Guía de Validación de Métodos Analíticoscolegio Qfb

8/18/2019 Guía de Validación de Métodos Analíticoscolegio Qfb

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GUÍA DE VALIDACIÓ DE MÉTODOS AALÍTICOSEDITADA POR EL COLEGIO NACIONAL DE QUÍMICOS FARMACÉUTICOS BIÓLOGOS MÉXICO, A. C.

OBJETIVO:

Establecer los lineamientos generales mínimos necesarios para llevar a cabo el proceso de

validación de métodos analíticos.

JUSTIFICACIÓ:

Un método analítico es la descripción de la secuencia de actividades, recursos materiales y parámetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el análisis de un componenteespecífico(analito) de una muestra.La validación es el proceso por el cual se demuestra, por estudios de laboratorio, que lacapacidad del método satisface los requisitos para la aplicación analítica deseada; esta actividadse justifica por los siguientes aspectos:

•

Moral y Ética,• Aseguramiento de calidad,• Económica, y•

Regulatoria.

DEFIICIOES:

•

Adecuabilidad del sistema.-Verificación de que el sistema opera con base a criterios que permitan asegurar la confiabilidad de los resultados de un método analítico.

• Analito.-Componente específico de una muestra a medir.•

Calibración.-Conjunto de operaciones que determinan la relación entre los valoresindicados por un instrumento de medición y los valores conocidos correspondientes aun patrón de referencia.

• Documentación.-Conjunto de información que sustenta una actividad realizada.• Especificaciones.-Descripción del material que incluye la definición de sus propiedadesy características, con las tolerancias de variación de los parámetros de calidad.

• Especificidad.-Capacidad de un método analítico para obtener una respuesta debidaúnicamente al analito de interés.

•

Estudio colaborativo.-Reproducibilidad realizada en distintos laboratorios, pordiferentes químicos.

•

Exactitud.-Concordancia entre un valor obtenido empleando el método y el valor dereferencia.

• Estabilidad analítica de la muestra.-Propiedad de una muestra preparada, de conservarsu integridad fisicoquímica y la concentración del analito, después de almacenarse porun tiempo y condiciones determinadas.

• Intervalo.-Concentraciones incluidas entre la concentración superior e inferior delanalito (incluyendo éstas), para las cuales se ha demostrado que el método es preciso,exacto y lineal.

• Límite de cuantificación.-Concentración mínima del analito que se puede determinarcon precisión y exactitud aceptables.

•

Límite de detección.-Concentración mínima del analito que puede ser detectada, pero nonecesariamente cuantificada.


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•

Linealidad.-Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos directamente o poruna transformación matemática, son proporcionales a la concentración del analito.

•

Metodología de prueba.-Procedimiento para determinar si un producto o materia primacumple con las especificaciones establecidas.

• Método analítico.-descripción de la secuencia de actividades, materiales y parámetrosque se deben cumplir para llevar a cabo el análisis de un componente específico de la

muestra.•

Método analítico desarrollado internamente.-Método desarrollado por el propiolaboratorio.

• Método analítico indicativo de estabilidad.-Método cuantitativo capaz de detectarvariaciones en las propiedades del material evaluado, debido a las condiciones dealmacenaje.

•

Método analítico oficial.-Método que aparece en la literatura oficial reconocida.• Método analítico no oficial.-Método que no aparece en la literatura oficial reconocida.• Muestra.-Porción del material a evaluar.•

Muestra analítica.-Porción del material a evaluar de acuerdo al método analítico.•

Muestra adicionada.-Porción representativa del material a evaluar, a la que se le

adicionan cantidades conocidas del analito.•

Parámetros de desempeño.-Parámetro específico a estudiar en un protocolo devalidación.

• Placebo analítico.-Muestra que contiene todos los componentes de un producto aexcepción del analito.

• Placebo adicionado.-Muestra e un placebo analítico al cual se le adiciona una cantidadconocida del analito.

• Precisión.-Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestrahomogénea.

• Precisión intermedia.-Precisión de un método analítico, expresada como laconcordancia relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas en un

mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos días.•

Proporcionalidad.-Relación establecida por una ecuación matemática entre losresultados obtenidos por dos métodos analíticos.

• Protocolo de validación,.Descripción de pruebas específicas para demostrar que un proceso da resultados que cumplen con los criterios preestablecidos de maneraconsistente.

•

Recobro.-Cantidad del analito determinada en el placebo adicionado, empleando elmétodo analítico.

•

Repetibilidad.-Precisión de un método analítico, expresada como la concordanciaobtenida entre determinaciones independientes realizadas por un solo analista, usandolos mismos instrumentos y métodos.

• Reproducibilidad.-.Precisión de un método analítico, expresada como la concordanciaentre determinaciones independientes realizadas por diferentes laboratorios.•

Revalidación.-comprobación de que el método analítico mantiene su desempeño cuandoexisten cambios en la composición del producto, en el método analítico.

• Robustez.-Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al presentarsevariaciones pequeñas pero deliberadas, en los parámetros normales de operación delmétodo.


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•

Sustancia de referencia.-Sustancia de uniformidad reconocida destinada a utilizarse encomprobaciones analíticas físicas, químicas o microbiológicas en el transcurso de lascuales se comparan con la sustancia en evaluación.

• Sustancia de referencia primaria.-Sustancia que es designada por tener la más altacalidad microbiológica, cuyas propiedades se aceptan sin referencia a otras sustancias.

•

Sustancia de referencia secundaria.-Sustancia cuyas propiedades se asignan por

comparación con una sustancia de referencia primaria, o bien, cuando es certificadamediante un procedimiento científicamente reconocido.

• Tolerancia.-Reproducibilidad de los resultados analíticos obtenidos por el análisis de lamisma muestra bajo diferentes condiciones normales de operación. La robustez y latolerancia son conceptos diferentes, ya que el primero se refiere a la influencia defactores internos del método, mientras que la tolerancia se refiere a factores externos delmétodo.

• Validación del método analítico.-Proceso por el cual se demuestra, por estudios delaboratorio, que la capacidad del método satisface los requisitos para la aplicaciónanalítica deseada.

CLASIFICACIÓ DE MÉTODOS AALÍTICOS:

Los métodos se clasifican bajo los siguientes criterios:•

En función de su estado regulatorio: a) Métodos farmacopeicos

b) Métodos no farmacopeicos

• En función de su aplicación (OM-059-SSA1 y OM-073-SSA1):a)

Métodos para producto a granel,

b)

Métodos para producto terminado,

c)

Métodos para muestra primaria, y

d)

Métodos indicadores de estabilidad.

• En función de la naturaleza de la respuesta analítica:

a)

Métodos físico-químicos.- cuando la respuesta es de carácter físico(absorción de luz, emisión de luz, voltaje, etc.) o químico(consumo de

iones –OH, consumo de un acomplejante, etc.)

b)

Métodos biológicos.- cuando la respuesta es de carácter biológico

(crecimiento de microorganismos, protección, muerte, etc.)

• En función de su propósito analítico:a)

Métodos para cuantificar el analito(contenido o potencia)

b) Métodos para establecer la presencia del analito a un limite.

c)

Métodos para identificar el analito.

Esta clasificación se utiliza para establecer los parámetros de desempeño a estudiar en la

validación del método analítico.

Cualquier método analítico puede estar constituido por técnicas de separación, extracción, etc.

, y por técnicas de medición (espectrofotometría, volumetría, colorimetría, potenciometría,etc.) que permiten medir la respuesta del analito en la muestra. A esta técnica se le denomina

Sistema de Medición.

• En función de la naturaleza del sistema de medición:a)

Métodos en los cuales el instrumento de medición de la respuesta

analítica, permite medir una señal de ruido (cromatógrafo de

líquidos y de gases, espectrofotómetros, etc.)

b) Métodos en los cuales el instrumento de medición no permite medir

una señal de ruido (buretas, medidor de halos, potenciómetros, etc.)


