Upload
vuhuong
View
214
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
1
Högupplösande masspektrometriför screening av internetdroger
Dr. Martin JosefssonDocent, ForskningskemistAvdelningen för rättsgenetik och rättskemiRättsmedicinalverket LinköpingAvdelningen för fysik och mätteknik (IFM)Linköpings Universitet
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
TOF-MS karaktäristik• hög MS-upplösning (resolving power)
>10,000 up to 50,000 (100,000)
• hög massnoggrannhet (accuracy)< 1 ppm (<0.5 ppm)
• hög känslighet (ESI)lägre pg-området ner till fg (injicerat)
• stort dynamiskt mätområde5 magnituder! (för nya instrument))inom 50-3000 m/z (≥20 spektra/sekund)
• snabb datainsamling (acquisition)1-4 GHz (ett krav för hög massnoggrannhet)genererar stora datamängder/analys, 100 Mb -1 Gb/analys
• hybridinstrumenttandem-MS, Q-TOF (möjligt att generera MS-spektra)
Kan användas för såväl…
riktad screeningtargetedsom förutsättningslösnon-targetedanalys av data
1 ppm ó 0.0003 amu (0.3 mDa)
263.188529 (tramadol)
2
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
QTOF-MS instrumenteringhybridinstrument
Time of Flight(TOF)
Ion Funnel (Agilent)StepWave (Waters) Quadrupole (Q)
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
MS upplösning (resolution/resolving power)
FWHM = 0.7(RP ≈ 500)
"Lågupplösande” Quadrupol-MS
Högupplösande TOF-MS
RP ≥ 10 000(FWHM≈0.015)
m/z abund(%)264.1958 100265.1991 18.05266.2019 1.94267.2045 0.16268.2072 0.01
hög upplösningmöjliggör analys av isotoper!
A, A+1, A+2 osv
MS-spektra förtramadol
3
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Massnoggrannhet vs. antal isobareraccuracy
Quadrupol MS (Q)
Time of Flight MS (TOF)
analyt formel nominell masstramadol C16 H25 N O2 263,4N-desmethyl-venlafaxin C16 H25 N O2 263,4O-desmethyl-venlafaxin C16 H25 N O2 263,4melperon C16 H22 F N O 263,4nortriptylin C19 H21 N 263,4
analyt forme l exakt ma ssatramadol C16 H25 N O2 263.188529N-desmethyl-venlafaxin C16 H25 N O2 263.188529O-desmethyl-venlafaxin C16 H25 N O2 263.188529melperon C16 H22 F N O 263.168542nortriptylin C19 H21 N 263.167399 2243 träffar!
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Databehandling, TOF-MS
alla massor mäts och all data sparas – retrospektiv analys möjligt!
genererar hög bakgrundsingnal – ger mycket brus!
