�� l’aumento della concentrazione di CO2 disciolta nel brodo di coltura, provoca una

variazione di pH.

L’abbassamento del pH, che si verifica con la diffusione di CO2, provoca un cambiamento di colore dell’indicatore

contenuto all’interno del sensore. A differenza di altri tipi di sensori fluorescenti, il sensore colorimetrico BacT/ALERT

3D è poco influenzato dalla luce e garantisce una maggiore affidabilità dei risultati, ciò soprattutto nei casi di

introduzione ritardata del flacone. Una volta introdotti nella cella di incubazione, i flaconi sono monitorati

continuamente, 24 ore su 24, per la creazione della curva di crescita. Durante la lettura un led, situato sul fondo di ogni

cella di incubazione��emette un fascio di luce diretto verso il sensore colorimetrico.

La quantità di luce riflessa dal sensore viene rilevata da un reflettometro che trasmetterà la lettura al computer

gestionale per l’analisi algoritmica, in base alla quale verrà discriminato il campione in positivo o negativo.

Il software di gestione, mediante l’utilizzo di sofisticati algoritmi, è anche in grado di distinguere tra la CO2 prodotta dai

microrganismi e quella generata dal campione ematico in analisi (processi catabolici del sangue e attività residua dei

globuli bianchi). Il monitoraggio dei flaconi in incubazione è continuo, le letture vengono eseguite ogni 10 minuti fino

alla formulazione del risultato

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Con i sistemi automatici i flaconi vengono incubati a 35°C per 5 giorni

Non è necessario protrarre l’incubazione nel sospetto di endocardite o

Brucellosi se vengono rispettati il n°di campioni e il volume di sangue

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Sistemi automatizzati

� 57% = 12 ore

� 82% = 24 ore

� 95-97% entro tre - quattro giorni anche per germi

tradizionalmente ritenuti difficili: Brucella,

Capnocytophaga, Campylobacter o HACEK(Haemophilus,

Actinobacillus, Cardiobacterium, Eikenella, Kingella)

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���������������������Da ogni flacone positivo viene

effettuato un esame microscopico per

confermare la presenza di batteri

o miceti, il risultato viene prontamente

refertato in attesa di identificazione

biochimica ed antibiogramma

E’ possibile avere informazioni

telefoniche preliminari sull’andamento

delle colture e referto scritto del

microscopico eseguito su campioni

positivi

Laboratorio di Microbiologia

Tel 236.427

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Il progetto LaSER Lotta alla Sepsi nell’AOU FE:2007-2010

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Identificazione e

antibiogramma sulle

colonie isolate

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