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PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

En función de la aplicación analítica de un método, se indican los parámetros de desempeño aestudiar.

PRUEBAS DE IMPUREZASPARÁMETRO DEDESEMPEÑO

COTEIDO/POTECIA /

VALORACI

COTEIDO/VALORACIÓ

LIMITE IDETIFICACIÓ

PRECISIÓN/ ADECUABILIDADDEL SISTEMA

SÍ SÍ SÍ *

LINEALIDAD DEL SISTEMA S S NO NOESPECIFICIDAD2 SÍ SÍ SÍ SÍEXACTITUD Y REPETIBILIDAD SÍ SÍ NO NOLINEALIDAD DEL MÉTODO SÍ SÍ NO NOPRESICIÓN DEL MÉTODO OPRECISIÓN INTERMEDIA2

SÍ SÍ NO NO

ESTABILIDAD ANALÍTICA2 DE LA MUESTRA

* * NO NO

LIMITE DE DETECCION NO NO SÍ NOLIMITE DE CUANTIFICACION NO SÍ NO NOROBUSTEZ * * * NOTOLERANCIA * * * NO

*Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza del método.1. La falta de especificidad de un método analítico, puede ser compensada por otraalternativa analítica de soporte, como por ejemplo cromatografía de capa fina.2. También es definido como un estudio de tolerancia.3. Un método que es exacto y lineal, por definición es específico al placebo analítico o a losotros componentes de la muestra.

DETERMIACIOES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓ:

•

Precisión del Sistema: ♣ Metodología.- Preparar por lo menos un sextuplicado de soluciones a laconcentración del analito que represente la concentración de la solución dereferencia utilizada o en ciertos casos, la concentración que represente el 100%de la muestra procesada para su medición; preparadas por dilución o por pesadasindependientes. Medir la respuesta analítica bajo las mismas condiciones.

Calcular S y CV de la respuesta analítica;

♣Criterios de aceptación:CV ≤ 1.5% para métodos físico-químicosCV ≤ 3% para métodos biológicos

Valores superiores u otro criterio de aceptación deben ser justificados.

Las formulas y el procedimiento se encuentra en el anexo 1.

• Adecuabilidad del sistema (Métodos cromatográficos): ♣ Metodología.- Inyectar por quintuplicado la solución de adecuabilidad,reportar la respuesta del analito, calcular el CV y para cada inyección:Factor capacidad (K’), resolución (si procede, R), retención relativa (si procede,Rr), factor de coleo (T), número de platos teóricos (N).


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♣Criterios de aceptación:

CV ≤ 2% para respuesta analítica.Valores superiores deben ser justificados.

Para cada inyección, se recomienda:K’>2 ; R>2 ; T


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Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 3.

Es conveniente trazar la gráfica de la concentración (x) vs la respuesta analítica(y), incluyendo en ella la ecuación, línea de ajuste y el coeficiente dedeterminación.

• Especificidad: ♣ Metodología.- Establecer las posibles sustancias interferentes y adicionarcantidades conocidas de éstas, solas o combinadas a la muestra y evaluar surespuesta bajo las mismas condiciones de análisis.

En métodos de identificación seleccionar sustancias que potencialmenteinterfieran en la determinación con base en la estructura del analito.

Para métodos de contenido/ potencia/ valoración, se analizan placebos del producto y cuando proceda sustancias relacionadas, precursores, homólogos yuna mezcla de ellos con el producto.

Para métodos de contenido/ valoración de impurezas, se adicionan éstas alanalito en niveles que incluya la especificación. Cuando no se dispone de lasimpurezas, el analito se somete a condiciones que generen su inestabilidadquímica y aplicar el método.

Para métodos de límite de impurezas se analizaran las muestras de impurezasindividualmente, el producto y la mezcla de éstos.

Para métodos indicadores de inestabilidad, si se cuenta con los productos dedegradación, preparar muestras con placebos adicionado de éstos, el placeboadicionado de analito, el placebo adicionado de analito y productos dedegradación y se analizan con el método.Si no se cuenta con los productos de degradación se puede favorecer lainestabilidad del analito en la muestra:

1) Someter el analito, el placebo y la muestra a temperaturas de 20°C por debajodel punto de fusión del analito de 2 a 4 semanas.2) Exponer el analito, placebo y muestra a luz UV, fluorescente y/o humedadrelativa.3) Hacer soluciones del analito, ajustando el pH de 1 a 2 y/o de 10 a 12 ysometerlas a 60°C – 80°C.4) Adicionar peróxido de hidrógeno para favorecer la oxidación del analito.

El tiempo y las condiciones se seleccionan con el fin de degradar al analito aniveles del 15 al 30%. Estos estudios no se realizan en analitos con propiedadesreactivas.

Para métodos no selectivos, la especificidad se sustenta con los resultados deexactitud y linealidad, si el método cumple con los criterios de aceptación.



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La respuesta del método solo se deberá al analito.

• Exactitud y Repetibilidad del método: ♣ Metodología:

A)Conociendo los componentes de la muestra se preparará el placebo analítico.A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra analítica porsextuplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% deeste en la muestra. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad porsextuplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% deeste en la muestra. El mismo analista analizara los placebos adicionadosutilizando de referencia la sustancia empleada en la adición al placebo analíticoen las mismas condiciones. Determinar la cantidad recuperada del analito.

B)Si no se conocen los componentes de la muestra, con el método se determinael contenido del analito y se preparan 6 muestras adicionadas del analito hastacompletar el 100% de éste en la muestra. Las muestras adicionadas se analizan

usando como referencia la sustancia empleada en la adición de la muestra.Determinar la cantidad recuperada del analito.

La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método.

Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo analítico, al obtener elcociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresadaen porcentaje.

Calcular ŷ, S, CV e IC(µ) del porcentaje de recobro.

♣Criterios de aceptación:IC(µ) debe incluir el 100% o que el promedio aritmético del % de

recobro se incluya en el intervalo:98-102% método cromatográfico98-102% método volumétrico97-103% método químico o espectrofotométrico95-105% método microbiológico

CV del porcentaje de recobro: No mayor de 2% en método cromatográfico No mayor de 2% en método volumétrico No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico

No mayor de 5% en método microbiológico No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a laespecificación del analito en la muestra.

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 4.•

Linealidad del método: ♣ Metodología:

A) Conociendo los componentes de la muestra se preparará el placebo analítico.A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra analítica por


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triplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de esteen la muestra. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad delanalito (intervalo) y preparar el placebo adicionado por triplicado a cada nivelmanteniendo constante la cantidad de placebo analítico en los tres niveles. Elmismo analista analizara los placebos adicionados utilizando de referencia lasustancia empleada en la adición al placebo analítico en las mismas condiciones.

Determinar la cantidad recuperada del analito.

B) Si no se conocen los componentes de la muestra, con el método se determinael contenido del analito y se preparan 3 muestras adicionadas del analito hastacompletar el 100% de éste en la muestra. Seleccionar dos niveles superior einferior de la cantidad del analito (intervalo) y preparar la muestra adicionada

por triplicado a cada nivel manteniendo constante la cantidad de muestra en lostres niveles Las muestras adicionadas se analizan usando como referencia lasustancia empleada en la adición de la muestra. Determinar la cantidadrecuperada del analito.La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método.

El intervalo de la concentración del analito adicionado depende del propósito delmétodo y debe incluir la especificación. La siguiente tabla sugiere intervalos

para el estudio de linealidad, en la cual la especificación se maneja como porcentaje, por ejemplo el 100% puede representar 100mg/g de muestra, 10ppm,5mg/ml, etc.