filtrering av data med hjälp av algoritmer• Identifiera kromatografiska toppar
– identifiera alla joner som länkar– inkludera addukter som; Na+ or K+
– inkludera isotoper ([M+H]+, [M+H+1]+,…– inkludera olika laddningsfördelning– identifiera eventuella dimerer– generera ett analytspecifikt spektra
• Summerar alla signaler till ett värde (Feature)• Helt automatiserad data processning
4
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Databas / Bibliotekexakt massa / spektra
PCDL = Personal ComposedDatabase / Library
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Find By Formula (FBF)
Compound information from formula or database
XIC drawn from information
Formula matchingparameters
Spectral performance calculated
Spectra extracted from integrated peak
total score (pos i.d.)max = 100
• retention time• accurate mass• isotopic pattern
5
Auto MS/MS data-dependent acquisition
Precursors (MS)max precursors per cycle, 2 co-eluted compounds can be identifiedactive exclusion
– excluded after 1 spectrum average of several spectra on each peak– released after 0.05 min
Spectra matching (MS/MS)reversed: library vs. sample gives most often the highest scoresforward: sample vs. library often bad scores in urine analyses
Library spectra at 10, 20 and 40 eV
fixed collision energy (CE) screening for analogues/homologes (T5)
CE based on MW from formula screening for more different chemical identities (T6/T8)
individual CE settings when target lists are used (T7)
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Auto MS/MSMDPV (bath salt)
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
2x10
0
0.25
0.5
0.75
1
+ESI Product Ion (5.485, 5.526, 5.567 min, 3 Scans) [email protected] (276.1595[z=1] -> **) ADF301A.d
260.1649
276.1594
126.1277 175.0744 205.0861 217.1106149.022672.080557.0700 105.066784.0800 191.1076 233.1014
2x10
-1
-0.5
0
0.5
1
+ESI Product Ion (5.485, 5.526, 5.567 min, 3 Scans) [email protected] (276.1595[z=1] -> **) ADF301A.d
260.1649276.1594
126.1277 175.0744 205.0861 217.1106149.022672.080557.0700 105.066784.0800 191.1076 233.1014
2x10
0
0.25
0.5
0.75
1
MDPV C16H21NO3 + Product Ion Frag=125.0V [email protected] T08_PCDL.cdb
126.1278276.1595
175.0753135.0441205.0861
149.0233
84.081072.0812
Counts vs. Mass-to-Charge (m/z)50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 180 185 190 195 200 205 210 215 220 225 230 235 240 245 250 255 260 265 270 275 280 285
forward (sample vs library)
reversed (library vs sample)
CE from formula
ref spectrum
15.9 V
20 V
O
O
N
O
6
Strategier analys
Screening/Sållning
Verifikation/Kvantifiering
Narkotika (urin/serum/blod)alla ärendetyperImmunoassay (EMIT, ADVIA)
Narkotika (urin/blod/hår)dedicerade MS-metoderen eller fåtalet analyt/er – frekvent!GC-MS eller LC-MS/MS
Särskild förfrågan (urin/blod)internetdrogerLC-QTOF-MS (GC-MS)
Narkotika (hår)LC-TOF-MS (LC-MS/MS)
Läkemedel (urin, blod, hår)multikomponentmetoder – frekvent!en eller fåtalet analyt/er – mindre frekvent!LC-MS/MS eller GC-NPD
Läkemedel (blod)obduktionsärendenLC-TOF-MS (GC-NPD)
Alkoholer, flyktiga (blod)GC-HS(verifikation/kvantifiering)
modersubstanser metaboliter
deutererade interna standarder
Läkemedel (vävnad)ObduktionsärendenLC-QTOF-MS (GC-NPD)
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Särskild förfrågan (urin)steroider GC-MS (full scan, SIM) X ej vidare för verifikation!
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Instrumentering
• Agilent 6540/6550, Jet-Stream ESIgenerella parameter inställningar!kapillär 3500 V, fragmentor 125 VMS-mode med 20 ppm detektionsfönser, auto MS/MS-mode m/z 50-1000, 1.5 spektra/sekundprofil och centroiddata vid 2 GHz (utökat dynamiskt område)
• Agilent 1290 UHPLClång kolonn för maximal upplösing! HSS T3, 150x2.1, 1.8 µm (Waters) Linjär gradientkromatografi inom 12 min(A) 0.05% FA i 10 mM NH4FA, (B) 0.05% FA i Acetonitril0.5 ml/min vid 60°C, 2 µl injicerat
• MassHunter Acq, Qual and Quantegna databaser/bibliotek (PCDL = personal composed database/library)>600 föreningar med tillgång till certifierat eller väldokumenterat referensmaterial (t ex beslag)
7
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Provberedning
• blod - 0.25 gprotein fällning (PPT) med 500 µl 0.075 % myrsyra i MeCN:EtOH 90/10 v/vcentrifugera, överför 200 µl, injicera 2 µl.
