GTC125 analiis microbiologicos

GUÍA TÉCNICA GTC COLOMBIANA 125

2005-10-26

GUÍA DE REFERENCIAS DE MÉTODOS HORIZONTALES DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS PARA BEBIDAS, ALIMENTOS Y ALIMENTOS PARA ANIMALES E: REFERENCES GUIDE FOR HORIZONTAL

MICROBIOLOGYCAL METHODS FOR BEVERAGE, FOOD AND ANIMAL FEEDING STUFFS

CORRESPONDENCIA: DESCRIPTORES: microbiología de alimentos – métodos

horizontales; microbiología de alimentos – alimentos para animales; microbiología de alimentos – bebidas.

I.C.S.: 07.100.30 Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC) Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435

Prohibida su reproducción Editada 2005-11-08

PRÓLOGO El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993. ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último caracterizado por la participación del público en general. La GTC 125 fue ratificada por el Consejo Directivo de 2005-10-26 Esta guía está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta guía a través de su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología. 3M COLOMBIA -DIVISIÓN DE MICROBIOLOGÍA- ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A. ALGARRA S.A. ALPINA S.A. AQUALAB LTDA. ASESORÍAS MICROBIOLÓGICAS ASINAL LTDA ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE MICROBIOLOGÍA AVESCO Y KLIK S.A. BIANÁLISIS BIOCONTROL LTDA. BIOIMÁGEN BIOMERIUX S.A. BIOQUILAB LTDA. BIOTRENDS LABORATORIOS CALIDAD MICROBIOLÓGICA CARULLA VIVERO S.A. CERCAL LTDA. COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES S.A. CONGELAGRO CREPES & WAFLES S.A. EMPRESA DE ACUEDUCTO Y ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ –E.S.P.– ENZIPAN DE COLOMBIA LTDA. FÁBRICA DE ESPECIAS Y CONDIMENTOS EL REY S.A.

FARMACOOP FRIGORÍFICO GUADALUPE S.A. FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S.A. GASEOSAS COLOMBIANAS S.A.

HOSPITAL DE SAN CRISTÓBAL HOSPITAL SAN JOSÉ INSTITUTO NACIONAL DE SALUD IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA. -LABFARVE- LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA VEGETAL LABORATORIO A.B.B.A. LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DEL EJÉRCITO

LABORATORIO LABCONTROL LABORATORIOS GRAM LARKIN LESNIAK E.U. LEVAPÁN S.A. MERCADEO DE ALIMENTOS DE COLOMBIA S.A. MERCK S.A. MICROBIÓLOGOS ASOCIADOS NULAB LTDA. PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

QUÍMICOS Y REACTIVOS LTDA. -QUIMIREL- REPRESENTACIONES BIOTECNOLÓGICAS LTDA. ROCHE DIAGNOSTICS

SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD SUIZO S.A. SURTIQUÍMICOS LTDA. UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las siguientes empresas: ASESORÍAS MICROBIOLÓGICAS BAVARIA S.A. CASA LUKER CENICAÑA CONGELAGRO CONSULTORÍAS MICROBIOLÓGICAS COOPERATIVA DE GANADEROS DE CARTAGENA LTDA. EJÉRCITO FRIGORÍFICO SUIZO S.A. INGENIO PICHICHI S.A. INGENIO RIOPAILA INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO -ICA- -INVIMA- INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS LABORATORIO MICROBIOLÓGICO SIS LLOREDA GRASAS S.A.

MERCK S.A. MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL. NESTLÉ DE COLOMBIA S.A. PASIFLORA COLOMBIANA S.A. PRODUCTORA DE CONCENTRADOS Y JUGOS DE FRUTA PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS LTDA. QUALA S.A. QUIOS LTDA. -RICA RONDO- INDUSTRIA NACIONAL DE ALIMENTOS S.A. TECNIMICRO LABORATORIO DE ANÁLISIS UNIDAD ADMINISTRATIVA DE SALUD PÚBLICA UNIVERSIDAD CATÓLICA INGECAL VIKINGOS