PROPÓSITO ESPECIFICACIÓ ITERVALO MÍIMOCONTENIDO/ POTENCIA/VALORACIÓN

LÍMITE INFERIOR (LI)LIMITE SUPERIOR (LS)

LI – 10% A LS +10%

EJEMPLO

VALORACIÓN 90% - 110%80% a 120%

Por lo tanto los niveles podríanSer 80%, 100% y 120%

UNIFORMIDAD DE DOSIS 75% - 125%60% a 140%

Por lo tanto los niveles podríanSer 60%, 100% y 140%

DISOLUCIÓNQ = 75%

En el caso conservador detercera etapa, ninguna unidad esQ –25%

40% a 130%Por lo tanto los niveles podríanSer 40%, 100% y 130%

CONTENIDO/ VALORACIÓNPARA PRUEBAS DEIMPUREZAS

LIMITE SUPERIOR (LS) LS – 20% a LS +20%

EJEMPLO

Sustancias Relacionadas No debe contener más de 100%80% a 120%

Por lo tanto los niveles podrían

Ser 80%, 100% y 120%Reportar la relación cantidad adicionada vs cantidad recuperada. Utilizar elmétodo de estimación por mínimos cuadrados y calcular b1, b0, r

2, IC(β1), IC(β0)y CVy/x.Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo o muestra adicionada alobtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionadaexpresada en porcentaje. Calcular ŷ, S, CV, IC(µ) del porcentaje de recobro.



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1) Cantidad adicionada vs cantidad recuperada:

r 2 > 0.98El IC(β1) debe incluir la unidadEl IC(β0) debe incluir el ceroEl CVy/x del porcentaje de recobro:

No mayor de 2% en método es cromatográfico No mayor de 2% en método volumétrico No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico No mayor de 5% en método microbiológico No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificacióndel analito en la muestra.

2) Porcentaje de recobro:

El IC(µ) debe incluir el 100% o el promedio aritmético del % de recobrose incluya en el intervalo:

98-102% método cromatográfico

98-102% método volumétrico97-103% método químico o espectrofotométrico95-105% método microbiológico

CV del porcentaje de recobro: No mayor de 2% en método cromatográfico No mayor de 2% en método volumétrico No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico No mayor de 5% en método microbiológico No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificacióndel analito en la muestra.

Otro criterio de aceptación debe ser justificado.


Es conveniente trazar la gráfica de la cantidad adicionada (x) vs la cantidadrecuperada (y), incluyendo en ella la ecuación, línea de ajuste y el coeficiente dedeterminación.

•

Precisión del Método (Precisión Intermedia o Tolerancia interdía / analista): ♣ Metodología.- Analizar por triplicado una muestra homogénea del productoque tenga un nivel cercano o igual al 100% (para contenido/potencia/valoración)o una muestra cuyo contenido este incluido en el intervalo lineal de

concentración de linealidad de método (para impurezas) en dos días diferentes y por dos analistas diferentes. Reportar el contenido/potencia/valoración delanalito de todas las muestras.

Calcular ŷ, S, CV del contenido/potencia/valoración, utilizando todos losresultados obtenidos.

♣Criterios de aceptación:CV ≤ 2% para métodos cromatográficos y volumétricos


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CV ≤ 3% para métodos químicos o espectrofotométricosCV ≤ 5% para métodos biológicos

No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación delanalito en la muestra.

Valores superiores deben ser justificados.


Los resultados pueden ser analizados utilizando otros métodos estadísticosapropiados que permitan sustentar que la precisión del método es aceptable.Puede ser utilizado un modelo estadístico lineal de diseño experimental ya quees de utilidad cuando se quiere determinar el grado de tolerancia del método afuentes de variación como estimar la variabilidad entre analistas o entre días.

•

Estabilidad Analítica de la Muestra: ♣ Metodología.- Establecer la etapa de análisis en la cual se desea evaluar laestabilidad, determinar si en dicha etapa es posible fraccionar (muestrasdependientes) o no (muestras independientes) y las condiciones de almacenaje.

En muestras dependientes, determinar la estabilidad analítica procesando hasta laetapa preestablecida por triplicado una muestra homogénea, fraccionar cada

preparación de acuerdo a las condiciones de almacenaje de interés. Terminar elanálisis de una de las fracciones de cada preparación(contenido/potencia/valoración), seguir el análisis de cada una de las fraccionesal término de cada condición de almacenaje utilizando una solución dereferencia recientemente preparada. Reportar el contenido/potencia/valoraciónde cada fracción.

En muestras independientes, determinar la estabilidad analítica a partir de unamuestra homogénea, analizando por triplicado (contenido/potencia/valoracióninicial). Simultáneamente y de la misma muestra, procesar el número demuestras necesarias para cada condición de almacenaje hasta la etapa

preestablecida (preparaciones) por triplicado, seguir el análisis de cada una delas preparaciones al término de cada condición de almacenaje utilizando unasolución de referencia recientemente preparada. Reportar elcontenido/potencia/valoración de cada preparación.

Calcular ŷ0, ŷ1, di.

♣Criterios de aceptación:di ≤ 2% métodos cromatográficos y volumétricosdi ≤ 3% para métodos químicos o espectrofotométricosdi ≤ 5% para métodos biológicos



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Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.


Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos como ladistribución t de Dunnett.

• Límite de Detección:

1)LD con base en señal de Ruido:

♣ Metodología.- Se aplica en métodos que utilizan instrumentos para medir larespuesta analítica y presentan una señal de ruido basal.Determinar la respuesta de blancos (reactivos. Placebos analíticos, etc.) y larespuesta de muestras analíticas (analitos, placebos adicionados, etc.) en unintervalo del analito que incluya la especificación de la prueba de impurezalimite. Determinar la cantidad del analito que genere una respuesta con respectoal blanco en una proporción de 3 a 1, lo que corresponde a la concentraciónasociada al limite de detección.


El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.

2)LD con base en curva de calibración y desviación estándar de los blancos:

♣ Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como noinstrumentales.Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) avalores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezaslimite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Simultáneamente

preparar 5 blancos. Medir las respuestas analíticas. Para la curva de calibración,sin incluir los blancos, calcular b1, r 2 e IC(β1).

Para los blancos, calcular S b de los blancos.Calcular el límite de detección:

LD=(3.3 × S b ) /b1

El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señalde ruido.

♣Criterios de aceptación:r 2 ≥ 0.98IC(β1), no debe incluir el cero.

El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

3)LD con base en la curva de calibración y la desviación estándar de regresión:


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♣ Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como noinstrumentales.Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) avalores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezaslimite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Medir lasrespuestas analíticas.

Calcular b1, r 2

, Sy/x, IC(β1).Calcular el límite de detección:

LD=(3.3 × Sy/x ) /b1

El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señalde ruido.

♣Criterios de aceptación:r 2 ≥ 0.98IC(β1), no debe incluir el cero.

El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

4)LD con base en la curva de calibración y la desviación estándar de la

ordenada al origen:

♣ Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como noinstrumentales.Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) avalores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezaslimite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Medir lasrespuestas analíticas.Calcular b1, r

2, S bo, IC(β1).

Calcular el límite de detección:

LD=(3.3 × S bo ) /b1

El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señalde ruido.♣Criterios de aceptación:

r 2 ≥ 0.98IC(β1), no debe incluir el cero.

El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 8.

• Limite de cuantificación: 1)Señal de Ruido:

♣ Metodología.- Se aplica en métodos que utilizan instrumentos para medir larespuesta analítica y presentan una señal de ruido basal.Determinar la señal de blancos (reactivos. Placebos analíticos, etc.) y la señal demuestras analíticas (analitos, placebos adicionados, etc.) a concentracionesconocidas del analito, inferiores o que incluya la especificación del contenido /valoración de la prueba de impurezas. Determinar la cantidad del analito cuya


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señal sea similar o mayor al blanco en una proporción de 10 a 1, lo quecorresponde a la concentración asociada al limite de detección. Verificar quedicha cantidad corresponda al limite de cuantificación, evaluando la exactitud yRepetibilidad del valor estimado.


