2

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение...……………………………………...……………….…………….. 5

Глава 1. Обзор литературы………………………………………………… 12

1.1. Распространенность проктологических заболеваний.

Проблемы их лечения……………………………………..………… 12

1.2. Анализ номенклатуры отечественного рынка лекарственных

форм для местного лечения проктологических

заболеваний…………………………………………………………. 14

1.3. Физико-химические свойства и биологическая роль анестезина… 17

1.4. Методы идентификации и количественного определения

анестезина……………………………………………….…………… 19

1.5. Физико-химические свойства и биологическая роль

-каротина микробиологического…………………..……………… 21

1.6. Методы идентификации и количественного определения

-каротина микробиологического …………………...…………….. 25

1.7. Действие эфирных масел на организм человека……..…………..... 26

1.8. Результаты современных исследований по применению

растений рода Monarda L. в научной медицине………..………… 29

1.9. Методы идентификации и количественного определения

эфирных масел……………………………….………………………. 32

Выводы…...…………………………………………………………………… 35

Экпериментальная часть …………………….……………………………. 36

Глава 2. Материалы и методы исследования….………………………... 36

2.1. Материалы исследования…………………………………………… 36

2.2. Методы исследования…………………….………………………… 39

2.2.1. Физические и физико-химические методы….…………………….. 39

2.2.2. Валидация методики ГХ для определения подлинности

и количественного содержания эфирного масла

монарды дудчатой в суппозиториях…………………..…………. 45

2.2.3. Биофармацевтические методы…………………..…………………. 46

3

2.2.4. Микробиологические методы ……………….….………………….. 47

2.2.5. Фармакологические методы …………………..……………………. 49

2.3. Дизайн исследования……………………………..…………………. 49

Глава 3. Технологические и биофармацевтические исследования

по разработке состава и технологии суппозиториев

с биологически активными веществами………………………………... 52

3.1. Оценка качества эфирного масла монарды дудчатой…………….. 52

3.2. Скрининговые исследования антимикробных и

противовоспалительных свойств эфирного масла

монарды дудчатой…………………………………………………… 59

3.3. Разработка состава суппозиториев с биологически

активными веществами……………………………………............... 61

3.4 . Разработка состава суппозиториев с биологически активными

веществами в сочетании с местным анестетиком…………………. 71

3.5. Обоснование и разработка технологии производства

суппозиториев «Монавитол»……………………………………….. 76

3.5.1. Определение температурного режима ведения процесса

получения суппозиториев «Монавитол»…………………............... 76

3.5.2. Описание технологического процесса изготовления

суппозиториев «Монавитол»…...…………………………............... 80

Выводы ……………………………………………………………………….. 92

Глава 4. Стандартизация и разработка норм качества

суппозиториев с биологически активными веществами ………………

93

4.1. Оценка качества суппозиториев «Монавитол»….………………… 93

4.2. Валидация методики ГХ определения подлинности и

количественного содержания ЭМ монарды

в препарате «Монавитол»……………………………………………

98

4.3. Изучение микробиологической чистоты суппозиториев.………… 107

4.4. Изучение стабильности суппозиториев в процессе хранения…… 108

Выводы ……………………………………………………………………….. 112

4

Заключение…..………………………………………………………………. 113

Список сокращений……………………………………………………….… 115

Список литературы…………………………………………………………. 116

Приложения…...……………………………………………………............... 135

5

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Одной из важных проблем современной медицины является диагностика, ле-

чение и профилактика проктологических заболеваний. В последнее время заболе-

вания прямой кишки, в частности, проктит, проктосигмоидит, геморрой, получа-

ют все большее распространение и не имеют тенденции к снижению. Причиной

этого являются сидячий, малоподвижный образ жизни, нерациональное питание,

вредные привычки, такие как злоупотребление алкоголем, стрессы (Л. К. Овчин-

ников, 2009; А. С. Логинов и др., 2000).

Согласно статистическим данным при скрининге проктологические заболе-

вания выявляются у каждого четвертого здорового взрослого человека, при этом

количество мужчин и женщин, страдающих этими заболеваниями, примерно оди-

наково. Сочетание двух и более заболеваний наблюдается примерно у 1/3 пациен-

тов. Среди клинически манифестирующих проктологических заболеваний первые

четыре места занимают геморрой (43%), проктит и проктосигмоидит (17%),

анальная трещина (10%) и опухоли толстой кишки, в основном рак прямой кишки

(9,2%) (Л. А. Соловьева, 2003; В. Л. Ривкин, 2001).

В настоящее время среди методов лечения в проктологии преобладают хи-

рургические, однако многие формы проктита, проктосигмоидита и геморроя нуж-

даются в консервативной медикаментозной терапии. Комплексная терапия гормо-

нальными (кортикостероиды, производные 5-аминосалициловой кислоты) и анти-

бактериальными ЛС (ампициллин, цефалоспорины и тетрациклины) улучшает

общее состояние больных, способствует снижению воспалительных процессов в

кишечнике. Но наблюдаемые результаты лечения вышеперечисленными группа-

ми ЛС непродолжительны, а появление стойкой ремиссии – редкость (Н. С. Беля-

лова, 2005; Л. К. Овчинников, 2009). Поэтому поиск и разработка новых безопас-

ных и эффективных фармакотерапевтических средств – актуальная задача.

6

Одним из основных вопросов разработки состава и технологии ЛС является

выбор ЛФ. Для местного воздействия на очаг воспаления применяются водные

извлечения лекарственных растений, растворы антисептических средств, мази,

тампоны. При этом ведущая роль в фармакотерапии проктологических заболева-

ний принадлежит суппозиториям. Безусловно, суппозитории как лекарственная

форма обладают рядом ценных и очевидных преимуществ. Кроме того, ректаль-

ный способ введения очень удобен и безопасен для гериатрических больных и для

детей. Введение лекарственных веществ непосредственно per rectum, безусловно,

благоприятно влияет на воспалительные процессы, позволяет облегчить местные

боли, ускорить заживление разрывов и трещин (Н. Г. Козлова, 2005).

При этом все большее внимание привлекают препараты растительного про-

исхождения как наиболее безопасные и органичные для человеческого организма.

На фармацевтическом рынке России наблюдается ограниченный ассорти-

мент суппозиториев отечественного производства, в состав которых входят сред-

ства растительного происхождения. К ним относятся масло семян тыквы, облепи-

ховое масло, измельченная масса хлорофиллсодержащих водорослей, экстракт

красавки. Поэтому исследования, касающиеся поиска БАВ, обоснования и созда-

ния на их основе суппозиториев, предназначенных для лечения данного класса

заболеваний в клинических и амбулаторных условиях, являются актуальными.

Перспективными для профилактики и лечения проктологических заболева-

ний лекарственными веществами являются -каротин микробиологический, обла-

дающий ранозаживляющим, противовоспалительным, иммуномодулирующим

действием, а также эфирное масло монарды дудчатой, которое проявляет проти-

вогрибковые, противовоспалительные и иммуномодулирующие свойства.

Учитывая тот факт, что клиническая картина большинства проктологиче-

ских заболеваний сопровождается такими симптомами, как жжение, зуд, болевые

ощущения, использование ЛС группы «местные анестетики» в разработке ЛП для

консервативного лечения проктологических заболеваний не теряет своей значи-

мости.

7

Степень разработанности темы исследования. Лечение большинства

проктологических заболеваний начинается с консервативных мер: диеты, приема

слабительных средств, применения ректальных ЛФ, в состав которых входят ЛС

различных фармакологических групп (местные анестетики, антисептические

средства и др.). Среди ЛС растительного происхождения наиболее известными

являются красавки экстракт, ихтиол, облепиховое масло.

Однако исследований в отношении создания ректальных суппозиториев с

эфирными маслами не проводилось и соответствующих технологических реше-

ний не принималось, в связи с чем новым направлением развития темы является

разработка дизайна исследования, связанного со стандартизацией эфирного масла

монарды дудчатой, выбором оптимального состава ректальных суппозиториев,

разработкой технологий производства, анализа лекарственной формы и оценкой

ее стабильности. Полученные результаты представлены в настоящей работе.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования является разработка состава, технологии и

стандартизация новой ЛФ (суппозиториев), содержащей комплекс биологически

активных веществ в сочетании с местным анестетиком для консервативного лече-

ния проктологических заболеваний.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести оценку качества эфирного масла монарды дудчатой, в том

числе исследования, подтверждающие его антимикробную и противовоспали-

тельную активность.

2. Теоретически и экспериментально обосновать и разработать состав,

технологию изготовления суппозиториев с БАВ: -каротином микробиологиче-

ским и эфирным маслом монарды дудчатой.

3. Теоретически и экспериментально обосновать и разработать состав,

технологию изготовления суппозиториев с БАВ (-каротином микробиологиче-

ским и эфирным маслом монарды дудчатой) в сочетании с местным анестетиком.

4. Разработать технологическую схему производства предлагаемых суп-

позиториев.

8

5. Разработать методики контроля качества предлагаемых суппозиториев

для стандартизации ЛФ.

6. Провести валидацию аналитических методик идентификации и количе-

ственного содержания эфирного масла монарды дудчатой в разработанной ЛФ.

7. Провести оценку качества, исследовать стабильность разработанных

суппозиториев в процессе хранения.

8. Разработать проект ФСП на эфирное масло монарды дудчатой, проект

ФСП на суппозитории.

Научная новизна исследования. На основании выполненных исследова-

ний проведена стандартизация эфирного масла монарды дудчатой, а также под-

тверждены его широкое антимикробное действие и противовоспалительная ак-

тивность.

Впервые на основании комплекса проведенных технологических, физико-

химических, биофармацевтических исследований обоснованы и разработаны со-

став и технологическая схема стабильных суппозиториев с БАВ (-каротином

микробиологическим и эфирным маслом монарды дудчатой), а также суппозито-

риев с БАВ в сочетании с местным анестетиком. Проведены реологические ис-

следования предложенных суппозиториев.

Разработаны методы контроля качества суппозиториев с рабочим названием

«Монавитол», проведена валидация аналитических методик идентификации и ко-

личественного содержания эфирного масла монарды дудчатой в разработанной

ЛФ. Определены основные показатели качества разработанных суппозиториев,

условия и срок хранения.

Теоретическая значимость заключается в изучении масштабов распро-

страненности проктологических заболеваний, структурировании известного ас-

сортимента ректальных ЛФ с БАВ, формулировании их достоинств и недостат-

ков, обосновании целесообразности использования БАВ: -каротина микробиоло-

гического и эфирного масла монарды дудчатой, в разработке состава и техноло-

гии ректальных суппозиториев.

Практическая значимость заключается в разработке методов контроля ка-

9

чества эфирного масла монарды дудчатой, состава и технологии ректальных суп-

позиториев с комплексом БАВ (-каротином микробиологическим и эфирным

маслом монарды дудчатой). На основании проведенных фармакотехнологических

исследований предложена технологическая схема производства разработанной

ЛФ в заводских условиях, даны рекомендации по проведению основных этапов

технологического процесса.

Разработаны и утверждены проекты ФСП на эфирное масло монарды дуд-

чатой и суппозитории с комплексом БАВ в сочетании с местным анестетиком, а

также акт внедрения на предприятии ООО «Медлинфарм» (г. Москва).

Фрагменты технологических и аналитических исследований внедрены в ла-

бораторно-практический курс дисциплины «Фармацевтическая технология» на

фармацевтическом факультете ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный на-

циональный исследовательский университет», в лекционный материал учебного

процесса кафедры технологии лекарств ГБОУ ВПО «Пятигорская ГФА Мин-

здравсоцразвития России» (дисциплина «Фармацевтическая технология», модуль

«Промышленное производство»), а также в лабораторно-практический курс дис-

циплины «Фармацевтическая технология» ГБОУ ВПО «Курский государственный

медицинский университет Минздрава России».

Методология и методы исследования. В диссертационном исследовании,

которое является многоплановым, методологический подход базируется на вы-

полнении комплекса теоретических, технологических, биофармацевтических, хи-

мических и физико-химических исследований, обеспечивающих получение со-

временных качественных, эффективных и безопасных лекарственных средств.

Дизайн исследования отражает структуру и последовательность выполнения всех

этапов диссертационной работы.

Положения, выносимые на защиту:

результаты оценки качества эфирного масла монарды дудчатой, включая

исследования его антимикробной и противовоспалительной активности;

результаты технологических и биофармацевтических исследований с це-

лью выбора вспомогательных веществ для суппозиториев;

10

результаты разработки технологического процесса производства суппо-

зиториев с БАВ (-каротином микробиологическим и эфирным маслом монарды

дудчатой), а также их сочетание с местным анестетиком – анестезином;

методики контроля качества разработанных суппозиториев;

результаты валидации аналитических методик идентификации и количе-

ственного содержания эфирного масла монарды дудчатой в разработанной ЛФ;

нормы качества разработанных суппозиториев.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность резуль-

татов подтверждена комплексным подходом к экпериментальной части диссерта-

ционного исследования, тщательностью и многократным повтором проведенного

эксперимента.

Все полученные результаты статистически обработаны с использованием

компьютерной программы Excel и сопоставлены с литературными данными.

Основные положения диссертационного исследования доложены и обсуж-

дены в рамках Международной научно-практической конференции «Ботаниче-

ские сады в XXI веке: сохранение биоразнообразия, стратегия развития и иннова-

ционные решения», посвященной 10-летию образования Ботанического сада Бел-

городского государственного университета (г. Белгород, апрель 2009 г.), 66-й на-

учно-практической конференции Пятигорской государственной фармацевтиче-

ской академии (г. Пятигорск, январь 2011 г.), 68-й научно-практической конфе-

ренции Пятигорской государственной фармацевтической академии (г. Пятигорск,

январь 2013 г.).

Публикации по работе. По материалам диссертационных исследований

опубликовано 13 работ, в том числе 8 в изданиях, рекомендованных ВАК. Полу-

чено техническое решение, защищенное в режиме ноу-хау.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических

наук. Диссертационная работа выполнена на базе ФГАОУ ВПО «Белгородский

государственный национальный исследовательский университет» в рамках науч-

ного направления «Разработка методологических подходов к анализу природных

и синтетических биологически активных соединений в объектах различного про-

11

исхождения. Изучение фармакологических аспектов использования данных био-

логически активных соединений», утвержденного в 2006 году.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на

134 страницах машинописного текста и состоит из 4 глав, заключения, списка ли-

тературы и приложений. Работа содержит 28 таблиц, 17 рисунков. Список литера-

туры включает 173 источника, их них 69 – на иностранных языках.

12

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространенность проктологических заболеваний.

Проблемы их лечения

Проктологические заболевания представляют собой серьезную медико-

социальную проблему вследствие неуклонного роста заболеваемости, особенно

среди молодого, трудоспособного населения, а также из-за развития серьезных

осложнений, приводящих к ранней инвалидизации [49].

Основными причинами возниконовения проктологических проблем явля-

ются неправильное питание, малоподвижный образ жизни, запоры, беременность

и роды, стрессы, врожденные аномалии развития, травмы. Они ведут к появлению

воспалительных процессов в кишечнике, нарушению его моторной функции и

микрофлоры, травматизации слизистой оболочки, расширению вен дистального

отдела кишечника [9].

По оценке ученых, среди населения России распространенность проктоло-

гических заболеваний в среднем составляет от 25 до 30%, причем наиболее кли-

нически манифестируемыми являются геморрой (43%), проктит и проктосигмои-

дит (17%), анальная трещина (10%), а также опухоли толстой кишки, в том числе

рак прямой кишки (9,2%) [72, 81].

Первоначальная клиническая картина проктологических заболеваний не

всегда четко выражена. В большинстве случаев отмечается период бессимптом-

ного течения, затем появляются признаки «кишечного расстройства»: учащенный

стул или запоры, вздутие кишечника, зуд и жжение в области анального отвер-

стия. Со временем эти явления становятся более выраженными, приобретают по-

стоянный характер. Отмечаются повышение температуры тела, острые спастиче-

ские боли в кишечнике, развивается тяжелый понос или запор, сопровождающий-

ся слизистыми выделениями и кровью. Наблюдаются общая интоксикация и обез-

воживание организма [68].

13

В настоящее время среди методов лечения в проктологии преобладают хи-

рургические, однако многие формы проктита, проктосигмоидита и геморроя нуж-

даются в консервативной медикаментозной терапии [5, 109].

Основными принципами рациональной медикаментозной терапии являются

угнетение и ликвидация патогенных возбудителей, снижение воспалительной ре-

акции, общая дезинтоксикация организма, стимуляция иммунной системы и по-

вышение резистентности организма [43].

Для лечения проктологических заболеваний основными группами ЛС явля-

ются производные 5-аминосалициловой кислоты, антибиотики, гормональные

средства. Среди производных 5-аминосалициловой кислоты наиболее эффектив-

ными являются сульфасалазин, олсалазин, салазопирин, салазопиридазин и сала-

зодиметоксин (два последних имеют пролонгированное действие). Терапия таких

заболеваний, как болезнь Крона (легкая и средняя формы), неспецифический яз-

венный колит и др., данной группой лекарственных средств примерно в 90% слу-

чаев дает положительный результат [93, 163]. Помимо производных 5-

аминосалициловой кислоты широко применяются антибиотики группы пеницил-

линов, тетрациклинов, цефалоспорины [67, 70].

Терапия гормональными средствами (гидрокортизоном, преднизолоном,

метилпреднизолоном и др.) применяется при обострениях, а также при тяжелых

формах заболеваний. Гормональные препараты назначают в виде клизм, перо-

рально и парентерально. Согласно литературным данным, комплексная терапия

гормонами и антибиотиками в большинстве случаев улучшает общее состояние

пациентов, снижает воспалительные явления в кишечнике. Однако, достигнутые

результаты непродолжительны, а появление стойкой ремиссии – редкость [70,

108, 147].

14

1.2. Анализ номенклатуры отечественного рынка

лекарственных форм для местного лечения

проктологических заболеваний

Контент-анализ официальных источников информации о зарегистрирован-

ных ЛС позволил выявить полное количество зарегистрированных препаратов,

применяемых в качестве местных противовоспалительных ЛС для лечения прок-

тологических заболеваний (за исключением производных 5-аминосалициловой

кислоты и гормональных ЛС). Общий ассортимент зарегистрированных в России

ЛС данной группы включает в себя 30 препаратов 24-х торговых наименований.

Среди них доля отечественных ЛС составляет 79,2% (19 наименований), осталь-

ные 20,8% (5 наименований) – ЛС зарубежного производства [46, 102]. На рисун-

ке 1 представлена структура ассортимента противоспалительных проктологиче-

ских ЛС по видам лекарственных форм.

6,7%

13,3% 3,3%

76,7%

суппозитории масла мази крема

Рисунок 1 – Структура ассортимента противовоспалительных

проктологических ЛС по видам лекарственных форм

Как видно, в фармакотерапии проктологических заболеваний ведущая роль

принадлежит суппозиториям. Доля данной группы ЛФ составляет 76,7% (23 ЛП)

от общего числа ЛФ.

Среди способов введения ЛС ректальный имеет ряд преимуществ, а именно:

быстрое всасывание лекарственного вещества за счет его попадания непосредст-

15

венно в кровоток, минуя желудочно-кишечный тракт и печень. Это также дает

возможность назначения препаратов, инактивирующихся ферментами желудочно-

кишечного тракта или подвергающихся интенсивному пресистемному метабо-

лизму, минимизирует побочные эффекты, позволяет применять ЛС как для мест-

ного, так и для общего воздействия на организм. Простота и безболезненность

введения лекарственных средств делает их удобными для использования в педи-

атрии, гериатрии и психиатрической практике. Кроме того, ректальный способ

введения не требует специального инструментария, производится без нарушения

целостности кожных покровов, а соответственно, безопасен в плане инфицирова-

ния вирусами иммунодефицита человека, гепатита и др.

Немаловажным является и тот факт, что локализация ЛС непосредственно

per rectum позволяет ускорить регенерацию слизистой, уменьшить воспалитель-

ные явления и болевые ощущения, что очень важно при комплексной терапии

проктологических заболеваний [40, 47, 158].

При изучении состава суппозиториев отечественного производства отмеча-

ется ограниченный ассортимент тех из них, в состав которых входят вещества

растительного происхождения (таблица 1).

Таблица 1 – Ассортимент ректальных суппозиториев на основе БАВ

растительного происхождения

Наименование ЛП Активный компонент

1 «Тыквеол»

Р N002321/02 Масло семян тыквы – 500 мг

2 «Олестезин»

Р N001104/01-2002

Облепихового

масла концентрат – 0,33 г

3 «Облепиховое масло»

Р N000270/01

Облепихового

масла концентрат – 0,5 г

4 «Альгинатол»

Р N001060/01

Натрия алгинат (полисахарид растительного происхожде-

ния, получаемый из бурых морских водорослей) – 250 мг

5 «Анузол»

P N003492/01

«Бетиол»

Р N003145/01

«Красавки экстракт»

Р N000580/02

Экстракт красавки густой – 20 мг

Экстракт красавки густой – 15 мг

Экстракт красавки густой – 15 мг

16

Как видно из таблицы 1, отечественной промышленность производятся

суппозитории «Тыквеол», содержащие масло семян тыквы. На основе облепихо-

вого масла производятся суппозитории «Олестезин», «Облепиховое масло». На

основе экстракта красавки – «Анузол», «Бетиол», «Красавки экстракт». Эффек-

тивным лекарственным средством при лечении заболеваний прямой кишки явля-

ются суппозитории «Альгиналон», в состав которых входят полисахариды расти-

тельного происхождения. Однако такой ограниченный ассортимент не удовлетво-

ряет потребностей населения Российской Федерации.

Анализ основ, применяемых в отечественном производстве суппозиториев

проктологического назначения, свидетельствует об ограниченном ассортименте.

Так, в 66,7% ЛП основой является витепсол (12 наименований ЛП), полиэтиле-

ноксидная основа используется для производства 3 наименований суппозиториев

(«Анестезол», «Красавки экстракт», «Олестезин») (16,7%), основой для суппози-

ториев с маслами «Тыквеол», «Облепиховое масло» является масло какао (11,1%).

Твердый жир применяется лишь при производстве суппозиториев «Проктозан»

(5,5%) [54, 94].

Ректальные мази, представленные на отечественном фармацевтическом

рынке «Проктозан», «Ультрапрокт», «Релиф», «Релиф Адванс» и крем «Прокто-

гливенол», составляют в структуре ЛС местного применения 13,3% и 3,3% соот-

ветственно и используются с целью воздействия на локальные процессы в прямой

кишке. Мази как лекарственная форма, безусловно, обладают рядом преиму-

ществ: они просты в изготовлении, имеют достаточно дешевую основу. Однако

при применении ректальных мазей нередко ЛС не достигают пораженного участ-

ка аноректальной области, также возникают трудности при нанесении этих ЛФ на

необходимый участок и удержании их на определенном месте. Кроме того, для

применения данных ЛФ необходимо наличие медицинского персонала, специаль-

ных приборов, имеются сложности при дозировании, влияет температурный фак-

тор. Из-за выше перечисленных недостатков ректальные мази и крема не получи-

ли массового распространения в медицинской практике [94].

В настоящее время в проктологии широко применяются аэрозоли («Сало-

17

фальк», «Гипозоль»). Они содержат в своем составе анестетики, кортикостерои-

ды, антисептики, нестероидные противовоспалительные средства. Однако данная

лекарственная форма также недостаточно удобна для самостоятельного примене-

ния [94].

Для местного воздействия на очаг воспаления применяются теплые сидячие

ванны с растворами антисептических средств (фурациллина, калия перманганата),

с настоем ромашки, компрессы с мазью Вишневского и ихтиолом. В качестве ле-

карственных веществ в микроклизмах используют водные настои ромашки, ка-

лендулы, шалфея или пустырника, колларгол, а также масла облепиховое, под-

солнечное, семян тыквы, рыбий жир. Безусловно, эффективность микроклизм хо-

рошо известна и не нуждается в доказательствах, однако приготовление настоев,

способ введения недостаточно комфортен для пациента. Кроме того, микроклиз-

мы как ЛФ часто потенцируют раздражение слизистой оболочки кишечника [69,

168].

1.3. Физико-химические свойства и биологическая роль анестезина

Анестезин по химической структуре является этиловым эфиром

п-аминобензойной кислоты (рисунок 2).

Рисунок 2 – Структурная формула анестезина

Анестезин представляет собой белый кристаллический порошок с молеку-

лярной массой 165,19, без запаха, слабогорького вкуса; вызывает на языке чувст-

18

во онемения. Очень мало растворим в воде, растворяется в жирных маслах, легко

растворяется в спирте, хлороформе, эфире, pKa=2,5. Температура плавления 89-

91,5°С [21].

Анестезин является одним из первых синтетических соединений, приме-

няемых в качестве местноанестезирующих средств. Несмотря на более чем 100-

летнее существование (синтезирован в 1890 г.), его применение в медицине не те-

ряет своей актуальности [54].

Анестезин относится к группе поверхностно-активных местноанестези-

рующих средств. Механизм действия анестезина связан с уменьшением прони-

цаемости клеточной мембраны для ионов Na+, вытеснением ионов Ca

2+ из рецеп-

торов, расположенных на внутренней поверхности мембраны, а также с блокиро-

ванием возникновения и проведения нервных импульсов. При местном и перо-

ральном применении абсорбция минимальна. При нанесении на слизистые обо-

лочки действие развивается в течение 1 мин. и продолжается 15-20 мин. [94].

В связи с трудной растворимостью в воде препарат не применяют паренте-

рально. Однако широкое применение анестезин нашел в наружных ЛФ (мазях,

линиментах, присыпках) для лечения и профилактики дерматологических заболе-

ваний, сопровождающихся зудом, а также для обезболивания раневой и язвенной

поверхности. Аэрозоль «Ампровизоль», одним из активных компонентов которо-

го является анестезин, применяется для местного обезболивания, как противовос-

палительное и охлаждающее средство при солнечных и термических ожогах I и II

степеней. Анестезин входит в состав таблетированных ЛФ «Белластезин» и «Па-

вестезин», применяемых при гастралгиях, спазмах желудка и кишечника [46, 54].

При заболеваниях прямой кишки (трещины, зуд, геморрой) назначают суп-

позитории, содержащие 0,05-0,1 г анестезина, 5-20% масляные растворы приме-

няют для анестезии слизистых оболочек. Обычно анестезин и его ЛП хорошо пе-

реносятся и не вызывают зависимости [43, 94].

19

1.4. Методы идентификации

и количественного определения анестезина

Так как анестезин является зарегистрированным ЛС, то его анализ прово-

дится в соответствии с разработанной нормативной документацией (ФС 42-3024-

00).

Подлинность анестезина, согласно ФС (42-3024-00), а также НД США, ус-

танавливают по идентичности ИК-спектра препарата в области от 4000 до 400см-1

и прилагаемых к ФС рисунков спектра СО анестезина. УФ-спектр щелочного рас-

твора препарата в хлороформе в области от 230 до 350 нм имеет максимум по-

глощения при 281 нм и минимум поглощения при 238 нм [19, 172].

Для установления подлинности анестезина также рекомендуется выполнять

серию аналитических реакций, например реакцию образования азокрасителя.

Данная реакция является общей для соединений, имеющих первичную аромати-

ческую аминогруппу, и сопровождается появлением вишнево-красного окраши-

вания. Анестезин, реагируя с п-диметиламинобензальдегидом в присутствии кон-

центрированной серной кислоты, образует основание Шиффа желтого цвета. Яв-

ляясь сложным эфиром, анестезин взаимодействует с гидроксиламином в щелоч-

ной среде с образованием гидроксамовой кислоты, при добавлении к которой рас-

твора хлорида железа (III) появляется красно-бурое окрашивание [8, 19].

Одной из характерных реакций на анестезин является щелочной гидролиз.

Наличие этилового спирта можно обнаружить по реакции образования йодофор-

ма, а также по реакции образования этилацетата [92].

Анестезин относится к легко окисляющимся веществам. При добавлении

5%-ного раствора хлорамина в кислой среде появляется красно-оранжевое окра-

шивание. При добавлении к раствору анестезина в концентрированной серной ки-

слоте азотной кислоты появляется желто-зеленое окрашивание, переходящее в

красное при добавлении воды и раствора гидроксида натрия [89].

Кроме того, анестезин можно идентифицировать с помощью осадительных

20

(общеалкалоидных) реактивов (пикриновой, фосфорновольфрамовой, фосфорно-

молибденовой кислот, хлорида ртути (II) и др.), а также с помощью реакций гало-

генирования [21].

Для количественного определения анестезина ФС (42-3024-00) рекомендует

выполнять нитритометрический метод титрования.

В литературе также описаны методики бромид-броматометрического и йод-

хлорметрического титрования, основанные на образовании дибром- и дийодпро-

изводных, а также метод неводного титрования в среде безводной уксусной, му-

равьиной кислот или в уксусном ангидриде 0,1М раствором хлорной кислоты [8,

21].

Количественное определение анестезина рекомендуется выполнять также

методом УФ-спектрофотометрии при максимуме светопоглощения 292 нм (рас-

творитель этанол) или 285 нм (0,01М раствор хлорной кислоты) [21].

На основе реакции образования азокрасителя, а также реакции образования

гидроксамовых кислот возможно использование фотоэлектроколориметрического

метода количественного определения анестезина [37, 48]. Ивахиенко П. И. пред-

ложена методика фотометрического определения анестезина по реакции взаимо-

действия с натрия нитритом и этакридина лактатом [91].