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN

GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

1

GUÍA DE REFERENCIAS DE MÉTODOS HORIZONTALES DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS PARA BEBIDAS, ALIMENTOS Y ALIMENTOS PARA ANIMALES 1. OBJETO 1.1 Esta guía brinda información sobre los métodos horizontales propuestos por diferentes entidades oficiales para el análisis de los alimentos. Son criterios mínimos que todos los laboratorios deberían considerar al establecer sus técnicas de análisis. 1.2 Esta guía fue diseñada para que la utilicen quienes son responsables de realizar los análisis microbiológicos de alimentos. 1.3 Esta guía presenta las características de los medios de cultivo, tiempos, temperatura y forma de expresión de los resultados para cada método horizontal propuesto. 1.4 Esta guía no pretende limitar solo el uso de los métodos horizontales, sino por el contrario presentar también las alternativas de las metodologías propuestas por entidades oficialmente reconocidas. 2. RESUMEN DE LA GUÍA Esta guía describe las directrices más importantes a tener en cuenta en la aplicación de un método horizontal, como son los medios de cultivo, los rangos de temperatura y los tiempos límites de incubación según el microorganismo a detectar. Aunque esta guía está prevista para aplicarla a todos los alimentos de consumo humano incluidos los productos lácteos, y alimentos de consumo animal, pueden existir ciertos alimentos a los cuales los métodos de ensayos descritos no aplican debido a la naturaleza de la muestra. 3. IMPORTANCIA Y USO La escogencia de un método horizontal para la evaluación de un alimento determinando su inocuidad o rechazo para consumo humano o animal y los resultados de los análisis, se usan para control de los procesos o evaluación de la conformidad con la reglamentación que establece los límites de aceptabilidad para un producto.


2

Los laboratorios que llevan a cabo muestreo de alimentos y generan datos estadísticos, y las personas que tienen la responsabilidad de seleccionar un laboratorio para realizar estudios de la calidad de los alimentos, necesitan utilizar criterios, directrices y recomendaciones de métodos oficiales para la evaluación de sus productos. La demostración y documentación por parte de un laboratorio de que hubo una selección apropiada del método para el análisis del alimento, incrementa la credibilidad de los datos producidos y promueve su aceptación. Por lo tanto, la guía proporciona recomendaciones para la selección de los diferentes métodos horizontales utilizados tanto a nivel internacional, como a nivel nacional para cada uno de los microorganismos que se pueden presentar en una muestra para analizar.


3

Tabla 1. Métodos horizontales para hongos y levaduras

Incubación Entidad oficial

Principio de la técnica Método Alimentos Medio cultivo

Temperatura Tiempo

Expresión de resultados

Filtración por membrana hidrofóbica

995.21 Todos los alimentos Agar YM - 11 25 oC ± 1 oC 50 h ± 2 h Número más probable (NMP) AOAC 2000

Capítulo 17 Recuento en

placa 997.02 Todos los alimentos Membrana hidrofóbicas Yeast and Mold Count

Plate 20 oC a 25 oC 5 d Contar cajas hasta 150 Colonias

Recuento en placa 1 OGY

Recuento en placa 2 DRBC

Recuento en placa 3 SMA + Clortetraciclina

STANDARD METHODS

Dairy Products 1992 16th

Capítulo 8.10 Recuento en placa 4

Todos los alimentos

PDA

25 oC ± 1 oC 5 d Se cuenta entre 15 y 150 colonias

ICMSF 1984 Recuento en placa 1 Todos los alimentos

Oxitetraciclina Gentamicina Extracto de levadura Glucosa (YGC)

20 oC a 24 oC 3 d a 5 d Se cuenta entre 30 y 300 colonias.

Calcular mohos y levaduras por aparte

INVIMA 1998 Recuento en placa 1 Todos los alimentos OGY 22 oC ± 2 oC 5 d a 7 d Se cuenta entre 20 y 100 colonias

Continúa . . .


4

Tabla 1. (Continuación)



Temperatura Tiempo Expresión de resultados

DRBC (M183)

DG18 ( M184) PCA (M124)+ Cloranfenicol

Agar maltosa (M185) Agar extracto Malta

(M182)

Recuento en placa/dilución Capítulo 18 Todos los alimentos

Agar Papa Dextrosa (M127)

25 °C ± 1 °C 5 d

DRBC (M183) Recuento en placa directo Capítulo 18

Habas, nueces, condimentos, café,

coco, etc. Alimentos que deben ser

abiertos con pinzas DG18 ( M184)