El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la pruebade impurezas.

2)LC con base en curva de calibración y desviación estándar de los blancos:

♣ Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como noinstrumentales.Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) avalores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la

prueba de impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del analito.Simultáneamente, preparar 5 blancos. Medir las respuestas analíticas. Calcular

b1, r 2 e IC(β1).

Para los blancos, calcular S b de los blancos.Calcular el límite de cuantificación:

LD=(10 × S b ) /b1

Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite decuantificación.

♣Criterio de aceptación:r 2 ≥ 0.98IC(β1), no debe incluir el cero.

El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la pruebade impurezas.Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

3)LC con base en la curva de calibración en la desviación estándar de

regresión:


prueba de impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del analito.Medir las respuestas analíticas.

Calcular b1, r 2, Sy/x, IC(β1).Calcular el límite de cuantificación:

LC=(10 × Sy/x ) /b1

Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite decuantificación.



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El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la pruebade impurezas.Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

4)LC con base en la curva de calibración y la desviación estándar de laordenada al origen:


prueba de impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del analito.Medir las respuestas analíticas.Calcular b1, r

2, S bo, IC(β1).Calcular el límite de cuantificación:

LC=(3.3 × S bo ) /b1

Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite decuantificación.♣Criterios de aceptación:


El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la pruebade impurezas.Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 9.

• Robustez: ♣ Metodología.- Establecer los factores instrumentales (temperatura y presiónde la columna) y/o no instrumentales (pH de fases) relacionados al método ysean críticos. En condiciones normales y distintas de operación, analizar lamuestra por triplicado. Reportar el contenido/potencia/valoración del analito enla muestra de condiciones normal y distintas, expresadas como %.Calcular ŷ0, ŷ1, di.

♣Criterios de aceptación:di ≤ 2% métodos cromatográficos y volumétricosdi ≤ 3% para métodos químicos o espectrofotométricosdi ≤ 5% para métodos biológicos





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Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos como ladistribución t de Dunnett (para 3 o más condiciones) o t de Student (para 2condiciones), incluyendo la condición normal.

•

Tolerancia: ♣ Metodología.- Establecer los factores ajenos al equipo (diferentes equipos,

lotes de reactivos) que se presentan al reproducir el método en otras condicionesde uso. Fijar 2 condiciones de uso y analizar la muestra por triplicado a cadacondición. Reportar el contenido/potencia/valoración del analito en todas lasmuestras.Calcular y, S y CV del contenido/potencia/valoración.

♣Criterios de aceptación:CV ≤ 2% métodos cromatográficos y volumétricosCV ≤ 3% para métodos químicos o espectrofotométricosCV ≤ 5% para métodos biológicos




Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos. Uno deellos es aplicar un análisis de varianza con un criterio de clasificación paradeterminar si al menos una de las condiciones de uso es diferente, si se concluyeque si, se realiza una prueba estadística de comparaciones múltiples paraidentificar aquellas condiciones que dan lugar a resultados diferentes.

SUSTACIAS DE REFERECIA:

Las sustancias de referencia constituyen un componente propio del método y una herramientaen la evaluación de los parámetros de desempeño, lo que permite establecer la confiabilidad dela metodología. Para su adquisición se debe contar con procedimientos para su manejo yaplicación, así como registros del uso y con la documentación que avale una buena práctica demanejo de dichas sustancias.

• Manejo.- Cada sustancia de referencia debe almacenarse, manejarse y utilizarse deacuerdo con las especificaciones correspondientes. Cualquier condición especial dealmacenamiento debe indicarse en el marbete y (o) certificado analítico.Todas las sustancias deben contar con su identificación y registro, teniendo como

mínimo las siguientes:

Para sustancias de referencia primarias:A) Nombre de la sustancia de referencia,B) Cantidad,,C) Lote del producto,D) Clave (para uso interno)E) Fecha de adquisición,F) Pureza (potencia),


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G) Fecha de caducidadH) Riesgo potencial de manejo, eI ) Indicaciones especiales.

Para sustancias de referencia secundaria:A) Nombre de la sustancia de referencia,B) Cantidad certificada,

C) Lote interno,D) Clave,E) Fecha de certificación, yF)

Potencia en relación con la sustancia de referencia.La información mínima para su registro es:

A)

Nombre,B)

Lote,C)

Clave de identificación interna,D) Procedencia (USP, BP, COSUFAR, etc.),E)

Fecha de adquisición,F)

Fecha de empleo,G)

Uso,

H)

Cantidad empleada,I)

Cantidad remanente,J)

Analista que la utiliza, yK)

CaducidadPara las sustancias de referencia secundaria, conviene además:

A)

Nombre,B) Lote,C)

Cálculos para obtener la potencia,D) Gráficas,E)

Certificado de análisis del materialEn la validación de métodos, estos registros son críticos.Se debe contar con lineamientos que aseguren la no-utilización de sustancias de

referencia caducas.

•

Tratamiento: Cualquier tratamiento previo al que deba someterse la sustancia de referencia lodebe contemplar la propia metodología, o en su caso, debe especificarse en sumarbete.

Si la sustancia de referencia debe secarse antes de utilizarse, se deberán seguirlas instrucciones de la etiqueta o certificado de análisis; se realizará en otroenvase al original y el excedente se desechará.

• Procedencia: Algunos centros especializados que proveen sustancias de referencia son:

*British Pharmacopoeia (BP), European Pharmacopoeia (EP)*European Pharmacopoeia Chemical Refernce Substances (EPCRS),*Comité de Sustancias Farmacéuticas de Referencia (COSUFAR)*Organización Mundial de la Salud (OMS)*Secretaría de Salud (SSA), y


17/43

*United States Pharmacopeia (USP)

REVALIDACIÓ:

Se deben establecer y justificar criterios apropiados para revalidación de métodos analíticos, asícomo mantener un control de cambios. Cualquier cambio crítico a un método analítico da lugar

a uno nuevo y por lo tanto requiere de una validación como tal.La siguiente tabla establece cambios en el método, su impacto y el parámetro de desempeño arevalidar:

CAMBIO IMPACTA PARÁMETRO A REVALIDARDISPOSITIVO DE MEDICIÓN

DEL INSTRUMENTO DEMEDICIÓN

VARIACIÓN EN SISTEMADE MEDICIÓN

PRECISIÓN DEL SISTEMAADECUABILIDAD DEL SISTEMA

CONCENTRACIÓN DE LASOLUCIÓN DE REFERENCIA

EXACTITUD DEL MÉTODO LINEALIDAD DEL SISTEMA YEXACTITUD DEL MÉTODO

FORMULACIÓN DELPRODUCTO

EXACTITUD DEL MÉTODO EXACTITUD Y REPETIBILIDADDEL MÉTODO

LINEALIDAD DEL MÉTODOESPECIFICIDAD

EQUIPOS VARIACI N DEL M TODO TOLERANCIAPROVEEDOR DE COLUMNAS VARIACIÓN DEL MÉTODO TOLERANCIA

COMPARACIÓ DE 2 MÉTODOS AALÍTICOS:

Cuando se quieren comparar 2 métodos para aplicaciones de contenido/potencia/valoración, seemplean los siguientes procedimientos:

•

Estudio de Comparación de Parámetros de Desempeño: Se utiliza cuando los dos métodos han sido validados y se quiere comparar sus

parámetros de desempeño. En función a su aplicación analítica se indican los parámetros de desempeño a estudiar:

CAMBIO COTEIDO/POTECIA/VALORACIÓ PAR METRO A REVALIDAR ESPECIFICIDAD

PARÁMETROS EXACTITUD Y REPETIBILIDAD

DE LINEALIDAD DEL MÉTODO

DESEMPEÑO PRECISION DEL MÉTODO O PRECISIÓN INTERMEDIA

Los parámetros analíticos a comparar, así como los criterios para establecer la igualdadde dichos parámetros, son los siguientes:

1) Especificidad:

Debe cumplir para cada método analítico, demostrando su especificidad oexactitud.