В многокомпонентных ЛФ многими учеными предложено количественное

определение анестезина методом ВЭЖХ. Так, Дементьева Н. Н. предлагает ис-

пользовать в качестве неподвижной жидкой фазы 3% неопентилгликольсукцинат,

нанесенный на хромосорб W и силанизированный [23, 24].

Метод ВЭЖХ описан в работах коллектива авторов во главе с Хабаровым

А. А., в качестве подвижной фазы использована смесь ацетонитрила и цитратного

буферного раствора в соотношении 30:70. Сланским В. Э. с соавторами предло-

жена ВЭЖХ, в качестве элюэнта используется смесь ацетонитрила с фосфатным

буферным раствором [16, 45, 79].

В НД США для количественного определения анестезина также предложен

метод ВЭЖХ, при этом в качестве подвижной фазы предлагается использовать

ацетонитрил с добавлением фосфорной кислоты и натрия гептансульфоната. Дан-

21

ная методика описана для глазных капель с анестезином, антипирином и адрена-

лином. Для определения анестезина в сочетании только с антипирином рекомен-

дуется в качестве подвижной фазы использовать смесь ацетонитрила с аммония

ацетатом [172].

Таким образом, анализ литературы позволил выявить достаточное количе-

ство методик идентификации и количественного определения анестезина, на ос-

новании которых и была предложена методика идентификации и количественного

определения анестезина в предлагаемой ЛФ.

1.5. Физико-химические свойства и биологическая роль

-каротина микробиологического

-каротин микробиологический (3,7,12,16-тетраметил-1,18-бис-2,6,6-

триметилциклогексен-1-ил-октадеканоен-1,3,5,7,9,11,13,15,17) – изомер каротина,

чаще всего встречается в клетках растений и микроорганизмов (далее -каротин).

Относится к классу тетратерпенов, углеродный скелет которых построен из четы-

рех С5-изопреновых фрагментов. С двух сторон молекула ограничена шестичлен-

ными кольцами, называемыми -ионами (рисунок 3) [8, 77].

Рисунок 3 – Структурная формула -каротина

Хромоформная группа, ответственная за поглощение каротином видимого

света, представляет собой систему 11-ти сопряженных двойных связей. Данная

система делает -каротин подверженным окислению под действием кислорода

22

воздуха. Считается, что -каротин самоокисляется воздухом, а также легко раз-

рушается под действием ряда факторов: света, температуры, кислорода, рН-среды

[59].

-каротин экстрагируют из растительных источников (тыквы, моркови, об-

лепихи), а также получают путем химического и микробного синтеза [29]. По-

требность в -каротине за рубежом удовлетворяется главным образом за счет

производства препаратов синтетического -каротина. Путем химического синтеза

-каротин получают две фирмы: «Hoffman La Roshe» (США) и «BASF» (Герма-

ния) [155]. Но в случае химического синтеза не исключено попадание в концен-

трат каротина следовых количеств ядовитых химических реагентов, которые ис-

пользуются в качестве катализаторов на разных стадиях производства [114].

-каротин синтезируют представители ряда микрогрибов. В Австралии

осуществляется выпуск -каротина из биомассы морских водорослей Dunaliella

salina [146]. Эффективный метод промышленного получения -каротина разрабо-

тан с использованием микрогриба Blakeslea trispora [151, 155]. Организован про-

мышленный выпуск микробиологического -каротина в виде масляного экстракта

биомассы микрогриба Blakeslea trispora на Верхнеднепровском крахмалопаточ-

ном комбинате (Донецкая область, Украина) и на заводе «Уралбиофарм» (Россия)

[29].

Одной из основных функций -каротина является его преобразование и

превращение в организме человека в витамин А [36, 154].

Содержание в плазме крови человека -каротина колеблется от 80 до 230

мг% и зависит от количества поступления его с пищей. В соответствии с имею-

щимися гигиеническими рекомендациями потребление -каротина должно со-

ставлять 5-6 мг в сутки [33, 116]. Частично в организме он превращается в рети-

нол, необходимый для нормального функционирования сетчатки (обеспечивает

переход опсина в родопсин – пигмент, который обеспечивает ночное зрение). По

биологической активности 1 мг -каротина соответствует 0,167 мг (556 ЭД) рети-

нола (витамина А) [36, 38].

23

Хроническая недосточность -каротина может привести к нарушениям зре-

ния, процессов метаболизма, анемии, роста тканей и организма, снижению сопро-

тивляемости организма тяжелым инфекциям и, как следствие, к повышенной

смертности от них [55, 126, 171].

-каротин проявляет антиокислительные свойства, предотвращая и мини-

мизируя процессы окислительного стресса в организме человека. Окислительный

стресс выступает в качестве фактора развития большого количества хронических

заболеваний, включая рак, катаракту, сердечно-сосудистые заболевания и старе-

ние вообще [77, 134, 152].

Активные формы кислорода и азота могут атаковать различные биологиче-

ские вещества и соединения в организме, в том числе липиды, нуклеиновые ки-

слоты и белки (протеины). Окисление любого из этих субстратов, если его не ос-

тановить, может способствовать развитию хронических заболеваний [118, 131]. -

каротин инактивирует на различных уровнях высокотоксические формы кислоро-

да, азота и свободные радикалы, которые непрерывно образуются в организме в

процессе нормальной жизнедеятельности любой клетки [150, 156, 164].

С антиокислительной функцией -каротина связывают его антиканцероген-

ное действие. -каротин может предотвращать образование злокачественных опу-

холей [107, 110]. Так, американские ученые доказали, что -каротин и иные каро-

тиноиды защищают ДНК клеток от разрушения и уменьшают потенциальный

риск появления рака [119]. При этом, как показывают результаты исследований,

низкий уровень -каротина в крови может рассматриваться как фактор риска раз-

вития онкологических заболеваний, в частности, злокачественных поражений ле-

гких, желудка, мочевого пузыря и шейки матки. Низкий уровень приема -

каротина является причиной 30-40% случаев раковых заболеваний [135, 159].

Результаты множества исследований свидетельствуют об обратной зависи-

мости между риском появления рака легких и употреблением -каротина [106,

144]. Установлено, что при достаточном уровне употребления -каротина умень-

шается риск развития рака желудка и кишечника [136].

24

Пониженное содержание -каротина в сыворотке крови женщин может

привести к появлению рака молочной железы, и диетический прием -каротина

помогает уменьшить прогрессирование рака молочной железы [101, 166, 170].

Анализ 13-ти исследований американских ученых говорит о том, что доста-

точное потребление -каротина из фруктов и овощей помогает снизить развитие

рака почек [142].

Немецкие ученые доказали, что -каротин обладает иммуностимулирую-

щим действием [167]. -каротин принимает участие в процессах деления иммуно-

компетентных клеток, синтезе иммуноглобулинов, интерферона, лизоцима и дру-

гих компонентов специфичной и неспецифичной защиты от инфекций, активиру-

ет ферменты лизосом в фагоцитах, что необходимо для удаления патогенных ми-

кроорганизмов [120, 137].

По данным зарубежных учених, прием -каротина часто болеющими деть-

ми приводит к иммуностимулирующему эффекту, который проявляется в увели-

чении уровня Т-лимфоцитов и иммуноглобулина А сыворотки при стимуляции

функциональной активности фагоцитирующих клеток периферической крови

[115, 143].

-каротин и другие каротиноиды могут облегчать взаимодействие между

соседними клетками путем стимуляции синтеза коннексин-протеинов. Коннекси-

ны формируют поры в мембранах клеток, что позволяет клеткам обмениваться

метаболистическими сигналами. Данный тип межклеточной связи важен для под-

держки клеток в дифференцированном состоянии. Каротиноиды облегчают меж-

клеточное взаимодействие, повышая экспрессию гена, который кодирует коннек-

син-белок. Таким образом, здоровые клетки посылают предопухолевым клеткам

достаточно большой метаболистический сигнал, тем самым оказывая влияние на

нормальный рост клеток и блокируя стадию развития канцергенеза [78, 117, 160].

25

1.6. Методы идентификации и количественного определения

-каротина микробиологического

Согласно ФС 42-3867-99, для идентификации и количественного определе-

ния каротиноидов широко используется метод спектрофотометрии в области от

300 до 500 нм. При идентификации -каротина максимум поглощения должен на-

блюдаться в области 450±4 нм. Данный метод также включен в НД США Фарма-

копею США ХХIV изд. [8, 172].

Для количественного определения -каротина в ЛФ, а также биологических

жидкостях и пищевых продуктах, в литературе помимо спектрофотометрии опи-

сан ряд спектральных методов анализа. Так, в работах Goodman G. E. и др. описа-

на методика ВЭЖХ для определения содержания -каротина в плазме и тканях

животных [135].

Колориметрический метод с треххлористой сурьмой используется для оп-

ределения содержания -каротина в пищевых продуктах как в России, так и за ру-

бежом. Метод основан на реакции -каротина с треххлористой сурьмой в хлоро-

форме с образованием синей окраски, интенсивность которой прямо пропорцио-

нальна содержанию -каротина [89, 172].

Характерной является также особенность каротиноидов, в том числе и -

каротина, избирательно адсорбироваться на минеральных и некоторых органиче-

ских абсорбентах, что позволяет идентифицировать и разделять их с помощью

хроматографии в различных системах растворителей. При обнаружении -

каротина в пищевых продуктах методом ТСХ предложена система растворителей

«бензол : ацетон» (3 : 1). При хроматографическом определении каротиноидов в

плодах рябины использована система «циклогексан : эфир» (80 : 20) с последую-

щей обработкой хроматограммы 10% раствором фосфорномолибденовой кислоты

в этиловом спирте. После прогревания пластинки при температуре 60-80°С каро-

тиноиды проявляются в виде пятен синего цвета на желто-зеленом фоне [26, 112].

26

Для идентификации -каротина в препарате «Каролин» описана методика

ТСХ в системе растворителей «гексан : бензол» (85 : 15). На хроматограмме ана-

лизируемого образца должно обнаружиться пятно желтого цвета. Чувствитель-

ность определения составляет 0,3 мкг [59]. Хроматография в тонком слое сорбен-

та предложена Чечета О. В., Сафоновой Е. Ф. и Сливкиным А. И. При проведении

хроматографии авторами в качестве элюента предложена смесь «гексан : бензол»

(29 : 1). Учитывая физико-химические свойства -каротина, авторы отмечают, что

при использовании хроматографии проявителя не требуется, но развитие хрома-

тограмм следует проводить, защищая хроматографическую камеру от попадания

прямых световых лучей. Это связано прежде всего с фотолабильностью -

каротина [98].

Таким образом, на основании обзора литературных источников можно сде-

лать вывод, что для идентификации и количественного определения -каротина

наиболее приемлемым методом является спектрофотометрия.

1.7. Действие эфирных масел на организм человека

Саногенетическая концепция подразумевает заблаговременную стимуляцию

систем организма, ответственных за поддержание гомеостаза. Под влиянием аэро-

золей ЭМ отмечается стимуляция иммунных механизмов защиты, снижается уро-

вень простудных заболеваний, быстрее ликвидируются последствия физического

напряжения [3, 15]. Большинство ЭМ являются эффективными спазмолитиками,

стимулируют сердечную деятельность. Кроме того, ЭМ обладают обезболиваю-

щим и противовоспалительным свойствами [103, 145].

Профилактическое направление в современной медицине занимает одно из

ведущих мест. В связи с этим поиск новых лекарственных веществ, обладающих

профилактическим действием, не только не потерял актуальности, но стал еще

более востребован. Исследования Е. С. Короленко, В. В. Николаевского и др. по-

27

казали, что растительные ароматические вещества обладают универсальным про-

филактическим действием, поскольку имеют ряд преимуществ перед синтетиче-

скими средствами [63, 66]. Преимущества растительных ароматических веществ

проявляются в том, что они являются многокомпонентными соединениями. Труд-

но переоценить этот факт, если учесть сложность и многогранность патогенеза

различных форм патологий, обусловленных экологическими факторами [138].

Использование растительных ароматических веществ в медицинских уч-

реждениях способствует санации воздуха помещений, профилактике послеопе-

рационных осложнений и внутрибольничного инфицирования, улучшению сани-

тарно-гигиенических условий содержания больных. Растительные ароматиче-

ские вещества также применяются для лечения при травмах, язвах, пролежнях

[12, 41].

Многокомпонентность растительных ароматических веществ обеспечивает

разносторонность их воздействия на течение патологического процесса. Одно яв-

ляется бесспорным – успешная профилактика различных форм патологий должна

быть многоцелевой. Растительные ароматические биорегуляторы используются в

гомеопатических дозах [139]. При этом ответная реакция организма бывает зна-

чительно более выраженной по силе, чем при прямом воздействии препарата.

Иначе говоря, лечебный эффект заключен в ответной реакции организма, что бо-

лее физиологично, так как это связано с перестройкой его систем. К этому стоит

добавить, что ЭМ – это продукт растений, обладающий биорегулирующим дейст-

вием на функциональные системы организма, нетоксичный и может применяться

массово. Положительные стороны растительных ароматических веществ, выяв-

ленные в результате многочисленных исследований, очевидны [15, 64].

Терапевтическое действие ЭМ заключается не только в проявлении выра-

женной противомикробной активности, они также являются превосходными им-

муномодуляторами. Отсутствие или дефицит растительных ароматических ве-

ществ в атмосфере может приводить к иммунодифицитным состояниям [84].

Активация клеточного и гуморального иммунитета выражается в повыше-

нии стимуляции Т-клеток корпускулярным и растворимым антигеном несинген-

28

ных стволовых клеток (NK-клеток). Со стороны гуморального иммунитета на-

блюдаются депрессия антителобразующей функции В-клеток и снижение титра

гемаглютинов [28]. ЭМ способны значительно стимулировать фагоцитарную ак-

тивность макрофагов непосредственно в живом организме. Установлена способ-

ность летучих фракций повышать количество лейкоцитов преимущественно за

счет эозинофилов и нейтрофилов, фагоцитарную активность лейкоцитов [52]. ЭМ

в 5–6 раз повышают количество розеткообразующих альвеолярных макрофагов,

увеличивают внутриклеточный метаболизм в местных фагоцитах в 4–5 раз по

сравнению с контролем [61, 111].

Доказано, что ЭМ обладают антиканцерогенными свойствами. Авторы от-

носят их к веществам, блокирующим доступ канцерогенов к критическим клет-

кам-мишеням [130]. Растительные ароматические биорегуляторы способны акти-

визировать Т-лимфоциты в феномене инактивации несингенных стволовых кле-

ток. Этот феномен отражает главный механизм иммунологического надзора и

элиминации соматических мутаций, включая возникновение клонов раковых кле-

ток [62, 63].

ЭМ, являясь в своем большинстве углеводородистыми и кислородсодержа-

щими соединениями, не вызывают аллергических реакций, что доказано проведе-

нием комплексной оценки аромотерапии с использованием ЭМ эвкалипта, шал-

фея, мяты и др. [14, 52]. Наружное применение природных ЭМ у больных хрони-

ческим бронхитом не вызывает аллергических реакций. Более того, у животных

ингаляционное введение аэрозоля ЭМ базилика практически полностью подавля-

ет анафилактические реакции в ответ на введение антигена непосредственно в

дыхательные пути. Это является доказательством того, что ЭМ не только не вы-

зывают аллергических реакций, но и способны давать терапевтический эффект в

случае их возникновения [1, 44]. Воздействие природными концентрациями лету-

чих фракций ЭМ приводит к нормализации процессов метаболизма, что выража-

ется в активации ферментов гликолитического цикла трикарбоновых кислот, сти-

муляции эндогенных механизмов антиокислительной защиты, активации пере-

кисного окисления липидов. [34, 66].

29

1.8. Результаты современных исследований по применению

растений рода Monarda L. в научной медицине

Одним из перспективных родов, содержащих ценное по компонентному со-

ставу ЭМ, является Северо-Американский род Monarda L.

Растения рода Монарда (Monarda L.) представляют собой многолетние, ре-

же однолетние травянистые растения семейства Яснотковые (Lamiaceae) или Гу-

боцветные (Labiatae).

На сегодняшний день изучение многих видов Монарды проводится в стра-

нах СНГ (Украине, Белоруссии), а также в ряде стран западной Европы (Франции,

Германии). К основным видам растений рода Monarda L. относятся M. fistulosa L.,

M. didyma L., M. citriodora Cerv., M. bradburiana Besk., M. clinopodia L., M.

russeliana Nutt., M. romaleyi Nelson, M. punctata L., M. stricta Wooton, M. media

Willd., M. menthaefolia Grah. Одни из первых работ по интродукции растений рода

Монарда были проведены в Крыму в ГНСБ (ныне Никитский ботанический сад –

Национальный научный центр (НБС-ННЦ)). В Никитском ботаническом саду

изучено 23 образца монарды [42, 76].

Наибольшей эфиромасличностью отличаются М. punctata, М. fistulosa, М.

citriodora с массовой долей ЭМ 0,64; 0,78; 0,65% от сырой массы (2,21; 2,43;

2,23% от абсолютно сухой массы) [82, 90, 128].

В ЭМ монарды идентифицировано более 40 основных компонентов. Все

виды монарды имеют сходный компонентный состав ЭМ. При этом основными

компонентами ЭМ монарды являются тимол и карвакрол. Отмечено, что в зави-

симости от климатических условий, вегетационного периода, почвенных и др.

факторов процентное содержание отдельных компонентов различается [96]. В це-

лом, количественное содержание фенольных соединений в ЭМ достигает 68-79%,

минимальное содержание – у М. magnifica (45,9%), максимальное – у М. mollis

(88,9%). У M. fistulosa и M. bradburiana основным компонентом ЭМ является кар-

вакрол. Помимо фенолов, в состав ЭМ монарды входят терпены (моно- и бицик-

30

лические, ациклические) и их кислородные производные: γ-терпинен, n-цимол,

1,8-цинеол, сабинен, борнеол, α-туйен, транс-сабиненгидрат, мирцен, линалоол,

витамин С [90, 129].

Анализ современных исследований по применению растений рода Монарда

в медицинской практике показывает, что среди различного видового состава Мо-

нарды наибольший интерес представляет М. fistulosa (Монарда дудчатая) [99,

122]. ЭМ монарды дудчатой (далее ЭМ монарды) содержит 34 компонента, среди

которых наиболее значимы в количественном отношении α-pinene – 3,5%, β-

pinene – 0,9%, α-terpinene – 1,7% и более, aliphatic aldehyde – 6,3%, sabinene

hydrate – 1,9%, β-caryophyllene – 1,1%, methyl ether of carvacrol – 5,5% citronellyl

acetate – 1,6%, thymol – 12,6% и более, carvacrol – до 24,0% и более. Некоторые

компоненты содержатся в меньшей концентрации: лилалоол, цинеол, борнеол и

другие [30, 127].

Среди фармакологических свойств ЭМ монарды отмечено капилляроукреп-

ляющее, диуретическое, противоглистное действие [63]. Наличие в ЭМ монарды

флавоноидов, обладающих мощной антисептической и противовоспалительной

активностью, объясняет эффективность его использования в отношении различ-

ных возбудителей заболеваний (грибков, бактерий, простейших и др.) [6, 65]. ЭМ

монарды актуально использовать в дерматологии для лечения кожных заболева-

ний различной этиологии, ожоговых поражений кожи [82].

Известно, что фенольные соединения, наряду с другими БАВ, являются

действующим началом многих галеновых препаратов, они оказывают действие на

надпочечники, гипофиз, щитовидную железу, обладают противоопухолевой и ка-

пилляроукрепляющей активностью [121, 148].

В пределах природных концентраций отмечено иммуномодулирующее дей-

ствие ЭМ монарды без проявления побочных реакций [13].

Полученные учеными Адыгейского государственного университета и Том-

ского медицинского института результаты высокой антимикробной активности

ЭМ монарды показали возможность его использования для аэрации воздуха об-

щественных помещений, что особенно актуально в период вспышек ОРВИ и дру-

31

гих респираторных заболеваний [96]. В концентрации 5 мг/м³ летучие выделения

способны значительно изменять и улучшать воздушную среду. ЭМ монарды в 10

раз снижало зараженность воздуха стафилококком, стрептококком, дифтерийной

и коклюшной палочками [140, 165].

При изучении ЭМ монарды в Ялтинском НИИ физических методов лечения

и медицинской климатологии получены авторские свидетельства на применение

ЭМ монарды дудчатой в качестве радиозащитного средства, для лечения и про-

филактики заболеваний бронхолегочной системы, а также как средства, способст-

вующего регенерации тканей, консерванта крови [65, 153].

Растения рода Monarda L. перспективны в качестве продуцентов антигриб-

ковых веществ, активных в отношении представителей трех родов плесневых

грибов (Aspergillus, Penicillium, Mucor), а также против возбудителей грибковых

заболеваний человека, в частности Trichophyton mentagrophytes [2, 123, 141].

Достаточный интерес представляют результаты изучения действия ЭМ мо-

нарды на активность обменных процессов, в частности на скорость деления кле-

ток и состояние цитоплазматических мембран. При применении ЭМ монарды от-

мечается значительное снижение интенсивности синтеза ДНК и проницаемости

мембран лимфоцитов. При этом количество жизнеспособных лимфоцитов не

уменьшается. При добавлении ЭМ в культуру фибробластов 0,5% эмульсия при-

водит к их гибели, а 0,0005-0,005% стимулирует рост и деление этих клеток [11,

65].

Таким образом, в результате изучения научной литературы среди известных

ЭМ выявлено ЭМ монарды, обладающее широким спектром фармакологического

действия.

32

1.9. Методы идентификации и количественного определения

эфирных масел

ЭМ являются сложными природными смесями, компоненты которых отно-

сятся к различным классам органических соединений, таких как алканы, алкены,

спирты, альдегиды, кислоты и эфиры. В связи с этим при анализе такого сложного

природного объекта, как ЭМ, возникает ряд трудностей [56, 125].

Анализ литературных данных показывает, что возможны два подхода к

идентификации и количественному определению ЭМ: 1) препаративное выделе-

ние компонентов разнообразными хроматографическими методами с последую-

щим анализом полученных соединений или 2) применение комбинированных ме-

тодов: ВЭЖХ, ГЖХ, ГХ, ХМС, спектрофотометрии, полярографии, ИК-

спектроскопии [31, 56, 57, 121].

До 1970 г. ИК-спектроскопия являлась наиболее распостраненным методом

идентификации компонентов в ЭМ. Данные ИК-спектров применялись для иден-

тификации функциональных групп. Наиболее часто ИК-спектроскопия применя-

лась в сочетании с препаративной хроматографией. Так, ИК-спектры 170 важ-

нейших компонентов ЭМ вместе с хроматографическими данными сообщаются

американской ассоциацией по ЭМ. Однако ограничением ИК-спектроскопии для

анализа компонентов ЭМ является значительно меньшая чувствительность, чем в

хроматографических методах анализа ЭМ [86].

УФ-спектроскопия, спектры отражения и флюоресценции описаны в ряде

работ, касающихся количественного анализа ЭМ. При этом многие компоненты

ЭМ не имеют хромоформных групп в молекулах, например, монотерпеновые уг-

леводороды и спирты, что ограничивает применение спектрофотометрических

методов для общего анализа ЭМ [113, 124, 161].

Применение 1Н- и 13С- ЯМР-спектроскопии в области анализа ЭМ ограни-

чено низкой чувствительностью метода (около 5 мг и выше) [86].

33

Для анализа смесей терпеновых соединений широкое и успешное примене-

ние нашел метод ВЭЖХ. Данный метод используется для исследования малоле-

тучих и термолабильных соединений, что является его важным преимуществом.

Однако отсутствие универсального и чувствительного детектора является серьез-

ным ограничением для применения ВЭЖХ при анализе терпеноидов [31, 113].

Наиболее широкое применение при анализе сложных ЭМ нашли методы ГХ

и ГЖХ. Это обусловлено тем, что температура кипения терпеноидов находится в

пределах 150-350°С, а также возможностью сочетания этого метода разделения с

методами идентификации в едином комплексе [32]. Анализ литературных источ-

ников показывает, что в настоящее время не существует единой универсальной

методики ГЖХ для разделения ЭМ, и их анализ проводится на различных типах

колонок с применением большого числа неподвижных фаз широкого диапазона:

от неполярных (SE-30) до полярных (Карбовакс 20М). Анализ смесей терпеновых

соединений осуществляется как на набивных, так и на капиллярных колонках.

Стоит отметить, что капиллярные колонки позволяют осуществить более эффек-

тивное разделение, поэтому тенденция к их применению возрастает [32, 86, 87].

Метод ХМС применяется для анализа компонентов ЭМ, начиная с 1963 г.

[95]. В настоящее время он является наиболее распространенным методом иден-

тификации ЭМ в сложных смесях и позволяет установить наличие/отсутствие ин-

тересующего компонента (группы), идентифицировать ее компоненты, получить

МС-данные о структуре соединения, если идентификация неоднозначна [121].

Стоит отметить, что термолабильность терпеноидов предъявляет особые требова-

ния к масс-спектрометрической части ХМС-систем. В частности, необходимым

условием является высокая инертность переходных линий между хроматографом

и ионным источником масс-спектрометра. Решение данной проблемы осуществ-

ляется введением через интерфейс кварцевой капиллярной колонки непосредст-

венно в ионный источник [87]. Идентификация терпеноидов, основанная только

на одном аналитическом методе, например по данным ГЖХ-удерживания, являет-

ся недостаточно надежной. Точная идентификация терпенов на основе данных

только масс-спектрометрии также часто невозможна. Недостатки отдельных ме-

34

тодов идентификации возможно устранить при комбинированном использовании

двух и более методов. Например, сочетание ГЖХ и МС привело к созданию одно-

го из наиболее мощных на сегодняшний день методов для анализа сложных сме-

сей летучих соединений. Картина масс-спектрометрической фрагментации в соче-

тании с данными удерживания (которые могут существенно отличаться даже у

стереоизомеров) дает возможность быстрой и надежной идентификации индиви-

дуальных компонентов [162, 169].

Таким образом, основным методом исследования эфирных масел в на-

стоящее время является ГЖХ, часто в сочетании со спектрометрическими ме-

тодами идентификации разделенных компонентов.

35

Выводы

Изученные данные, касающиеся концепции лечения проктологических за-

болеваний, свидетельствуют, что данная патология проявляется через совокуп-

ность процессов, которые протекают одновременно. В терапии проктологических

заболеваний применяют хирургический и консервативный пути лечения. При

этом разработка лекарственных препаратов, обладающих широким спектром те-

рапевтического действия, для лечения данного класса заболеваний в клинических

и амбулаторных условиях является актуальной.

Основываясь на имеющихся литературных данных, можно сделать вывод,

что каротиноиды, и прежде всего -каротин, привлекают к себе внимание как

перспективные лечебно-профилактические средства при сниженных иммунных

реакциях, воспалительных процессах, злокачественных новообразованиях. Что

касается ЭМ монарды, то оно является перспективным сырьем растительного

происхождения для разработки на его основе антимикробных, противовоспали-

тельных и иммуномодулирующих средств. Учитывая клиническую картину тече-

ния большинства проктологических заболеваний и исходя из современных требо-

ваний комплексного (обезболивающего, противовоспалительного, ранозаживляю-

щего, антимикробного) воздействия ЛС, можно сделать вывод, что применение ме-

стноанестезирующих средств при разработке ЛФ не теряет своей актуальности.

Таким образом, направление исследований актуально и сведения, изложен-

ные в обзоре литературе, это подтверждают.

36

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследования

-каротин микробиологический, полученный биотехнологическим

методом из биомассы мукорового гриба Blakeslea trispora.

В работе использовался 0,02% масляный раствор -каротина, который

представляет собой прозрачную жидкость оранжево-красного цвета (ФС 42-3867-

99).

ЭМ монарды дудчатой – прозрачная, бесцветная с желтоватым оттенком

жидкость со специфическим тимоловым запахом. Относительная плотность от

0,890 до 0,920, показатель преломления от 1,464 до 1,475, удельное вращение

масла 0,916-0,941.

В работе использован лабораторный образец, полученный в Никитском бо-

таническом саду – Национальном научном центре (Украина).

Анестезин представляет собой белый, кристаллический порошок без запа-

ха, слабогорького вкуса, вызывает скоропроходящее чувство онемения на языке.

Растворим в спирте (1 : 5), жирах, жирных маслах, эфире, хлороформе, дихлорэ-

тане, хуже в толуоле, бензоле. Трудно растворим в разведенной соляной кислоте,

лучше в соляной кислоте концентрацией выше 4,5-5,0%. Очень мало растворим в

воде, чуть лучше в кипящей воде. Тпл 89-91,5°С.

В работе использован стандартный образец анестезина (ФС 42-3024-00) и

субстанция производства Changzhou Jiaerke GroupCorp., Ltd, Китай, серия

С5030905037.

Вспомогательные вещества, суппозиторные основы, использованные в ра-

боте, и их краткая характеристика представлены в таблицах 2 и 3.

37

Таблица 2 – Вспомогательные вещества, использованные в

диссертационной работе

Название Характеристика Использованная

субстанция

Поливинил-

пирролидон (ПВП)

Катионный ПАВ – полимер винилпиролидона.

ПВП обладает высокими комплексообразую-

щими свойствами. Применяется как стабилиза-

тор в производстве суспензий и эмульсий, в ка-

честве наполнителя для таблеток, драже. ПВП

входит в состав плазмозаменителей, глазных

пленок, аэрозолей, мазей. Представляет собой

белый или слегка желтоватый порошок со сла-

бым специфическим запахом, гигроскопичен.