25°C ± 1 °C 5 d

Contar cajas entre 10 - 150 colonias

FDA - BAM 2001

Microscopia Fluorescencia Cuantificación

levaduras viables y no

viables

Capítulo 18 Bebidas y muestras liquidas Azul de Anilina NaOH


5





20.52 Todos los alimentos Agar Plate count+Cloramfenicol 22 °C a 25 oC 5 d Contar entre 15 - 150 colonias.

Reportar como UFC por g o ml

20.53 Cereales, arroz, nueces y condimentos Agar DG18 22 °C a 25 oC 5 d Contar entre 15 - 150 colonias.


20.541 Mohos acidofílicos Agar ADYS 25 oC 5 d a 7 d

20.542 Mohos Aflatosxigénicos Agar AFPA 32 oC 42 h a 48 h

20.543 Especies de Fusarium Agar CZID 25 oC 7 d

20.545 Especies De Mucor Agar MYCK 25 oC 5 d

20.546 Especies De Penicilium Agar DRYES 20 oC 7 d a 8 d

20.547 Levaduras resistentes a preservantes Agar Agar MAA o TGY 25 °C a 30 oC 3 d a 5 d

20.548 Hongos Xerofílicos Agar DG18 o MY50G 25 oC ± 1 °C 7 d

APHA Capítulo 20 Recuento

20.549 Levaduras dominantes en alimentos Agar MEA o TGY 25 oC ± 1 °C 3 d

Contar entre 15 - 150 colonias. Reportar como UFC por g o ml


6

Tabla 1. (Final)




NTC 4132 ICONTEC Recuento en

placa ISO 7954 Todos los alimentos

Agar extracto levadura, dextrosa,

cloranfenicol 25 oC ± 1 °C 3 d a 5 d Contar entre 15 - 150 colonias.


PDA

PLATE COUNT AACC Recuento en placa AACC 4250 Todos los alimentos

AGAR MALTA

22 °C a 25 oC 3 d a 5 d Contar entre 15 - 150 colonias. Reportar como UFC por g o ml


7

Tabla 2. Métodos horizontales para listeria monocytogenes

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas

Entidad oficial

Principio de la

técnica Método Alimentos Medio (s)

de cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C

Medio (s) de cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C


Tiempo y Temperatura °C


Tiempo y Tempera-

tura °C


OXA, Iluminación de Henry

PALCAM,

35 oC/24 h a 48 h

Coloración Gram, Catalasa, Oxidasa Prueba

CAMP Agar sangre

35 oC/48 h

LPM+esculin/Fe3+,

TSBYE*(A partir de este se inoculan

las bioquímicas

35 oC/24 h

LPM y pasar a:

30 oC/24 h a 48 h

Reducción de Nitrato (Caldo Nitrato M108)

35 oC/5 d

TSAYE 30 oC/24 h a 48 h SIM o MTM Amb/7 d

FDA-BAM 2001 Detección Capítulo 10 Todos los

alimentos Caldo EB 30 oC 4 h

EB+acrifla-vina, ácido nalidixico y ciclohexam

ida

30 oC 44 h

Caldo carbohidratos +: Dextrosa,

Esculina, Maltosa,

Ramnosa, Manitol, Xilosa

35 oC/7 d

Presencia ó ausencia

Continúa... * Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial


8



Entidad oficial

Principio de la


de cultivo Tiempo y

Temperatura °C Medio (s) de cultivo

Tiempo y Temperatuta °C


Tiempo y Temperatura

°C



Expresión de

resultados

Kits para Elisa FDA-BAM 2001

Detección Capítulo 10

Todos los alimentos Caldo EB 30 °C 4h

EB+acrifla-vina, ácido nalidixico y ciclohexamida

30 oC 44 h

Serología Agar Oxford y Agar Palcam.

Pasar a:

35 oC ± 2 oC/ 24 h ± 48 h Método Iluminación Henry

Agar Triptosa ácido

nalidixico. Pasar a:

Coloración Gram, Catalasa, Oxidasa Productos

Lácteos Caldo EB 30 oC ± 2 oC/24 h -48 h

Agar movilidad-

nitrato modificado

Hatano Schuch

Temperatura ambiente / 2 d -

5 d

Hemólisis 35 oC ± 2 C/24 h

CAMP

Xilosa, Ramnosa,

Manitol

35 oC ± 2 oC/24 h - 48 h

INVIMA Detección No. 20

Productos cárnicos

Caldo LEB + acriflavina

1 %

30 oC ± 2 oC/18 h -24 h

Caldo LEB2+

acriflavina 0,2 %

30 oC ± 2 oC/18 h -24 h

Agar tripticasa soya extracto

Levadura TSA-YE

35 oC ± 2 oC/ 18 h a 24 h

Serología


9


Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial

Principio de la

técnica Método Alimentos







°C



Expresión de

resultados

Agar sangre 48 h 37 ºC Caldo TSYE: Utilización de carbohidratos

7 d 37 ºC

Agar para motilidad 2 d -7 d 25 ºC

Enriqueci-miento y

Aislamiento 993.12

Lácteos, derivados lácteos,

cárnicos, derivados cárnicos.