• urin - 0.5 ml med eller utan hydrol med β-glucuronidase (E.coli) extraktion genom utsaltning (SALLE) med 500 µl MeCN och 250 µl 10 M NH4Accentrifugera, överför 100 µl MeCN, injicera 2 µl.
interna standarder för standard metoder (amfetamin-D8, diazepam-D5, mianserin-D3)för syntetiska cannabinoider (tillgängliga deutererade analoger)
UHPLC - gradientkromatografi
Blankt blodprov (överst). Autentiskt blodprov från obduktion (nederst). Interna standarder markerade med svarta pilar (amphetamine-D8, mianserine-D3, diazepam-D5).
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
HSS T3, 150x2.1, 1.8 µm
(A) 10 mM NH4FA + 0.05% FA (B) actetonitril + 0.05% FA
Linjär gradient1-95% B inom 10 minuter
Kromatografin är en kompromiss!
GHBTHC
8
Strategier för TOF-/QTOF-MS analys
• single state TOF-MS (6540/6550)används för screening som följs av verifikationsanalys LC-MS/MS, GC-MS eller GC-NPD för verifikation och kvantifiering
högt genomflöde av prover!
• data-dependent MS/MS acquisition QTOF-MS (6540)används för screening där ingen kvantifiering krävsscreening och verifikation av internetdroger
tillförlitliga identifieringar!
• QTOF-MS med mer känsligt instrument (6550/iFunnel)- data-dependent MS/MS med inklusionslista (prefered list)- prekusorer + fragment; All Ions (Agilent), MSe (Waters), bbCID (Bruker)screening och verifikation av internetdroger i låga koncentration (syntetiska cannabinoider i blod)
tillförlitliga identifieringar vid låga koncentrationer!
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Syntetiska cannabinoider
JWH-018JWH = John W. Huffman
• research chemical (RC)• designade droger / internetdroger
(”spice”, K2)
flera olika klasser naftoylindoler (JWH-018)tetrametylcyxlopropylindoler (XLR-11)adamantoylindoler (AKB-48)
mångaanaloger
genererar flera metaboliterhydroxylering, karboxylering
monohydroxylering (Fas I) konjugering, glukuronider (Fas II)
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
9
Klassning LVFS 2011:10 syntetiska cannabinoider
Klassade (April 2013)1. Narkotika (n=20) 2. Hälsofarlig vara (n=10)
Narkotika (Aug 2013)EAM-2201
Hälsofarligvara (Dec 2013)5F-PB-22STS-135JWH-018 N-(5-klorpentyl)analogAM-694 klorderivatAB-001 (JWH-018 adamantoylderivat)JWH-018 adamantylkarboxamide (SDB-001, 2NE1, APICA)5F-AKB-48 (5F-APINACA)AKB-48 (APINACA)5F-UR-144
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
2
2
4-OH-pentyl
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Kromatografi optimerad för metabolitersyntetiska cannabinoider
bifunktionell stationärfasACE Excel 2 C18-AR (100*2mm)C18 kedjor med integrerade fenylgrupper
44 metaboliter till 13 modersubstanser
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
(A) 0.05% FA in 10 mM NH4FA, (B) 0.05% FA in metanol
flack gradient50-70% B inom 13 min
HSS T3 (C18), 1.7 µm150 x 2.1mm i.d.0.5 ml/min 60°C
10
Arbetsflöde syntetiska cannabinoider i urin
Provberedning ü 600 µl urinü Hydrolys (β-glukuronidas), 20 min rumstempü SALLE (MeCN, 10 M NH4Ac)
UHPLC-QTOF-MS (AT1290, 6540)ü 5 µl (2µl) injicerat, 17 minuters analysü Auto MS/MS (data-dependent acquisition)
MassHunter Qualü Identifiering av prekursorer (MS)ü Matchning av spektra (Auto-MS/MS, fast CE 20 eV)
MussHunter Quanü Konfirmering av fynd i jämförelse mot standarder
vid tröskelvärdet 2 ng/ml (5ng/ml)
få positiva resultat är att förvänta!