Растворяется не только в воде, но и в ряде орга-

нических растворителей, например, в алифати-

ческих спиртах, этиленгликоле, глицерине

Povidone, CN

107443, Merck

(Germany), Eph

5.0

Povidone

01/2005:0685,

ФС 42-8482-98.

Твин-80

(полисорбат-80)

Синтетический эмульгатор, является сложным

эфиром олеиновой кислоты и полиоксиэтилиро-

ванного сорбитана. Представляет собой масля-

нистую жидкость от слабо-желтого до желтого

цвета, которая легко растворяется в воде, 95%

спирте, растворяется в кукурузном и персико-

вом масле: практически не растворяется в вазе-

линовом масле. Плотность от 1,060 до 1,100

г/см, рН от 6,0 до 8,0. Твин-80 является ПАВ и

используется в качестве вспомогательного ве-

щества для производства готовых ЛФ

ФС 42-2540-88

Эмульгатор №1 Твердая масса от белого до белого с желтова-

тым оттенком, жирная на ощупь со специфиче-

ским запахом. Температура плавления от 50°С

до 58°С. Кислотное число не больше 2,0. При-

меняется в пищевой и фармацевтической про-

мышленности

ФС 42-2121-92

38

Таблица 3 – Суппозиторные основы, использованные в

диссертационной работе

Наименование

основы,

НД

(производитель)

Состав Описание Показатели

Твердый жир

типа А,

ФС 42-3466-97

Смесь моно- ди-, триг-

лицеридов жирных

кислот, получаемых

этерификацией жир-

ных кислот природно-

го происхождения

глицерином или пере-

этерификацией при-

родных жиров

Воскообразная масса бело-

го или почти белого цвета.

При нагревании плавится с

получением бесцветной

или слабо-желтоватой

жидкости. Практически не

растворяется в воде, легко

растворяется в эфире, мало

растворим в этаноле

Тпл. 34-37°С; ки-

слотное число не

более 0,3; гидро-

ксильное число не

более 20; йодное

число не более 3,0;

перекисное число не

более 3,0

Витепсол W35,

НД 42-9584-88

Смесь триглицеридов

насыщенных жирных

кислот с 1% моно- и

диглицеридов тех же

кислот

Белая, твердая, крошащая-

ся, легкоплавкая при тем-

пературе тела масса без

вкуса и запаха.

Тпл. 33,5-35,5°С;

Тзатв. 32,5-34,5°С;

кислотное число не

более 0,2; йодное

число не более 3,0

С у п п о ц и р

N A S 5 0 ,

Gattefosse SAS,

Франция

Полусинтетические

глицериды насыщен-

ных С12-С18 жирных

кислот

Хрупкая воскообразная

масса белого или почти

белого цвета. Растворима в

хлороформе, метиленхло-

риде, плохо растворима в

96% спирте, не растворима

в воде

Тпл. 34,5-36,5°С;

кислотное число не

более 0,2; гидро-

ксильное число от

5,0 до 15,0; йодное

число не более 2,0;

перекисное число не

более 3,0; число

омыления от 230 до

245

Суппоцир АМ,

Gattefosse SAS,

Франция

Полусинтетические

глицериды насыщен-

ных С8-С18 жирных

кислот

Хрупкая воскообразная

масса белого или почти бе-

лого цвета. Растворима в

хлороформе, метиленхло-

риде, плохо растворима в

96% спирте, не растворима

в воде

Тпл. 35,0-36,5°С;

кислотное число не

более 0,2; гидро-

ксильное число не

более 10,0; йодное

число не более 2,0;

перекисное число не

более 3,0; число

омыления от 228 до

252

39

2.2. Методы исследования

2.2.1. Физические и физико-химические методы

Среднюю массу суппозиториев определяли согласно ГФ ХI изд., вып. 2, с.

152 статья «Суппозитории» взвешиванием 20 суппозиториев с точностью до

0,01 г. Отклонение в массе суппозиториев не должно превышать ±5%, и только

два суппозитория могут иметь отклонение ±7,5%.

Температуру плавления суппозиториев определяли согласно ГФ XII изд.,

ч. 1, ОФС 42-0034-07. Температура плавления суппозиториев не должна пре-

вышать 37°С.

ВПД суппозиториев определяли согласно ГФ ХI изд., вып. 2, с. 153 статья

«Суппозитории». ВПД должно быть не более 15 мин.

Определение рН водного извлечения из суппозиториев проводили соглас-

но ГФ XII изд., ч. 1, ОФС 42-0048-07. Один суппозиторий помещали в колбу,

добавляли 50 мл воды очищенной, расплавляли на водяной бане, затем фильт-

ровали и измеряли рН водной вытяжки потенциометрически.

Прочность суппозиториев определяли на приборе марки ERWEKA SBT-

2. Прибор для определения прочности суппозиториев Erweka SBT-2 состоит из

камеры с электрическим подогревом, внутри которой находится специальный

зажим с кронштейном для навешивания различных грузов. Во время проведе-

ния теста испытуемый суппозиторий вкладывали в держатель, на кронштейн

навешивали определенную комбинацию грузов. Момент разрушения образца

определяли визуально. Значение прочности выражали в массе грузов, при кото-

рой наблюдалось визуальное разрушение суппозитория за определенное время.

Реологические исследования модельных образцов суппозиториев прово-

дили на ротационном вискозиметре «Реотест-2». Вискозиметр «Реотест-2» от-

личается большим диапазоном измерения напряжения сдвига и скорости де-

формации.

40

Для изучения тиксотропных свойств строили полные реологические кри-

вые зависимости напряжения сдвига (r) от скорости сдивига (Dr) образца гото-

вого средства при температурах 37ºС и 40ºС. Термостатирование образцов осу-

ществляли с помощью ультратермостата ТС-16 с точностью ±0,1°С в течение 30

мин.. Температуру измеряли лабораторным термометром с ценой деления 0,1°С.

Методика определения структурной вязкости: навеску суппозиторной мас-

сы (около 30,0 г) помещали в емкость внешнего неподвижного цилиндра, вследс-

твии чего масса заполняла кольцевую щель цилиндрической системы. После это-

го приводили во вращение внутренний цилиндр и величину момента высчитыва-

ли по отклонению индикатора прибора, показатели которого пропорциональны

напряжению сдвига. Измерения проводили при двенадцати увеличивающихся

скоростях сдвига, начиная с низких скоростей деформации. На каждой ступени

соответствующей скорости деформации фиксировали показатели вискозиметра.

Касательную напряжения сдвига (τ, Па) расчитывали по формуле 1:

τ = Z·α, (1)

где τ - касательная напряжение сдвига, 10-1

Па;

Z - константа цилиндра, 10-1

Па (деления шкалы);

α - показания индикаторного прибора.

Идентификация субстанции ЭМ монарды. Для определения компонент-

ного состава ЭМ монарды использовали методы ТСХ и ГХ.

Методом ТСХ определяли наличие компонентов ЭМ монарды путем

сравнения расположения и интенсивности окраски хроматографических зон на

хроматограмме испытуемого раствора монарды и РСО β-пинена, гераниола и

гераниола ацетата.

Приготовление испытуемого раствора. 0,25 мл препарата растворяли в

10 мл циклогексана.

Приготовление РСО β-пинена, гераниола и гераниола ацетата. 10 мкл β-

пинена, 50 мкл гераниола и 10 мкл гераниола ацетата растворяли в 10 мл цик-

логексана.

41

Методика определения. На линию старта хроматографической пластинки

SilicaGel 60, размером 10 х 20 см полоскам длиной 10 мм наносили по 10 мкл

испытуемого раствора и РСО β-пинена, гераниола и гераниола ацетата. Пла-

стинку хроматографировали в вертикальной камере в системе растворителей

«этилацетат – гептан» (10 : 90). Когда фронт элюента достигал 12 см от линии

старта, пластинку вынимали, высушивали на воздухе в течение 10 мин., опры-

скивали раствором анисового альдегида и выдерживали в сушильном шкафу в

течение 10 мин. при температуре 100оС.

На хроматограмме должны обнаружиться зоны адсорбции в виде пятен на

уровне зон адсорбции РСО β-пинена, гераниола и гераниола ацетата.

Хроматографический профиль компонентов ЭМ Монарды определяли

методом ГХ с использованием следующего аналитического оборудования:

хроматограф газовый: Shimadzu GC-2014 в комплектации с автоматическим

самплером и инжектором AOC-5000.

Приготовление РСО β-пинена, гераниола и гераниола ацетата. 20 мкл β-

пинена, 100 мкл гераниола и 20 мкл гераниола ацетата растворяли в 1 мл цик-

логексана.

Приготовление испытуемого раствора. В качестве испытуемого раствора

использовали препарат.

По 1 мкл испытуемого образца и РСО β-пинена, гераниола и гераниола

ацетата хроматографировали в следующих условиях:

- колонка капиллярная кварцевая, размером 60 м х 0,32 мм, с неподвижной фа-

зой StabilWax, толщина слоя 0,5 мкм;

- температуру колонки программировали следующим образом: 60оС выдержи-

вали в течение 5 мин., далее температуру повышали со скоростью 5оС/мин до

температуры 220оС и выдерживали в течение 6 мин.;

- температура инжектора - 240оС;

- температура детектора - 250оС;

- скорость газа-носителя (гелий) - 1 мл/мин.;

- деление потока - 1:50.

42

Идентификация и количественное определение анестезина, -каротина

микробиологического, ЭМ монарды в суппозиториях.

Идентификация и количественное определение анестезина. Для иденти-

фикации анестезина один суппозиторий помещали в стакан вместимостью 100

мл, прибавляли 20 мл воды и нагревали при перемешивании на кипящей водя-

ной бане до полного расплавления жировой основы, перемешивали еще в тече-

ние 10 мин. и охлаждали до комнатной температуры. После охлаждения вод-

ный слой фильтровали через бумажный фильтр «синяя лента». Определение

подлинности анестезина проводили с помощью реакции образования азокраси-

теля. Данная реакция используется для обнаружения ЛС, содержащих первич-

ную ароматическую аминогруппу. Приготовление 5% раствора β-нафтола и

10% раствора натрия нитрита осуществляли в соответствии с требованиями ГФ

ХII изд.

Проведение анализа: К 1 мл полученного фильтрата прибавляли 1 мл во-

ды очищенной и перемешивали. К полученному раствору прибавляли 0,2 мл

10% раствора натрия нитрита, перемешивали и прибавляли 1 мл 5% раствора β-

нафтола, после чего отмечали аналитический эффект реакции.

Количественное определение анестезина проводили методом нитрито-

метрия 3,0 г (точная навеска) массы измельченных суппозиториев помещали в

стакан вместимостью 100 мл, прибавляли 50,0 мл воды очищенной и нагревали

при перемешивании на кипящей водяной бане до полного расплавления жиро-

вой основы, перемешивали в течение 10 мин., затем охлаждали до комнатной

температуры. После охлаждения водный слой фильтровали через бумажный

фильтр «синяя лента». Затем 25,0 мл фильтрата помещали в колбу вместимо-

стью 100 мл, прибавляли 10 мл кислоты хлористоводородной концентрирован-

ной, перемешивали и титровали 0,1М раствором натрия нитрита, используя

поршневую бюретку на 5 мл. Точку эквивалентности определяли амперометри-

чески. Параллельно проводили контрольный опыт.

Идентификация и количественное определение -каротина. Идентифи-

кацию и количественное определение -каротина проводили спектрофотомет-

43

рически, для чего 20 суппозиториев измельчали до получения однородной мас-

сы. 3,0 г (точная навеска) измельченных суппозиториев помещали в мерную

колбу вместимостью 50 мл, прибавляли 40 мл гептана, перемешивали до полно-

го растворения жировой основы, объём смеси доводили до метки гептаном и

перемешивали. Полученную смесь фильтровали через бумажный фильтр «си-

няя лента», отбрасывая первые 3 мл фильтрата. Измеряли оптическую плот-

ность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 450 нм в

кювете с толщиной слоя 10 мм. Спектр испытуемого раствора препарата в об-

ласти от 400 до 500 нм имел максимум поглощения при длине волны 450 ± 4нм.

При количественном определении -каротина методом спектрофотомет-

рия в качестве раствора сравнения использовали растворитель.

Параллельно измеряли оптическую плотность раствора РСО калия би-

хромата, используя в качестве раствора сравнения воду очищенную.

Приготовление раствора РСО калия бихромата. Около 0,026 г (точно

взятая навеска) предварительно высушенного в течение 2 часов при температу-

ре от 100 до 105оС калия бихромата помещали в мерную колбу вместимостью

1000 мл, растворяли в части воды очищенной, доводили объём раствора водой

очищенной до метки и перемешивали.

Идентификация и количественное определение ЭМ монарды. Идентифи-

кацию и количественное определение ЭМ монарды осуществляли методом ГХ с

использованием хроматографа газового Shimadzu GC-2014 в комплектации с

автоматическим самплером и инжектором AOC-5000.

Приготовление испытуемого раствора. Около 10 г (точная навеска) мас-

сы измельченных суппозиториев помещали в круглодонную колбу вместимо-

стью 500 мл, прибавляли 300 мл 0,1% раствора натрия хлорида, колбу присое-

диняли к прибору для определения ЭМ. В сосуд для измерения объема ЭМ по-

мещали 1,0 мл циклогексана и проводили отгонку в течение 2 часов.

Приготовление РСО ЭМ монарды. Около 75 мг (точная навеска) РСО ЭМ

монарды помещали в мерную колбу вместимостью 5 мл, растворяли в 4 мл

циклогексана, доводили объём раствора этим же растворителем до метки и пе-

44

ремешивали.

1 мкл полученного циклогексанового слоя и раствора РСО ЭМ монарды

хроматографировали в выше указанных условиях, аналогичных условиям иден-

тификации ЭМ монарды методом ГХ.

На хроматограммах испытуемого раствора хроматографический профиль

компонентов должен соответствовать профилю хроматограммы РСО ЭМ мо-

нарды.

Определение степени дисперсности анестезина. Изучение степени дис-

персности анестезина в суппозиторной массе изучали с использованием микро-

скопа марки «Микмед-2» (объектив маркировки 10х0,3, измерительный окуляр

К 15х). На трех уровнях модельных образцов суппозиториев готовили попереч-

ные тонкие срезы, каждый из которых переносили на предварительно подго-

товленное предметное стекло (на предметном стекле алмазным скальпелем от-

черчивали квадрат 15х15 мм и диагонали) в каплю вазелинового масла. Пред-

метное стекло нагревали до расплавления суппозиторной массы, прибавляли

каплю 0,1% раствора судана III и осторожно фиксировали покровным стеклом.

Определение относительной плотности ЭМ монарды проводили соглас-

но ГФ XII изд., ч. 1, ОФС 42-0037-07, метод 1.

Определение показателя преломления ЭМ монарды проводили согласно

ГФ XII изд., ч. 1, ОФС 42-0040-07.

Определение оптического вращения ЭМ монарды проводили согласно ГФ

XII изд., ч.1, ОФС 42-0041-07.

Показатели ЭМ монарды «Вода», «Посторонние эфиры в эфирных мас-

лах», «Остаток после выпаривания», «Жирные масла и осмоленные эфирные

масла» определяли согласно методикам ЕФ 7.0 изд., статья «Essential Oils» с.

673.

Определение кислотного, эфирного числа и числа омыления суппозитор-

ных основ, ЭМ монарды, а также суппозиториев проводили согласно методи-

кам ГФ XI изд., вып. 1, с. 191-193.

Определение перекисного числа проводили согласно ГОСТ 8285-91 «Жи-

ры животные топленые» йодометрическим методом [18].

45

2.2.2. Валидация методики ГХ для определения подлинности

и количественного содержания эфирного масла монарды дудчатой

в суппозиториях

В соответствии с методическими рекомендациями по валидации аналити-

ческих методик идентификации и количественного определения действующих

веществ в разрабатываемых препаратах были определены следующие валида-

ционные характеристики: специфичность, правильность, прецизионность (схо-

димость), линейность, диапазон применения [60, 73, 85, 173].

Правильность и прецизионность исследовали на модельных растворах

препарата с концентрациями ЭМ Монарды, которые соответствуют 80%, 85%,

90%, 95%, 100%, 105%, 110%, 115% и 120% его содержания по отношению к

номинальному значению.

Валидацию методики проводили на образце препарата, приготовленного

в соответствии с лабораторной технологией, который не содержал ЭМ масла

монарды (плацебо).

Приготовление испытуемых растворов. 5 измельченных суппозиториев

(плацебо) помещали в колбу прибора для отгонки эфирного масла. К образцам

«плацебо» прибавляли точно известные навески ЭМ монарды в количестве от

80% до 120% от номинальной концентрации.

ЭМ монарды вводили непосредственно микрошприцом вместимостью

250 мкл. Массу навески вводимого количества ЭМ определяли по разности

массшприца с ЭМ до и после введения.

По полученным результатам рассчитывали метрологические характеристи-

ки методики.

Специфичность методики служила доказательством того, что разработан-

ная методика позволяет точно и правильно установить подлинность и количест-

венное содержание ЭМ монарды в образце препарата. При определении специ-

фичности методики использовали растворитель (циклогексан), раствор плаце-

46

бо, РСО ЭМ монарды.

Линейность – это способность методики (в пределах диапазона приме-

нения) получать результаты испытаний, прямо пропорциональные количеству

анализируемого вещества в образце. Линейность методики исследовали на мо-

дельных растворах препарата с концентрациями ЭМ монарды в пределах от 80%

до 120% от номинального содержания ЭМ монарды в препарате.

По полученным данным строили график зависимости между взятым и

найденным количеством определяемого вещества. Линейность методики харак-

теризовали по метрологическим характеристикам линейной зависимости.

2.2.3. Биофармацевтические методы

Высвобождение анестезина из суппозиториев и оценку фармацевтиче-

ской доступности изучали с помощью мембранно-диффузионного метода через

полупроницаемую мембрану. Исследования проводили в приборе для диализа,

предложенном Л. Крувчинским [7]. В качестве полупроницаемой мембраны

использовали целлофановую пленку «Купрофан» с толщиной слоя 45 микрон.

Средой для диализа являлся фосфатный буферный раствор (рН 7,4±0,05) (100

мл). Измерения проводили в течение 5 часов с момента начала опыта при тем-

пературе 37±1°С.

Методика проведения эксперимента: суппозиторий помещали в диализ-

ную ячейку и выдерживали в термостате при температуре 37±1°С в течение

всего времени опыта. Пробу диализата (5 мл) отбирали через 15, 30, 45, 60, 90,

120, 150, 180, 210, 240, 300 минут, восполняя взятый объем равным количест-

вом фосфатного буферного раствора.

Содержание анестезина определяли методом нитритометрия, определяя

точку эквивалентности амперометрически.

47

2.2.4. Микробиологические методы

Антимикробную активность ЭМ монарды проводили методом серийных

разведений 1% спиртового раствора масел в МПБ. В качестве масел сравнения

использовали ЭМ эвкалипта, мяты и лаванды.

В работе использовали 10 тест-культур. Посевная доза бактерий равня-

лась 1000 микробных клеток на 1 мл питательной среды. Посевы инкубировали

в течение 24 ч при 37°С, затем их высевали на МПА. Параллельно ставили все

необходимые контроли (МПБ без добавок масел, контроли со спиртом). Резуль-

таты оценивали по интенсивности роста бактерий на МПА [4].

Определение микробиологической чистоты ЭМ монарды и разработан-

ных суппозиториев проводили согласно ГФ ХII изд., ч. 1, с. 160 ОФС 42-0067-

07. Испытания ЭМ монарды и образцов суппозиториев на микробиологическую

чистоту проводили в отношении следующих тест-микроорганизмов: Bacillus

subtilis, Bacillus cereus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus

aureus, Candida albicans.

Подготовка проб для испытания

ЭМ монарды. 10 мл образца ЭМ монарды эмульгировали в 90 мл фосфат-

ного буферного раствора в присутствии 0,2 г твина-80 с помощью стеклянных

бус, нагревая до температуры не более 40С и механически встряхивая до по-

лучения гомогенной эмульсии. Конечный объем раствора составлял 100 мл.

Суппозитории. Образец суппозиториев из средней пробы массой 10 г ос-

торожно смешивали с 5 г твина-80. Полученную смесь нагревали на водяной

бане до температуры не более 40С и добавляли стерильный фосфатный бу-

ферный раствор со стеклянными бусами. Смесь осторожно перемешивали для

получения гомогенной эмульсии. Конечный объем раствора составлял 100 мл.

Методика определения. По 1 мл приготовленного образца вносили в каж-

дую из двух пробирок с 4 мл расплавленной и охлажденной до температуры 45-

50С среды №1. Содержимое пробирки быстро перемешивали и переносили в

48

чашку Петри, содержащую 15-20 мл застывшей питательной среды №1. Быст-

рым покачиванием чашки Петри равномерно распределяли верхний слой агара.

После застывания среды чашки переворачивали и инкубировали в течение 5 су-

ток при температуре от 30 до 35С. Через 48 часов и окончательно через 5 суток

подсчитывали число бактериальных колоний на двух чашках, находили среднее

значение, и, умножая на показатель разведения, вычисляли число бактерий в 1г.

При определении общего числа грибов и использовали двухслойный ага-

ровый метод в чашках Петри. 1 мл разведения вносили в каждую из двух про-

бирок с 4 мл расплавленной и охлажденной до температуры 45-50С среды №2.

Быстро перемешивали содержимое пробирок и переносили в чашку Петри, со-

держащую 20 мл застывшей питательной среды №2. Быстрым покачиванием

чашки Петри равномерно распределяли верхний слой агара. После застывания

среды чашки переворачивали и инкубировали в течение 5 суток при температу-

ре от 20 до 25С. Через 72 часа и окончательно через 5 суток, подсчитывали

число грибов на двух чашках, находили среднее значение и, умножая на пока-

затель разведения, вычисляли число грибов в 1 г.

Для выявления и идентификации семейства Enterobacteriaceae 10 г суппо-

зиториев вносили в 100 мл питательной среды №3, тщательно перемешивали и

инкубировали при температуре от 30 до 35С в течение 24-48 часов.

Согласно требованиями ГФ ХII изд., ч. 1, с. 160 ОФС 42-0067-07:

в 1 мл ЭМ допускается не более 104 аэробных бактерий, 10

2 грибов, не

более 102

Энтеробактерий, отсутствие Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas

aeruginosa, Staphylococcus aureus (категория 3.2).

в 1 г суппозиториев допускается не более 103 аэробных бактерий, 10

2 гри-

бов, отсутствие Escherichia coli (категория 3А).

49

2.2.5. Фармакологические методы

Исследование противовоспалительной активности ЭМ монарды про-

водилось с использованием модели по В. Менкину на 16-ти обоеполых белых

лабораторных мышах [74]. Были взяты две группы: опытная и контрольная.

Мышам опытной группы вводили внутрикожно в подушечку задней лапы

0,08 мл 10 миллиардной суточной культуры Staphylococcus aureus 209. После

инъекции микробной взвеси животным трижды через день вводили внутримы-

шечно 0,1 мл 0,5% масляного раствора ЭМ монарды.

У животных контрольной группы инфекционный очаг воспроизводили

так же, как и у животных опытной группы. Мышам контрольной группы инъ-

екции ЭМ монарды не делали.

Учет интенсивности воспаления у животных обеих групп проводили пу-

тем ежедневного сравнительного измерения объема «больных» и «здоровых

лап» онкометрически.

Статистическая обработка результатов

Статистическую обработку опытов проводили с использованием t-

критерия Стьюдента для независимых рядов. Изменение исследуемых

показателей считали статистически значимыми при p 0,05.

Полученные экспериментальные данные обрабатывали с использованием

программного обеспечения «Microsoft Office» и «Autocad».

2.3. Дизайн исследования

Настоящий дизайн исследования определяет методологию и последова-

тельность данных научных разработок и состоит из ряда основных этапов (ри-

сунок 4).

50

В соответствии с разработанной концепцией исследования на первом эта-

пе проводится маркетинговый анализ российского рынка ректальных ЛФ. На

данном этапе проводится сравнительная характеристика современных ректаль-

ных ЛФ. На том же уровне по значимости исследований на рисунке 4 показано

обоснование выбора основных действующих компонентов ЛФ.

Второй этап настоящего дизайна посвящен оценке качества ЭМ монарды,

в ходе реализации которого проводится разработка методов анализа ЭМ монар-

ды. Полученные результаты данного этапа являются базовыми при разработке

методов анализа ЛФ. На данном этапе также подтверждается антимикробная и

противовоспалительная активность ЭМ монарды.

Третий этап представляет собой комплекс работ по непосредственному

формированию состава суппозиториев с учетом данных первых двух этапов. В

рамках данного этапа исследований проводится изучение физико-химических,

реологических показателей модельных суппозиториев, проводятся исследова-

ния, посвященные технологическому совершенствованию выбранных суппози-

торных основ. Полученные результаты позволяют дать подробную оптималь-

ную технологию производства ЛФ с выбором и обоснованием критических то-

чек технологического процесса.

С целью обеспечения возможности исследования стабильности разрабо-

танной ЛФ при хранении и обоснования разработанного технологического про-

цесса производства разработанных суппозиториев четвертый этап настоящего

дизайна посвящен разработке методов анализа основных действующих компо-

нентов разрабатываемой ЛФ. Для разработанных методик созданы валидацион-

ные характеристики.

На этом же этапе определены показатели норм качества разработанной

ЛФ. На основании полученных результатов будут исследованы процессы, про-

исходящие при хранении ЛФ и, таким образом, установлены сроки годности.

Представленные в данной главе методы и дизайн обеспечили решение

поставленных задач данного диссертационного исследования, необходимую

степень точности и достоверности полученных результатов.

51

Рисунок 4 – Дизайн исследования

52

Глава 3. ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ

СУППОЗИТОРИЕВ С БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ

3.1. Оценка качества

эфирного масла монарды дудчатой

Для разработки норм качества создаваемой ЛФ первоочередной задачей

является стандартизация лабораторного образца ЭМ монарды, полученного в

2009 году в Никитском ботаническом саду – Национальном научном центре

(Украина).

Разработку норм качества проводили на основании требований ЕФ 7.0

изд. статья «Essential Oils».

В соответствии с требованиями ЕФ 7.0 изд. для ЭМ монарды были опре-

делены следующие показатели качества: описание, подлинность, относительная

плотность, показатель преломления, кислотное число, оптическое вращение,

содержание воды, посторонние эфиры, жирные масла и осмоленные эфирные

масла, остаток после выпаривания, хроматографический профиль.

Описание. По внешнему виду ЭМ монарды представляло собой бесцвет-

ную со специфическим запахом жидкость.

Подлинность. Для идентификации ЭМ монарды были разработаны и ис-

пользованы два теста.

Тонкослойная хроматография

Методом ТСХ определяли наличие основных компонентов ЭМ монарды

путем сравнения расположения и интенсивности окраски хроматографических

зон на хроматограмме испытуемого раствора и РСО, состоящего из смеси β-

пинена, гераниола и гераниола ацетата. Для хроматографирования испытуемого

образца и образца сравнения использовали систему растворителей «этилацетат

– гептан» (10 : 90). Хроматографирование проводили в стандартных условиях в

53

соответствии с методикой, описанной в п. 2.2.1. главы 2. Результаты хромато-

графирования представлены в таблице 4.

Таблица 4 – Результаты идентификации компонентов ЭМ

монарды дудчатой методом ТСХ

Условия хроматографирования Rf, Rs Идентифицировано

Сорбент: SilicaGel 60

Система растворителей:

этилацетат : гептан 10 : 90

Проявитель: раствор анисового

альдегида в кислоте серной конц.

0,36

0,21

0,82

β-пинен 0,37

гераниол 0,22

гераниола ацетата 0,84

β-пинен

гераниол

гераниола ацетат

Полученные данные, представленные в таблице 4, показывают, что зоны

адсорбции исследуемых веществ в испытуемом образце ЭМ монарды совпада-

ют с зонами адсорбции РСО, состоящего из смеси β-пинена, гераниола и гера-

ниола ацетата.

Газовая хроматография

Вторым тестом установления подлинности ЭМ монарды является хрома-

тографический профиль всех летучих компонентов препарата. Хроматографи-

ческий профиль определяли методом ГХ с использованием капиллярной колон-

ки с полярной неподвижной фазой на основе полиэтиленоксида с молекулярной

массой около 20000. Условия хроматографирования приведены в п. 2.2.1. главы

2 и аналогичны условиям, приведенным в статье «Essential Oils» ЕФ 7.0 изд.

Хроматограмма испытуемого раствора препарата приведена на рисунке 5.

Рисунок 5 – Типичная хроматограмма ЭМ монарды дудчатой

54

Установлено, что ЭМ монарды состоит из более чем 30 компонентов. Со-

отношение этих компонентов может варьировать от условий произрастания

растительного сырья. Соответственно, с изменением соотношения основных

компонентов будет меняться показатель «Хроматографический профиль» и

другие физические показатели, включая и показатель «Относительная плот-

ность». Тем не менее контроль препарата по этому показателю косвенно позво-

ляет подтвердить идентичность компонентного состава составу образца, ис-

пользуемого как при разработке проекта ФСП на ЭМ монарды, так и на разра-

батываемую ЛФ.

Относительная плотность. Показатель «Относительная плотность» опре-

деляли пикнометрически (методика приведена в главе 2 п. 2.2.1.). Значение от-

носительной плотности препарата находится в пределах от 0,890 до 0,920.