Medio de enriqueci-

miento selectivo completo

48 h 30º C Medio Oxford medio TSYE 48 h 37 ºC

Medio de test CAMP 18 h -24 h 37 ºC

AOAC

Inmunoprecipitación 997.03

Productos lácteos, carnes rojas, cerdo, aves y

derivados, productos marinos, frutas,

vegetales, pastas,

chocolate, huevos y harina de

hueso

caldo MFB +Lic. O Caldo Frazer

28 h ±2 h 30 ºC BLEB 24±2h 30ºC INMUNOPRECIPITACIÓN



10



Principio de la








°C




Coloración Gram, Catalasa

Motilidad 25 ºC ± 2 ºC 2 d -5 d

Agar sangre de cordero

35 ºC ± 2 ºC 24 h ± 2 h

Fermenta-ción de

carbohidra-tos: ramnosa,

xilosa, manitol

35 ºC ± 2 ºC 24 h - 48 h hasta

5 d

NTC 4666 ISO 11290-1

Detección y aisla-miento

todos los alimentos

Caldo Fraser media

concentra-ción. Caldo

Leb 1 Caldo

Palcam

24 h 30 ºC ± 2 ºC

Caldo Fraser + agentes

selectivos. Caldo Leb

2 Caldo Palcam

24 h -48 h a 30 ºC ± 2 ºC

Agar Oxford Agar Palcam y

pasar a TSYEA

24 h - 48 h a 35 ºC ± 2 ºC

para TSYEA:18 h -24 h a 35 ºC ±

2 ºC

Serología, CAMP


Agar Oxford y Palcam ó

24 h a 48 h 35 ºC

Coloración Gram, Catalasa, Oxidasa

Agar LPM, y pasar a :

24 h a 48 h 30 ºC

36.511 leche y

productos lácteos

Caldo M52 48 h 30 ºC

TSA-YE 24 h - 48 h 30 ºC

Fermentación del manitol, ramnosa y xilosa

Caldo UVM y pasar a :

22 h ± 2 h 30 ºC ± 2 ºC

26 h a 48 h 35 ºC

APHA Capítulo

36

36512

Aisla-miento e Identifica-

ción

Productos cárnicos

Caldo FB 26 h -48 h 35 ºC

Agar MOX

26 h a 48 h 35 ºC ± 2 ºC

Hemólisis en agar sangre de caballo



11

Tabla 2. (Final)


Principio de la



Tiempo y Temperatu-ra °C





°C




agar LMP 24 h a 48 h 30 ºC

Coloración Gram, Catalasa, Oxidasa

Agar oxford pasar a :

24 h a 48 h 35 ºC

Agar sangre de cordero 48 h 35 ºC

TSA-YE 24 h 30º C

Urea Red de nitratos

TSI

5 d 35 ºC

SIM 7 d temperatura ambiente

MR-VP 48 h 35 ºC

Fermenta-ción

carbohidratosTSBYE + Dextrosa, esculina, maltosa, ramnosa, manitol, xilosa

7 d 35 ºC

Standard Methods for Dairy products

Detección 5,4A todos los alimentos Caldo LEB 2 días 30 ºC

CAMP


12

Tabla 3. (Métodos horizontales para Salmonella spp.


Principio de la




°C



°C

Medio (s) de

cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C



Expresión de

resultados

Huevos, leche, ponqués, bizcochos,

pan, formulas infantiles, caseína,

Harina de soya, fideos, macarrones,

spaghetti, queso, ensaladas

preparadas(con jamón, huevo, pollo, atún, pavo), frutas y

vegetales deshidratados,

carnes, crustáceos, pescados, coco, ancas de rana,

carcasas de conejo

Caldo Lactosa

35 oC/ 24 h ± 2 h

PARA ALIMENTOS CON ALTA CARGA MICROBIANA

CONSULTAR NORMAS NTC 4491-1 NTC 4491-2 NTC 4491-3 NTC 4491-4

TSI, LIA Urea

conven-cional

35 oC/24 h ± 2 h

Cáscara De Huevo, Huevo Liquido, Huevo

cocido, colores, sabores

Caldo TS+Sulfato

Ferroso

35 oC/ 24 h ± 2 h

Rappaport Vassiliadis

(RV) y

42 oC ± 0,2 oC/ 24 h ± 2 h

UREA Rápida

37 oC ± 0,5 oC/2 h Baño de María

Leche en polvo Solución

Verde Brillante

35 oC/ 24 h ± 2 h

Caldo Tetrationato

(TT)

43 oC ± 0,2 oC/ 24 h ± 2 h

Antisuero flagelar

polivalente

48 oC a 50 oC/1 h Baño de María

FDA - BAM Detección Capítulo 5

Levadura seca, especias Caldo TS 35 oC/ 24 h ±

2 h

Agar BS, XLD y HE

35 oC/ 24 h ± 2 h

Antisuero somático

polivalente 1 min


Continúa...