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Function CriteriaMass accuracy ± 5 ppmRetention time ± 0.1Score (MS) >80Cut-off (Calibrator) 5 ng (2 ng)Score Lib (MS/MS) >80(CE 20 V)
Standard 131216 131212 131211 131209 131205Calibration (A) 44 43 42 41 40Name Notes Score (Lib)Score (Lib)Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib)RCS-4 5-OH-pentyl A , 91,08 94,87 95,54 90,18 84,43JWH-250 5-OH-pentyl A , 82,15 89,31 89,71 88,65 84,38JWH-073 3-OH-butyl A , 88,14 96,73 85,7 90,16 96,88JWH-018 5-OH-pentyl A , 84,11 96,96 96,95 95,25 87,51UR-144 4-OH-pentyl A , 70,7 87,84 72,32 72,89 76,58MAM-2201 4-OH-pentyl A , 89,59 94,01 93,72 87,84 89,89JWH-019 5-OH-hexyl A , 90,34 92,89 94,8 92,89 92,79JWH-122 5-OH-pentyl A , 81,95 89,9 95,88 90,36 88,12AKB48 pentansyra A , 91,66 93,04 91,61 90,35 93,81JWH-210 4-OH-pentyl A , 87,79 89,4 88,2 92,97 89,89JWH-398 4-OH-pentyl A , 76,54 78,29 91,18 86,12 85,64d5-JWH-250 4-OH-pentyl IS 0 0 0 0 0d5-JWH-073 3-OH-butyl IS 0 0 0 0 0d5-JWH-018 pentansyra IS 0 0 0 0 0d7-JWH-073 6-OH-indol IS 0 0 0 0 0d9-JWH-018 6-OH-indol IS 0 0 0 0 0d9-JWH-018 7-OH-indol IS 0 0 0 0 0
Fyra standarder A-D vid tröskelvärdet
BlankkontrollHydrolyskontroll (JWH-18 5-OH-pentyl glucuronid)
Autentiskt fall, urinanalys
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Substans Funnet (ng/ml)JWH-018 4-OH-pentyl 27JWH-018 5-OH-pentyl 6JWH-018 pentansyra 11JWH-073 butansyra 6
d5-JWH-073 3-0H-butyl
d9-JWH-186-0H-indol
JWH-184-0H-pentyl
JWH-073 butansyra JWH-18
5-0H-pentyl
JWH-18pentansyra
d5 JWH-18pentansyra
d5-JWH-250 4-0H-pentyl
d7-JWH-073 6-0H-indol
d9-JWH-187-0H-indol
11
Immunologisk screening
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
2.9%5.0%6.4%+50%
5.8%9.0%19.7%-50%
20105
2.9%5.0%6.4%+50%
5.8%9.0%19.7%-50%
20105
0,00
0,010,02
0,030,04
0,050,06
0,070,08
0 5 10 15 20 25 30
ng/mL
abs
0,00
0,010,02
0,030,04
0,050,06
0,070,08
0 5 10 15 20 25 30
ng/mL
abs
MAM-2201 pentansyra52% korsreaktivitet
MAM-2201 4-OH pentyl36% korsreaktivitet
JWH-122 4-OH & 5-OH pentyl40 resp. 39% korsreaktivitet
Ingen korsreaktivitet förUR-144 pentansyraUR-144 4-OH & 5-OH pentyl
Analyserat med Advia 1850
forts…
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Tröskelvärde; HEIA 5 ng/ml, LC-QTOF 2 ng/ml
utvalda prover (3 månader, n=87)
än god överensstämmelse mellan metoderna
men UR-144 detekterades ej med HEIA
80 positiva fynd i 38 fall med LC-QTOF
JWH-122 5-OH-pentyl, JWH-018 5-OH-pentyl
Strategies for the analysis of synthetic cannabinoids in urine. A comparison between an immuno assay and an LC-QTOF method Kronstrand R, Birath-Karlsson C, Brinkhagen L, Roman M, Josefsson M. Anal. Bioanal. Chem. 2014 epub-
FP
FN
339+
540-
+-
339+
540-
+-
LC-Q-TOF
HEIA
12
Rutinscreening för syntetiska cannabinoider i urin
stor efterfrågan > 250 prover per vecka - problem med kontamination av instrumentet
Steg 1• Mindre injektionsvolym, 2µl (vs 5) och höjda tröskelvärden, 5ng (vs 2)Steg 2• Utveckla ny snabbare screening metod (T9).