Показатель преломления. Аналогично показателю «Относительная плот-

ность» этот показатель косвенно позволяет подтвердить идентичность компо-

нентного состава составу используемого образца. Показатель преломления оп-

ределяли в соответствии с методикой п. 2.2.1. главы 2. Значение показателя

преломления ЭМ монарды находится в пределах от 1,464 до1,475.

Кислотное число. Наличие свободных кислот не характерно для ЭМ. В

данном случае в ЭМ монарды присутствует гераниолацетат, т.е. сложный эфир,

который в процессе получения путем перегонки с водяным паром может гидро-

лизоваться с образованием уксусной кислоты. Поскольку уксусная кислота хо-

рошо растворяется в воде, то основная ее часть будет удалена из готового про-

дукта еще на стадии выделения ЭМ. Однако примеси этой кислоты могут по-

пасть в препарат как на стадии производства, так и образовываться в процессе

хранения. Поэтому при оценке качества ЭМ монарды был включен показатель

«Кислотное число», определение которого проводили титриметрическим мето-

дом (глава 2 п. 2.2.1.). Предел данного показателя установлен на уровне 1,0, по-

скольку более высокое содержание кислот в препарате значительно влияет на

сроки годности.

55

Оптическое вращение. Пределы этого показателя установлены экспери-

ментально на образцах препарата используемого для разработки проекта ВФС.

Наряду с другими физическими показателями, показатель «Оптическое враще-

ние» косвенно характеризует компонентный состав препарата. Значение пока-

зателя оптического вращения ЭМ монарды находится в пределах от -0,5о до -

3,5о.

Вода. Концентрация воды в ЭМ монарды влияет как на сроки годности

самого ЭМ монарды, так и на качество готовых ЛФ. Определение воды в пре-

парате проводили визуально, растворив 0,5 мл препарата в 1 мл сероуглерода.

При наличии в препарате воды образуется мутный раствор. Экспериментально

определенный нижний предел обнаружения воды в ЭМ монарды составил око-

ло 0,8 мкл в 0,5 мл (около 0,2%).

Посторонние эфиры в эфирных маслах. Определение посторонних слож-

ных эфиров в препарате проводили по методике, описанной в п. 2.2.1. главы 2.

Определение посторонних сложных эфиров основано на реакции щелоч-

ного гидролиза и образовании нерастворимых в спиртовом растворе калиевых

солей жирных кислот, которые при стоянии реакционной массы выпадают в

осадок. При определении посторонних эфиров в ЭМ препарат должен выдер-

живать испытание на отсутствие посторонних эфиров. Соответственно при

проведении теста не должно наблюдаться образование кристаллов в течение 30

мин, а также при охлаждении.

Жирные масла и осмоленные эфирные масла. Наличие в препарате посто-

ронних жирных масел и осмоленных эфирных масел определяли визуально, на-

нося одну каплю препарата на фильтровальную бумагу. В течение 24 часов

компоненты ЭМ монарды при комнатной температуре испарялись, не оставляя

на фильтровальной бумаге заметного следа. В случае присутствия в препарате

мало летучих компонентов на фильтровальной бумаге остается визуально за-

метная по контуру нанесенного пятна зона при просмотре на просвечивающее-

ся пятно.

56

Предел определения жирных масел этой пробой был определен экспери-

ментально путем прибавления жирного масла (кукурузного) к препарату. Ниж-

няя концентрация жирного масла в препарате, при которой образуется четко

заметное пятно, составляет 1,5-2%.

Остаток после выпаривания. Количество неиспарившегося при темпера-

туре кипения воды в течение 1 часа вещества свидетельствует о наличие в пре-

парате как органических, так и неорганических посторонних веществ. Остаток

после выпаривания составил не более 1,0%.

Хроматографический профиль. Определение хроматографического про-

филя ЭМ монарды проводили методом ГХ с учетом требований общих статей

ЕФ 7.0 2.2.28 (Газовая хроматография) и 2.2.46 (Хроматографические методы

разделения). Пригодность хроматографической системы устанавливали в соот-

ветствии с требованиями общей статьи «Essential oils» ЕФ 7.0 изд. Данный по-

казатель является наиболее информативным в оценке качества препарата, так

как позволяет устанавливать качественный и количественный состав ЭМ. Хро-

матографический пофиль ЭМ монарды должен соответствовать хроматографи-

ческому профилю, представленному на рисунке 5.

По результатам наблюдений за качеством препарата в процессе хранения

и с использованием разработанных методик установлен его срок годности.

Данные представлены в таблице 5.

57

Таб

ли

ца

5 –

Рез

ульт

аты

оп

ред

елен

ие

кач

еств

а Э

М м

он

ард

ы д

уд

чат

ой

в п

ро

цес

се х

ран

ени

я

Д

ата

ко

нтр

ол

я

12

.02.1

2

Пр

озр

ачн

ая

жи

дко

сть с

слаб

ым

желто

-

ват

ым

отт

ен-

ко

м с

о с

пец

и-

фи

чес

ки

м з

а-

пах

ом

Со

отв

етств

ует

Со

отв

етств

ует

0,9

103

1,4

75

0,9

8

12

.08.1

1

Пр

озр

ачн

ая

жи

дко

сть с

слаб

ым

желто

-

ват

ым

отт

ен-

ко

м с

о с

пец

и-

фи

чес

ки

м з

а-

пах

ом

Со

отв

етств

ует

Со

отв

етств

ует

0,9

102

1,4

75

0,9

3

02

.03.1

1

Пр

озр

ачн

ая

жи

дко

сть с

слаб

ым

желто

-

ват

ым

отт

ен-

ко

м с

о с

пец

и-

фи

чес

ки

м з

а-

пах

ом

Со

отв

етств

ует

Со

отв

етств

ует

0,9

068

1,4

74

0,6

0

29

.10.1

0

Пр

озр

ачн

ая

жи

дко

сть с

слаб

ым

желто

-

ват

ым

отт

ен-

ко

м с

о с

пец

и-

фи

чес

ки

м з

а-

пах

ом

Со

отв

етств

ует

Со

отв

етств

ует

0,9

066

1,4

74

0,3

5

27

.07.1

0

Пр

озр

ачн

ая

бес

цветн

ая

жи

дко

сть с

о

спец

иф

ич

е-

ски

м з

апах

ом

Со

отв

етств

ует

Со

отв

етств

ует

0,9

065

1,4

74

0,2

5

08

.05.1

0

Пр

озр

ачн

ая

бес

цветн

ая

жи

дко

сть с

о

спец

иф

ич

е-

ски

м з

апах

ом

Со

отв

етств

ует

Со

отв

етств

ует

0,9

062

1,4

73

0,2

3

06

.02.1

0

Пр

озр

ачн

ая

бес

цветн

ая

жи

дко

сть с

о

спец

иф

ич

ески

м

зап

ахо

м

Со

отв

етст

ву

ет

Со

отв

етст

ву

ет

0,9

055

1,4

72

0,2

3

Тр

ебо

ван

ия

Пр

озр

ачн

ая б

ес-

цвет

ная

ил

и с

жел

товат

ым

от-

тен

ко

м ж

ид

ко

сть,

со с

пец

иф

ич

е-

ски

м з

апах

ом

Рас

по

ло

жен

ие

и

окр

аска

пяте

н н

а

хр

ом

ато

грам

ме

исп

ыту

емо

го р

-ра

и р

-ра

срав

нен

ия

до

лж

ны

со

вп

а-

дат

ь

Хр

ом

ато

граф

ич

е-

ски

й п

ро

фи

ль

хр

ом

ато

грам

мы

пр

епар

ата

до

лж

ен

совп

адат

ь с

хр

о-

мат

огр

амм

ой

,

пр

едст

авлен

но

й

на

ри

с. 6

От

0,8

90

до

0,9

20

От

1,4

64

до

1,4

75

Не

бо

лее

1,0

По

каз

ател

и

кач

еств

а

Оп

иса

ни

е

По

дли

нн

ост

ь

Отн

оси

тельн

ая

Пло

тно

сть

По

каз

ател

ь

Пр

ело

млен

ия

Ки

сло

тно

е

чи

сло

58

Продолжение таблицы 5

- 1

,8

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

0,3

8

Со

отв

етств

у-

ет

Го

ден

- 1

,8

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

0,3

5

Со

отв

етств

у-

ет

Го

ден

- 1

,8

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

0,2

2

Со

отв

етств

у-

ет

Го

ден

- 1

,7

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

0,1

5

Со

отв

етств

у-

ет

Го

ден

- 1

,7

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

0,1

5

Со

отв

етств

у-

ет

Го

ден

- 1

,7

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

0,1

2

Со

отв

етств

у-

ет

Го

ден

- 1

,6

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

Вы

дер

жи

вае

т

исп

ыта

ни

е

0,1

2

Со

отв

етств

у-

ет

Го

ден

От

-0,5

о д

о -

3,5

о

См

есь 0

,5 м

л п

ре-

пар

ата

с 1

мл с

е-

ро

угл

еро

да

до

лж

-

на

бы

ть п

ро

зрач

-

на

Пр

епар

ат д

ол

жен

вы

дер

жи

ват

ь и

с-

пы

тан

ие

на

отс

ут-

стви

е п

ост

ор

он

-

ни

х э

фи

ро

в

Пр

епар

ат д

ол

жен

вы

дер

жи

ват

ь и

с-

пы

тан

ие

на

отс

ут-

стви

е ж

ир

ны

х м

а-

сел и

осм

олен

ны

х

эфи

рн

ых

мас

ел

Не

бо

лее

1,0

%

Хр

ом

ато

граф

ич

е-

ски

й п

ро

фи

ль

хр

ом

ато

грам

мы

пр

епар

ата

до

лж

ен

совп

адат

ь с

хр

о-

мат

огр

амм

ой

пр

едст

авлен

но

й

на

ри

с. 6

Го

ден

Оп

тич

еско

е

вр

ащен

ие

Во

да

По

сто

ро

нн

ие

эфи

ры

в э

фи

р-

ны

х м

аслах

.

Жи

рн

ые

мас

ла

и о

смо

лен

ны

е

эфи

рн

ые

мас

ла

Ост

ато

к п

осл

е

вы

пар

иван

ия

Хр

ом

ато

гра-

фи

чес

ки

й

пр

оф

иль

Вы

во

ды

Препарат хранили в хорошо укупоренной таре в защищенном от света

месте при температуре не выше 25оС

59

3.2. Скрининговые исследования антимикробных и

противоспалительных свойств ЭМ монарды дудчатой

Поскольку лечение инфекционно-воспалительных заболеваний все еще

недостаточно эффективно, остается необходимость в дальнейшем изыскании и

внедрении в клиническую практику новых ЛС, используемых для регулирова-

ния регенеративного процесса. При этом предпочтение отдают тем, которые

обладают наиболее широким диапазоном действия, безопасны и оказывают

стимулирующее действие на специфические и неспецифические механизмы

защиты. Таким требованиям отвечают ЭМ [63]. Обоснование выбора активных

компонентов разрабатываемой ЛФ потребовало исследования антимикробной

и противоспалительной активности ЭМ монарды в сравнении с другими ЭМ,

используемыми в медицине.

Исследования антимикробной активности ЭМ монарды в сравнении с

ЭМ эвкалипта, мяты и лаванды проводили методом серийных разведений 1%

спиртовых растворов масел в МПБ по методике, описанной в п. 2.2.5. главы 2.

Результаты исследования представлены в таблице 6.

Таблица 6 – Антимикробная активность ЭМ монарды дудчатой

в сравнении с другими маслами, используемыми в медицине (мкг/мл)

Наименование

эфирных

масел

Исследованные микроорганизмы

Nei

sser

ia

сata

rral

is

36621

Str

epto

cocc

us

рyogen

es

Dic

k I

Sta

phylo

cocc

us

aure

us

209

Cit

robac

ter

freu

ndii

101/5

7

Esc

her

ichia

coli

АТ

СС

25922

Kle

bsi

ella

рre

um

onia

e 4

18

Pro

teus

vulg

aris

4636

Ente

robac

ter

сloac

ae

ГИ

СК

А-1

86

Ser

rati

a m

arce

scen

s

АТ

СС

-9986

Pse

udom

onas

аеru

gin

osa

АТ

СС

27853

монарда 125 125 250 500 400 400 400 400 500 1562,5

эвкалипт 1000 - 4000 4000 4000 4000 4000 4000 4000 4000

мята 500 250 4000 3125 4000 1562,5 3125 4000 3125 4000

лаванда 500 500 3125 4000 4000 3125 3125 4000 - -

60

Судя по приведенным в таблице 6 данным, при сравнительном исследо-

вании ЭМ наибольшей антимикробной активностью обладает ЭМ монарды. Его

бактерицидная доза колебалась в пределах 125 мкг/мл – 500 мкг/мл. Исключе-

нием была культура синегнойной палочки, которая гибла только при концен-

трации 1562,5 мкг/мл. Кроме того, представленные данные позволяют судить о

широком спектре антимикробной активности ЭМ монарды.

Исследование противовоспалительной активности ЭМ монарды про-

водили с использованием модели по В. Менкину (методика приведена в п 2.2.6.

главы 2).

Введение опытным животным ЭМ монарды приводило в первые сутки к

увеличению объема зараженной лапы по сравнению с таковым у мышей

контрольной группы. Однако на третьи сутки исследования объем зараженных

лап у мышей опытной группы стал меньше объема лап мышей контрольной

группы. На шестые сутки после заражения объем «больных» лап у животных

опытной группы стал достоверно меньше, чем у животных контрольной группы

(0,112±0,012 см3 и 0,181±0,025 см

3 соответственно, р<0,05) (таблица 7).

Таблица 7 – Динамика изменения объема инфицированных лап мышей

под влиянием трехкратного введения 0,5% масляного раствора ЭМ монарды

дудчатой

Группы

животных

Кол-во

животных

Средний объем

здоровой лапы

(см3)

Средний объем зараженной лапы

по суткам (см3)

1-е сутки 3-и сутки 6-е сутки

Опытная 5 0,086±0,008 0,240±0,016 0,187±0,031 0,112±0,012

Контрольная 5 0,080±0,005 0,198±0,015 0,197±0,003 0,181±0,025

Приведенные в таблице 7 данные свидетельствуют о том, что ЭМ

монарды обладает противовоспалительным эффектом и, в частности, влияет на

экссудативную фазу воспаления.

61

3.3. Разработка состава суппозиториев

с биологически активными веществами

Одним из направлений разработки состава и технологии суппозитор-

ных ЛФ является поиск основ, которые обеспечивают не только удобство

применения, но и биодоступность ЛС. В контексте сказанного необходимо

учитывать физико-химические показатели действующих веществ, предупре-

ждать их разрушение и отрицательную взаимосвязь со вспомогательными

веществами, которая может привести к изменениям фармакологических

свойств лекарственного препарата [35, 39].

Для лечения воспалительных процессов слизистой прямой кишки, а

также для улучшения регенеративных процессов в состав разрабатываемых

суппозиториев вводили комплекс БАВ: -каротин микробиологический, об-

ладающий ранозаживляющим, иммуностимулирующим, противовоспали-

тельным действием и ЭМ монарды. Представленные выше результаты по ис-

следованию противоспалительной и антимикробной активности ЭМ монарды

доказали высокую противоспалительную активность ЭМ монарды и широ-

кий спектр антимикробного действия.

На первом этапе исследований были получены модельные образцы

суппозиториев на четырех основах липофильного характера: твердый жир

типа А, витепсол W35, суппоцир NAS50 и суппоцир АМ.

Суппозитории изготавливали методом выливания. Комплекс БАВ вво-

дили к предварительно расплавленным основам при постоянном перемеши-

вании.

Количество 0,02% масляного раствора -каротина и ЭМ монарды в со-

ставе готового продукта (одного суппозитория) было определено по литера-

турным данным и на основании полученных результатов исследования мик-

робиологических и противовоспалительных свойств ЭМ монарды. Получен-

ную суппозиторную массу дозировали в гнезда формы объемом 3,0, предва-

62

рительно смазанные мыльным спиртом. Охлаждали до полного застывания в

условиях холодильника при температуре (4±1)ºС в течение 60 мин., после че-

го суппозитории извлекали из формы и упаковывали.

Оценку качества полученных суппозиториев проводили согласно тре-

бованиям ГФ XI изд. Полученные результаты исследований модельных об-

разцов суппозиториев на разных основах представлены в таблице 8.

63

Т

абли

ца

8 –

Ор

ган

олеп

тич

ески

е и

фи

зико

-хи

ми

чес

ки

е св

ой

ства

суп

пози

тор

иев

с Б

АВ

Т

пл,

°С

Чер

ез д

ва

год

а

хр

анен

ия

36

,42

±0

,02

36

,12

±0

,02

37

,65

±0

,02

38

,12

±0

,02

Чер

ез о

ди

н

год

хр

анен

ия

36

,12

±0

,02

35

,48

±0

,02

37

,14

±0

,02

37

,24

±0

,02

По

сле

пр

и-

гото

влен

ия

35

,40

±0

,02

35

,24

±0

,02

35

,82

±0

,02

35

,96

±0

,02

ВП

Д, м

ин

.

Чер

ез д

ва

год

а

хран

ени

я

4,6

8±

0,0

2

3,8

9±

0,0

2

5,9

5±

0,0

2

6,2

7±

0,0

2

Чер

ез о

ди

н

год

хран

ени

я

4,4

2±

0,0

2

3,8

2±

0,0

2

5,2

2±

0,0

2

5,6

6±

0,0

2

Посл

е п

ри

-

гото

влен

ия

3,5

1±

0,0

2

3,5

0±

0,0

2

3,9

2±

0,0

2

3,7

8±

0,0

2

Вн

ешн

ий

ви

д

Су

пп

ози

тор

ии

торп

едооб-

раз

но

й ф

ор

мы

, рав

ном

ер-

но

окр

ашен

ны

е, с

вет

ло-

ор

анж

евы

е, г

лад

ки

е, б

ез

трещ

ин

и с

ко

лов.

На

срез

е

од

но

ро

дн

ые,

без

мех

ани

-

чес

ки

х в

клю

чен

ий

Су

пп

ози

тор

ии

торп

едооб-

раз

но

й ф

ор

мы

, рав

ном

ер-

но

окр

ашен

ны

е, с

вет

ло-

ор

анж

евы

е, г

лад

ки

е, б

ез

трещ

ин

и с

ко

лов.

На

срез

е

од

но

ро

дн

ые,

без

мех

ани

-

чес

ки

х в

клю

чен

ий

Су

пп

ози

тор

ии

торп

едооб-

раз

но

й ф

ор

мы

, рав

ном

ер-

но

окр

ашен

ны

е, с

вет

ло-

ор

анж

евы

е, г

лад

ки

е, б

ез

трещ

ин

и с

ко

лов.

На

срез

е

од

но

ро

дн

ые,

без

мех

ани

-

чес

ки

х в

клю

чен

ий

Су

пп

ози

тор

ии

то

рп

едоо

б-

раз

но

й

фор

мы

, рав

ном

ерн

о

окр

ашен

ны

е, с

вет

ло-

ор

анж

евы

е, г

лад

ки

е, б

ез

трещ

ин

и с

ко

лов.

На

срез

е

од

но

ро

дн

ые,

без

мех

ани

-

чес

ки

х в

клю

чен

ий

Об

ъек

т

исс

лед

ован

ия

суп

по

зито

ри

и

на

осн

ове

твер

ды

й ж

ир

тип

а А

суп

по

зито

ри

и

на

осн

ове

ви

теп

сол

W3

5

суп

по

зито

ри

и

на

осн

ове

суп

по

ци

р

NA

S5

0

Суп

по

зито

ри

и

на

осн

ове

суп

по

ци

р A

M

64

Как видно из данных таблицы 8, внешний вид полученных суппозито-

риев и показатели ВПД за указанный период наблюдения отвечали требова-

ниям ГФ XI изд.

Однако температура плавления суппозиториев на основах суппоцир

NAS50 и суппоцир AM уже после первого года хранения превысила предел

требований НД (37°С), поэтому пришли к выводу о невозможности в даль-

нейшем использования этого типа основ.

Дальнейшие исследования проводили с суппозиториями, изготовлен-

ными на основах твердый жир типа А и витепсол W35.

Изучение физико-химических свойств

суппозиториев с БАВ

Для разработки состава и технологии суппозиториев с БАВ были ис-

следованы физико-химические показатели: температура плавления, ВПД, ки-

слотное, эфирное, перекисное число и число омыления исследуемых суппо-

зиторных основ и модельных образцов суппозиториев следующих составов:

Состав №1: -каротин микробиологический 0,02% масляный раствор –

0,15 г, ЭМ монарды дудчатой – 0,015 г, твердый жир типа А до 3,0 г.

Состав №2: -каротин микробиологический 0,02% масляный раствор –

0,15 г, ЭМ монарды дудчатой – 0,015 г, витепсол W35 до 3,0 г.

Для установления закономерностей поведения действующих веществ в

суппозиторных основах в качестве препарата сравнения были использованы

суппозитории «Олестезин», содержащие в своем составе масло облепихи.

Как известно, масло облепихи в своем составе содержит от 50 до 100 мг% ка-

ротиноидов. По содержанию каротиноидов масло облепихи является неоспо-

римым лидером среди всех растительных масел и нашло применение в прок-

тологии в виде микроклизм, тампонов, а также ректальных суппозиториев

[38].

Результаты изучения температуры плавления и ВПД изготовленных

суппозиториев с комплексом БАВ на разных основах представлены в таблице

9.

65

Таблица 9 – Результаты исследования температуры плавления и ВПД

суппозиториев с БАВ на разных основах

Объект исследования ВПД, мин. Тпл, °С

основа твердый жир типа А 4,62±0,01 35,62±0,02

суппозитории состава №1

твердый жир типа А+-каротин

+ЭМ монарды

3,53±0,02 35,36±0,02

основа витепсол W35 4,53±0,11 35,60±0,04

суппозитории состава №2

витепсол W35+-каротин

+ЭМ монарды

3,58±0,12 35,56±0,18

суппозитории «Олестезин»

(контроль)

3,62±0,01 35,54±0,02

Из данных таблицы 9 видно, что средние показатели ВПД и температу-

ры плавления при введении комплекса БАВ не превышают требований ГФ XI

изд. (ВПД – не более 15 мин., Тпл. – не более 37°С). Однако стоит отметить,

что при введении комплекса БАВ в липофильные основы показатели ВПД и

температуры плавления уменьшаются, что объяснимо родством вводимого

комплекса БАВ и используемых липофильных основ.

Испытание на механическую прочность суппозиториев проводили на

приборе марки ERWEKA SBT-2 (методика приведена в п. 2.2.4. раздела 2).

Результаты исследования механической прочности суппозиториев с дейст-

вующими веществами на разных основах приведенные в таблице 10.

Таблица 10 – Результаты исследования механической прочности

суппозиториев с БАВ

Объект исследования Механическая прочность

суппозиториев, г

основа твердый жир типа А 1100

суппозитории состава №1

твердый жир типа А+-каротин+ЭМ Монарды

1000

основа витепсол W35 1050

суппозитории состава №2

витепсол W35+-каротин+ЭМ Монарды

1000

суппозитории «Олестезин»

(контроль)

1100

Результаты эксперимента показали, что суппозитории с БАВ на осно-

вах твердый жир и витепсол W35 выдерживают нагрузку 1000 г. Однако вве-

66

дение комплекса БАВ в суппозиторную основу вызывает незначительное

снижение механической прочности суппозиториев по отношению к основе.

Известно, что в некоторых случаях на полноту высвобождения ЛС из

суппозиториев, стабильность ЛФ влияют физико-химические показатели:

эфирное, перекисное, кислотное числа и число омыления [27, 53].

В таблице 11 представлены результаты определения физико-

химических показателей как суппозиторных основ, так и динамика их изме-

нения при добавлении основных действующих компонентов: -каротина и

ЭМ монарды (методики приведены в п. 2.2.1. раздела 2).

Таблица 11 – Физико-химические показатели суппозиториев БАВ

на разных основах

Объект

исследования

Кислотное

число, Кч

Эфирное

число, Ч

Перекисное

число

Число

омыления

твердый жир типа А 0,26 222,26 2,36 222,52

твердый жир типа А+-каротин 2,36 225,28 2,28 227,64

Состав №1

твердый жир типа А+

-каротин+ЭМ монарды

2,62 216,71 2,25 219,33

витепсол W35 0,16 235,98 2,42 236,14

витепсол W35+-каротин 2,58 235,57 2,34 238,15

Состав №2

витепсол W35+

-каротин+ЭМ Монарды

2,71 228,94 2,19 231,65

Из представленных в таблице 11 данных видно, что введение дейст-

вующих веществ (-каротина и ЭМ монарды) в основы меняет базовые пока-

затели в сторону их уменьшения, что дает возможность предположить стаби-

лизирующее действие данного активного комплекса в составе суппозиториев,

т. е. прогнозировать увеличение стабильности, продолжительности хранения

и возможности не использовать химические стабилизаторы.

Проведенные исследования по изучению физико-химических свойств

суппозиториев с -каротином и ЭМ монарды позволили судить о возможно-

сти применения основ твердый жир типа А и витепсол W35.

67

Изучение реологических показателей

суппозиториев с БАВ

Структурно-механические свойства системы (вязкость, граница текуче-

сти, тиксотропность) являются важными характеристиками, которые опреде-

ляют стабильность и способность к формированию их в готовые изделия, со-

противляемость разрушению и деформации в процессе технологической пе-

реработки, упаковки, транспортировки и хранения. От показателей вязкости

дисперсной системы зависит распределение ЛВ в основе и точность дозиро-

вания.

Реологические характеристики суппозиториев значительно зависят от

температуры и механического влияния. В процессе изготовления суппози-

торная масса подвергается нескольким видам деструкции: механической, те-

пловой, световой и др. Деструкция суппозиторных основ и масс может про-

исходить при технологических операциях, которые проводятся при изготов-

лении суппозиториев [22, 149].

Интенсивность механической обработки суппозиторных масс может

привести к их перегреву, окислению (особенно -каротина), изменению мо-

лекулярной массы полимеров, а также к изменению реологических парамет-

ров, разрушению структуры системы и др. Поэтому при изготовлении суппо-

зиториев важно знать закономерности и механизмы процессов деструкции,

зависимость от внешних факторов, чтобы уметь руководить ими.

Для определения влияния действующих веществ (-каротина и ЭМ мо-

нарды) на реологические показатели суппозиторной массы, а в дальнейшем и

на суппозитории были исследованы реологические параметры модельных

образцов суппозиториев, а также основ при температурных режимах 37°С и

40°С. (методика приведена в п. 2.2.4. раздела 2). Полученные данные приве-

дены на рисунках 6 и 7.

68

Рисунок 6 – Реограммы суппозиториев с БАВ на основе твердый жир типа А:

1 – суппозитории при Т – 37°С; 2 – суппозитории

при Т – 40 °С; 3 – твердый жир при Т – 37°С;

4 – твердый жир при Т – 40°С

Рисунок 7 – Реограммы суппозиториев с БАВ на основе витепсол W35:

1 – суппозитории при Т – 37°С; 2 – суппозитории

при Т – 40°С; 3 – витепсол W37 при Т – 37°С;

4 – витепсол W35 при Т – 40°С

При определении реологических параметров суппозиторных основ

(твердый жир и витепсол W35) и суппозиториев, полученных на вискозимет-

ре «Реотест-2» установлено, что исследуемые объекты представляют собой

системы с Ньютоновским типом течения как при температуре 37°С, так и при

40°С.

Приведенные выше реограммы подтвердили возможность применения

0

100

200

300

400

500

600

0 200 400 600 800 1000 1200 1400

скорость сдвига, с^(-1)

на

пр

яж

ен

ие

сд

ви

га,

Па

1

2

3

4

0

100

200

300

400

500

600

0 200 400 600 800 1000 1200 1400

скорость сдвига, с^(-1)

на

пр

яж

ен

ие

сд

ви

га,

Па

1

2

3

4

69

суппозиторных основ твердый жир типа А и витепсол W35 для дальнейших

исследований при разработке суппозиториев с БАВ: возможность выливания

массы, перемешивания в процессе приготовления и упаковки.

На основании результатов проведенных исследований разработаны

следующие составы суппозиториев с комплексом БАВ:

Состав №1 Состав №2

-каротин микробиологический

0,02% масляный раствор

(ФС 42-3867-99)………………0,15 г

ЭМ монарды дудчатой

(ФСП)…………………………0,015 г

Твердый жир типа А

(ФС 42-3466-97)……………до 3,0 г

-каротин микробиологический

0,02% масляный раствор

(ФС 42-3867-99)………………0,15 г

ЭМ монарды дудчатой

(ФСП)…………………………0,015 г

Витепсол W35

(НД 42-9584-88)………………до 3,0 г

Технологическая схема получения суппозиториев представлена на ри-

сунке 8.

70

ВР 1.1 Подготовка воздуха

ВР 1.2 Подготовка производственных помещений

ВР 1.3 Подготовка технологического оборудования

ВР 1.4 Подготовка технологической одежды и персонала

ТП 2.1Отвешивание основы, β-каротина, эфирного масла

Монарды

ТП 3.1 Плавление основы с последующей фильтрацией

ТП 3.2 Смешивание компонентов суппозиторной массы

ТП 3.3 Гомогенизация суппозиторной массы

ТП 4.1 Розлив суппозиторной массы

ТП 4.2 Охлаждение суппозиториев

УМО 5.1 Упаковка готовой продукции

УМО 5.2 Маркировка готовой продукции

ВР 1

Км

Санитарная подготовка

производства

Сточные воды в

канализацию

ТП 2

Кт, Кх, Км

Подготовка сырья

ТП 3

Кт, Кх, Км

Приготовление

суппозиторной массы

Потери механические,

в т.ч. в канализацию

Потери механические,

в т.ч. в канализацию

ТП 4

Кт, Кх

Формирование

суппозиториев

УМО 5

Кт, Кх, Км

Маркировка, упаковка

готовой продукции

Потери механические,

в т.ч. в канализацию

Потери механические

на утилизацию

Готовая продукция.