13



Principio de la


de cultivo


°C



°C

Medio (s) de

cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C



Expresión de

resultados

Dulces

Reconsti-tuted

nonfat dry milk

35 oC/ 24 h ± 2 h



Caldo Rojo fenol

dulcitol o Caldo Base

Púrpura con 0,5 %

dulcitol

35 oC/48 h ± 2 h


(RV) y

42 oC ± 0,2 oC/ 24 h ± 2 h Para cultivos mixtos

Caldo Triptona o Triptofano

35 oC/24 h ± 2 h

XLD Caldo KCN 35 oC/ 48 h ± 2 h

Agar Mac Conkey

Caldo Malonato 35 oC/48 h ± 2 h

Caldo Tetrationato

(TT)

35 oC ± 2,0 oC/ 24 h ± 2 h

Agar HE

35 °C/ 24 h ± 2 h

Test Indol

Caldo Lactosa

Rojo Fenol, o Lactosa Púrpura

35 oC/48 h ± 2 h

Caldo Sacarosa

Rojo Fenol, o Sacarosa

Púrpura

35 oC/48 h ± 2 h


Jugo Naranja (Pasteurizado y No

Pasteurizado

Caldo Pre-

enriquecimiento

Universal

35 oC/ 24 h ± 2 h

Caldo MR-VP 35 oC/48 h ± 2 h



14



Principio de la técnica Método Alimentos


Tiempo y Tempera-

tura °C



°C



°C



Expresión de

resultados

Agar Citrato Simmons 35 oC/96 h ± 2 h


Todos los alimentos

Agua De Peptona

Tamponada

35 oC ± 2 oC/

18 h -24 h Caldo Selenito Cistina y

35 oC ± 0,2 oC/ 18 h - 24 h

Coloración Gram

LIA Agar UREA

Lactosa Glucosa

Sacarosa Lisina

Movilidad Caldo Red

Nitrato TSI Citrato

Simmons Agar

fenilalanina Caldo

Triptofano Caldo MR-

VP

INVIMA Detección Leche en Polvo

Agua destilada +

5 ml de solución Verde

Brillante 0,1%

35 oC/18 h -24 h

Caldo Tetrationato (TT)+0,2 ml Solución de

Yodo + 0,1 ml Solución

acuosa de verde brillante

0,1 %

43 oC ± 0,2 oC/ 18 h - 24 h

Agar BS, Agar XLD y Agar Verde

brillante lactosa

sacarosa con novobiocina

35 oC ± 2 oC/ 24 h ± 2 h

Oxidasa

35 oC ± 2 oC/24 h - 48h


15



Principio de la




°C


Tiempo y Tempera-

tura °C



°C



Expre-sión de resulta-

dos

Leche Cruda, leche

pasteurizada. Quesos, yogurt

Caldo Lactosa 35 oC/24 h ± 2 h

Caldo Selenito Cistina y

TSI, LIA 35 oC/25 h ± 2 h y 48 h ± 2 h

Leche en polvo, caseína, postres

congelados, mantequilla

Solución Verde

Brillante 35 oC/24 h ± 2 h

Caldo Tetrationato

(TT)

35 oC/24 h ± 2 h

Agar BS, Agar XLD y Agar HE

35 oC/24 h ± 2 h

UREA Convencional 35 oC/24 h ± 2 h

UREA Rápida 37 oC ± 0,5 oC/2 h Baño de María

Antisuero flagelar

polivalente

48 oC - 50 oC/ 1 h Baño de

María

Antisuero somático

polivalente 1 min

Agar Lisina Decarboxilasa 35 oC/48 h ± 2 h

Caldo Rojo fenol dulcitol o Caldo Base Púrpura con 0,5% dulcitol

35 oC/48 h ± 2 h

Caldo Triptona o Triptofano

35 oC/24 h ± 2 h

Caldo KCN 35 oC/48 h ± 2 h

Standard Methods Detección Capítulo 5

No. 5,4 B

Todos los alimentos


Caldo Tetrationato

(TT)

