OLEH:TIM PRAKTIKUM HEMATOLOGI JURUSAN ANALIS KESEHATAN POLTEKKES DEPKES BANDUNG

Hitung Jumlah Lekosit

Sel Darah PutihJumlah lekosit di dalam darah bervariasi sama halnya seperti hemoglobin, hanya jumlah sel leukosit ini tidak tergantung pada jenis kelamin tetapi tergantung pada usia seseorang. Darah dalam sirkulasi mengandung sekitar 4.000 11.000 sel darah putih per mikroliter atau per milimeter kubik darah (/mm3).

Hitung Jumlah LekositHitung jumlah sel lekosit ini sangat berguna dalam membantu diagnosa dokter yaitu adanya infeksi dan perkembangan penyakit. Jumlah sel lekosit meningkat pada keadaan:- infeksi oleh bakteri- lekemia- appendicitis - uremia- kehamilan

Hitung Jumlah LekositJumlah sel lekosit ini menurun di bawah normal yaitu pada penyakit yang disebabkan oleh:- virus seperti measles- brucellosis- thypoid fever- infeksi hepatitis- rhemathoid arthritis- cirrosis hati- lupus eryhematosus.

Hitung Jumlah LekositJumlah sel lekosit seseorang sedikit meningkat jika di periksa pada sore hari dibandingkan dengan pagi hari, juga pada strenous exercise, emotional stress dan anxiety

Hitung Jumlah LekositPrinsip : Dengan penambahan larutan Turk maka darah akan menjadi encer dan sel lain selain lekosit akan lisis. Alat-alat : - Haemocytometer lengkap (Bilik Hitung, Dek glass, pipet Thoma untuk lekosit, pipet Thoma untuk eritrosit ) - Satu set alat untuk pengambilan darah - Mikroskop

Hitung Jumlah LekositBahan : - Darah - Alkohol 70%- Kapas - Larutan Turk : - Asam Asetat Glacial 0,5 mL Fungsi: untuk melisiskan sel selain lekosit - Methyl violet 1% 1 mL Fungsi: memberi warna pada lekosit

- Aquadest 100 mL Fungsi: sebagai pengencer

Hitung Jumlah LekositProsedur : 1. Pengenceran dengan pipet thoma lekosit- Siapkan bilik hitung dengan deck glass- Bersihkan jari pasien dengan alkohol 70%.- Tunggu sampai kering, kemudian tusuk dengan Vaccinostyle - Darah yang keluar isap dengan pipet Thoma lekosit sampai angka 1 (pengenceran 10 kali) atau sampai tanda 0,5 (pengenceran 20 kali)..

Hitung Jumlah LekositIsap larutan Turk sampai angka 11 Kocok perlahan selama 3 menit. Buang tiga tetes pertama lalu masukkan ke dalam bilik hitung.Tunggu beberapa saat (3 menit). Hitung dalam 4 kotak besar (64 kotak sedang berukuran mm x mm).

Hitung Jumlah Lekosit2. Pengenceran dalam tabung menggunakan mikropipet- Siapkan bilik hitung dengan deck glass- Larutan Turk sebanyak 400 uL dipipet menggunakan mikropipet, kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi.- Dari larutan tersebut diambil sebanyak 20 uL kemudian dibuang.- Selanjutnya darah (vena/ kapiler) dipipet sebanyak 20 uL menggunakan mikropipet. (Pengenceran 20 kali).

Hitung Jumlah LekositPerhitungan = P(pengenceran) x V(volume) x N (jumlah sel). 1. P = Pengenceran = 10 kali atau 20 kali2. Koreksi Volume = volume = p x l x t x jumlah kotak = mm x mm x 1/10 mm x 64 kotak= 64 / 160 = 1/2,5 mm3= 2,5/mm33. N = Jumlah sel dalam 64 kotak.

Nilai Normal : 4.000 10.000 sel / mm3

Hitung Jumlah LekositContoh perhitungan:Darah EDTA dipipet dengan pipet Thoma untuk lekosit sampai tanda 0,5, kemudian diisap larutan Turk sampai tanda 11 (pengenceran 20 kali).Koreksi volume: 64 kotak = 64 kotak x mm x mm x 1/10 mm= 64 / 160 = 1/2,5 mm3Jumlah sel dihitung dalam 1 mm3 darah, sehingga koreksi volume menjadi: 1 dibagi 1/2,5= 2,5/mm3

Hitung Jumlah LekositJumlah lekosit yang ditemukan pada 64 kotak dalam bilik hitung: 80 sel.Jadi jumlah lekosit/ mm3 adalah:P x KV x N = 20 x 2,5 x N= 50 x N= 50 x 80= 4.000 sel lekosit/ mm3Normal : 4.000 10.000 sel / mm3

Hitung Jumlah LekositHal-hal yang harus diperhatikan untuk melakukan hitung jumlah sel darah:Memastikan sampel darah homogenMemastikan pengenceran darah sudah dilakukan dengan tepat atau sesuai sehingga setiap sel bisa dihitung satu persatu dengan jelas.Contoh : - Pengenceran darah untuk eritrosit: 100 kali sampai 200 kali- Pengenceran darah untuk Trombosit: 100 kali- Pengenceran darah untuk Lekosit atau eosinofil: 10 kali sampai 20 kali

Hitung Jumlah Lekosit3. Memilih larutan pengencer yang tepat/ sesuai sehingga dapat memperjelas sel yang dihitung.Contoh: Untuk menghitung sel eritrosit: Larutan HayemUntuk menghitung sel lekosit : LarutanTurkUntuk menghitung sel trombosit: LarutanAmonium oksalat 1%Untuk menghitung sel Eosinofil: LarutanVon Dungern.