Карантинное хранениеНа склад

Рисунок 8 – Технологическая схема производства

суппозиториев с комплексом БАВ

71

3.4. Разработка состава суппозиториев с биологически активными

веществами в сочетании с местным анестетиком

В консервативной терапии проктологических заболеваний для быстро-

го обезболивания аноректальной области широко используют местноанесте-

зирующие препараты анестезин, лидокаин, которые могут применяться пу-

тем аппликаций, но чаще в составе комбинированных мазей, кремов и суппо-

зиториев [70].

Дальнейшие исследования были посвящены совершенствованию со-

става и технологии суппозиториев с комплексом БАВ. Исходя из современ-

ных требований комплексного (обезболивающего, противовоспалительного,

ранозаживляющего, антимикробного) воздействия ЛС, в состав ЛФ одним из

активных компонентов, оказывающих местноанестезирующее действие, был

введен анестезин. При выборе содержания анестезина в суппозиториях ори-

ентировались на его содержание в известных суппозиториях, выпускаемых

отечественной промышленностью и применяемых в проктологии [54].

Известно, что добавление вспомогательных веществ разносторонне

влияет на качество разрабатываемой ЛФ. Учитывая снижение таких показа-

телей как ВПД, температура плавления, механическая прочность при введе-

нии в суппозиторную основу комплекса БАВ, решено было ввести в качестве

предполагаемого структуроформирующего агента, а также стабилизатора

ПВП в количестве 1%.

Для изучения равномерности распределения действующих веществ, а

также для улучшения их полноты высвобождения ЛС в состав суппозиториев

были введены ПАВ: твин-80 и эмульгатор №1, взятых в общеизвестных кон-

центрациях (1% и 5% соответственно). Модельные образцы суппозиториев

на основах твердый жир типа А и витепсол W35 готовили методом вылива-

ния [10, 17, 75].

С учетом физико-химических свойств компонентов разрабатываемой

72

ЛФ изготовление модельных образцов суппозиториев осуществляли в две

стадии.

При изготовлении суппозиториев с твином-80 в расплавленную основу

при тщательном перемешивании вводили комплекс БАВ (масляный раствор

-каротина и ЭМ монарды) (полупродукт 1). В ступке измельчали анестезин,

добавляли ПВП, твин-80, тщательно смешивали и частями добавляли полу-

продукт 1.

При изготовлении суппозиториев с эмульгатором №1 суппозиторную

основу сплавляли с эмульгатором №1 на водяной бане и при тщательном пе-

ремешивании вводили комплекс БАВ (масляный раствор -каротина и ЭМ

монарды) (полупродукт 1). В ступке к измельченному анестезину добавляли

ПВП, смешивали и частями добавляли полупродукт 1.

Суппозиторную массу дозировали в гнезда формы объемом 3,0, пред-

варительно смазанные мыльным спиртом. Охлаждали до полного застывания

в условиях холодильника (при температуре (4±1)ºС в течение 60 мин.), после

чего суппозитории извлекали из формы и упаковывали.

Составы модельных образцов суппозиториев приведены в таблице 12.

Таблица 12 – Составы модельных образцов суппозиториев

Образец №1 Образец №2 Образец №3 Образец №4

ЭМ монарды - 0,5%

0,02% раствор

-каротина микро-

биологического в

масле - 5%,

Анестезин - 4,0%,

ПВП - 1%,

твин-80 - 1%,

твердый жир типа А

- до 3,0г

ЭМ монарды - 0,5%,

0,02% раствор

-каротина микро-

биологического в

масле - 5%,

Анестезин - 4,0%,

ПВП - 1%,

твин-80 - 1%,

витепсол W35 - до

3,0 г

ЭМ монарды - 0,5%,

0,02% раствор

-каротина микро-

биологического в

масле - 5%,

анестезин - 4,0%,

ПВП - 1%,

эмульгатор №1 - 5%,

твердый жир типа А

- до 3,0 г

ЭМ монарды - 0,5%,

0,02% раствор

-каротина микро-

биологического в

масле -5%,

анестезин - 4,0%,

ПВП - 1%,

эмульгатор №1 - 5%,

витепсол W35 - до

3,0 г

Оценку качества полученных модельных образцов суппозиториев

проводили согласно требований ГФ XI изд. Результаты исследований

представлены в таблице 13.

73

Таблица 13 – Органолептические и физико-химические свойства

модельных образцов суппозиториев

Объект

исследования Внешний вид ВПД Тпл, °С

суппозитории

состава №1

Суппозитории торпедообразной формы, равно-

мерно окрашенные, светло-оранжевые, гладкие,

без трещин и сколов. На срезе однородные, без

механических включений

6,45±0,02 36,12±0,02

суппозитории

состава №2

Суппозитории торпедообразной формы, равно-

мерно окрашенные, светло-оранжевые, гладкие,

без трещин и сколов. На срезе однородные, без

механических включений

6,72±0,02

35,92±0,02

суппозитории

состава №3

Суппозитории торпедообразной формы, равно-

мерно окрашенные, светло-оранжевые, гладкие,

без трещин и сколов. На срезе однородные, без

механических включений

6,56±0,02 36,14±0,02

суппозитории

состава №4

Суппозитории торпедообразной формы, равно-

мерно окрашенные, светло-оранжевые, гладкие,

без трещин и сколов. На срезе однородные, без

механических включений

7,05±0,02 36,25±0,02

По внешнему виду все приготовленные образцы суппозиториев торпе-

дообразной формы, равномерно окрашенные, светло-оранжевые, гладкие, без

трещин и сколов. На срезе однородные, без механических включений.

Установлено, что средние значения температуры плавления и ВПД для

модельных образцов суппозиториев с комплексом БАВ+анестетик, изготов-

ленных на основах твердый жир типа А и витепсол W35, увеличиваются, но

не превышают допустимых норм, предъявляемых ГФ XI изд.

Результаты исследования механической прочности суппозиториев с

действующими веществами на разных основах к разрушению приведены в

таблице 14 (методика приведена в п. 2.2.4. раздела 2).

Таблица 14 – Результаты исследования механической прочности

суппозиториев с комплексом БАВ+анестетик к разрушению

Объект

исследования

Механическая прочность

суппозиториев, г

суппозитории плацебо

(твердый жир типа А)

1100

суппозитории состава №1 1180

суппозитории состава №3 1150

74

Продолжение таблицы 14

суппозитории плацебо

(витепсол W35)

1050

суппозитории состава №2 1150

суппозитории состава №4 1100

суппозитории «Олестезин» 1100

Результаты эксперимента показали, что при введении вспомогательных

веществ стойкость суппозиториев к разрушению увеличивается, что свиде-

тельствует о стабильности их формы.

Методом диализа через полупроницаемую мембрану по методике

Крувчинского изучали влияние основ и ПАВ на процесс высвобождения од-

ного из действующих веществ (анестезина) из суппозиториев (методика при-

ведена в п. 2.2.3. раздела 2). Результаты представлены в таблице 15.

Таблица 15 – Результаты изучения высвобождение анестезина из

суппозиториев в опытах in vitro

Время диализа,

мин.

Содержание анестезина в диализате, %

Образец № 1 Образец № 2 Образец № 3 Образец № 4

15 15,35 17,90 10,73 6,65

30 50,55 27,34 19,81 8,95

45 49,20 32,15 19,93 12,50

60 51,15 31,42 20,90 16,60

90 54,60 33,58 26,57 19,86

120 54,80 34,20 28,34 21,96

150 51,55 35,20 25,50 22,64

180 45,80 31,00 23,12 24,30

210 37,25 30,73 22,70 22,40

240 31,95 29,66 23,27 22,15

300 26,20 31,20 23,50 23,22

Полнота

высвобождения, %

83,66 77,78 57,90 49,70

Настоящие результаты подтверждены графически на рисунке 9.

75

0

10

20

30

40

50

60

15 30 45 60 90 120 150 180 210 240 300

образец №1 образец №2 образец №3 образец №4

Рисунок 9 – Высвобождение анестезина из суппозиториев

в опытах in vitro

Установлено, что добавление к основам твина-80 в количестве 1% при-

водит к более интенсивному высвобождению анестезина. При этом наиболее

полное высвобождение достигается из основы твердый жир типа А. За 300

минут эксперимента в диализную среду высвободилось 83,66% действующе-

го вещества. Из основы витепсол W35 с добавкой твина-80 за указанный

промежуток времени высвободилось 77,78% анестезина. Таким образом,

наиболее полное и быстрое высвобождение анестезина в диализат обеспечи-

вают суппозитории, приготовленные на основе твердый жир типа А с добав-

ление твина-80 в количестве 1%.

Как показано в обзоре литературы, анестезин относится к веществам,

не растворимым в воде, растворимым в жирах и жирных маслах. Однако уве-

личение количества анестезина приводит к уменьшению его растворимости в

маслах, что может повлиять равномерность распределения анестезина в суп-

позиторной массе, а соответственно, ее однородность. Поэтому на следую-

щем этапе исследований были поставлены задачи изучения однородности

суппозиторной массы. Однородность изучали с использованием микроскопа

марки «Микмед-2» (объектив маркировки 10х0,3, измерительный окуляр К

15х) (методика приведена в разделе 2.2.1. главы 2). Установлено, что анесте-

зин полностью растворяется в суппозиторной массе, следовательно, суппози-

76

торная масса представляет собой гомогенную систему.

Опираясь на результаты комплексного исследования, предложен состав

суппозиториев с -каротином и ЭМ монарды и на твердой жировой основе:

-каротин микробиологический

0,02% масляный раствор ФС 42-3867-99 .....................................................0,15 г

Эфирное масло монарды дудчатой ФСП ………………………………..0,015 г

Анестезин ФС 42-3024-00……………………………………..…...………..0,12 г

Поливинилпирролидон (ПВП) ФС 42-1194-98……………….……………0,03 г

Твин-80 ФС 42-2540-88………………………………………..….…………0,03 г

Твердый жир типа А ФС 42-3466-97…...…………….. достаточное количество

до получения суппозитория массой 3,0 г

Разработанный состав суппозиториев получил условное название «Мо-

навитол».

3.5. Обоснование и разработка технологии производства

суппозиториев «Монавитол»

3.5.1. Определение температурного режима ведения

процесса получения суппозиториев «Монавитол»

При разработке состава и технологии суппозиториев возникает ряд во-

просов относительно температурных режимов введении масляной фазы в со-

став суппозиторной основы и изучение структурно-механических (реологи-

ческих) свойств, которые существенно влияют на технологические процессы

производства ЛФ.

Среди композиций, которые используются в фармации, встречаются

основы, очень разнообразные по своим реологическим свойствам. Известно

много случаев, когда в процессе технологической обработки один и тот же

продукт переходит из одного структурного состояния в другое, часто проти-

воположный по свойствам первому. Например, суппозиторная масса при от-

ливании в форму с дальнейшим охлаждением переходит из вяжущего (теку-

77

чего) состояния в твердое. Поэтому в первую очередь необходимо выяснить,

какие свойства исследуемого материала при заданных условиях деформации

являются основными и значащими [10, 97, 149].

При разработке суппозиториев в первую очередь необходимо учиты-

вать физико-химические свойства лекарственных веществ, а также парамет-

ры суппозиторной основы, которые характеризуют ее как твердое тело. В

предыдущих экспериментах установлено, что температура плавления основ

снижается при повышении содержания липофильных компонентов. За счет

этого уменьшается и ВПД суппозиториев.

Кроме того, необходимо учитывать реологические параметры суппози-

торных масс. Знание реологических свойств разрешает регулировать процес-

сы высвобождения, эффективности терапевтического воздействия, однород-

ности дозирования и выбора параметров технологического процесса при раз-

работке, производстве и применении ЛФ.

При определении реологических параметров суппозиториев с дейст-

вующими веществами и суппозиторной основы (твердый жир типа А) уста-

новлено, что исследуемые объекты представляют собой системы с Ньюто-

новским типом течения как при температуре 37°С, так и при 40°С (рисунки

10 и 11).

Рисунок 10 – Зависимость напряжения сдвига от скорости сдвига:

1 – твердый жир типа А при Т – 37°С, 2 – суппозитории «Монавитол»

0

100

200

300

400

500

600

0 200 400 600 800 1000 1200 1400

скорость сдвига, с^(-1)

Нап

ря

жен

ие

сд

ви

га,П

а

1

2

78

Рисунок 11 – Зависимость напряжения сдвига от скорости сдвига:

1 – твердый жир типа А при Т – 40°С, 2 – суппозитории «Монавитол»

Представленные на рисунках графики показывают, что характер реоло-

гических кривых для всех объектов похож.

При изучении температурного режима ведения технологического про-

цесса отмечено, что при снижении температуры реологические параметры

образцов, которые исследовались, увеличивались (рисунок 12).

Рисунок 12 – Зависимость структурной вязкости от температуры:

1 – твердый жир типа А, 2 – суппозитории «Монавитол»

2

2,5

3

3,5

4

4,5

5

35 40 45 50 55 60

t, 0С

n,

Па

*с

Па

*с 1

2

0

100

200

300

400

500

0 200 400 600 800 1000 1200 1400

скорость сдвига, с^(-1)

на

пр

яж

ен

ие

сд

ви

га,

Па

2

1

79

При температуре ниже 32°С текучесть суппозиторной массы уменьша-

лась настолько, что она не затекала в устройство для дозирования, а при тем-

пературе 30°С затвердевала. При температуре выше 45°С суппозиторная мас-

са имела довольно значительные параметры текучести, которые приводили к

образованию крошащихся суппозиториев. Начиная с 55°С температура почти

не влияла на структурную вязкость как на суппозиторную массу, так и на с

основу.

Таким образом, для получения качественных по физико-химическим

свойствам суппозиториев перемешивание суппозиторной массы в реакторе

должно проводиться при температуре 35-40°С, после чего осуществляется

охлаждение массы в реакторе до температуры 33-37°С. Такую же температу-

ру суппозиторная масса должна иметь в сборнике и в бункере автомата для

дозирования.

Полученные зависимости нелинейные, что свидетельствует о пластич-

но-вяжущих свойствах разработанных суппозиториев. При увеличении тем-

пературы кривые вязкости плавно возрастают, а потом переходят в прямые,

что свидетельствует о постепенном полном разрушении структуры.

Построенные кривые вязкости суппозиториев свидетельствуют также о

том, что сдвиг начинается не сразу, а лишь после некоторого приложенного

напряжения, необходимого для разрыва элементов структуры. В период нис-

падающего напряжения качество образца постепенно восстанавливается. При

этом характерно, что в период уменьшения напряжения сдвига восстановле-

ние структуры опаздывает. Характер реограмм указывает на то, что с увели-

чением скорости сдвига появляется прямо пропорциональная зависимость

напряжения сдвига от скорости деформации, что также указывает на принад-

лежность суппозиторной основы и суппозиториев к вязкопластическим те-

лам, которые владеют определенной структурой.

Разработанные суппозитории с комплексом БАВ и анестетиком по дис-

персности являются раствором, поскольку при повышенной температуре, а

также при влиянии вспомогательных веществ анестезин, β-каротин и ЭМ мо-

80

нарды полностью диспергируются суппозиторной основе. Экспериментально

установлено, что при хранении расплавленной суппозиторной массы на про-

тяжении 24 часов при температуре 40°С не происходит расслаивания, в связи

с чем рекомендуется сохранять расплавленную суппозиторную массу без пе-

ремешивания.

3.5.2. Описание технологического процесса изготовления

суппозиториев «Монавитол»

Особое внимание при создании нового ЛС уделялось разработке техно-

логической схемы. Схема традиционна для суппозиториев, получаемых ме-

тодом выливания в условиях завода. Основные этапы технологии суппозито-

риев заключаются в подготовке лекарственных и вспомогательных веществ,

приготовления основы и суппозиторной массы, дозирования суппозиторной

массы и формования суппозиториев.

Технологическая схема производства приведена на рисунке13.

Изложение технологического процесса

Технологический процесс производства препарата «Монавитол», суп-

позитории ректальные состоит из следующих стадий технологического про-

цесса:

ВР 1 Санитарная подготовка производства

ТП 2 Подготовка сырья

ТП 3 Приготовление суппозиторной массы

ТП 4 Формирование суппозиториев

УМО 5 Маркировка, упаковка готовой продукции

81

ВР 1.1 Подготовка воздуха

ВР 1.2 Подготовка производственных помещений

ВР 1.3 Подготовка технологического оборудования

ВР 1.4 Подготовка технологической одежды и персонала

ТП 2.1 Измельчение и просеивание анестезина

ТП 2.2Отвешивание основы, ПВП, твина-80, анестезина,

β-каротина и эфирного масла Монарды

ТП 3.1 Плавление основы с последующей фильтрацией

ТП 3.2 Приготовление концентрата

ТП 3.3 Смешивание компонентов суппозиторной массы

ТП 3.4 Гомогенизация суппозиторной массы

ТП 4.1 Розлив суппозиторной массы

ТП 4.2 Охлаждение суппозиториев

УМО 5.1 Упаковка готовой продукции

УМО 5.2 Маркировка готовой продукции

ВР 1

Км

Санитарная подготовка

производства

Сточные воды в

канализацию

ТП 2

Кт, Кх, Км

Подготовка сырья

ТП 3

Кт, Кх, Км

Приготовление

суппозиторной массы

Потери механические,

в т.ч. в канализацию

Потери механические,

в т.ч. в канализацию

ТП 4

Кт, Кх

Формирование

суппозиториев

УМО 5

Кт, Кх, Км

Маркировка, упаковка

готовой продукции

Потери механические,

в т.ч. в канализацию

Потери механические

на утилизацию

Готовая продукция.

Карантинное хранениеНа склад

Рисунок 13 – Технологическая схема производства

суппозиториев «Монавитол»

82

Стадия ТП 2 ПОДГОТОВКА СЫРЬЯ

ТП 2.1 Отвешивание ПВП, твина - 80,

-каротина микробиологического, ЭМ монарды

Все сырьё при производстве препарата «Монавитол», суппозитории

ректальные, должны быть одобренными ОКК и иметь статус «одобрено

ОКК» и соответствующие статусные этикетки. Данные, указанные в анали-

тических листах и на транспортной упаковке сырья или материала, должны

совпадать (КТ 12).

До начала взвешивания проводят калибровку весов в соответствие с

Инструкциями по эксплуатации (КТ 11).

Перед загрузкой сырья проверяют статус оборудования,

задействованного в процессе производства (оборудование должно быть

очищено и допущено к работе), проверяют чистоту всех вспомогательных

ёмкостей, сборников и мерников, используемых в работе (КТ 10).

На технических весах КП11 в сборники Сб 1-Сб 4 отвешивают

рссчитанные количества ПВП, твина-80, масляного раствора -каротина, ЭМ

монарды. Сборники герметично укупоривают и передают в стадию ТП 3.

Процесс приготовления навесок фиксируют в протоколе производства серии

(КТ 13).

ТП 2.2 Измельчение и просеивание анестезина

На технических весах КП 11 в сборник Сб 5 отвешивают рассчитанное

количество анестезина, процесс приготовления навески фиксируют в

протоколе производства серии.

В мельницу для измельчения анестезина М 13 загружают отвешенное

количество сырья, мельницу включают и производят помол анестезина в

течение ~ 3 мин. Измельченный анестезин просеивают сквозь сита

диаметром 0,16 мм. Далее анестезин поступает в сборник Сб 6, после

окончания помола мельницу выключают. Сборник Сб 6 с измельченным

анестезином взвешивают, вычисляют массу измельченного анестезина,

герметично укупоривают и передают на стадию ТП 3 (КТ 14).

83

ТП 2.3 Подготовка твердого жира

Для плавителя П 10 устанавливают температуру воды обогрева

рубашки ёмкости 80°С.

На технических весах ВТ 12 в сборник Сб 7 отвешивают рассчитанное

количество твердого жира (КТ 18). Отвешенное количество твердого жира

помещают в ёмкость для измельчения жиров Е 8 и измельчают при помощи

металлического ножа. Плавление твердого жира осуществляется в плавителе

П 10. Измельченный твердый жир через верхний загрузочный люк плавителя

П 10 загружают в резервуар, затем крышку закрывают. Расплавление жира

проводят при периодическом перемешивании, контроль агрегатного

состояния сырья проводят визуально. После полного расплавления основы

плавитель П 10 переводят в режим термостатирования на 120 минут при

температуре воды обогрева рубашки 40-50оС, по истечении указанного

времени водяную рубашку плавителя переводят в режим охлаждения,

установив температуру воды в рубашке 16±1°С и при периодическом

помешивании проводят охлаждение расплава твердого жира до 35±5°С (КТ

16, 17). После достижения температуры полупродукта 35±5°С производят

выгрузку полупродукта в сборник. После загрузки ёмкости с расплавом

твердого жира укупоривают и передают на стадию ТП 3.

Стадия ТП 3. ПРИГОТОВЛЕНИЕ СУППОЗИТОРНОЙ МАССЫ

ТП 3.1 Приготовление концентрата

При выключенном приводе перемешивающего устройства в резервуар

Р1 линии СЛ 18/19 через верхний край загружают часть расплава суппози-

торной основы из сборника Сб 9, переданной со стадии ТП 2.3 и поочередно

добавляют измельченный и просеянный анестезин из сборника Сб 6, ПВП,

твин-80, -каротин, ЭМ монарды из сборников Сб 1 - Сб 4, переданных со

стадии ТП 2.1, ТП 2.2 (КТ 18-23). После загрузки полупродуктов крышку ре-

зервуара закрывают, включают перемешивающее устройство и готовят кон-

центрат в течение 20 минут (КТ 24). По истечении указанного времени пере-

мешивающее устройство останавливают и производят выгрузку концентрата

84

в сборник Сб 10, герметично укупоривают и передают на стадию ТП 3.2.

ТП 3.2 Смешивание компонентов суппозиторной массы

При выключенном приводе перемешивающего устройства загружают в

резервуар №2 линии СЛ 18/19 концентрат, переданный со стадии ТП 3.2 и

оставшееся количество расплава суппозиторной основы из сборника Сб 9,

переданной со стадии ТП 2.3. Затем крышку резервуара закрывают. Включа-

ют перемешивающее устройство резервуара №2 на 150 об./мин. и перемеши-

вают все компоненты суппозиторной массы.

ТП 3.3 Гомогенизация суппозиторной массы

Для достижения однородности суппозиторной массы к реактору под-

ключен роторно-пульсационный аппарат, который сочетает в себе принципы

работы диспергатора, гомогенизатора и центробежного насоса (КТ 25).

По истечении времени перемешивания суппозиторная масса передается

на дозирующие устройства линии СЛ 18/19.

Стадия ТП 4 ФОРМИРОВАНИЕ СУППОЗИТОРИЕВ

ТП 4.1 Розлив суппозиторной массы

В формовочные блоки линии СЛ 18/19 устанавливают рулоны с марки-

рованной и немаркированной пленкой для изготовления упаковок ячейковых

контурных (КТ 26). Формовочные блоки включают и начинают процесс

формования упаковок ячейковых контурных для розлива суппозиторной мас-

сы. Сформованные упаковки в виде ленты с раздутыми ячейками автомати-

чески поступают в наполняющие узлы линии СЛ 18/19. После прохождения

дозирующих узлов ленту с ячейками заправляют в блоки охлаждения и через

10 минут начинают дозирование суппозиторной массы в подготовленные

ячейки. Включают дозирующие устройства, суппозиторная масса поступает в

дозаторы линии СЛ 18/19 (КТ 27).

ТП 4.2 Охлаждение суппозиториев

Заполненные суппозиторной массой ячейки помещают в холодильный

блок, где происходит застывание суппозиторной массы при температуре 10-

16°С в течение 20 минут (КТ 28).

85

После охлаждения лента с суппозиториями запаевается, верхний край

ленты сваривается и методом тиснения наносится утвержденный номер се-

рии и срок годности продукта (КТ 29).

После прохождения процесса отбраковки суппозитории собирают в

контейнеры и передают на следующую стадию.

Суппозитории отбраковывают при наличии таких дефектов:

недостаточная наполненность ячейки;

наличие грязи на поверхности контурной упаковки;

нарушение герметичности упаковки;

деформированная пленка.

Некондиционные упаковки относят к потерям. Кондиционные суппозито-

рии собирают в сборник, прикрепляют этикетку с наименованием конечной

продукции, номером серии, датой изготовления, количеством и передают на

следующую стадию.

УМО 5 Маркировка, упаковка готовой продукции

УМО 5.1 Упаковка готовой продукции

Готовые суппозитории с -каротином и ЭМ монарды пакуют в марки-

рованные соответственно нормативной документации пачки по 10 штук. В

каждую пачку вкладывают листок-вкладыш. Пачки упаковывают в группо-

вую (транспортную) упаковку на упаковочном столе ГФ 11. На каждую еди-

ницу транспортной упаковки наклеивают по две транспортных этикетки с

наименованием препарата, номера серии, срока годности и количества по-

требительских упаковок в коробе (КТ 30–31).

В конце процесса упаковки подсчитывают полученное количество

единиц готовой продукции в потребительской таре и количество единиц

транспортной тары.

УМО 5.2 Маркировка готовой продукции

На пачке и этикетке групповой упаковки указывают предприятие-

изготовитель, его товарный знак, юридический адрес и тел./факс, электрон-

ный адрес корпоративного сайта, название препарата, ЛФ на русском и ла-

86

тинском языках, количество суппозиториев в упаковке, состав, способ при-

менения, условия хранения, предупредительные надписи: «Хранить в недос-

тупном для детей месте», «Не использовать по истечении срока годности»,

номер серии, срок годности, штрих-код, дата изготовления.

На пачке дополнительно указывают условия отпуска, знак соответст-

вия, «Комбинированное противовоспалительное средство». На этикетке

групповой упаковки указывают количество упаковок (КТ 32).

Контрольные точки (контролируемые параметры) технологического

процесса производства суппозиториев с -каротином и ЭМ монарды, крите-

рии оценки представлены в таблице 16.

Таблица 16 – Контрольные точки технологического процесса

производства суппозиториев с -каротином микробиологическим и

ЭМ Монарды

Наименование

стадий, места

измерения

параметров или

отбора проб

Наименование

объекта

контроля

Наименование

контролируемого

параметра,

единицы измерения

Регламентируемый

норматив

(значение параметра)

1. 2. 3. 4.

ВР 1.1 Подготовка

воздуха

КТ 1

Воздух рабочей

зоны

Концентрация аэро-

зольных частиц

Максимально допус-

тимое количество

частиц в

1 м3 воздуха с разме-

рами 0,5 мкм –

3520000, с размерами

1 мкм – 832000, с раз-

мерами 5 мкм – 29300

ВР 1.1 Подготовка

воздуха

Воздух рабочей

зоны

Температура

Влажность

20–24°С

30–60%

КТ 2 Микробиологическая

чистота

не более 200 КОЕ в 1

м3 воздуха в эксплуа-

тируемом состоянии

по ГОСТ Р 52249-

2004

ВР 1.2 Подготовка

производственных

помещений

Подготовка воды

очищенной

Вода очищенная Микробиологическая

чистота

Не более 100 микро-

организмов в 1 мл при

отсутствии бактерий

семейства

Enterobacteriaceae,

87

Продолжение таблицы 16

КТ 3

рН

Сухой остаток

Восстанавливающие

вещества

Диоксид углерода

Нитраты и нитриты

Аммиак

Хлориды

Сульфаты

Кальций

Тяжелые металлы

Staphylococuss aureus,

Pseudomonas

aeruginosa

от 5,0 до 7,0

Не более 0,001%

Розовая окраска

должна сохраняться

не должно быть по-

мутнения в течение 1

часа

Не должно появляться

голубого окрашива-

ния

Не более 0,00002%

Не должно быть опа-

лестенции

Не должно быть по-

мутнения

Не должно быть ок-

рашивания

ВР 1.2 Подготовка

производственных

помещений

Ламинол

Новодез Форте

Жавель Солид

Концентрации

рабочих растворов

1%; 3%

0,1%; 0,2%

0,015%; 0,3

Подготовка дезинфи-

цирующих растворов

для санитарной обра-

ботки

КТ 4

Саносил супер

Спирт этиловый

ректификованный

6%

70%

ВР 1.3 Подготовка

оборудования

КТ 5

Производственное

оборудование

Остатки дезинфици-

рующих и моющих

средств

Отсутствие остатков

дезинфицирующих и

моющих средств

ВР 1.3 Подготовка

оборудования

КТ 6

Производственное

оборудование

Микробиологическая

чистота

Не более 20 КОЕ в

смывах с поверхности

площадью около

30см2

ВР 1.4 Подготовка

технологической

одежды и персонала

КТ 7

Поверхность тех-

нологической оде-

жды

Микробная контами-

нация поверхности

технологической оде-

жды, количество КОЕ

в смыве с поверхности

одежды одного со-

трудника

Не более 20 КОЕ в

смыве с поверхности

одежды одного со-

трудника

ВР 1.4 Подготовка

технологической

Поверхность рук

персонала

Микробная контами-

нация поверхности

Не более 20 КОЕ в

смыве с поверхности

88

Продолжение таблицы 16

одежды и персонала

КТ 8

рук, количество КОЕ

в смыве с поверхности

рук одного сотрудни-

ка

рук одного сотрудни-

ка

ВР 1.4 Подготовка

технологической

одежды и персонала

КТ 9

Персонал

Готовность персонала

к работе

Соответствие требо-

ваниям, изложенным

в разделе ВР 1.4

«Подготовка персона-

ла»

ТП 2 Подготовка сы-

рья

КТ 10

Производственные

помещения

Остатки сырья, мате-

риалов и документов

от предыдущей серии

продукта. Чистота

помещений

Отсутствие остатков

сырья, материалов и

документов от преды-

дущей серии продук-

та. Визуальная чисто-

та помещений

ТП 2 Подготовка сы-

рья

КТ 11

Весы ВТ 10 и

ВТ 11

Диапазон допустимо-

го отклонения

Соответствие полу-

ченного веса калиб-

ровочной гири

ТП 2 Подготовка сы-

рья.