35 oC/24 h ± 2 h

Agar BS, Agar XLD y Agar HE

35 oC/24 h ± 2 h


Presencia ó

ausencia


16



Principio de la





Tiempo y Tempera-

tura °C



°C



Expresión de

resultados

Test Indol Caldo Lactosa Rojo Fenol, o

Lactosa Púrpura

35 oC/48 h ± 2 h

Caldo Sacarosa Rojo

Fenol, o Sacarosa Púrpura

35 oC/48 h ± 2 h

Caldo MR-VP 35 oC/48 h ± 2 h


Standard Methods Detección Capítulo 5

No. 5,4 B Todos los alimentos


Caldo Tetrationato

(TT)

35 oC/24 h ± 2 h

Agar BS, Agar XLD y

Agar HE

35 oC/24 h ± 2 h

Sistemas multitest Rápidos


17



Principio de la



Tiempo y Tempera-

tura °C




Tiempo y Tempera-

tura °C


Tiempo y Tempera-

tura °C

Expresión de

resultados

Agar Lisina Hierro

35 oC a 37 ºC durante

24 h

Presencia ó ausencia de Salmonella en g de producto.

Levadura desecada Agua destilada

leche en polvo descremada y

entera

Agua destilada + 2 ml de

solución verde brillante al

1 %

caramelos y dulces

Leche en polvo reconstituida

con verde brillante

ICMSF Detección. 1

Subproductos grasos de

animales, coco

Caldo lactosa + 1 % de

Tergitol o agua de peptona tamponada

con 0,22 % de Tergitol

Caldo tetrationato

verde brillante

43 ºC ± 0,05 ºC 24 h.

Agar sulfito bismuto

35 ºC a 37 ºC durante 48 h

Agar triple azúcar hierro


18



Principio de la


de cultivo


°C



°C


Tiempo y Tempera-

tura °C



Expresión de

resultados



Agar BS Agar XLD Agar HE

35 oC/24 h ± 2 h

TSI Urea

convencional 35 oC/24 h ± 2 h


(RV)