ett mer känslig instrument (6550), 0.5 µl injicerat (jfr 5 µl ursprunligen)snabbare kromatografi, from 17 to 6 minuterTOF-MS-analyser
• Bara de positiva fynden analyseras och verifieras med hjälp av den ursprungliga metoden (T5)
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
131128 131127 1311 25 131121 131120 131118 131117 131114 131113 1311 08 131104 131031 131030 131028 131025 131024 B 1310 24 131023 131021 131020 131019 131017 131016 131014 131010 131009 131004 131002 130930 130927 B 1309 27 A 130923 130920 B 130920 A 160918 130916 130912 13091038 37 36 35 34 33 32 31 30 29 ,5 28 27 26 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1
Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib)Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib)Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib)Score (Lib )Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib)Score (Lib )Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib) Score (Lib)90,6 89,84 90 ,6 91,4 83,01 87,88 94 95,21 89,12 95 ,26 90,38 76,07 56,08 61,80 0,00 81,36 83 ,01 89,88 83,65 0,00 83,01 89,00 91,03 82,07 81,62 83,01 94,69 91,11 91,50 91,78 92,37 92,01 92,93 90,92
75,15 60,98 77,2 4 82,18 76,48 81,14 82,99 85,02 88,2 78 ,49 0,00 54,63 75,14 68,32 78,60 72,00 66 ,26 78,38 77,13 65,95 69,35 74,16 82,49 71,75 71,09 80,68 75,58 89,24 68,21 83 ,52 79,69 83,90 83,66 81,65 83,82 80,50 75,98 83,3984,39 89,92 88,8 7 87,95 85,51 84,46 94,97 89,8 90,51 93 ,25 61,24 69,53 73,90 68,30 86,33 62,34 70 ,82 80,05 81,13 52,78 71,26 75,69 87,46 81,82 87,78 93,14 92,23 91,85 86,46 94 ,48 85,90 76,23 94,92 93,69 89,79 88,80 93,48 92,5276,09 86,81 82,9 3 75,37 83,84 94,13 86,64 95,5 92,71 90 ,51 73,48 70,89 64,06 83,00 76,53 73,48 73 ,48 91,93 67,63 73,48 73,48 78,80 92,88 77,86 83,78 83,98 93,32 91,95 94,21 86 ,31 88,46 94,13 92,91 91,51 94,02 91,45 93,60 94,9075,86 62,16 70,0 3 76,26 69,4 73,99 69,08 72,69 81,83 76 ,09 0,00 55,62 0,00 51,00 51,21 50 ,83 0,00 50,83 59,22 72,50 68,58 75,03 71,71 72,00 85,09 65,53 66 ,10 61,00 78,69 79,23 64,13 77,34 74,88 71,54 73,5886,14 90,55 80,3 5 85,34 92,72 91,54 93,16 89,08 85,31 94 54,59 57,72 63,84 56,57 75,86 0,00 58 ,23 51,90 76,20 55,35 0,00 77,19 93,36 83,00 94,78 89,40 74,65 90,42 83,58 81 ,35 83,48 94,13 91,20 85,09 92,08 90,79 92,43 91,39