КТ 12

Сырьё, материалы

первичной упаков-

ки, упаковочные

материалы

Соответствие Все сырьё, материалы

первичной упаковки и

упаковочные мате-

риалы должны иметь

статус «Одобрено

ОКК», иметь соответ-

ствующие статусные

этикетки. Данные,

указанные в аналити-

ческих листах и на

транспортной упаков-

ке сырья или мате-

риала должны совпа-

дать. При получении

сырья проверяют ко-

личество выданного

материала в соответ-

ствие с Протоколом

производства серии

ТП 2.1 Отвешивание

ПВП, твина-80,

β-каротина и ЭМ мо

нарды

КТ 13

ПВП, твин-80,

β-каротин и ЭМ

монарды

Масса, г

ТП 2.2 Измельчение и

просеивание анесте-

Анестезин Масса, г

89

Продолжение таблицы 16

зина

КТ 14

ТП 2.3 Подготовка

твердого жира

КТ 15

Твердый жир Масса, г

ТП 2.3 Подготовка

твердого жира

КТ 16

Процесс плавления

твердого жира

Режим плавления:

температура воды

обогрева рубашки

-время плавления

Режим термостатит-

рования:

-температура воды

обогрева рубашки

-время

75-80ºС

60-80 мин.

40-50ºС

120-840 мин.

ТП 2.3 Подготовка

твердого жира

КТ 17

Процесс охлажде-

ния твердого жира

Режим охлаждения:

температура воды ох-

лаждения рубашки

время охлаждения

-температура твердого

жира

14-16ºС

45-55 мин.

35-40ºС

ТП 3.1 Приготовле-

ние концентрата

КТ 18-23

ПВП, твин-80,

β-каротин и ЭМ

монарды

Масса, г

ТП 3.1 Приготовле-

ние концентрата

КТ 24

Процесс переме-

шивания

Время перемешивания 20 мин.

ТП 3.2 Смешивание

компонентов суппо-

зиторной массы

КТ 25

Процесс переме-

шивания

Время перемешивания 25 мин.

ТП 4.1 Розлив суппо-

зиторной массы

КТ 26

Упаковка ячейко-

вая контурная

Внешний вид

Качество запайки

Кодировка

Обрезка

Ячейки должны быть

пулевидной формы

Должны быть герме-

тично запаяны

Кодировка должна

соответствовать уста-

новленному номеру

серии и сроку годно-

сти

Обрезка должна быть

ровной и соответство-

вать 10 суппозитори-

ям в упаковке.

ТП 4.1 Розлив суппо Готовая упаковка Герметичность упако Упаковки должны

90

Продолжение таблицы 16

зиторной массы

КТ 27

ячейковая контур-

ная с суппозитор-

ной массой

вок быть герметичными

ТП 4.2 Охлаждение

суппозиториев

КТ 28

Процесс охлажде-

ния суппозиториев

Режим охлаждения:

время охлаждения

температура охлажде-

ния

20 мин.

10-16°С

ТП 4.1 Охлаждение

суппозиториев

КТ 29

Готовый препарат

в суппозиториях

Описание

Средняя масса суппо-

зиториев

Суппозитории равно-

мерно окрашенные,

светло-оранжевого

цвета, гладкие, без

трещин и сколов. На

срезе однородные, без

механических вклю-

чений

2,85 г - 3,15 г

УМО 5.1. Упаковка

готовой продукции в

потребительскую и

групповую тару

КТ 30-31

Готовая продукция Внешний вид потре-

бительской упаковки

Правильность нанесе-

ния номера серии и

срока годности

Комплектность упа-

ковки

Комплектность груп-

повой тары

На сгибах упаковки

не должно быть тре-

щин. Красочный слой

маркировки не дол-

жен допускать «рас-

ползания» краски при

трении пачек друг о

друга

Должно соответство-

вать установленному

номеру серии и сроку

годности

В каждую упаковку

должны быть вложе-

ны контурная упаков-

ка с 10 суппозитория-

ми и одна инструкция

по применению. Но-

мер серии и срок год-

ности должны быть

четко читаемы на ко-

робке

В каждой групповой

таре должны быть

вложены упаковки с

суппозиториями и ин-

струкцией. С внешней

91

Продолжение таблицы 16

стороны должны быть

наклеены транспорт-

ные этикетки в коли-

честве 2 штук

УМО 5.2. Маркиров-

ка готовой продукции

КТ 32

Упаковки с препа-

ратом, маркиро

ванные

Текст этикетки, каче-

ство печати

Качество нанесения

номера серии и срока

годности

Качество этикетиро-

вания

Текст этикетки в со-

ответствии с ВФС

Четкость нанесения

номера серии, срока

годности

Качественное наклеи-

вание этикетки. Цело-

стность этикетки

Таким образом, впервые разработана технологическая схема производ-

ства суппозиториев с β-каротином и ЭМ монарды. В ней расставлены все

технологические акценты и установлены критические точки процесса.

92

Выводы

1. Проведена оценка качества ЭМ монарды по показателям: описание,

подлинность, относительная плотность, показатель преломления, кислотное

число, оптическое вращение, содержание воды, посторонние эфиры, жирные

масла и осмоленные эфирные масла, остаток после выпаривания, хромато-

графический профиль.

2. Проведены скрининговые исследования антимикробной и противо-

воспалительной активности ЭМ монарды дудчатой, подтверждающие широ-

кий спектр антимикробного действия и высокую противовоспалительную ак-

тивность.

3. По результатам комплекса физических и физико-химических мето-

дов исследования разработаны составы суппозиториев с комплексом БАВ -

каротином микробиологическим и ЭМ монарды: Состав №1: -каротин

микробиологический 0,02% масляный раствор - 0,15 г, ЭМ монарды дудча-

той –0,015 г, твердый жир до 3,0 г. Состав №2: -каротин микробиологиче-

ский 0,02% масляный раствор – 0,15 г, ЭМ монарды дудчатой – 0,015 г, ви-

тепсол W35 до 3,0 г.

4. На основании проведеных биофармацевтических исследований in

vitro по выбору оптимальной композиции вспомогательных веществ показа-

но, что для формирования состава суппозиториев с комплексом БАВ в соче-

тании с местным анестетиком наиболее рациональным является следующий

состав: анестезин – 0,12 г, -каротин микробиологический 0,02% масляный

раствор – 0,15 г, ЭМ монарды – 0,015 г; ПВП – 0,03 г, твин-80 – 0,03 г,

твердый жир марки А до получения суппозитория массой 3,0 г.

5. Разработана технологическая схема для предложенных суппозитори-

ев с акцентом на введении активных компонентов β-каротина, ЭМ монарды и

анестезина. Определены критические точки на этапах подготовки сырья,

приготовления суппозиторной массы и формования суппозиториев.

93

Глава 4. СТАНДАРТИЗАЦИЯ И РАЗРАБОТКА НОРМ

КАЧЕСТВА СУППОЗИТОРИЕВ С БИОЛОГИЧЕСКИ

АКТИВНЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ

4.1. Оценка качества суппозиториев «Монавитол»

Оценку качества изготовленных суппозиториев осуществляли согласно

ГФ XI изд.

Внешний вид. Полученные суппозитории имели светло-оранжевую

окраску, одинаковую торпедообразную форму и размер, гладкую поверх-

ность, без трещин и сколов. В некоторых образцах присутствовал небольшой

воздушный стержень.

Среднюю массу суппозиториев определяли согласно методике п. 2.2.1.

раздела 2. Результаты определения средней массы суппозиториев приведены

в таблице 17.

Таблица 17 – Результаты определения средней массы суппозиториев

Серия Средняя масса суппозитория, г Максимальные отклонения в массе, %

010610 2,97 +1,7 - 1,0

020610 3,07 +1,3 - 3,0

030610 2,94 +2,3 - 2,5

040610 2,91 +1,7 - 2,7

050610 3,05 +2,1 - 3,2

060610 2,96 +1,0 - 2,9

Из таблицы 17 следует, что полученные отклонения в массе не превы-

шают допустимых норм.

Температуру плавления суппозиториев определяли согласно ГФ XII

изд., ОФС 42-0034-07. Полученные результаты приведены в таблице 18.

Таблица 18 – Результаты испытания различных серий суппозиториев

по тесту «Температура плавления»

Серия Температура плавления

010610 35,5

020610 36,0

030610 34,5

040610 36,5

94

Продолжение таблицы 18

050610 35,0

060610 36,5

Из таблицы 18 следует, что температура плавления суппозиториев на-

ходится в пределах 34,5-36,5 °С, что соответствует требованиям НД.

При определении ВПД согласно ГФ XI изд. издания установлено, что

оно находится в пределах 6,45-7,10 мин., что также соответствует требовани-

ям ГФ XI изд. (таблица 19).

Таблица 19 – Результаты испытания различных серий суппозиториев

по тесту «Время полной деформации»

Серия ВПД, мин.

010610 7,10

020610 6,45

030610 7,08

040610 6,55

050610 7,05

060610 6,50

рН водного извлечения суппозиториев определяли согласно методике

п. 2.2.1. раздела 2. Результаты определения рН водного извлечения суппози-

ториев приведены в таблице 20.

Таблица 20 – Результаты определения рН водного извлечения

суппозиториев

Серия рН

010610 6,6±0,04

020610 6,8±0,06

030610 6,8±0,05

040610 6,9±0,07

050610 6,7±0,04

060610 6,9±0,05

При определении рН водного извлечения из суппозиториев установле-

но, что значение рН находится в пределах 6,6 – 6,9.

В настоящее время для проведения испытания на подлинность широко

используются не только цветные реакции, позволяющие идентифицировать

ЛС в соответствии с функциональными группами, но и современные физико-

химические методы, позволяющие сочетать идентификацию и количествен-

ное определение ЛС.

95

Идентификацию и количественное определение анестезина проводили

согласно методикам, описанным в п. 2.2.1. раздела 2. Анестезин по химиче-

ской природе относится к производным п-аминобензойной кислоты. В своем

составе содержит первичную аминогруппу, идентифицировать которую воз-

можно реакцией образования азокрасителя. При проведении данной реакции

образуется комплекс, имеющий интенсивную оранжево-красную окраску.

Количественное определение анестезина проводили методом нитрито-

метрия.

Содержание анестезина в одном суппозитории (Х), в миллиграммах,

рассчитывали по формуле:

52,162)21(

m

bVVX , (2)

где V1 – объём титранта, пошедший на титрование испытуемого раствора,

мл;

V2 – объём титранта, пошедший на титрование в контрольном опыте, мл;

b – среднее значение массы суппозитория, г.

1 мл 0,1 М раствора натрия нитрита соответствует 16,52 мг анестезина.

Идентификацию и количественное определение β-каротина проводили

методом спектрофотометрия согласно методикам, описанным в п. 2.2.1. раз-

дела 2. Данный метод является одним из современных методов идентифика-

ции и количественного определения.

Спектр испытуемого раствора препарата, приготовленного для количе-

ственного определения β-каротина в области от 400 до 500 нм имел макси-

мум поглощения при длине волны 450 нм (рисунок 14).

96

Рисунок 14 – Спектр поглощения β-каротина микробиологического

Содержание суммы каротиноидов (Х) в препарате, в пересчете на -

каротин, вычисляли по формуле:

mD

bD

mD

bDX

oo

306,050 11

, (3)

где D1 – оптическая плотность испытуемого раствора;

Do – оптическая плотность раствора РСО калия бихромата;

m – масса навески препарата, г;

50 – объем испытуемого раствора, мл;

0,6 – концентрация -каротина, в мкг/мл, в растворе, соответствующем

по оптической плотности раствору РСО калия бихромата с концентра-

цией 0,026 г/л при длине волны 450 нм;

b – среднее значение массы суппозитория, г.

Для идентификации и количественного определения ЭМ монарды в

рамках диссертационной работы была разработана методика идентификации

и количественного определения методом ГХ (методика приведена в п. 2.2.1.

раздела 2). При идентификации ЭМ монарды на хроматограммах испытуемо-

го раствора, хроматографический профиль компонентов соответствовал про-

филю хроматограммы, представленной на рисунке 15.

97

Рисунок 15 – Типичная хроматограмма РСО ЭМ монарды дудчатой

Содержание ЭМ монарды (Х) в препарате, в миллиграммах в одном

суппозитории, вычисляли по формуле:

55

1

mS

bmS

mS

bmSX

oi

oii

oi

oii

, (4)

где Si – среднее значение суммы всех пиков на хроматограммах испытуемо-

го раствора, времена удерживания которых совпадают с временами

удерживания пиков на хроматограмме РСО ЭМ монарды;

Soi – среднее значение суммы всех пиков на хроматограммах РСО ЭМ

монарды;

moi – масса навески ЭМ монарды, мг;

m – масса препарата, г;

b – среднее значение массы суппозитория, г.

Результаты определения анестезина, β-каротина, ЭМ монарды в суппо-

зиториях представлены в таблице 21.

Таблица 21 – Результаты количественного определения действующих

веществ в суппозиториях

Определяемое

вещество

Найдено Метрологические

характеристики

Анестезин

0,121 Х = 0,121

S2 = 3,2∙10

-6

S = 0,0018

Х±∆Х = 0,121±0,0018

0,123

0,120

0,119

98

Продолжение таблицы 21

0,122 ɛ = 1,56% RSD =1,48% 0,121

β-каротин

0,0000285

Х = 2,87∙10-5

S2 = 1,7∙10

-13

S = 1,8∙10-7

Х±∆Х = 28,7∙10-6

±2∙10-7

ɛ = 068%

RSD = 0,65%

0,0000287

0,0000287

0,0000284

0,0000289

0,0000288

ЭМ монарды

0,0138 Х = 0,136

S2 = 2∙10

-8

S = 0,00014

Х±∆Х = 0,136 ±0,00014

ɛ = 1,04%

RSD = 1,03%

0,0136

0,0136

0,0136

0,0137

0,0135

Содержание анестезина в 1 суппозитории должно быть от 114 мг до

126 мг, содержание β-каротина в 1 суппозитории должно быть не менее 25,5

мкг, содержание ЭМ монарды в 1 суппозитории должно быть не менее 12,75

мг.

4.2. Валидация методики ГХ определения подлинности

и количественного содержания ЭМ монарды

в препарате «Монавитол»

Валидация разработанной методики идентификации и количественного

определения ЭМ монарды была проведена по показателям специфичность,

правильность, прецизионность (сходимость), линейность, диапазон примене-

ния. Кроме того была рассчитана полная неопределенность методики коли-

чественного определения ЭМ монарды.

При разработке и проведении валидационных исследований методики

использовали следующее аналитическое оборудование: хроматограф газо-

вый: Shimadzu GC-2014 в комплектации с автоматическим самплером и ин-

жектором AOC-5000, колонка: капиллярная кварцевая размером 60 м х 0,32

99

мм с неподвижной фазой Stabilwax, толщина слоя 0,5 мкм.

Навески ЭМ монарды и других веществ брали на аналитических весах

AGW200 с неопределенностью 33 мкг. Пределы: содержание ЭМ монарды в

1 суппозитории должно быть при выпуске не менее 12,75 мг.

Приготовление образцов и проведение испытаний осуществлялось в

соответствии с методикой, указанной в п. 2.2.2. раздела 2. Хроматограммы

испытуемых растворов были получены из модельных образцов плацебо пре-

парата, к которым в определенном количестве перед стадией отгонки масла

были добавлены навески ЭМ монарды.

Специфичность методики оценивали по следующим показателям:

1. На хроматограммах испытуемого раствора плацебо препарата и на

хроматограммах растворителя должны отсутствовать пики со временами

удерживания, совпадающими со временами удерживания пиков ЭМ монарды

на хроматограммах испытуемого раствора.

2. Время удерживания пиков ЭМ монарды на хроматограммах испы-

туемого раствора должно совпадать со временами удерживания пиков ЭМ

монарды хроматограммах раствора сравнения ЭМ монарды.

3. Пики ЭМ монарды на хроматограммах испытуемого раствора долж-

ны хорошо разделяться с пиком растворителя.

Специфичность методики определения подлинности и количественного

определения ЭМ монарды представлена на хроматограммах 1, 2, 3 и 4 рисун-

ка 16.

100

Рисунок 16 – Хроматограммы растворов (сверху вниз):

1 – испытуемого раствора; 2 – раствора сравнения ЭМ монарды дудчатой;

3 – растворителя (бланка), 4 – раствора плацебо

Специфичность испытания подтверждается тем, что на хроматограмме

раствора плацебо и на хроматограмме бланка отсутствуют пики со времена-

ми удерживания, совпадающим со временами удерживания пиков ЭМ мо-

нарды на хроматограмме испытуемого раствора. То есть компоненты плаце-

бо и растворитель (циклогексан) не мешают проведению испытаниям на под-

линность и количественное определение ЭМ монарды. Время удерживания

пиков ЭМ монарды на хроматограмме испытуемого раствора совпадает со

временами удерживания соответствующих пиков на хроматограмме раствора

сравнения ЭМ монарды. На хроматограммах испытуемого раствора пики

компонентов ЭМ монарды и пик растворителя полностью разделяются.

Таким образом, методика идентификации и количественного определе-

ния ЭМ монарды в разработанной ЛФ методом ГХ является специфичной.

Правильность характеризует степень соответствия между известным

содержанием определяемого вещества в растворе и его содержанием в рас-

творе, определенным по данной методике.

Сходимость характеризует прецизионность методики при ее выполне-

нии в одних и тех же условиях в течение небольшого промежутка времени.

На данном этапе сходимость изучали на 9 модельных смесях, охватывающих

диапазон применения методики.

101

Линейность – это способность методики (в пределах диапазона приме-

нения) получать результаты испытаний, прямо пропорциональные количест-

ву анализируемого вещества в образце. При этом должна получаться линей-

ная зависимость между взятым («истинным») MВ и найденным MН количест-

вом определяемого вещества.

Диапазон применения аналитической методики – это интервал между

минимальной и максимальной концентрациями (количествами) анализируе-

мого вещества в образце (включая эти концентрации), для которого показано,

что аналитическая методика имеет требуемую правильность, сходимость и

линейность.

Допуск по содержанию ЭМ монарды в препарате (В) составляет на мо-

мент выпуска ± 15%, интервал является односторонним.

Характеристики правильности, сходимости (прецизионности) и линейно-

сти методики исследовали на модельных растворах препарата с концентрация-

ми ЭМ монарды, которые соответствуют 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 105%,

110%, 115% и 120% его содержания по отношению к номинальному значению.

Валидацию методики проводили на образце препарата, приготовленного

в соответствии с лабораторной технологией, который не содержал ЭМ монарды

(плацебо).

Приготовление испытуемых растворов. 5 измельченных суппозитори-

ев препарата (плацебо), помещали в колбу прибора для отгонки ЭМ. К образ-

цам «плацебо» прибавляют точно известные навески определяемого компо-

нента (ЭМ монарды) в количестве от 80% до 120% от номинальной концен-

трации.

ЭМ монарды вводили непосредственно, микрошприцом вместимостью

250 мкл. Массу навески вводимого количества ЭМ определяли по разности

масс-шприца с ЭМ до и после введения.

Данные по приготовлению и результатам анализа модельных растворов

представлены в таблице 22.

102

Таблица 22 – Приготовление модельных растворов и результаты анализа

№ п/п

Масса ЭМ Монарды,

вводимая в плацебо

препарата, мг

Заложено

содержание,

% норм.

Найдено

содержание,

% норм.

1 56,55258 74,60384 75,40344

2 65,26031 87,68004 87,01375

3 68,73113 91,92177 91,6415

4 72,39868 96,05309 96,53157

5 75,38331 100,1633 100,5111

6 79,97225 106,6725 106,6297

7 82,45756 110,5332 109,9434

8 85,0669 113,3222 113,4225

9 89,19228 118,6676 118,9230

Правильность и сходимость методики была проверена методом «вве-

дено-найдено». Результаты количественного определения ЭМ монарды в мо-

дельных растворах в области аналитических концентраций и результаты рас-

четов метрологических характеристик представлены в таблице 23.

Таблица 23 – Результаты анализа модельных смесей препарата

«Монавитол», содержащих от 80 % до 120 % ЭМ монарды дудчатой и их

статистическая обработка

№ п/п

Введено в % от номинальной

концентрации (Xi, факт., %)

Найдено в % от номинальной

концентрации (Yi, %)

Найдено в %

к введенному

Zi=100×(Yi/Xi)

1 74,60384 75,40344 101,0718

2 87,68004 87,01375 99,24009

3 91,92177 91,6415 99,6951

4 96,05309 96,53157 100,4981

5 100,1633 100,5111 100,3472

6 106,6725 106,6297 99,9598

7 110,5332 109,9434 99,46644

8 113,3222 113,4225 100,0886

9 118,6676 118,923 100,2153

Среднее, Zср,% = 100,07

Относительное стандартное отклонение, RSDz,% = 0,56

Относительный доверительный интервал

Δz% = t (95%, 9 – 2) x RSDz = 1,895 x 0,56 =

1,06

Критическое значение для сходимости результатов ΔAs,% = 4,8

Систематическая ошибка % = | Zср – 100 | = 0,07

103

Продолжение таблицы 23

Критерий незначимости систематической ошибки:

1) статистическая незначимость: < Δz : √9 =1,06 : 3 = 0,35% > 0,07% Выполняется

Если не выполняется 1), то ≤ max :

2) практическая незначимость: δ% ≤ 0,32 4,8 =1,54% > 0,07% Выполняется

Общий вывод о методике КОРРЕКТНА

Из данных, приведенных в таблице 23, следует, что методика количест-

венного определения ЭМ монарды характеризуется достаточной правильно-

стью и сходимостью (прецизионностью) во всем диапазоне концентраций (от

80% до 120%) и является корректной.

Как свидетельствуют данные, приведенные в таблице 23, в диапазоне

концентраций ЭМ монарды от 80% до 120% по отношению к номинальной

концентрации методика его количественного определения не имеет система-

тической ошибки.

Характеристику «Линейность» исследовали в диапазоне концентраций

ЭМ монарды от 80% до 120% по отношению к номинальному значению.

График линейной зависимости представлен на рисунке 17, а результа-

ты расчета параметров линейной зависимости в таблице 24.

Рисунок 17 – Линейная зависимость найденной концентрации

ЭМ монарды дудчатой от его введенной концентрации в

нормализованных координатах

104

Таблица 24 – Метрологические характеристики линейной зависимости

найденной концентрации ЭМ монарды дудчатой от его введенной

концентрации

Параметры Значения Требования 1 Требования 2 Заключение

b 0,99228

Sb 0,0129

a 0,8167 |3,80 | |7,68| Выдерживается по 1 критерию

Sa 1,304

RSD0 0,5107

RSD0/b 0,511 |2,53| Выполняются

r 0,99941 >|0,98273| Выполняются

Как следует из представленных данных, требования к параметрам ли-

нейной зависимости выполняются, то есть линейность методики количест-

венного определения ЭМ монарды подтверждается в диапазоне концентра-

ций от 80% до 120% от номинального значения.

Таким образом, методика характеризуется достаточной сходимостью,

так как найденное значение относительного доверительного интервала вели-

чины Z (1,3393%) меньше критического значения для сходимости результа-

тов (1,6%) (таблица 23).

Методика характеризуется достаточной правильностью, так как выпол-

няется критерий незначимости систематической ошибки методики. Система-

тическая ошибка методики равна 0,07% и удовлетворяет требованиям стати-

стической и практической незначимости: статистическая незначимость: 1,06 :

3 = 0,35% > 0,07%; практическая незначимость: 0,32 4,8 = 1,54% > 0,07%.

Высокое значение коэффициента корреляции r = 0,99941 удовлетворяет требо-

ваниям критерия приемлемости (r = 0,98273) и подтверждает линейность зави-

симости между взятым и найденным количеством ЭМ монарды в области от

80% до 120% относительно его номинального содержания в препарате. Вы-

полняются требования к параметрам линейной зависимости (а, RSD0/b, r) ме-

105

тодики определения ЭМ монарды во всем диапазоне концентраций от 80% до

120% от номинального значения (таблица 24).

Для подтверждения корректности методики при воспроизведении в дру-

гих лабораториях проведен прогноз полной неопределенности методики. Пол-

ная неопределенность методики анализа (ΔAs) включает в себя неопределен-

ность пробоподготовки (ΔSP) и неопределенность конечной аналитической опе-

рации (ΔFAO):

2

FAO

2

SPAs , (5)

При этом прогнозируемая полная неопределенность результатов ана-

лиза не должна превышать максимально допустимую неопределенность ре-

зультатов анализа для допусков содержания + 15% – max ΔAs ≤ 4,8%.

Ожидаемая неопределенность пробоподготовки складывается из неоп-

ределенности навески препарата и навески, взятой для приготовления рас-

твора сравнения, доведения до метки растворов и разбавления. Расчет прове-

ден из расчетных формул проекта ФСП с использованием подхода к допус-

тимой неопределенности мерной посуды. Расчет и величины неопределенно-

сти процедуры пробоподготовки приведены в таблице 25.

Неопределенность взятия навески рассчитывают по формуле:

%1002,0

mm , (6)

где m – масса навески в миллиграммах.

Таблица 25 – Расчет неопределенности пробоподготовки для методики

количественного определения ЭМ монарды дудчатой

Операция пробоподготовки Параметр для

расчетной формулы

Неопределённость (Δ), %

Раствор сравнения

Взятие навески ЭМ монарды mo=75 мг 0,27%

Доведения объёма раствора

в мерной колбе 5,0 мл до метки

5

0,50%

106

Продолжение таблицы 25

Испытуемый раствор

Доведения объёма раствора в мер-

ной колбе 5 мл до метки

0,50%

Суммарная неопределенность пробоподготовки ΔSP равна:

ΔSP=[0,27 2+0,5

2+0,5

2]

1/2=0,76%, (7)

Расчет неопределенности конечной аналитической операции по коли-

чественному определению ЭМ монарды рассчитывали для испытуемого рас-

твора и раствора сравнения по данным, приведенным в таблице 26. Относи-

тельное стандартное отклонение (RSD, %) рассчитывали для среднего из 3

результатов.

Полученные значения относительных стандартных отклонений для

площадей пика ЭМ монарды меньше допустимого RSDmax,% (n0 = 3, В = 15%)

= 2,01%.

Таблица 26 – Относительное стандартное отклонение отношения пло-

щадей пиков ЭМ монарды дудчатой (А) к площадям внутреннего стандарта

А0* А1

**

3,372222 3,35869

3,381462 3,362949

3,377443 3,364082

RSD, % 0,137 0,09

RSDmax, % (n0=3, В=15%) 1,19 *А0 - отношение суммарной площадь пиков ЭМ монарды, полученная из хроматограмм

раствора сравнения. **

А1 - суммарная площадь пиков ЭМ монарды, полученная из хроматограмм

испытуемого раствора.

Неопределенность конечной аналитической операции рассчитывали по

формулам:

%13,009,036,23

1)1%,95(

3

10 RSDntst

FAO , (8)

%24,014,036,23

1)1%,95(

3

10 RSDntsmp

FAO , (9)

Суммарная неопределенность конечной аналитической операции при

количественном определении ЭМ монарды равна:

107

%27,024,013,0)()( 2222 smp

FAO

st

FAOFAO , (10)

Полная неопределенность методики анализа (ΔAs) равна:

%8,4%81,027,076,0,% max

22 AsAs , (11)

Как видно, величина полной неопределенности методики анализа

ЭМ монарды не превышает критического значения 4,8%:

0,81% < max ΔAs = 4,8%

Полученные результаты показывают, что полная прогнозируемая неоп-

ределенность результатов для теста «Количественное определение ЭМ монар-

ды» не превышает критическое значение ΔAsmax = 4,8, то есть методика будет

давать корректные результаты.

Таким образом, разработанная методика количественного определения

ЭМ монарды в препарате «Монавитол» методом ГХ в диапазоне применения

методики валидирована и является корректной по показателям специфичность,

правильность, прецизионность (сходимость) и линейность.

4.3. Изучение микробиологической чистоты суппозиториев

Определение микробиологической чистоты проводили по методике,

приведенной в п. 2.2.6. главы 2. Результаты микробиологического контроля

разрботанных суппозиториев, представленные в таблице 27, показали их

полное соответствие требованиям НД.