42 ºC ± 0,2 oC/ 24 h ± 2 h LIA 35 oC/48 h ± 2 h

Caldo TBG

43 ºC ± 0,2 oC/ 24 h ± 2 h UREA Rápida

37 ºC ± 0,5 oC/ 2 h Baño de

María Antisuero flagelar

polivalente

48 ºC a 50 oC/ 1 h Baño de

María

Antisuero somático

polivalente 1 min

APHA Método de Referencia 37.5

Huevos, leche, ponqués,

bizcochos, pan, formulas

infantiles, caseína, Harina de soya,

fideos, macarrones,

spaghetti, queso, ensaladas

preparadas(con jamón, huevo,

pollo, atún, pavo), frutas y vegetales

deshidratados, carnes,

crustáceos, pescados, coco, ancas de rana,

carcasas de conejo


Caldo Rojo fenol dulcitol o Caldo Base

Púrpura bromocresol con 0,5 %

dulcitol

35 oC/48 h ± 2 h

Presencia/ ausencia


19



Principio de la






°C


Tiempo y Tempera-

tura °C



Expresión de

resultados

Caldo Triptona o Triptofano 35 oC/24 h ± 2 h

Caldo KCN 35 oC/48 h ± 2 h


PARA ALIMENTOS CON ALTA CARGA

MICROBIANA CONSULTAR NORMAS

NTC 4491-1 NTC 4491-2 NTC 4491-3 NTC 4491-4 Test Indol 35 ºC 24 h

Cáscara De Huevo, Huevo Liquido, Huevo cocido, colores,

sabores, Levadura seca,

Caldo TS 35 oC 24 h ± 2 h Caldo SC 35 °C/24 h ± 2 h

Caldo Lactosa púrpura

bromocresol o rojo fenol

35 oC/24 h a 48 h

Leche en polvo Solución

Verde Brillante

35 oC/24 h ± 2 h Caldo TBG

35 °C/24 h ± 2 h

Caldo Sacarosa Rojo

Fenol, o Sacarosa Púrpura

35 oC/48 h ± 2 h

especias de cebolla y ajo

Caldo lactosa 35 oC/24 h ± 2 h Caldo MR-VP 35 oC/8 h ± 2 h

Método de Referencia 37.5

Dulces Caldo lactosa 35 oC/24 h ± 2 h


Agar Lisina y Agar HE

ó 43 oC/24 h

APHA

Filtración Por

membrana Hidrofóbica

37.72

leche en polvo, huevo

pulverizado, queso

pulverizado, pimienta,

chocolate y pollo crudo

Caldo lactosa,

Caldo TS, Solución

Verde Brillante

35 oC/18 h a 24h Caldo TBG

35 oC/6 h a 8 h

Agar EF-18 35 oC/24 h


20









Tiempo y Tempera-

tura °C


Tiempo y Tempera-

tura °C

Expresión de

resultados

Todos los alimentos

Caldo lactosa, Caldo TS, Solución

Verde Brillante

35 oC/24 h ± 2 h Caldo TBG 35 oC/6 h a 8 h

Inmunodifusion 37.73

Carnes crudas

Caldo lactosa, Caldo TS, Solución

Verde Brillante

35 oC/24 h ± 2 h Caldo TGB 42 oC ± 0,5 oC/ 6 h a 8 h

1-2 TEST system 35 oC/14 h

Inmunoensayo Enzimático 37.74 Todos los

alimentos Medio no selectivo 35 oC/24 h ± 2 h Caldo SC o

TGB 35 oC/18 h a

24 h

Caldo -M

35 oC/6 h

APHA

Test Rápidos para la

detección de Salmonella

37.8

Todos los alimentos y muestras

ambientales

Métodos multitest aprobados por la AOAC


21



Principio de la técnica Método Alimentos Medio (s)

de cultivo


°C


Tiempo y Tempera-

tura °C

Medio (s) de

cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C

Medio (s) de

cultivo


Expresión de

resultados

Huevos deshidradatos, Caldo lactosa

24 h ± 2 h a 35 ºC

Agar TSI y LIA 24 h ± 2 h a 35 ºC

Leche entera en polvo

Agua + 1%

solución de

coloración verde

brillante

24 h ± 2 h a 35 ºC

Caldo selenito

cistina + 1-10 ml caldo tetrationato Test de

ureasa Baño de maría 2 h a 35 oC ± 0,5 ºC

Levadura activa desecada

Caldo tripticasa de soya

24 h ± 2 h a 35 ºC

Caldo selenito cistina

Caldo lactosa rojo de fenol

48 h ± 2 h a 35 ºC

Ajo y cebolla en polvo Caldo

tripticasa de soya

24 h ± 2 h a 35 ºC

Caldo sucrosa rojo de fenol

48 h ± 2 h a 35 ºC

Chocolates de leche y caseína

Caldo lactosa+

% solución

de coloración

verde brillante

24 h ± 2 h a 35 ºC

Medio MR/VP 48 h± 2 h a 35 ºC

Detección. 967.25

Leche en polvo instantánea libre de

grasa

Solución verde

brillante

24 h ± 2 h a 35 ºC

Caldo selenito

cistina + 1-10 ml caldo tetrationato

24 h ± 2 h a 35 ºC

XLD, Agar

Sulfito Bismuto, Agar para entéricos Hektoen

24 h ± 2 h a 35 ºC

Agar citrato de Simmons

96 h ± 2 h a 35 ºC

AOAC

Kit de identificación bioquímica

978,24 (a) Todos los alimentos Métodos multitest aprobados

por la AOAC



22






°C


Tiempo y Tempera-

tura °C

Medio (s) de

cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C

Medio (s) de

cultivo


Expresión de

resultados

Test Serológicos Aglutinación Todos los alimentos

Método de búsqueda por anticuerpos

fluorescentes

975.54 Todos los alimentos

ISO-GRID 991.12 Todos los alimentos

AOAC

Método de búsqueda

monoclonal calorimétrico

EIA


Positivo ó negativo


23






°C


Tiempo y Tempera-

tura °C

Medio (s) de

cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C

Medio (s) de

cultivo


Expresión de

resultados

Método de búsqueda

monoclonal calorimétrico

EIA

987.11

Todo tipo de alimentos excepto materias

primas de alimentos o alimentos con alta carga microbiana

Inmunoensayo enzimático

policlonal para salmonellas mótiles y no

mótiles


Ensayo de inmunofluores-cencia unido a

una enzima


AOAC

Inmunodifusión para

salmonellas mótiles




24





Tiempo y Tempera-

tura °C


Tiempo y Tempera-

tura °C


Tiempo y Tempera-

tura °C



°C

Expresión de

resultados

MSRV 993.07 Cocoa y chocolate

MSRV 995.07 Productos lácteos deshidratados

Método de conductancia 991.38 Todos los alimentos

Pollo, ostras, setas, camarones, alimento para aves y alimentos

altamente contaminados

Caldo lactosa

24 h ± 2 h a 35 ºC Detección. 995.2

Ancas de rana Caldo lactosa

24 h ± 2 h a 35 ºC

medio Rappaport-Vassiliadis +1-10 ml

caldo tetrationato

Baño de maría

24 h ± 2 h a 42 oC ±

0,2 ºC

Agar Sulfito

Bismuto, agar para entéricos Hektoen y

XLD

24 h ± 2 h a 35 ºC TSI y LIA 24 h ± 2 h a

35 ºC

Inmunoensayo enzimático

policlonal con caldo RV y caldo

tetrationato


AOAC

INMUNOPRECIPITACIÓN para salmonelas mótiles y no

mótiles




25

Tabla 3. (Final)