2) Repetibilidad en exactitud:

♣ Metodología.- De los datos de exactitud y Repetibilidad utilizar la informacióndel porcentaje de recobro. Calcular S

2 del porcentaje de recobro de cada

método.


18/43

♣Criterios de aceptación:El intervalo de confianza para la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1.Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 12.

3) Repetibilidad en Linealidad del Método:

♣ Metodología.- De los datos de linealidad del método, utilizar la información

del porcentaje de recobro. Calcular la S2

del porcentaje de recobro de cadamétodo.♣Criterios de aceptación:El intervalo de confianza para la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1.Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 13.

4)Exactitud:

♣ Metodología.- De los datos de exactitud y Repetibilidad, utilizar lainformación del porcentaje de recobro. Calcular la S2, ŷ del porcentaje derecobro de cada método.♣Criterios de aceptación:El intervalo de confianza para la diferencia de las 2 medias poblacionales del

porcentaje de recobro, debe incluir el valor de cero.Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.El análisis estadístico de los resultados, presenta 2 situaciones:

a)Los métodos tienen la misma Repetibilidad (varianzas iguales) b)Los métodos tienen diferente Repetibilidad (varianzas diferentes);

por lo tanto se tiene que realizar el estudio de comparación de Repetibilidad deambos métodos.Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 14.

5) Linealidad del Método:

♣ Metodología.- De los datos de linealidad utilizar la información del porcentajede recobro así como la cantidad adicionada y la cantidad recuperada de cadamétodo. Calcular la

♣Criterios de aceptación: Anexo 15.

6) Precisión del Método:

♣ Metodología.- De los datos de precisión del método, utilizar la información delcontenido/potencia/valoración del analito de cada método. Calcular S21 y S

22.

♣Criterios de aceptación: El intervalo de confianza para la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1.Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo16.

•

Estudio de Correlación: Se utiliza cuando se comparan dos métodos cuyos resultados se expresan enunidades diferentes.Se aplica a métodos de contenido/valoración/potencia y los parámetros a evaluarson:

1) Proporcionalidad:


19/43

No necesariamente establecen equivalencia de resultados, sino proporcionalidad,ya que en muchas ocasiones la respuesta analítica es diferente.

a) Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar un placeboanalítico.♣ Metodología.-Preparar una cantidad suficiente de placebo analítico con los

componentes que están comúnmente en la muestra, de tal modo que pueda seranalizado por ambos métodos en tres diferentes niveles del analito, que incluyala especificación.Del placebo analítico preparado adicionarle analito al nivel inferior. Fraccionaren tres muestras y analizar cada muestra por ambos métodos bajo las mismascondiciones de cada método para determinar el contenido/valoración/potencia.Repetir este procedimiento con el nivel del 100% superior.Reportar la relación contenido/valoración/potencia de cada método en cadamuestra del método a comparar (y), método de referencia (x). Calcular b1, b0, r

2,IC(β1), CVy/x.

b) No se conocen los componentes de la muestra.

♣ Metodología.- Seleccionar 9 muestras del producto cuyo nivel del analitocumpla con la especificación, fijar una etapa de los métodos analíticos en loscuales transfiera una mayor o menor cantidad e la muestra con el objeto de podervariar el nivel del analito. Tener 3 muestras con nivel bajo, 3 nivelescorrespondientes al 100% y 3 con un nivel alto del analito. Las 9 muestras seanalizan por ambos métodos en las mismas condiciones analíticas de cadamétodo. Determinar el contenido/valoración/potencia de cada muestra.Reportar la relación contenido/valoración/potencia del método a comparar (y), elmétodo de referencia (x). Calcular b1, b0, r

2, IC(β1), CVy/x.♣Criterios de aceptación: El IC(β1) no debe incluir el cero.

Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo17.

2) Precisión:

El método no oficial deberá tener una precisión igual a mejor que el métodooficial, o que su precisión sea aceptable para la aplicación analítica.Inicialmente se debe establecer el método de referencia y el método a comparar.♣ Metodología.-Tanto con el método de referencia como el método a comparar,dos analistas en dos días deben analizar por triplicado muestras independientes(pesadas o alícuotas) de un lote homogéneo de producto, cuyo nivel de analitoesté incluido dentro de la especificación. Reportar elcontenido/potencia/valoración del analito de todas las muestras en % para ambos

métodos.

♣Criterios de aceptación: El intervalo de confianza unilateral inferior, para la razón de varianzas delmétodo a comparar respecto del método de referencia, no debe exceder el valorde 1.Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 18.


20/43

DOCUMETACIÓ:

Las actividades de la validación de un método analítico deben ser sustentadas por los siguientesdocumentos:

a) Protocolo, cuyo contenido es:1. Titulo

2. Propósito u Objetivo,3. Responsabilidades,4. Plan de prueba describiendo los parámetros de desempeño que permitanverificar la aplicación analítica deseada,5. Criterios de aceptación para cada parámetro,6. Formato de registro de resultados.

b) Reporte, cuyo contenido es:1. Titulo,2. Resultados,3. Análisis de resultados,4. Confrontación contra los criterios de aceptación,5. Conclusión

Es crítico documentar los registros analíticos; dicha documentación deberá estar ordenada ydisponible, en responsabilidad del área de calidad.

COCORDACIA CO GUIAS ITERACIOALES:

Esta guía es equivalente a: Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures

ICH-Q2Q, March 1995 Guideline on the Validation of Analytical Procedures, Methodology,

Availability. Notice ICHQ2B. USP24. Validation of Compendial Methods. Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods CDER.

November 1994, CMC 3.

BIBLIOGRAFIA:

Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 7a Ed. México (2000). Métodos Analíticos Validación Guías Generales de Validación de la DGCIS,

SSA (1989). Ley General de Salud (1997) NMX-CC-1-1990 Sistemas de Calidad Vocabulario


21/43

NMX-CC-2-1990 Sistemas de Calidad- Gestión de Calidad, Guía para laSelección, el Uso de Normas de Aseguramiento de Calidad.

Reglamento de Insumos para la Salud (1998). Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-1993. Buenas prácticas de

fabricación para establecimientos de la industria químico farmacéuticadedicados a la fabricación de medicamentos.

NOM-177-SSA1-1998 “Que establece las pruebas y procedimientos parademostrar que un medicamento es intercambiable” Guidance for Industry Bioanalytical methods Validation for Human Studies,

December, 1998 FDA. Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures ICH-Q2A,

March 1995. Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods, CDER,

November 1994, CMC 3. Guideline for Industry Analytical Procedures and Methods Validation, August

2000, FDA.

Guideline for submitting Samples and Analytical Data for Methods Validation,February 1987, FDA.

ICH Harmonised Tripartile Guideline Validation Analytical ProceduresMethodology 6 Nov 1996.

USP24, Validation of Compendial Methods. Norma Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-1993, Estabilidad de medicamentos. Diseño y Análisis de Experimentos, Montgomery D. C., Grupo Editorial

Iberoamérica, 3ª Ed. México (1991).