Hitung Jumlah Lekosit4. Memilih bilik hitung serta penutup kaca (dek glas) yang bersih dan kering untuk memastikan penyebaran sel merata pada saat memasukkan ke bilik hitung.5. Mengisi bilik hitung dalam satu aliran yang berkesinambungan untuk memastikan tidak ada gelembung udara atau tumpah.

Hitung Jumlah Lekosit6. Menghitung sel dengan cara yang sistematis untuk meminimalkan kesalahan menghitung sel dengan cara menentukan patokan menghitung sel.Ada empat pilihan dalam menentukan patokan hitung sel:1. Kiri - atas2. Kanan - atas3. Kiri- bawah4. Kanan- bawahYang paling umum dipilih adalah patokan KIRI - ATAS

Hitung Jumlah Lekosit7. Menghitung jumlah sel dalam sampel yang asli dalam per mm3 darah.8. Meyakinkan perhitungan yang dilakukan konsisten.Misalnya: untuk hitung jumlah lekosit perbedaan jumlah sel dalam setiap kotak ukuran besar 1 mm x 1 mm ( 16 kotak ukuran mm x mm) jumlahnya tidak boleh lebih dari 10 sel lekosit.

Hitung Jumlah LekositSumber-sumber kesalahan:1. Bilik hitung dan pipet kotor.2. Pipet tidak akurat.3. Sampel tidak homogen.4. Teknik pengenceran salah.5. Pengisian cairan ke dalam bilik hitung yang berlebih atau kurang.6. Menghitung sel terlalu cepat sehingga sel belum terdistribusi sempurna.7. Tidak konsisten dalam menggunakan patokan hitung sel.

LEUKOCYTEERYTHROCYTE1. THOMAS PIPET2. COUNTING CHAMBER3. DILUTING FLUID4. HEMOLANCET COTTON + 70% ETHANOLTURK..- HAYEM- FORMAL CITRATECOUNTING CHAMBER = IMPROVED NEUBAUER BURKER , ETC.COLOUR BAND& NEWTONS RINGCHAMBER DEPTH = 0.1 mm..

IMPROVED NEUBAUERLEUKOCYTES COUNT :4 CORNER SQUARES ( L ) = 1 X 1 X 0.1 mm3ERYTHROCYTES COUNT :

LEUKOCYTE COUNT

COUNT BY MICROSCOPECONDENSOR : DOWN WARDOBJECTIVE : 10 XCALCULATION :NORMAL :Dewasa : 4.000 - 10.000 mm3 Bayi baru lahir : 10.000 - 12.000 mm31-6 bulan : 4.000 - 15.000 mm34-7 tahun : 4.000 - 11.000 mm3 8-12 tahun : 4.000 - 10.000 mm3IMPROVED NEUBAUERCOUNTING CHAMBER

01.000.0002.000.0003.000.0004.000.0005.000.0006.000.000Concentration / lconcentration

CBC.RBC, WBC, and PLT counts are each expressed as concentrations - cells per unit volume.International Committee for Standardization in Hematology (ICSH) recommends that the unit of volume be the liter.The preferred mode of expressing blood counts:RBC: 5.00 x 1012/L or 5.00 x 106/uLWBC: 7.00 x 109/L or 7.00 x 103/uLPLT: 300 x 109/L or 300 x 103/L

Manual method

Methods in performing CBCManual method - utilizes a hemacytometer1.2.3.4.5.W - WBC R - RBC P - Platelets

Automated methodElectrical ImpedanceCells that pass through an aperture through which a current is flowing causes changes in electrical resistance that are counted as voltage pulses. The size of the pulse generated by the cell is proportional to its volume.

Light ScatteringCells are detected and counted as they pass through a focused beam of light instead of through an electrical field.Cells suspended in diluent pass through a conical chamber called a flow cell, then the cells are irradiated with a beam of light from a light source (i.e. laser beam) generating a scattered light. Different cells have different light scattering intensities that could be proportional to their cell size and intracellular density Automated method

DiluentManualAutomated

RBCIsotonic solutionNot done due Recommended preserves the shapelack of accuracyof the cellsand reliability

WBC2% acetic acidDone when there Recommendedlyses the red cellsis a low WBC countand platelets

PLT1%ammonium oxalateDone when there Recommendedlyses red cellsis a low PLT count

Sekian dan terima kasihAtas perhatiannya