90,2 86,11 85 ,9 88,86 81,44 93,22 96,42 94,6 89,19 96 ,09 72,11 76,17 86,93 76,17 86,71 50,16 75 ,42 76,17 76,17 76,17 69,97 87,10 86,95 87,13 89,05 91,54 86,92 90,72 87,07 79 ,57 91,78 87,07 90,31 88,16 91,69 90,58 91,62 91,6978,49 94,2 88,6 9 85,34 92,63 85,35 93,07 89,18 84,73 94 ,9 71,56 59,76 59,12 0,00 70,50 71,54 73 ,92 61,76 77,26 66,15 74,57 77,60 87,89 56,82 89,19 71,17 92,94 82,62 76,59 80 ,88 80,61 78,87 93,87 93,49 91,75 85,79 85,80 91,4793,92 73,36 79,7 1 91,52 91,66 90,89 90,83 92,44 91,6487,33 83,32 69,2 6 87,45 83,28 91,1 78,8 81,87 88,71 90 ,05 0,00 68,55 79,54 72,26 58,48 0,00 62 ,33 76,06 72,39 0,00 71,93 61,60 88,76 87,74 87,83 87,28 62,47 86,14 76,27 84 ,20 90,35 89,22 81,46 89,65 91,17 88,74 87,77 91,6781,02 78,82 82,1 5 82,23 75,77 80,31 86,39 84,79 87,49 90 ,73 68,77 73,55 52,68 61,89 64,56 0, 00 73,92 67,30 50,34 73,64 80,49 80,49 74,18 84,27 78,71 75,88 71,82 79 ,98 77,46 88,06 84,32 80,15 76,05 83,81 87,10 83,24
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
start (T5) sept-13problem okt-13ny screeningmetod (T9) jan-14
Resultat syntetiska cannabinoider i urin
Riktad QTOF screening av 13 substanser genom analys av 44 metaboliter
Nu har vi tillgång till ytterliggare 16 metaboliter till 7 nya modersubstanser
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
130909 start JWH-18 + JWH-73 + AM-2201 UR-144 JWH-122 JWH-210 AKB-48131123 addition of AKBs 21 9 12 7 2 2 -140120 new pre-screening 3 2 2 10 0 0 28
2 0 1 8 3 0 2526 11 15 23 5 2 53
BB-22 3-COOH-indo l AB-PINACA 5-OH-pentyl5F-PB-22 3-COOH-indo l AB-PINACA pentansyra
PB-22 3-COOH-indo l 5F-AB-PINACA 4-OH-pentylPB-22 4-OH-pentylPB-22 5-OH-pentyl ADBICA 4-OH-pentylPB-22 pentansyra ADBICA pentansyraPB-22 4-OH-pentyl-3-COOH-indolPB-22 5-OH-pentyl-3-COOH-indol ADB-PINACA 4-OH-pentylPB-22 pentansyra-3-COOH-indol ADB-PINACA pentansyra
det finns ett behov avatt ständigt uppdaterascreeningmetoderna!
Tidsperiod T5 T9130909-140116 (5 mån) 1889 - 73 4%140120-140217 (1 mån) 50 1251 40 3%
Positiva fynd
13
Statistik - Beslag NADIS 2013
SKL 2014 (jan-febr)
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
ADB-FUBINACA
NN
O
NHNH2
O
CH3 CH3
F
CH3
AB-FUBINACA
NN
O
NHNH2
O
CH3 CH3
F
ADBICA
NO
NHNH2
O
CH3 CH3
CH3
CH3
5F-AB-PINACA
NN
FO
NHNH2
O
CH3 CH3
5F-AKB-48 (5F-APINACA)
NH
NNO F
5F-PB-22
NO
O
N
F
BB-22
NO
O
N
Fynd Substanser180 ADB-FUBINACA61 ABINACA59 5F-AB-PINACA30 AB-FUBINACA
Substanser5F-AKB48 (5F-APINACA)AB-FUBINACA5F-PB22BB-22
Övriga internetdroger
katinoner, fenetylaminer, tryptaminer, bensodiazepiner, andra…
• standard gradientkromatografi (UHPLC)
• enkel provberedning (SALLE för urin, PPT för blod)• auto MS/MS (AT 6540) – endast kvalitativ analys• eget bibliotek, PCDL (för närvarande ca 120 substanser)• tröskelvärde: urin 50-500 ng/ml, blod 20-100 ng/g (analytberoende)
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
GHBTHC
14
Separation of isomerer (isobarer)4x10
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
1.1
+ESI EIC(154.1027) Scan Frag=125.0V FA_REF.d Smooth
* 2.451
* 2.307
* 2.579