AEXOS:


22/43

UMERO COTEIDO1 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL SISTEMA2 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ADECUABILIDAD DEL SISTEMA3 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA

4 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA EXACTITUD Y RepetibilidadDEL MÉTODO5 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL MÉTODO6 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISION DEL MÉTODO

(PRECISIÓN INTERMEDIA)7 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ESTABILIDAD ANALÍTICA

DE LA MUESTRA8 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE DETECCIÓN9 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE CUANTIFICACION

10 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ROBUSTEZ11 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA TOLERANCIA12 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD Y EXACTITUD

PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS13 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD EN

LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS

14 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN EXACTITUD PARA COMPARACIÓNDE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS15 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN LINEALIDAD DEL MÉTODO

PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS16 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN PRECISIÓN DEL

MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS17 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PROPORCIONALIDAD DE

MÉTODOS EN ESTUDIOS DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE2 M TODOS ANAL TICOS

18 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL MÉTODOEN ESTUDIO DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS

19 TABLA ESTAD STICA DE LA DISTRIBUCI N t DE Student20 TABLAS ESTADÍSTICAS DE LA DISTRIBUCIÓN F DE FISHER21 COMENTARIOS RESPECTO A LOS CÁLCULOS Y REGLAS DE REDONDEO

AEXO 1. FÓRMULAS Y PROCEDIMEIT O DE CÁLCULO PARA PRECISIÓDEL SISTEMA.

A)FORMULAS:Media Aritmética


23/43

n

∑= yy

Desviación Estándar

( ) ( )( )1 22 −−= ∑∑ nnnS yy

Coeficiente de variación

100*y

S CV =

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultadosCalcular Σy, Σy2 y determinar n.

Calcular ŷ y SCalcular el CV

AEXO 2. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARAADECUABILIDAD DEL SISTEMA.

A)FORMULAS:Media Aritmética

n

∑= yy

Desviación estándar

( ) ( )( )1

22

−

−= ∑∑

nn

nS

yy


100*y

S CV =



AEXO 3. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARA LIEALIDADDEL SISTEMA.

A)FORMULAS:Pendiente


24/43

( )∑ ∑∑ ∑ ∑

−

−=

221

x xn

y x xynb

Ordenada al origen

n

xb yb

∑ ∑−= 10

Coeficiente de determinación) ) ))

( ) ( )( ) ( ) ( )( )22222

2∑∑∑∑

∑∑∑−−

−=

y yn x xn

y x xynr

Intervalo de confianza para la pendienteIC(β1) = b1 ± t0.975,n-2S b1

( )∑ ∑−

=

n

x x

S S x yb2

2

1/1

22 1

/−

−−= ∑ ∑ ∑n

yb xyb yS

o

x y

t0.975, n-2 = Referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t deStudent.

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultadosCalcular Σx, Σy, Σx2, Σy2, Σxy, y determinar n.Calcular b1, b0, r

2 Calcular el Sy/x y S b’ Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(β1)

AEXO 4. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARA EXACTITUDY REPETIBILIDAD DEL MÉTODO.A)FORMULAS:

Media aritmética

n

∑= yy Desviación estándar

( ) ( )

( )1

22

−

−

=

∑∑nn

n

S

yy


100*y

S CV =

Intervalo de confianza para la media poblacional


25/43

n

S t y IC n 1,975.0)( −±= µ

t0.975, n-1 Referirse al anexo 19 para determinar el valor de t deStudentn = numero de recobros.

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultadosCalcular Σy, Σy2 y determinar n.Calcular ŷ y SCalcular el CVDeterminar en el anexo 19 t0.975, n-1 y calcular IC(µ)

AEXO 5. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARA LIEALIDADDEL MÉTODO.5.1 CANTIDAD ADICIONADA VS CANTIDAD RECUPERADA

A)FORMULAS:Pendiente

( )∑ ∑∑ ∑ ∑

−

−=

221

x xn

y x xynb

Ordenada al origen

n

xb yb

∑ ∑−= 10

Coeficiente de determinación

( ) ( )( )( )( ) ( )( ) ( ) ( )( )2222

2

2 ∑∑∑∑∑∑∑

−−

−

= y yn x xn

y x xyn

r

Intervalo de confianza para la pendienteIC(β1) = b1 ± t0.975,n-2S b’

( )∑ ∑−

=

n

x x

S S x yb2

2

1/'

2

2 1/

−

−−= ∑ ∑ ∑

n

yb xyb yS

o

x y

t0.975, n-2 = Referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t deStudent.

Intervalo de confianza para la ordenada al origenIC(βo) = bo ± t0.975,n-2S bo


26/43

( )( )

∑ ∑−+=

n

x x

x

nS S x ybo

22

21/

n

x x

∑= Coeficiente de variación de regresión

100/

/ ×=y

x y x y

S CV

n

∑= yy

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultados

Calcular Σx, Σy, Σx2, Σy2, Σxy, y determinar n.Calcular b1, b0, r

2 Calcular el Sy/x y S b’ Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(β1)Calcular x y S bo Calcular IC(b0)Calcular el CVy/x

5.2 PORCENTAJE DE RECOBROA)FORMULAS:Media aritmética

n

∑= yy


( ) ( )( )1

22

−

−= ∑∑

nn

nS

yy


100*y

S CV =

Intervalo de confianza para la media poblacional

n

S t y IC n 1,975.0)( −±= µ



27/43

Calcular ŷ y SCalcular el CVDeterminar en el anexo 19 t0.975, n-1 y calcular IC(µ)

AEXO 6. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARA PRECISIÓ

DEL MÉTODO (PRECISIÓ ITERMEDIA).A)FORMULAS:

Media aritmética

n

∑= yy Desviación estándar

( ) ( )( )1

22

−

−= ∑∑

nn

nS

yy


100*y

S CV =

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultadosCalcular Σy, Σy2 y determinar n.Calcular ŷ y SCalcular el CV

AEXO 7. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARAESTABILIDAD AALÍTICA DE LA MUESTRA.A)FORMULAS:

Media aritmética del análisis inicial

on

0∑= yy0 no = número de muestras del análisis inicial

Media aritmética del análisis de cada condición de almacenaje

1n

∑=

1

1

y

y n1 = número de muestras del análisis de la i-ésima condición de almacenaje

Diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición dealmacenaje respecto de la media aritmética del análisis inicial

01 y ydi −=


28/43

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultadosCalcular Σy0, Σy1, Σy2, Σy3 y determinar no, n1, n2, n3 Calcular ŷo, ŷ1, ŷ2, ŷ3 Calcular di

AEXO 8. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARA LIMITE DEDETECCIÓ.8.1 SEÑAL RUIDO

Tabular los resultados.8.2 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓNESTÁNDAR DE LOS BLANCOSA)FORMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACIÓN:

Pendiente

( )∑ ∑∑ ∑ ∑

−

−=

221

x xn

y x xynb


) ) ))( ) ( )( ) ( ) ( )( )2222

22

∑∑∑∑∑∑∑

−−

−=

y yn x xn

y x xynr

Intervalo de confianza para la pendiente

IC(β1) = b1 ± t0.975,n-2S b1

( )∑ ∑−=n

x x

S S x yb 22

1/1

2

2 1/

−

−−= ∑ ∑ ∑

n

yb xyb yS

o

x y

n

xb yb

∑ ∑−= 10 Intervalo de confianza para la pendiente

t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de

Student

B)FORMULA PARA LOS BLANCOSDesviación estándar de los blancos


29/43

( ) ( )( )1

22

−

−= ∑∑

nn

nS b

yy

n = numero de blancos

C)FORMULA PARA EL LIMITE DE DETECCIÓN

1

3.3

b

S LD

b×=

D)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIÓNTabular los resultadosCalcular Σx, Σy, Σx2, Σy2, Σxy, y determinar n.Calcular b1, r

2 Calcular el Sy/x y S b1, bo Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(β1)

E)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOS

Tabular los resultadosCalcular Σy, Σy2, y determinar n.Calcular S b Calcular el LD