108

Таблица 27 – Результаты микробиологического контроля

суппозиториев

Вид

испытания

Требо-

вания

Результаты анализов

010610 020610 030610 040610 050610 060610

Количест-

во аэроб-

ных бак-

терий,

КОЕ/г

не более

103

15 10 20 15 10 20

Количест-

во грибов,

КОЕ/г

не более

102

менее 10 менее 10 менее 10 менее 10 менее 10 менее 10

Escherichia

coli в 1 г

отсутст-

вие

отсутст-

вие

отсутст-

вие

отсутст-

вие

отсутст-

вие

отсутст-

вие

отсутст-

вие

4.4. Изучение стабильности суппозиториев в процессе хранения

Стабильность – неотъемлемое требование, предъявляемое к фармацев-

тическим препаратам с точки зрения сохранения их качества. Поэтому про-

блема исследования стабильности и создания стабильных ЛФ является одной

из актуальных проблем фармации.

Качество изготовленных суппозиториев оценивали в процессе дли-

тельного хранения с помощью химических и физико-химических методов

исследования.

С этой целью готовили суппозитории на основе твердый жир типа А,

выбранной в результате ранее проведенных исследований в качестве опти-

мальной, с добавлением 1% твина-80 и 1% ПВП. Упаковывали их в контур-

ные упаковки из полимерных материалов (контурная ячейковая упаковка по

ОСТ 64-074-91 из пленки поливинилхлоридной марки ЭП-77С по ГОСТ

25250-88).

Хранили суппозитории при температурном режиме (4±1)°С, подвергая

контролю через 6, 12, 18, 24 месяца (срок наблюдения).

109

Критериями качества служили следующие показатели: внешний вид,

температура плавления, ВПД, средняя масса суппозитория, подлинность, ко-

личественное содержание действующих веществ. Все показатели определяли

по методикам, описанным в главе 2.

Результаты визуального контроля показали, что внешний вид суппози-

ториев не менялся в течение всего срока наблюдения, а суппозиторная масса

оставалась однородной. Значение температуры плавления не превышало

37°С, ВПД суппозиториев не превышало 15 мин. и составило в процессе хра-

нения 4-5 мин.

Средняя масса суппозиториев оставалась стабильной.

Результаты исследования суппозиториев в процессе хранения пред-

ставлены в таблице 28.

Данные таблицы 28 свидетельствуют о том, что количество действую-

щих веществ в процессе хранения суппозиториев изменялось незначительно

и не превышало допустимых норм содержания.

На основании проведенных исследований можно сделать заключение:

предлагаемые суппозитории стабильны в течение 24 мес., что позволяет ус-

тановить срок хранения суппозиториев – 2 года.

110

Т

абли

ца

28

– Р

езу

льт

аты

ан

али

за с

уп

по

зито

ри

ев в

про

цес

се х

ран

ени

я

(Сер

ия 0

1. Т

емп

ерат

ура

хр

анен

ия +

4°С

, у

пак

овка

по

про

екту

ФС

П)

Рез

ульта

ты а

нал

иза

су

пп

ози

тор

иев

01

06

12

7

Су

пп

ози

тор

ии

свет

ло-о

ран

жев

ого

цвет

а, т

ор

пед

об

-

раз

но

й ф

ор

мы

с х

а-

рак

тер

ны

м з

апах

ом

35

°С

5 м

ин

ут

2,9

8

6,7

Со

отв

етст

ву

ет

По

ло

жи

тельн

ая к

а-

чес

твен

ная

реа

кц

ия

на

пер

ви

ч-

01

12

11

6

Су

пп

ози

тор

ии

свет

ло

-

ор

анж

ево

го ц

вет

а,

тор

пед

об

раз

но

й

фо

рм

ы с

хар

ак-

тер

ны

м з

апах

ом

36

°С

5 м

ин

ут

2,9

8

6,8

Со

отв

етст

ву

ет

По

ло

жи

тельн

ая

кач

еств

енн

ая р

е-

акц

ия н

а п

ерви

ч-

01

06

11

5

Суп

по

зито

ри

и

свет

ло

-оран

жев

ого

цвет

а, т

ор

пед

об

-

раз

ной

фо

рм

ы с

ха-

рак

терн

ым

зап

ахо

м

35

°С

5 м

ин

ут

3,0

1

6,6

Соотв

етст

ву

ет

Полож

ите

льн

ая к

а-

чес

твен

ная

реа

кц

ия

на

пер

ви

ч-

011210

4

Суп

пози

тори

и

свет

ло

-

оран

жев

ого

цве-

та,

торп

едоб

раз

-

ной

форм

ы с

ха-

рак

терн

ым

зап

а-

хом

36

°С

4 м

ин

уты

2,9

9

6,6

Соотв

етст

вует

Полож

ите

льн

ая

кач

еств

енн

ая р

е-

акц

ия н

а п

ерви

ч-

010610

3

Суп

пози

то-

ри

и с

вет

ло

-

оран

жев

ого

цвет

а, т

орп

е-

доб

раз

ной

форм

ы с

ха-

рак

терн

ым

зап

ахом

36

°С

4 м

ин

уты

2,9

7

6,7

Соотв

етст

ву-

ет

Полож

ите

ль-

ная

кач

ест-

вен

ная

реа

к-

ци

я н

а п

ер-

ви

ч-

Но

рм

ы

кач

еств

а

2

Су

пп

ози

тор

ии

свет

ло

-

ор

анж

ево

го ц

вет

а, т

орп

е-

до

бр

азн

ой

фо

рм

ы с

хар

ак-

тер

ны

м з

апах

ом

Не

вы

ше

37°С

Не

бо

лее

15

ми

ну

т

2,8

5-3

,15

6,6

-6,9

В 1

г и

ли

1 м

л п

реп

арат

а н

е

бо

лее

10

3 аэ

роб

ны

х б

акте

ри

й

и н

е

бо

лее

10

2 г

ри

бо

в.

при

от-

сутс

тви

и E

sch

eric

hia

coli

К

ачес

твен

ная

реа

кц

ия н

а

пер

ви

чн

ые

аро

ма-

Показ

ател

и к

аче-

ства

по п

роек

ту

ФС

П

1

1.

Оп

иса

ни

е

2.

Тем

пер

атур

а

плав

лен

ия

3.

Врем

я п

олн

ой

деф

ор

мац

ии

3.

Сред

няя

мас

са

4.р

Н в

од

ного

из-

влеч

ни

я

5.

Ми

кроб

иологи

-

чес

кая

чи

сто

та

анес

те-

зин

6.

По

д-

ли

н-

ност

ь

111

Продолжение таблицы 28

7

ны

е ар

ом

ати

-

чес

ки

е ам

ин

ы

Сп

ектр

рас

тво

ра

пр

епар

ата

в о

б-

лас

ти о

т 4

00

до

50

0 н

м и

мее

т

мак

сим

ум

погл

о-

щен

ия п

ри

дли

не

во

лн

ы

45

0 ±

4 н

м

Хр

ом

ато

гра-

фи

чес

ки

й п

ро

-

фи

ль и

спы

туе-

мо

го р

аств

ор

а

пр

епа

рат

а со

-

отв

етст

ву

ет

хр

ом

ато

граф

и-

чес

ко

му

про

-

фи

лю

РС

О Э

М

мо

нар

ды

11

8м

г

28

,2м

кг

13

,7м

г

6

ны

е ар

ом

ати

че-

ски

е ам

ин

ы

Сп

ектр

рас

тво

ра

пр

епар

ата

в о

б-

лас

ти о

т 4

00

до

50

0 н

м и

мее

т

мак

сим

ум

погл

о-

щен

ия п

ри

дли

не

во

лн

ы

45

0 ±

4 н

м

Хр

ом

ато

граф

и-

чес

ки

й п

ро-

фи

ль и

спы

туе-

мо

го р

аств

ор

а

пр

епа

рат

а со

-

отв

етст

ву

ет

хр

ом

ато

граф

и-

чес

ко

му

про

-

фи

лю

РС

О Э

М

мо

нар

ды

11

8м

г

28

,0м

кг

13

,8м

г

5

ны

е ар

ом

ати

че-

ски

е ам

ин

ы

Сп

ектр

рас

тво

ра

преп

арат

а в о

б-

лас

ти о

т 4

00

до

500

нм

им

еет

мак

сим

ум

погл

о-

щен

ия п

ри

дли

не

во

лн

ы

45

0 ±

4 н

м

Хром

ато

граф

и-

чес

ки

й п

ро-

фи

ль и

спы

туе-

мого

рас

тво

ра

преп

а р

ата

со-

отв

етст

ву

ет

хро

мат

огр

афи

-

чес

ко

му

про

-

фи

лю

РС

О Э

М

мо

нар

ды

12

1м

г

28

,2 м

кг

13

,7м

г

4

ны

е ар

ом

ати

-

чес

ки

е ам

ин

ы

Сп

ектр

рас

твора

преп

арат

а в о

б-

лас

ти о

т 400 д

о

500 н

м и

мее

т

мак

сим

ум

погл

о-

щен

ия п

ри

дли

не

волн

ы

450 ±

4 н

м

Хром

атогр

афи

-

чес

ки

й п

ро-

фи

ль и

спы

туе-

мого

рас

твора

преп

а рат

а со

-

отв

етст

вует

хром

атогр

афи

-

чес

ком

у п

ро-

фи

лю

РС

О Э

М

мон

ард

ы

122м

г

28,1

мкг

13,9

мг

3

ны

е ар

ом

ати

-

чес

ки

е ам

ин

ы

Сп

ектр

рас

твора

преп

арат

а в о

б-

лас

ти о

т 400 д

о

500 н

м и

мее

т

мак

сим

ум

погл

о-

щен

ия п

ри

дли

не

волн

ы

450 ±

4 н

м

Хром

атогр

а-

фи

чес

ки

й п

ро-

фи

ль и

спы

туе-

мого

рас

твора

преп

а рат

а со

-

отв

етст

вует

хром

атогр

афи

-

чес

ком

у п

ро-

фи

лю

РС

О Э

М

мон

ард

ы

119м

г

28,3

мкг

13,7

мг

2

тичес

ки

е ам

ин

ы

Сп

ектр

рас

твора

пр

епар

ата

в о

блас

-

ти о

т 4

00

до 5

00 н

м

до

лж

ен и

мет

ь м

ак-

сим

ум

по

глощ

ени

я

пр

и д

ли

не

волн

ы

45

0 ±

4 н

м

Хр

ом

ато

граф

и-

чес

ки

й п

роф

иль

исп

ыту

емого

рас

тво

ра

преп

а

рат

а д

олж

ен с

о-

отв

етст

воват

ь

хр

ом

ато

граф

и-

чес

ско

му п

ро-

фи

лю

РС

О Э

М

мо

нар

ды

От

11

4 м

г д

о 1

26

мг

Не

мен

ее

25

,5 м

кг

Не

мен

ее

12

,75 м

г

1

-

кар

оти

н

ЭМ

мо

нар

-

ды

анес

те-

зин

-

кар

оти

н

ЭМ

мо

нар

-

ды

7.

Коли

че-

ствен

ное

сод

ерж

а-

ни

е д

ейст

-

вую

щи

х

вещ

еств

112

Выводы

1. Проведена стандартизация суппозиториев «Монавитол» по показа-

телям внешний вид, температура плавления, ВПД, значениие рН, средняя

масса суппозиториев, подлинность, количественное содержание действую-

щих веществ. Установлено, что приготовленные суппозитории соотвествуют

требованиям, предъявляемым к данной ЛФ.

2. Разработанная методика идентификации и количественного опре-

деления ЭМ монарды в суппозиториях методом ГХ валидирована и является

корректной по показателям: специфичность, правильность, прецизионность

(сходимость) и линейность.

3. Изучена микробиологическая чистота разработанных суппозитори-

ев. Результаты микробиологического контроля разрботанных суппозиториев

показали полное соответствие требованиям НД.

4. Изучена стабильность суппозиториев в процессе хранения в усло-

виях холодильника. Установлено, что срок хранения суппозиториев состав-

ляет не менее 2 лет.

113

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Основные итоги выполненного диссертационного исследования сво-

дятся к следующим основным положениям:

1. С целью определения исходных характеристик проведена оценка

качества ЭМ монарды дудчатой. Установлен преимущественный спектр

антимикробного действия ЭМ монарды дудчатой в сравнении с известными

ЭМ эвкалипта, мяты и лаванды, определена его бактерицидная доза в

пределах 125 мкг/мл – 500 мкг/мл, отмечена высокая противовоспалительная

активность ЭМ монарды дудчатой.

2. По результатам комплекса физических и физико-химических ме-

тодов исследования разработаны составы суппозиториев с комплексом БАВ

-каротином микробиологическим и эфирным маслом монарды дудчатой. В

качестве суппозиторной основы предложено использовать витепсол W35 и

твердый жир типа А.

3. Теоретически обоснован и экспериментально разработан состав и

технология ректальных суппозиториев с комплексом БАВ (-каротином

микробиологическим и ЭМ монарды дудчатой) в сочетании с местным ане-

стетиком (анестезином) с использованием в качестве основы твердого жира

типа А. Установлено, что улучшение структурно-механических

характеристик обеспечивает введение 1% ПВП. Экспериментально доказано,

что увеличению скорости и полноты высвобождения анестезина из

суппозиториев способствует введение в основу твердый жир типа А 1% тви-

на-80, при этом степень высвобождения анестезина составляет 83,66%.

4. Разработана технологическая схема производства предложенных

суппозиториев с акцентом на технологические стадии приготовление основы

и суппозиторной массы и формование суппозиториев. Установлены

критические точки технологического процесса производства суппозиториев.

5. Для разработанных суппозиториев разработана методика иденти-

фикации и количественного определения эфирного масла монарды дудчатой

методом ГХ.

114

6. По результатам проведенной валидации методика идентификации и

количественного определения эфирного масла монарды дудчатой методом

ГХ является корректной по показателям: специфичность, правильность, пре-

цизионность (сходимость) и линейность.

7. Установлены нормы качества полученных суппозиториев по

следующим показателям: внешний вид, средняя масса суппозитория и

отклонения от нее, температура плавления, время полной деформации,

значениие рН, микробиологическая чистота, подлинность, количественное

определение действующих веществ. Установлено, что приготовленные

суппозитории соответствуют требованиям, предъявляемым к данной ЛФ.

Изучена стабильность суппозиториев по разработанным показателям

качества и установлен срок годности при (4±1)°С в течение 24-х мес.

хранения (время наблюдения).

8. На основании установленных норм качества и предложенного

аналитического инструментария разработан проект ФСП на ЭМ монарды

дудчатой, проект ФСП на суппозитории с рабочим названием «Монавитол,

суппозитории ректальные». Данный проект ФСП внедрен на предприятии

ООО «Медлинфарм», г. Москва.

115

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГФ Государственная фармакопея

ЕФ Европейская фармакопея

ЛФ лекарственная форма

ЛС лекарственное средство

ФСП фармакопейная статья предприятия

ФС фармакопейная статья

ОФС общая фармакопейная статья

МПБ мясопептонный бульон

МПА мясопептонный агар

ПВП поливинилпирролидон

НД нормативная документация

РСО рабочий стандартный образец

ЭМ эфирное масло

КТ контрольная точка

ГХ газовая хроматография

ГЖХ газожидкостная хроматография

ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография

МС масс-спектрометрия

ВПД время полной деформации

ХМС хромато-масс-спектрометрия

ТСХ тонкослойная хроматография

116

Список литературы

1. Акимов, Ю. А. Действие эфирных масел на патогенную микрофлору ор-

ганов дыхания / Ю. А. Акимов // Основные направления научных исследова-

ний по интенсификации эфирномасличного производства : тез. докл. всесо-

юз. науч.-техн. совещ. (IV симпоз. по эфиромасличным растениям и маслам)

(Симферополь, 1-4 окт. 1985 г.) : в 2 ч. – Симферополь, 1985. – Ч. 2. – С. 41-

42.

2. Антибактериальное и противогрибковое действие экстракта Монарды

дудчатой / А. Ф. Прокопчук [и др.] // Фитонциды: роль в биогеоценозах, зна-

чение для медицины : материалы VIII совещ. (Киев, 16-18 окт. 1979 г.) /

АН УССР, Ин-т микробиологии и вирусологии ; отв. ред. Б. Е. Айзенман. –

Киев, 1981. – С. 126-129.

3. Антимикробные и ранозаживляющие свойства комбинации этанольных

экстрактов и эфирных масел лекарственных растений / А. К. Кулатаева

[и др.] // Раст. ресурсы. – 2006. – Т. 42, № 2. – С. 102-109.

4. Ахапкина, И. Г. Питательные среды как искусственная среда роста и раз-

вития микроорганизмов / И. Г. Ахапкина, Л. П. Блинкова // Журн. микробио-

логии, эпидемиологии и иммунологии. – 2001. – № 6. – С. 99-104.

5. Бабюк, И. А. К вопросу о принципах и методах лечения больных хрониче-

ским простатитом / И. А. Бабюк, А. М. Толстопятов // Журн. дерматологии и

венерологии. – 2000. – № 2. – С. 89-92.

6. Банах, Р. Определение химического состава флавоноидов 6 видов расте-

ний рода Monarda и изучение их биологической активности : автореф. дис. …

канд. фарм. наук : 15.00.02 / Р. Банах ; 1-й Моск. мед. ин-т. – М., 1988. – 23 с.

7. Безуглая, Е. П. Исследование высвобождения некоторых лекарственных

веществ из различных основ для мазей и суппозиториев / Е. П. Безуглая, А. Г.

Фадейкина // Фармаком. – 1999. – № 1. – С. 26-29.

8. Беликов, В. Г. Фармацевтическая химия. В 2 ч. : учебное пособие / В. Г.

Беликов. – М.: МЕДпресс-информ, 2007 — 624 с.

117

9. Белялова, Н. С. Факторы риска и профилактика рака. Ч. 1 / Н. С. Беляло-

ва, Ф. И. Белялов // Клинич. медицина. – 2005. – № 11. – С. 17-21.

10. Биофармация: учебник для студентов вузов / А. И. Тихонов [и др.]. –

Харьков: Золотые страницы, 2003. – 240 с.

11. Богутский, Б. В. Исследования распределения эфирного масла Монарды

в организме экспериментальных животных / Б. В. Богутский, В. В. Николаев-

ский // Труды ВНИИ эфирно-масличных культур. – Симферополь, 1978. –

Т. 11. – С. 83-87.

12. Быков, В. А. Некоторые особенности и перспективы использования рас-

тений для улучшения среды обитания в помещениях / В. А. Быков, Л. Н. Зай-

ко, А. Н. Цицилин // Лекарственное растениеводство : сб. науч. тр., посвящ.

70-летию Всерос. НИИ лекарств. и аромат. растений. – М., 2000. – С. 155-159.

13. Влияние эфирного масла Монарды дудчатой на живые клетки in vitro /

Б. В. Богутский [и др.] // Фитонциды: роль в биогеоценозах, значение для ме-

дицины : материалы VIII совещ. (Киев, 16-18 окт. 1979 г.) / отв. ред. Б. Е. Ай-

зенман. – Киев, 1981. – С. 87-90.

14. Войткевич, С. А. Эфирные масла для парфюмерии и ароматерапии /

С. А. Войткевич. – М. : Пищ. промыш., 2001. – 153 с.

15. Воронина, Е. П. Новые ароматические растения для Нечерноземья /

Е. П. Воронина, Ю. Н. Горбунов, Е. О. Горбунова. – М. : Наука, 2001. – 172 с.

: ил.

16. Вощинина, Н. А. Химико-токсикологическое исследование производных

п-аминобензойной кислоты: анестезина, новокаина, новокаинамида : авто-

реф. дис. … канд. фарм. наук : 15.00.02 / Н. А. Вощинина ; Курск. гос. мед.

ун-т. – Курск, 2000. – 22 с.

17. Вспомогательные вещества, применяемые в технологии суппозиториев

/ Н. С. Михеева, В. Ф. Охотникова, М. А. Джавахян [и др.] // Вопр. биол.,

мед. и фармацевт. химии. – 2013. – № 9. – С. 16-19.

18. ГОСТ 8285 – 91. Жиры животные топленые. Правила приемки и методы

испытания. – М.: Стандартинформ, 2005. – 12 с.

118

19. Государственная фармакопея Российской Федерации : сб. / М-во здраво-

охранения и соц. развития РФ [и др.]. – 12-е изд. – М. : Науч. Центр экспер-

тизы средств мед. применения, 2007. – Ч. 1. – 696 с.

20. Государственная фармакопея Союза Советских Социалистических Рес-

публик : в 2 вып. / М-во здравоохранения СССР. – М. : Медицина, 1987-1990.

– Вып. 2 : Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. – М.,

1990. – 397 с.

21. Государственная фармакопея Союза Советских Социалистических Рес-

публик / М-во здравоохранения СССР. – 10-е изд. – М. : Медицина, 1968. –

1078 с. : ил.

22. Дем’яненко, В. Г. Вивчення фізико-хімічних і реологічних властивостей

супозиторіїв з ліпофільним екстрактом шипшини / В. Г. Дем’яненко, Самер

Жехжах, Д. В. Дем’яненко // Вісник фармації. – 2006. – № 3 (47). – С. 18-21.

23. Дементьева, Н. Н. Влияние природы неподвижной жидкой фазы на газо-

хроматографический анализ некоторых алкалоидов барбитуратов и анестези-

рующих препаратов / Н. Н. Дементьева // Современные методы анализа фар-

мацевтических препаратов. – М., 1988. – С. 67-76. – (Научные труды / НИИ

фармации ; т. 26).

24. Дементьева, Н. Н. Применение метода газо-жидкостной хроматографии

для изучения качества новокаиновой и анестезиновой мазей при хранении /

Н. Н. Дементьева, М. И. Кулешова // Труды Всесоюзного научно-

исследовательского института фармации / ВНИИ фармации, Всесоюз. конъ-

юнкт.-информ. бюро. – 1977. – Т. 14. – С. 144-148.

25. Демина, Н. Б. Биофармация – путь к созданию инновационных лекар-

ственных средств / Н. Б. Демина // Разработка и регистрация лекарств.

средств. – 2013. – № 1. – С. 8-13.

26. Демьяненко, В. Г. Разработка технологии липофильной фракции из плодов

шиповника и ее фитохимическое исследование / В. Г. Дем’яненко, Самер

Жехжах, Д. В. Дем’яненко // Материалы 6-го Национального сьезда фармацев-

119

тов Украиньї (Харьков, 28-30 сент. 2005 г.) / Нац. фарм. ун-т. – Харьков, 2005. –

С. 697.

27. Дмитрієвський, Д. І. Розробка складу та дослідження вагінальних супо-

зиторіїв з глюкорібіном / Д. І. Дмитрієвський, Є. О. Передерій, Л. М. Малош-

тан // Вісник фармації. – 2005. – № 3 (43). – С. 24-27.

28. Еременко, А. Е. Вещества растительного происхождения как средства

коррекции иммунного обмена / А. Е. Еременко, М. И. Говорун // Фитонциды.

Бактериальные болезни растений : тез. докл. совещ. (Ужгород, окт. 1985 г.) :

в 2 ч. / отв. ред. В. В. Смирнов. – Киев, 1985. – Ч. 1. – С. 123-124.

29. Еремин, Ю. Н. Перспективные продукты питания с бета-каротином /

Ю. Н. Еремин, В. В. Зырянов // Пищевая пром-сть. – 1996. – № 6. – С. 26-27.

30. Замуренко, В. А. Исследование компонентного состава эфирного масла

Monarda fistulosa / В. А. Замуренко, Н. А. Клюев, Б. В. Бочаров // Химия при-

род. соединений. – 1989. – № 5. – С. 646-649

31. Зенкевич, И. Г. Некоторые особенности количественного анализа ком-

понентов эфирных масел в высокоэффективной жидкостной хроматографии /

И. Г. Зенкевич, В. М. Косман, К. Г. Ткаченко // Раст. ресурсы. – 1999. – Т. 35,

вып. 1. – С. 128-137.

32. Иващенко, Н. В. Анализ эфирного масла гипотензивного сбора методом

ГЖХ / Н. В. Иващенко, И. А. Самылина // Современные аспекты изучения

лекарственных растений : сб. ст. / под ред. И. А. Самылиной [и др.]. – М.,

1995. – С. 121-125. – (Научные труды / НИИ фармации ; т. 34).

33. Изучение биодоступности фармакодинамики различных форм синтети-

ческого бета-каротина на добровольцах / Л. М. Якушина [и др.] // Вопр. мед.

химии. – 1995. – Т. 41, № 4. – С. 36-41.

34. Использование растительных ароматических веществ для коррекции

ферментативных процессов / В. В. Николаевский [и др.] // Основные направ-

ления научных исследований по интенсификации эфиромасличного произ-

водства : тез. докл. V всесоюз. симп. (Кишинев, 17-19 сент. 1990 г.) – Симфе-

рополь, 1990. – С. 193-194.

120

35. Исследования в области создания суппозиторных основ и новой но-

менклатуры суппозиториев различной направленности действия / Н. Г. Коз-

лова [и др.] // Фармаком. – 1994. – № 2/3. – С. 15-21.

36. Карнаухов, В. Н. Биологические функции каротиноидов / В. Н. Карнау-

хов ; АН СССР, Ин-т биол. физики. – М. : Наука, 1988. – 240 с. – (Теорет. и

приклад. биофизика).

37. Карпова, Л. К. Фотоколориметрическое определение анестезина /

Л. К. Карпова // Некоторые вопросы фармации : тр. 1-го Моск. мед. ин-та. –

М., 1968. – С. 267-269

38. Ключников, С. О. Витамин А или бета-каротин – незаменимые микро-

нутриенты / С. О. Ключников, Е. С. Гнетнева // Практика педиатра. – 2007. –

№ 5. – С. 39-42.

39. Козлова, Н. Г. Некоторые особенности создания лекарственных

средств в форме суппозиториев / Н. Г. Козлова, Е. Е. Замараева, Л. И. Драник

// Фармация. – 1992. – № 6. – С. 80-83.

40. Кондратьева, И. А. Требования фармакопей к ректальным суппозитори-

ям / И. А. Кондратьева, И. Е. Смехова // Фармация. – 2012. – № 1. – С.54-56.

41. Крецу, Л. Г. Биологически активные вещества из дикорастущих расте-

ний / Л. Г. Крецу, М. В. Бодруг // Ботанические исследования / АН МССР,

Ботан. сад. – Кишинев, 1992. – Вып. 11. – С. 64-69.

42. Крутенко, Е. Г. Монарда – ценное растение / Е. Г. Крутенко, Н. Е. Зелен-

гур // Охрана природы Адыгеи : [сб. ст.] / Всерос. о-во охраны природы,

Адыг. обл. совет ; [науч. ред. М. П. Мальцев]. – Майкоп, 1987. – Вып. 3. –

С. 59-61.

43. Кукес, В. Г. Клиническая фармакология / В. Г. Кукес. – М. : ГЭОТАР-

Медиа, 2006. – 944 с.

44. Кулиев, К. М. Использование эфиромасличных растений и эфирных ма-

сел для фитопрофилактики / К. М. Кулиев, С. С. Мишурова, З. А. Мамедов //

Основные направления научных исследований по интенсификации эфиро-

масличного производства. – Симферополь, 1990. – С. 178-179.

121

45. Лайпанов, А. Х. Применение высокоэффективной жидкостной хромато-

графии в анализе лекарственных средств, содержащих местные анестетики /

А. Х. Лайпанов, В. Э. Сланский // Фармация. – 1991. – Т. 40, № 1. – С. 28-31.

46. Лекарственные препараты в России : справ. Видаль. – 14-е изд. – М. :

АстраФармСервис, 2008. – 1676 с. : ил.

47. Лекарственные препараты в форме суппозиториев / Н. Г. Козлова [и др.]

// Технология и стандартизация лекарств : сб. науч. тр. ГНЦЛС / под ред.

В. П. Георгиевского, Ф. А. Конева. – Харьков, 2000. – Т. 2. – С. 415-444.

48. Литвин, А. А. Применение гидроксамовой реакции для количественного

определения анестезина / А. А. Литвин, Д. М. Попов, С. В. Чернова // Хим.-

фарм. журн. – 1982. – Т. 16, № 3. – С. 374-377.

49. Логинов, А. С. Болезни кишечника : рук. для врачей / А. С. Логинов,

А. И. Парфенов. – М., 2000. – 630 с. : ил.

50. Лядова, Е. В. Разработка технологии получения и исследование хими-

ческого состава твердых липофильных фракций из плодов растений семейст-

ва Сельдерейные : автореф. дис. … канд. фарм. наук : 14.04.01; 14.04.02 / Е.

В. Лядова. – М., 2010. – 22 с.

51. Ляпунов, Н. А. Методология фармацевтической разработки лекарст-

венных препаратов в Украине / Н. А. Ляпунов, Е. П. Безуглая // Фармация. –

2013. – № 7. – С. 44-49.

52. Макарчук, Н. М. Антимикробное действие фитонцидов и их влияние на

общую реактивность организма / Н. М. Макарчук, Я. С. Лещинская,

А. Ф. Лебедева // Актуальные вопросы курортной фитотерапии : крат. тез.

докл. краев. науч.-практ. конф. / отв. ред. И. И. Лысенко. – Пятигорск, 1985. –

С. 66-67.

53. Марченко, Л. Г. Технология мягких лекарственных форм : учеб. посо-

бие / Л. Г. Марченко, А. В. Русак, И. Е. Смехова. – СПб. : СпецЛит, 2004. –

174 с.

54. Машковский, М. Д. Лекарственные средства / М. Д. Машковский. – 15-

е изд., перераб., испр. и доп. – М. : Новая волна, 2007. – 1206 с.