Counts vs. Acquisition Time (min)2 2.05 2.1 2.15 2.2 2.25 2.3 2.35 2.4 2.45 2.5 2.55 2.6 2.65 2.7 2.75 2.8 2.85 2.9 2.95 3
Fluoramphetamine (FA)
2-FA 3-FA 4-FA
Kinetex PFPPentafluorphenyl
5x10
0
0.25
0.50.75
1
1.25
1.5
1.75
2
2.25
2.5
2.75
3
3.25
3.5
3.75
4
4.25
4.5
+ESI EIC(178.1226) Scan Frag=125.0V MMC_REF_2.d Smooth
* 5.916
* 6.128
* 5.489
Counts vs. Acquisition Time (min)5 5.05 5.1 5.15 5.2 5.25 5.3 5.35 5.4 5.45 5.5 5.55 5.6 5.65 5.7 5.75 5.8 5.85 5.9 5.95 6 6.05 6.1 6.15 6.2 6.25 6.3 6.35 6.4 6.45 6.5 6.55 6.6 6.65 6.7 6.75 6.8 6.85 6.9 6.95 7
2-MMC 3-MMC 4-MMC
mephedrone
Cosmosil piNAPNaphtylethyl
HN
F
HN
O
π-π interaktionalternativisokratisk
kromatografiMethylmethcathinone (MMC)
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Resultat internetdroger I urin och blod
Riktad screening för >100 substanser
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
25C-NBOMe ethylphenidate2-amiodarone etizolam2-FA mCPP4-EMC MDAI4-FA mephedrone4-MEC mescaline5-MAPB methylone6-APB metiopropamineAH-7921 metoxiethaminebeta-ethylmethcathinone methylonebutylone MPPPcathinone MXEephedrine norephedrine
MDPV“badsalt”Topp fem urin T6 Topp fem blod T8
Maj-Dec 2013 n=3344 Maj-Dec 2013 n=1210400/mån 150/mån
Metylfenidat 216 MDPV 174MDPV 196 PVP 783-MMC (3-metylmetkatinon) 166 3-MMC (3-metylmetkatinon) 57PVP 63 Metylfenidat* 21*MDPPP (+ MDPV el. PVP) 37 Flubromazepam 20
övrigt 118 övrigt 63
totalt antal positiva 796 39224% 34%
*flera fynd, vid riktad frågeställning analyserat med 3Q LC-MS/MS
15
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Sammanfattning
• LC-TOF-MS kan på ett snabbt och rationellt sätt användas för screening av ett stort antal prover på en relativt kort tid, men en uppföljande verifikationsanalys av positiva fynd är nödvändig.
• LC-QTOF-MS kan användas för screening och verifikation vid ett och samma analystillfälle men är ofta mer tidskrävande både gällande analys och utvärdering av data.
• Med TOF-MS metoder kan man uppnå den flexibilitet som krävs vid analys av internetdroger där omsättningen är stor för de substanser som metoderna bör täcka. De är möjligt att retrospektivt analysera data från tidigare analyserade prover och att utföra förutsättningslös (ej riktad) analys av data.
Martin Josefsson, Agilent Forensic Solution Summit, Mannheim Germany 140226
Martin Josefsson, Equalis användarmöte, Knivsta 140324
Ansvariga medarbetare RMV
Markus Roman (QTOF specialist, blodmetoderna)
Linda Brinkhagen (syntetiska cannabinoider i urin)
Carina Munter (övriga internetdroger i urin)
Carolina (Carro) Birath-Karlsson (immunologisk screening)
Dr. Robert Kronstrand (toxikologisk specialist, design/planering)
Tack för uppmärksamheten!