8.3 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADA EN LA DESVIACIÓNESTÁNDAR DE REGRESIÓNA)FORMULAS

Pendiente

( )∑ ∑∑ ∑ ∑

−

−=

221

x xn

y x xynb


) ) ))( ) ( )( ) ( ) ( )( )2222

22

∑∑∑∑∑∑∑

−−

−=

y yn x xn

y x xynr


IC(β1) = b1 ± t0.975,n-2S b1

( )∑ ∑−

=

n

x x

S S x yb 22

1/1

2

2 1/

−

−−= ∑ ∑ ∑

n

yb xyb yS

o

x y


30/43

n

xb yb

∑ ∑−= 10

t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

Limite de detección

1

/3.3b

S LD

x y×=

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULOTabular los resultadosCalcular Σx, Σy, Σx2, Σy2, Σxy, y determinar n.Calcular b1, r

2 Calcular el Sy/x y S b’, bo Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(β1)Calcular el limite de detección

8.4 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN

ESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGENA)FORMULASPendiente

( )∑ ∑∑ ∑ ∑

−

−=

221

x xn

y x xynb


) ) ))( ) ( )( ) ( ) ( )( )2222

22

∑∑∑∑∑∑∑

−−

−=

y yn x xn

y x xynr

Intervalo de confianza para la pendienteIC(β1) = b1 ± t0.975,n-2S b1

( )∑ ∑−

=

n

x x

S S x yb2

2

1/1

2

2 1/

−

−−= ∑ ∑ ∑

n

yb xyb yS

o

x y

n

xb yb ∑ ∑−= 10


Desviación estándar de la ordenada al origen


31/43

( )( )

∑ ∑−+=

n

x x

x

nS S x ybo

22

21/

n

x x

∑=

Limite de detección

1

3.3

b

S LD

bo×=


2

Calcular el Sy/x y S b’, bo Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(β1)Calcular x y S bo Calcular el LD

AEXO 9. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARA LIMITE DECUATIFICACIÓ.9.1 SEÑAL RUIDO

Tabular los resultados.8.2 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓNESTÁNDAR DE LOS BLANCOS

A)FORMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACIÓN:Pendiente

( )∑ ∑∑ ∑ ∑

−

−=

221

x xn

y x xynb


( ) ( )( )( )( ) ( )( ) ( ) ( )( )2222

22

∑∑∑∑∑∑∑

−−

−=

y yn x xn

y x xynr


IC(β1) = b1 ± t0.975,n-2S b1

( )∑ ∑−

=

n

x x

S S x yb2

2

1/1


32/43

2

2 1/

−

−−= ∑ ∑ ∑

n

yb xyb yS

o

x y

n

xb yb

∑ ∑−= 10


B)FORMULA PARA LOS BLANCOSDesviación estándar de los blancos

( ) ( )( )1

22

−

−= ∑∑

nn

nS b

yy

n = número de blancos

C)FORMULA PARA EL LIMITE DE CUANTIFICACIÓN

1

10b

S LC b×=

D)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIÓNTabular los resultadosCalcular Σx, Σy, Σx2, Σy2, Σxy, y determinar n.Calcular b1, r

2 Calcular el Sy/x y S b’, bo Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(β1)

E)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOSTabular los resultados

Calcular Σy, Σy2

, y determinar n.Calcular S bCalcular el LC

9.3 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADA EN LA DESVIACIÓNESTÁNDAR DE REGRESIÓNA)FORMULAS

Pendiente

( )∑ ∑∑ ∑ ∑

−

−=

221

x xn

y x xynb


) ) ))( ) ( )( ) ( ) ( )( )2222

22

∑∑∑∑∑∑∑

−−

−=

y yn x xn

y x xynr


33/43


IC(β1) = b1 ± t0.975,n-2S b1

( )

∑ ∑−=

n

x

x

S S x yb2

2

1/1

2

2 1/

−

−−= ∑ ∑ ∑

n

yb xyb yS

o

x y

n

xb yb

∑ ∑−= 10 t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

Limite de cuantificación

1

/10

b

S LC

x y×=


2 Calcular el Sy/x y S b’, bo Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(β1)Calcular el LC

9.4 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓNESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGENA)FORMULAS

Pendiente

( )∑ ∑∑ ∑ ∑

−

−=

221

x xn

y x xynb


( ) ( )( )( )

( ) ( )( ) ( ) ( )( )2222

22

∑∑∑∑

∑∑∑−−

−=

y yn x xn

y x xynr


34/43


IC(β1) = b1 ± t0.975,n-2S b1

( )

∑ ∑−=

n

x

x

S S x yb2

2

1/1

2

2 1/

−

−−= ∑ ∑ ∑

n

yb xyb yS

o

x y

n

xb yb

∑ ∑−= 10 t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

Desviación estándar de la ordenada al origen

( )( )

∑ ∑−+=

n

x x

x

nS S x ybo

22

21/

n

x x

∑=

Limite de cuantificación

110

bS LC b×=


2 Calcular el Sy/x y S b’, bo Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(β1)Calcular x y S bo Calcular el LC


35/43

AEXO 10. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CÁLCULO PARA ROBUSTEZ.A)FORMULAS:

Media aritmética de la condición de operación.

0

0

n

y yo

∑= no = numero e muestras de la condición normal de operación

Media aritmética del análisis de cada condición de operación diferente ala condición normal

1

11

n

y y

∑= n1 = numero de muestras de la i-esima condición de operación

Diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición respecto dela media aritmética de la condición normal.

01 y-y=id

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultadosCalcular Σy0, Σy1, Σy2, y determinar no, n1, n2.Calcular ŷo, ŷ1, ŷ2.Calcular di

AEXO 11. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARATOLERACIAA)FORMULAS:

Media aritmética

n

∑= yy


( ) ( )( )1

22

−

−= ∑∑

nn

nS

yy


100*y

S CV =



36/43


AEXO 12. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARAREPETIBILIDAD E EXACTITUD PARA COMPARACIÓ DE 2

MÉTODOS AALÍTICOS.A)FORMULAS:Varianza

)( )1

222

−

−= ∑ ∑

nn

y ynS

Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza para la razón de varianzas, se debe establecer.

S12= varianza menor

S22= varianza menor

Intervalo de confianza para la razón de varianzas.

1,1,975.01

2

11,1,025.0

1

21212 2

22

222

2−−≤≤−− ×× nnnn F

S S

F S

S

σ

σ

F0.025,n2-1, n1-1 y F0.975, n2-1, n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fishern2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados

de libertad del numerador; y n1-1 son los grados de libertad de la varianzamenor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.

.n1 = numero de recobros del método de varianza menor

.n2 = numero de recobros del método de varianza mayor

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:

Tabular los resultadosCalcular Σy, Σy2 y determinar n para cada método analíticoCalcular la varianza de cada métodoDeterminar la varianza mayor (S2

2) y la varianza menor (S12)

Determinar en el anexo 20 F0.025, n2-1, n1-1y F0.925, n2-1, n1-1Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.

AEXO 13. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARAREPETIBILIDAD E LIEALIDAD DEL MÉTODO PARACOMPARACIÓ DE 2 MÉTODOS AALÍTICOS.A)FORMULAS:

Varianza

( )( )1

222

−

−= ∑ ∑

nn

y ynS


S12= varianza menor

S22= varianza menor


37/43


1,1,975.01

2

11,1,025.0

1

21212 2

22

222

2−−≤≤−− ×× nnnn F

S S

F S

S

σ

σ

F0.025,n2-1, n1-1 y F0.975, n2-1, n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher

n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los gradosde libertad del numerador; y n1-1 son los grados de libertad de la varianza

menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador..n1 = numero de recobros del método de varianza menor.n2 = numero de recobros del método de varianza mayor

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultadosCalcular el porcentaje de recobro de cada muestra en cada método (y), alobtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidadadicionada expresada en porcentaje.Calcular Sy, Sy2 y determinar n para cada método analíticoCalcular la varianza de cada métodoDeterminar la varianza mayor (S2


Determinar en el anexo 20 F0.025 n2-1, n1-1y y F0.925, n2-1, n1-1yCalcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.