122

55. Медико-биологические аспекты каротиноидов / А. В. Сергеев [и др.] //

Вопр. мед. химии. – 1992. – Т. 38, № 6. – С. 8-12.

56. Методы анализа эфирных масел / В. А. Замуренко [и др.] // Изв. Тими-

ряз. сельскохоз. акад. – 1985. – № 6. – С. 169-172.

57. Методы биохимического исследования растений / под ред. А. И. Ерма-

кова. – 3-е изд., перераб. и доп. – Л. : Агропромиздат, 1987. – 430 с.

58. Муравьев, И. А. Технология лекарств / И. А. Муравьев. –3-е. изд., пере-

раб. и доп. – М. : Медицина, 1980. – Т. 2. – С. 538-566.

59. Муравьева, И. А. Физико-химические свойства и биологически актив-

ные вещества препарата «Каротин микробиологический в масле» / И. А. Му-

равьева, Г. И. Ковальская // Фармация. – 1988. – № 3. – С. 32-35.

60. Надлежащая производственная практика лекарственных средств. Актив-

ные фармацевтические ингредиенты. Готовые лекарственные средства. Руко-

водства по качеству. Рекомендации PIC/S / под ред. Н. А. Ляпунова [и др.]. –

Киев : МОРИОН, 2001. – 472 с.

61. Неграш, А. К. Развитие устойчивости у золотистого стафилококка к

антибиотикам растительного происхождения и свойства устойчивых

вариантов / А. К. Неграш // Фитонциды, их роль в биогеоценозах, значение

для медицины. – Киев, 1981. – С. 260-262.

62. Никитина, Т. И. Разработка иммуномодулирующего сбора из лекарст-

венного растительного сырья / Т. И. Никитина, Н. В. Кудашкина,

Л. В. Шуклина // Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарствен-

ных растений : материалы междунар. совещ., посвящ. памяти В. Г. Минаевой

(Новосибирск, 15-18 апр. 1998 г.) – Новосибирск, 1998. – С. 140-141.

63. Николаевский, В. В. Ароматерапия : справочник / В. В. Николаевский. –

М. : Медицина, 2000. – 336 с. : ил.

64. Николаевский, В. В. Внутрибольничная заболеваемость и растительные

ароматические биорегуляторы (РАБ) / В. В. Николаевский // Селекция, эко-

логия, технологии возделывания и переработки нетрадиционных растений :

материалы V междунар. науч.-производств. конф., посвящ. творч. наследию

123

Л. П. Симиренко (Алушта, 9-14 сент. 1996 г.). – Симферополь, 1996. – С. 283-

284.

65. Николаевский, В. В. Действие эфирного масла Монарды на показатели

клеточного и гуморального иммунитета / В. В. Николаевский, В. Н. Алексан-

дров, В. М. Резванов // Эфирные масла и их использование в здравоохране-

нии и народном хозяйстве : материалы конф. (Ялта, дек. 1988 г.) – Ялта, 1988.

– С. 14-15.

66. Николаевский, В. В. Коррекция вторичных иммунодефицитов расти-

тельными ароматическими биорегуляторами (РАБ) / В. В. Николаевский,

А. Е. Еременко, М. И. Говорун // Селекция, экология, технологии возделыва-

ния и переработки нетрадиционных растений : материалы V междунар. на-

уч.-производств. конф., посвящ. творч. наследию Л. П. Симиренко (Алушта,

9-14 сент. 1996 г.). – Симферополь, 1996. – С. 287-289.

67. Овчинников, Л. К. Геморрой и принципы его лечения / Л. К. Овчинни-

ков, Е. А. Овчинникова // Рос. аптеки. – 2009. – № 8. – С. 20-25.

68. Патологическая физиология : учеб. для студентов мед. вузов / под ред.

Н. Н. Зайко, Ю. В. Быця. – 3-е изд., перераб. и доп. – Киев : Логос, 1996. –

647 с.

69. Простатиты и аденома предстательной железы: диагностика, комплекс-

ное лечение и профилактика с использованием фитотерапии / В. В. Россихин

[и др.] ; под ред. И. А. Егорова. – Харьков, 2004. – 120 с.

70. Простатопротекторы : справочник / под ред. С. М. Дроговоз ; Нац. фарм.

ун-т. – Харьков : Плеяда, 2005. – 184 с.

71. Ривкин, В. Л. Актуальные вопросы колопроктологии / В. Л. Ривкин,

С. В. Ремизов. – Самара, 2003. – C. 22-23.

72. Ривкин, В. Л. Руководство по колопроктологии / В. Л. Ривкин,

А. С. Бронштейн, С. Н. Файн. – М. : Медпрактика, 2001. – 300 с.

73. Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств : ме-

тод. рекомендации. Ч. 1 / под ред. Н. В. Юргеля [и др.] // Руководство для

предприятий фармацевтической промышленности [Электронный ресурс] :

124

метод. рекомендации : ч. I-III. – М., 2007. – С. 5-92. – Режим доступа:

http://www.google.ru/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&frm=1&source=web&cd=1&ve

d=0CCcQFjAA&url=http%3A%2F%2Ffcpfarma.ru%2FAttachment.aspx%3FId%

3D228&ei=r9NkUuquKevV4wS0YDACQ&usg=AFQjCNEoBH4T2rDyoV_tRPL

8TCyVbauw&bvm=bv.54934254,d.bGE&cad=rjt, свободный.

74. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых

фармакологических веществ : учеб. пособие для системы послевуз. проф. об-

разования врачей – 2-е изд., перераб. и доп. – М. : Медицина, 2005. – 826 с.

75. Рынок эмульгаторов для пищевой промышленности в 2008-2011 годах

[Электронный ресурс] / Исследовательская компания Abercade. – Режим дос-

тупа: 295 http://www.abercade.ru/research/reports/7667.html, свободный.

76. Свиденко, Л. И. Интродукцiя Monarda fistulosa L. в Херсонськiй областi /

Л. И. Свиденко // Вiсник Львiвского университету. Сер. Бiологiчна. – 2004. –

Вип. 36. – С. 319-324.

77. Сергеев, А. В. Создание лечебно-профилактических средств на основе

каротиноидов / А. В. Сергеев // Вопр. мед. химии. – 1992. – Т. 38, № 6. – С. 4-

5.

78. Сергеева, Т. И. Ингибирующее влияние отечественного синтетического

бета-каротина и аскорбиновой кислоты на эндогенный канцерогенез мышей

/ Т. И. Сергеева [и др.] // Вопр. мед. химии. – 1992. – Т. 38, № 6. – С. 12-14.

79. Сланский, В. Э. Использование высокоэффективной жидкостной хрома-

тографии в контроле качества местноанестезирующих лекарственных

средств : автореф. дис. ... канд. фарм. наук : 15.00.02 / В. Э. Сланский. – М.,

1994. – 25 с.

80. Современные биофармацевтические аспекты вспомогательных веществ /

А. И. Тенцова [и др.] // Фармация. – 2012. – № 7. – С. 3-6.

81. Соловьева, Л. А. Простатиты: диагностика, лечение / Л. А. Соловьева //

Рус. мед. журн. – 2003. – Т. 11, № 5. – С. 21-24.

82. Состав и бактерицидные свойства эфирного масла Монарды дудчатой /

Б. В. Богутский [и др.] // Труды ВНИИ эфирно-масличных культур. Т. 14. Се-

125

лекция, технология возделывания и переработки эфироносов. – Симферо-

поль, 1982. – С. 15-21.

83. Состояние и перспективы создания суппозиторных лекарственных форм

в секторе суппозиторных лекарственных форм ГП ГНЦЛС / Н. Г. Козлова [и

др.] // Фармаком. – 2005. – № 2/3. – С. 25-30.

84. Средообразующие фитотехнологии XXI века / В. А. Быков [и др.] // Не-

традиц. с.-х., лекарств. и декоратив. растения. – 2003. – № 1. – С. 74-87.

85. Стандартизованная процедура валидации методик количественного

анализа лекарственных средств методом стандарта / А. И. Гризодуб [и др.] //

Фармаком. – 2004. – № 3. – С. 3-17.

86. Сур, С. В. Методы выделения, идентификации и определения терпено-

вых соединений / С. В. Сур // Хим.-фарм. журн. – 1990. – Т. 24, № 5. – С. 42-

50.

87. Танасиенко, Ф. С. Эфирные масла : содержание и состав в растениях /

Ф. С. Танасиенко. – Киев : Наук. думка, 1995. – 264 с.

88. Технология лекарственных форм : учеб. для студентов фармац. ин-тов и

фармац. фак. мед. ин-тов : в 2 т. / под ред. Т. С. Кондратьевой. – М. : Меди-

цина, 1991. – Т. 1-2.

89. Фармацевтическая химия / под ред. А. П. Арзамасцева. – 2-е изд. испр.

– М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005. – 640 с.

90. Фирсова, А. В. Виды рода Монарда в условиях интродукции / А. В.

Фирсова // Роль ботанических садов в сохранении биоразнообразия : мате-

риалы междунар. конф. «Сохранение и воспроизводство растительного ком-

понента биоразнообразия», посвящ. 75-летию Ботан. сада Рост. гос. ун-та

(Ростов-на-Дону, 28-30 мая 2002 г.) – Ростов н/Д, 2002. – С. 63-64.

91. Фотометрическое определение анестезина, стрептоцида и сульфацил на-

трия в лекарственных формах / П. И. Ивахиенко [и др.] // Фармация. – 1981. –

№ 2. – С. 58-61.

92. Фрик, Л. П. Основной гидролиз новокаина и анестезина в присутствии

ПАВ / Л. П. Фрик, Е. В. Рикунова // Фармация. – 1984. – № 2. – С. 33-36.

126

93. Халиф, И. Л. Использование салицилатов в лечении неспецифического

язвенного колита / И. Л. Халиф // Лечащий врач. – 2000. – № 5. – С. 52-54.

94. Харкевич, Д. А. Фармакология : учеб. для вузов / Д. А. Харкевич. – 8-е

изд., перераб., доп. и испр. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005. – 736 с.

95. Химический анализ лекарственных растений : учеб. пособие / под ред.

Н. И. Гринкевич, Л. Н. Сафронович. – М, 1983. – С. 130.

1. Хлыпенко, Л. А. Рост и развитие растений рода Монарда в условиях

Южного берега Крыма / Л. А. Хлыпенко, В. Д. Работягов, Б. А. Виноградов //

Вивчення онтогенезу рослин природних і культурних флор у ботанічних за-

кладах і дендропарках Євразії : матеріали 12 міжнар. наук. конф. / НАН

України; Ін-т клітинної біології та генетичної інженерії ; відп. ред.

Й. Й. Сікура. – Полтава, 2000. – С. 242-243, 342-344.

2. Цагарейшвили, Г. В. Биофармацевтические, фармацевтические и тех-

нологические аспекты создания мягких лекарственных форм: Ректальные

препараты / Г. В. Цагарейшвили, В. А. Головкин, Т. А. Грошовый. – Тбилиси,

1987. – 263 с.

3. Чечета, О. В. Методика определения каротиноидов методом хромато-

графии в тонком слое сорбента / О. В. Чечета, Е. Ф. Сафронова, А. И. Слив-

кин // Сорбц. и хроматогр. процессы. – 2008. – Т. 8, вып. 2. – С. 320-326.

4. Читао, С. И. Монарда – новое эфиромасличное и лекарственное растение

/ С. И. Читао, Е. Г. Крутенко // Бюл. ботанич. сада им. И. С. Косенко. – Крас-

нодар, 1998. – № 8. – С. 104-105.

5. Шеламова, С. А. Научно-практические аспекты технологии модифика-

ции растительных масел для жировых продуктов с функциональными свой-

ствами : автореф. дис. … д-ра техн. наук : 05.18.06 / С. А. Шеламова. – М.,

2012. – 50 с.

6. Ших, Е. В. Клинико-фармакологическое обоснование применения вита-

минов-антиоксидантов в комплексной терапии заболеваний молочной желе-

зы / Е. В. Ших // Вопр. гинекологии, акушерства и перинатологии. – 2008. –

Т. 7, № 2. – С. 99-104.

127

7. Энциклопедия лекарств : ежегод. сб. / гл. ред. Г. Л. Вышковский. – М. :

РЛС, 2007. – 1487 с. – (Регистр лекарственных средств России ; вып. 15).

8. Эфирные масла – аромат здоровья : древний и соврем. опыт профилактики

и лечения заболеваний эфирными маслами / С. С. Солдатченко, Г. Ф. Кащен-

ко, А. В. Пидаев. – Сімферополь : Тавріда, 2001. – 174 с.

9. Ярных, Т. Г. Изучение ассортимента суппозиторных основ (обзор) / Т.

Г. Ярных, Е. В. Толочко, В. Н. Чушенко // Хим.-фармацевт. журн. – 2010. – Т.

44, № 10. – С. 21-26.

10. Ansel, H. C. Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems / H.

C. Ansel, N. G. Popovich, L. V. Allen. – 6th ed. – Baltimor, Philadelphia: Wil-

liams and Wilkins, 1995. – 497 p.

11. A randomized, placebo-controlled trial of the health effects of antioxidant vita-

mins and minerals / Serge Hercberg [et al.] // Arch. Intern. Med. – 2004. – Vol.

164. – P. 2335-2342.

12. Albanes, D. Vitamin supplements and cancer prevention: where do randomized

controlled trials stand / Demetrius Albanes // J. Natl Cancer Inst. – 2009. – Vol.

101, N 1. – P. 2-4.

13. Alfuzosin treatment for chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome: a pro-

spective, randomized, double-blind, placebo-controlled, pilot study / A. Mehic [et

al.] / Urology. – 2003. – Vol. 62, N 3. – P. 425-429.

14. Alpha-blockers and bioflavonoids in men with chronic nonbacterial prostatitis /

M. Lü [et al.] // Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi. – 2004. – Vol. 25, N 2. – P.

169-172.

15. An Antiinflammatory Galactolipid from Rose Hip (Rosa canina) that Inhibits

Chemotaxis of Human Peripheral Blood Neutrophils in Vitro / E. Larsen [et al.] //

J. Nat. Prod. – 2003. – Vol. 66, N 7. – P. 994-995.

16. An investigation into the use of aromatherapy in intrapartum midwifery prac-

tice / E. E. Burns [et al.] // J. Altern. Complement. Med. – 2000. – Vol. 6, N 2. –

P. 141-147.

128

17. Applications of high-speed counter-current chromatography for the separa-

tion and isolation of natural products / N. Fischer [et al.] // J. Chrom. – 1991. –

Vol. 538, N 1. – P. 193-202.

18. Bayrak, A. Composition of essential oils from Turkish Salvia species /

A. Bayrak, A. Akgul // Phytochemistry. – 1987. – Vol. 26, N 3. – P. 846-847.

19. Ben-amotz, A. Case study: dunaliella natural – β-carotene biotechnology in

large scale oblong open raceways / A. Ben-amotz // Algae and Human Affairs in

the 21st

Century : 8th

international сonf. on Applied Algology (Montecatini Terme

(Italy), 26 sept.-1 oct. 1999) : abstracts. – Montecatini Terme, 1999. – Р. 130.

20. Benedich, A. Carotenoids and the immune response / A. Benedich // J. Nutr.

– 1989. – Vol. 119, N 1. – P. 112-115.

21. Bermond, P. Caroténoïdes : une classe nutritionnelle / P. Bermond, L.

Santamaria // Cahiers de Nutrition et de Diététique. – 1990. – Vol. 25, N 4. – P.

240-245.

22. Bertram, J. S. Carotenoids and gene regulation. / J. S. Bertram // Nutr. Rev. –

1999. – Vol. 57, N 6. – P. 182-191.

23. Beta-carotene prevents ozone-induced proinflammatory markers in murine skin

/ G. Valacchi [et al.] // Toxicol. Ind. Health. − 2009. − Vol. 25. − Р. 241-247.

24. Biological activities of natural and synthetic carotenoids: induction of gap

junctional communication and singlet oxygen quenching / W. Stahl [et al.] // Car-

cinogenesis. – 1997. – Vol. 18, N 1. – P. 89-92.

25. Bishop, G. M. Zinc stimulates the production of toxic reactive oxygen species

(ROS) and inhibits glutathione reductase in astrocytes / G. M. Bishop, R. Dringen,

S. R. Robinson // Free Radic. Biol. Med. – 2007 – Vol. 42, N 8. – Р. 1222-1230.

26. Chalcat, J. C. Study of clones of Salvia officinalis L. yields and chemical

composition of essential oil / J. C. Chalcat, A. Michet, B. Pasquier // Flavour and

fragrance J. – 1998. – Vol. 13, N 1. – P. 68-70.

27. Collicutt, L. M. «Marshalls Delight» Monarda / L. M. Collicutt // HortScience.

– 1989. – Vol. 24, N 3. – P. 525.

28. Collicutt, L. M. «Petite Delight» monarda / L. M. Collicutt, C. G. Davidson //

129

HortScience. – 1999. – Vol. 34, N 1. – P. 149-150

29. Combined use of supercritical fluid extraction, micellar electrokinetic chroma-

tography, and reverse phase high performance liquid chromatography for the anal-

ysis of antioxidants from rosemary (Rosmarinus officinalis L.) / E. Ibañez [et al.] //

J. Agric. Food Chem. – 2000. – Vol. 48, N 9. – P. 4060-4065.

30. Comparative study of the essential oils from Rosmarinus from Algeria and R.

officinalis L. from other countries / N. Arnold [et al.] // J. Essent. Oil Res. – 1997.

– Vol. 9, N 2. – P. 167-175.

31. Cooper, D. A. Carotenoids in health and disease: recent scientific evaluations,

research recommendations and the consumer / D. A. Cooper // J. Nutr. – 2004. –

Vol. 134. – P. 221S-224S.

32. Craig, P. W. De nouveaux coloris de monardes / P. W. Craig // Quebec. Vert. –

1995. – Vol. 17, N 12. – P. 27-28.

33. Cresswell, J. E. How and why do nectar-foraging bumblebees initiate move-

ments between inflorescences of wild bergamot Monarda fistulosa (Lamiaceae) /

J. E. Cresswell // Oecologia. – 1990. – Vol. 82, N 4. – P. 450-460.

34. Davidson, C. G. «Petite Wonder» Monarda / C. G. Davidson // HortScience. –

2002. – Vol. 37, is. 1. – P. 235-236.

35. Development of an aromatherapy service at a Cancer Centre / S. M. Kite [et al.]

// Palliat. Med. – 1998. – Vol. 12, N 3. – P. 171-180.

36. Effects of beta-carotene supplementation on lipid peroxidation in humans / J. P.

Allard [et al.] // Am. J. Clin. Nutr. – 1994. – Vol. 59, N 4. – P. 884-890.

37. European pharmacopoeia. – 7th ed. suppl. 7.0 – Strasbourg : European De-

partment for the Quality of Medicines, 2010. – Vol. 1. – P. 1207.

38. Excipients for pharmaceuticals [Electronic resource]. – Режим доступа:

http://www.sasoltechdata.com/marketingbroshures/Excipients_Pharmaceuticals.pd

f

39. Gannedahloand, E.-L. Coxibs and the reporting of adverse reactions / E.-

L. Gannedahloand, Q. Y. Yue // Medical Products Agency. – 2000. – N 11. –

P. 74-77.

130

40. Goodman, G. E. Retinol, Vitamins, and Cancer Prevention: 25 Years of Learn-

ing and Relearning / G. E. Goodman, D. S. Alberts, F. L. Meyskens // J. Clin.

Oncol. – 2008. – Vol. 26, N 34. – P. 5495-5496.

41. Hercberg, S. The history of β-carotene and cancers: from observational to inter-

vention studies. What lessons can be drawn for future research on polyphenols / S.

Hercberg // Am. J. Clin. Nutr. – 2005. – Vol. 81 (suppl). – P. 218S-222S.

42. High dietary antioxidant intakes are associated with decreased chromosome

translocation frequency in airline pilots / L. C. Yong [et al.] // Am. J. Clin. Nutr. –

2009. – Vol. 90, N 5. – P. 1402-1410.

43. Ilidrissi, A. Etude chimique comparative de quelques populations de

lavandula dentata L du Maroc / A. Ilidrissi, M. Berrada // 1er colloque international

sur les plantes aromatiques et medicinales du Maroc (Rabat, 15-17 May 1984) /

Centre National de Coordination et de Planification de la Recherche Scientifique et

Technique. – Rabat, 1985. – P. 220.

44. In vitro permeation through porcine buccal mucosa of Salvia desoleana Atzei &

Picci essential oil from topical formulations / G. C. Ceschel [et al.] // Int. J. Pharm.

– 2000. – Vol. 195, N 1/2. – P. 171-177.

45. Increase in Community-Acquired Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus

at a Naval Medical Center / A. J. Kallen [et al.] // Infect. Contr. Hosp. Epidemiol. –

2000. – Vol. 21, N 3. – P. 223-226.

46. Inouye, S. Volatile composition and vapour activity against Trichophyton

mentagrophytes of 36 aromatic herbs cultivated in Chichibu district in Japan /

S. Inouye, K. Uchida, S. Abe // International Journal of Aromatherapy. – 2006. –

Vol. 16, N 3/4. – P. 159-168.

47. Intakes of Fruit, Vegetables, and Carotenoids and Renal Cell Cancer Risk: A

Pooled Analysis of 13 Prospective Studies / Jung Eun Lee [et al.] // Cancer

Epidemiol. Biomarkers Prev. – 2009. – Vol. 18. – P. 1730-1739.

48. Jyonouchi, H. Effect of carotenoids on in vitro immunoglobulin production by

human peripheral blood mononuclear cells: astaxanthin, a carotenoid without vit-

amin A activity, enhances in vitro immunoglobulin production in response to a T-

131

dependent stimulant and antigen / H. Jyonouchi, S. Sun, M. Gross // Nutr. Cancer.

– 1995. – Vol. 23, N 2. – P. 171-183.

49. Keith, R. L. Chemoprevention of Lung Cancer / R. L. Keith // Proceedings Am.

Thorac. Soc. – 2009. – Vol. 6. – P. 187-193.

50. Kosova, V. Przyczynek do ocenu Lawendy wychodowanej w

czechoslowacji i mozliwosc popravienia jej jakosci / V. Kosova, M. Chladek //

Acta Pol. Pharm. – 1996. – Vol. 17, N 4. – P. 307-318.

51. Lee, E. C. Quenching Mechanism of β-Carotene on the Chlorophyll Sensitized

Photooxidation of Soybean Oil / E. C. Lee, D. B. Min // J. Food Sci. – 1988. – Vol.

53, N 6. – P. 1894-1895.

52. Lipid peroxidation and plasma antioxidant micronutrients in Crohn disease /

B. E. Wendland [et al.] // Am. J. Clin. Nutr. – 2001. – Vol. 74. – P. 259-264.

53. Lis-Balchin, M. A Study of the Changes in the Bioactivity of Essential Oils

Used Singly and as Mixtures in Aromatherapy / M. Lis-Balchin, S. Deans, S. Hart

// J. Altern. Complement. Med. – 1997. – Vol. 3, N 3. – P. 249-256.

54. Margarit, M. V. Thermal and rheological study of lipophilic ethosuximide

suppositories / M. V. Margarit, J. D. Caballero // Eur. J. Pharm. Sci. – 2003. – N

19. – Р. 123-128.

55. Mayne, S. T. Antioxidant Nutrients and Chronic Disease: Use of Biomarkers of

Exposure and Oxidative Stress Status in Epidemiologic Research / S. T. Mayne //

J. Nutr. – 2003. – Vol. 133, suppl. : Biomarkers of Nutritional Exposure and Nutri-

tional Status. – P. 933S-940S.

56. Mehta, B. J. Mutants of carotene production in Blakeslea trispora / B. J. Mehta,

E. Cerdá-Olmedo // Appl. Microbiol. Biotechnol. – 1994. – Vol. 42, N 6. – P. 836-

838.

57. Modulation of the Effect of Prenatal PAH Exposure on PAH-DNA Adducts in

Cord Blood by Plasma Antioxidants / E. A. Kelvin [et al.] // Cancer. Epidemiol.

Biomarkers Prev. – 2009. – Vol. 18, N 8. – P. 2262-2268.

58. Nadeem, A. Oxidant – antioxidant imbalance in asthma: scientific evidence, ep-

idemiological data and possible therapeutic options : Review / A. Nadeem,

132

A. Masood, N. Siddiqui // Ther. Adv. Respir. Dis. – 2008. – Vol. 2. – P. 215-235.

59. Olson, J. A. Provitamin A Function of Carotenoids: The Conversion of β-

Carotene into Vitamin A / J. A. Olson // J. Nutr. – 1989. – Vol. 119, N 1. – P. 105-

108.

60. Opinion of the scientific committee on food on ß-carotene from Blakeslea

trispora [Electronic resource] : adopted on 22 June 2000, and corrected on 7 Sep-

tember 2000 : SCF/CS/ADD/COL 158 Final – correction / European commission,

Health & Consumer Protection Directorate-General, Scientific Committee for

Food. – Brussels (Belgium), 2000. – Режим доступа:

http://ec.europa.eu/food/fs/sc/scf/out60_en.pdf.

61. Paiva, S. A. Beta-carotene and other carotenoids as antioxidants / S. A. Paiva,

R. M. Russell // J. Am. Coll. Nutr. – 1999. – Vol. 18. – P. 426-433.

62. Rectal and Vaginal Pharmaceuticals [Electronic resource] /

www.gattefosse.com. – Режим доступа:

http://www.gattefosse.com/en/applications/?administration-route,rectal-vaginal

63. Rectal drug administration: clinical pharmacokinetic consideration / A. G.

De Boer, F. Moolenaar, J. de Leede, D. D. Breimer // Clinical Pharmacokinetics. –

1982. – N 7. – P. 285-311.

64. Plasma levels of carotenoids, retinol and tocopherol and the risk of gastric can-

cer in Japan: a nested case–control study / C. Persson [et al.] // Carcinogenesis. −

2008. − N 29. − Р. 1042-1048.

65. Proceedings of the International Symposium on Natural Antioxidants: molecu-

lar mechanisms and health effects / eds.: L. Packer, M. G. Traber, W. Xin. –

Champaign, Ill. : AOCS Press, 1996. – 705 p. : ill. – (Symposium was held during

June 20-24, 1995 in Beijing, China).

66. Qualitative and quantitative analysis of the essential oil of Salvia officinalis

L. from Morocco / M. Holeman [et al.] // Boletim da Sociedade Broteriana. – 1984.

– Vol. 7, N 57. – P. 61-67.

67. Qualitative and quantitative determination of sesquiterpenoids in Achillea

species by reversed-phase high-performance liquid chromatography, mass-

133

spectrometry and thin-layer chromatography / S. Glasl [et al.] // J. Chromatogr. B.

Biomed. Sci. Appl. – 1999. – Vol. 729, N 1/2. – P. 361-368.

68. Schaeffer, A. Chronic prostatitis / A. Schaeffer, J. Stern // Clin. Evid. – 2003. –

N 10. – P. 994-1002.

69. Schmidt, K. Antioxidant vitamins and beta-carotene: effects on

immunocompetence / K. Schmidt //Am. J. Clin. Nutr. – 1991. – Vol. 53. – P. 383S-

385S.

70. Seitz, P. Mit Pflanzen gegen den Smog. Bessere Luftqualität durch

Innenraumbegrünung / P. Seitz // Gartenamt. – 1995. – Bd. 44, N 1. – S. 51-54.

71. Selected antioxidants and risk of hormone receptor–defined invasive breast

cancers among postmenopausal women in the Women's Health Initiative Observa-

tional Study trial / Yan Cui [et al.] // Am. J. Clin. Nutr. – 2008. – Vol. 87. –

P. 1009-1018.

72. Selective in vivo anti-inflammatory action of the galactolipid

monogalactosyldiacylglycerol / A. Bruno [et al.] // Eur. J. Pharmacol. – 2005. –

Vol. 524, N 1/3. – P.159-168.

73. Steenkamp, V. Phytomedicines for the prostate / V. Steenkamp // Fitoterapia. –

2003. – Vol. 74, N 6. – P. 545-552.

74. Study of Rosmarinus officinalis L. essential oil yield and composition as a

function of the plant life cycle / C. Boutekedjiret [et al.] // J. Essent. Oil Res. –

1999. – Vol. 11, N 2. – P. 238-240.

75. The association between oxidative stress and pregnancy-related symptoms of

illness among vitamin A-deficient women / Ting-Yuan David Cheng [et al.] //

FASEB J. – 2009. – Vol. 23. – 215.1.

76. The Effects of a Standardized Herbal Remedy Made from a Subtype of Rosa

canina in Patients with Osteoarthritis: A Double-Blind, Randomized, Placebo-

Controlled Clinical Trial / O. Warholm [et al.] // Curr. Ther. Res. – 2003. – Vol.

64, N 1. – P. 21-31.

134

77. The United States pharmacopoeia 24 – The national formulary 19 : official

from January 1, 2000. – 24th ed. – Rockville, Md. : United States Pharmacopeial

Convention, Inc., 2000. – 569 p. : ill.

78. Validation of analytical procedures: text and methodology [Electronic resourse]

: ICH Topic Q 2 (R1). Step 5 : Note for guidance on validation of analytical proce-

dures: text and methodology (CPMP/ICH/381/95), June 1995 / European Medi-

cines Agency. – London, 2006. – Mode of access:

http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/200

9/09/WC500002662.pdf.

135

ПРИЛОЖЕНИЯ

136

137

138

139

140

141

142

143

144

145