AEXO 14. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO E EXACTITUDPARA COMPARACIÓ DE 2 MÉTODOS AALÍTICOS.14.1 COMPARACIÓN DE Repetibilidad DE AMBOS MÉTODOS:A)FORMULAS:

Varianza

)( )1

222

−

−= ∑ ∑

nn

y ynS


S12= varianza menor

S22= varianza menor


1,1,975.01

2

11,1,025.01

21212 222222

2−−≤≤−− ×× nnnn F S S F S

S

σ

σ

F0.025,n2-1, n1-1 y F0.975, n2-1, n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fishern2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados

de libertad del numerador; y n1-1 son los grados de libertad de la varianzamenor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.

.n1 = numero de recobros del método de varianza menor

.n2 = numero de recobros del método de varianza mayor


38/43

14.2 IGUAL REPETIBILIDA (VARIANZAS EQUIVALENTES):A)FORMULAS:

Media aritmética del método 1.

1

1

1

n

yy

∑=

Media aritmética del método 2.

2

2

2

n

yy

∑=

Varianza del método 1.

)( )1

222

11

1111

−

−= ∑ ∑

nn

y ynS

Varianza del método 2.

( )( )1

222

22

2222

−

−= ∑ ∑

nn

y ynS

Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.

( ) ( ) 2975.021 21 nnt IC +±=− 21 y-y µ µ

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultadosCalcular Σy, Σy2 y determinar n para cada método analíticoCalcular la varianza de cada métodoDeterminar la varianza mayor (S2


Determinar en el anexo 20 F0.025, n2-1, n1-1y F0.925, n2-1, n1-1Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.Tabular otra vez los resultados.Calcular Σy1, Σy2, Σy12, Σy22, y determinar n1 y n2.Calcular ŷ1, ŷ2 Calcular S

1

2, S2

2 Determinar en el anexo 19 t0.975, n1+n2 y calcular IC(µ1-µ2)

14.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES):A)FORMULAS:Media aritmética del método 1.Media aritmética del método 2.Varianza del método 1.Varianza del método 2.Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.


39/43



Determinar en el anexo 20 F0.025, n2-1, n1-1y F0.925, n2-1, n1-1

Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.Tabular otra vez los resultados.Calcular Σy1, Σy2, Σy12, Σy22, y determinar n1 y n2.Calcular ŷ1, ŷ2 Calcular S1

2, S22

Calcular glDeterminar en el anexo 19 t0.975, gl y calcular IC(µ1-µ2)

AEXO 15. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO E LIEALIDADDEL MÉTODO PARA COMPARACIÓ DE 2 MÉTODOSAALÍTICOS.15.1 CANTIDAD ADICIONADA (x) VS CANTIDAD RECUPERADA (y): A)FORMULAS:

SumatoriasPendiente del método 1.Pendiente del método 2.Ordenada al origen del método 1.Ordenada al origen del método 2.Desviación estándar de regresión.Intervalo de confianza para la diferencia de las 2 pendientes.Intervalo de confianza para la diferencia de las ordenadas al origen

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultadosCalcular Σx1, Σx12, Σx2, Σx22, Σy1, Σy12, Σxy1, Σy2, Σy22, Σxy1 ydeterminar n1 y n2.Calcular b11, b12, b01, bo2 Calcular Sx/y y S b11 – S b12 Determinar en el anexo 19 t0.97523, y calcular IC(β1-β2)Calcular x1, x2, S bo1-S bo2 Calcular IC(β01-β02)

15.2 PORCENTAJE DE RECOBRO:

15.2.1 COMPARACIÓN DE Repetibilidad DE AMBOS MÉTODOS A)FORMULAS:VarianzaIntervalo de confianza para la razón de varianzas.15.2.2 IGUAL Repetibilidad (VARIANZAS EQUIVALENTES)

A)FORMULAS:Media aritmética del método 1.Media aritmética del método 2.Varianza del método 1.


40/43

Varianza del método 2.Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.

15.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES):A)FORMULAS:Media aritmética del método 1.Media aritmética del método 2.

Varianza del método 1.Varianza del método 2.Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.



Determinar en el anexo 20 F0.025, n2-1, n1-1y F0.925, n2-1, n1-1Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.Tabular otra vez los resultados.

Calcular Σy1, Σy2, Σy12, Σy22, y determinar n1 y n2.Calcular ŷ1, ŷ2 Calcular S1

2, S22

Determinar en el anexo 19 t0.975, gl y calcular IC(µ1-µ2)

AEXO 16. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO E PRECISIÓ DELMÉTODO PARA COMPARACIÓ DE 2 MÉTODOS AALÍTICOS.A)FORMULAS:

VarianzaIntervalo de confianza para la razón de varianzas.



Determinar en el anexo 20 F0.025, n2-1, n1-1y F0.925, n2-1, n1-1Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.

AEXO 17. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARAPROPORCIOALIDAD DE MÉTODOS E ESTUDIO DECORRELACIÓ PARA COMPARACIÓ DE 2 MÉTODOSAALÍTICOS.A)FORMULAS:

PendienteOrdenada al origenCoeficiente de determinaciónIntervalo de confianza para la pendienteCoeficiente de variación de regresión.

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultados (datos primarios)Calcular Σx, Σy, Σx2, Σy2, Σxy, y determinar n.Calcular b1, b0, r

2


41/43

Calcular el Sy/x y S b’ Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(β1)

AEXO 18. FÓRMULAS Y PROCEDIMIETO DE CALCULO PARA PRECISIÓDEL MÉTODO E ESTUDIOS DE CORRELACIÓ PARACOMPARACIÓ DE 2 MÉTODOS AALÍTICOS

A)FORMULAS:Varianza del método oficial.Varianza del método no oficial.Limite unilateral inferior de confianza para la razón de varianzas.

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:Tabular los resultados (datos primarios)Calcular Σy1, Σy12, Σy2, Σy22, y determinar n1 y n2.Calcular la varianza del método oficial y del método no oficial.Determinar en el anexo 20 F0.05Calcular el limite unilateral inferior de confianza para la razón devarianzas.

AEXO 19. TABLA ESTADÍSTICA DE LA DISTRIBUCIÓ t DE Student.

GRADOS DELIBERTAD

t0.975 GRADOS DELIBERTAD

t0.975 GRADOS DELIBERTAD

t0.975

1 12.706 26 2.056 51 2.0082 4.303 27 2.052 52 2.0073 3.182 28 2.048 53 2.0064 2.776 29 2.045 54 2.0055 2.571 30 2.042 55 2.0046 2.447 31 2.040 56 2.0037 2.365 32 2.037 57 2.0028 2.306 33 2.035 58 2.0029 2.262 34 2.032 59 2.001

10 2.228 35 2.030 60 2.000

11 2.201 36 2.028 61 2.00012 2.179 37 2.026 62 1.99913 2.160 38 2.024 63 1.99814 2.145 39 2.023 64 1.99815 2.131 40 2.021 65 1.99716 2.120 41 2.020 66 1.99717 2.110 42 2.018 67 1.99618 2.101 43 2.017 68 1.99519 2.093 44 2.015 69 1.99520 2.086 45 2.014 70 1.99421 2.080 46 2.013 71 1.99422 2.074 47 2.012 72 1.99323 2.069 48 2.011 73 1.99324 2.064 49 2.010 74 1.99325 2.060 50 2.009 75 1.992


42/43


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Guía de Validación de Métodos Analíticoscolegio Qfb