Principio de la



Tiempo y Tempera-

tura °C




Tiempo y Tempera-

tura °C


Tiempo y Tempera-

tura °C

Expresión de

resultados

medio Rappaport-Vassiliadis/ medio verde malaquita o Tetrationate

16 h a 18 h a 42,5 ºC ± 0,5 ºC

TSI, LIA y Urea

NTC Detección 4574

Alimentos de consumo

humano y para animales

Agua peptonada

tamponada, Caldo

lactosado

18 h - 24 h a 35 ºC ± 2 ºC

Medio Selenito/cistina

16-18 H a 35 ºC ± 2 ºC

Agar Rambach,

agar Hektoen,

agar McConkey, agar sulfito

bismuto, agar

salmonella-shiguella

(SS), agar verde

brillante A. XLD

24 h a 48 h a 35 ºC ± 2

ºC

Serología: sueros poli-

monovalentes

24 h - 48 h a 35 ºC ± 2 ºC


de Salmonella en 25 g de producto.

AACC 4225A Todos los alimentos

Caldo nutritivo

24 h ± 2 h a 35 ºC

Selenito cistina tetrationato 24 h ± 2 h a 42 ºC

Agar Hektoen, XLD, SB,

McConkey

24 h 35ºC Agar TSI, LIA y serológico

en BHI 24 h 35 ºC


26

Tabla 4. Métodos horizontales para aerobios


Principio de la técnica Método Alimentos Medio

cultivo Temperatura Tiempo Expresión de

resultados

Recuento en placa 966.23

Desmenuzados, congelados, precocidos, preparados,

nueces y carnes

Agar Plate count 35 oC ± 2 ºC 48 h ± 2 h

Conteo: 30 - 300 UFC Reportar como:

UFC/g

Filtración por membrana Hidrofóbica

986.32

Leche Pasterizada, Huevos en

polvo y cremas

TSFA 32 oC 48 h ± 2 h Total de bacterias/g o ml

Recuento en Placa 988.18 Productos

Lácteos Gel de pectina 32 oC ± 1 ºC 48 h ± 3 h


UFC/g

AOAC 2000 Capítulo 17

Recuento en Placa 990.12 Todos los

alimentos

Membrana hidrofóbicas

Aerobic Count

35 oC ± 1 ºC 48 h ± 3 h Conteo 30-300 UFC

Reportar como UFC/g o ml

Recuento en Placa 6,2 Class O Productos

Lácteos

Standard Methods

Agar 32 oC ± 1 ºC 48 h ± 3 h


UFC/g o ml

STANDARD METHODS

Diary products 1992 16th Capítulo 6

Recuento en placa 6.3 Productos

Lácteos


Aerobic Count

32 oC ± 2 ºC 48 h ± 3 h Conteo: 25 - 250 UFC

Reportar como: UFC/g

Recuento estándar en

placa Método 1 Todos los

alimentos Agar Plate

Count 29 oC a 31 oC 48 h 3d


UFC/g Recuento en

placa de siembra por extensión en

superficie

Método 2 Todos los alimentos

Agar Plate count 29 oC a 31 oC

72 h


UFC/g

Recuento en placa por

siembra de gotas en superficie con asa

calibrada


Agar Plate count 29 oC a 31 oC 48 h


UFC/g

ICMS 1984

Recuento en placa por

siembra con asa calibrada


Agar Plate count 29 oC a 31 oC 48 h


UFC/g

INVIMA 1998 Recuento en placa No. 2 Todos los


Count 35 oC ± 2 oC 48 h ± 2 h Conteo: 30 - 300 UFC


Todos los alimentos 35 oC ± 2 oC 48 h ± 2 h


UFC/g o ml FDA - BAM 2001

Recuento en Placa Capítulo 3

Lácteos

Agar Plate count

32 oC ± 1 oC 48 h ± 2 h Conteo: 25 - 250 UFC

Reportar como: UFC/g Continúa . . .


27

Tabla 4. (Final)


Principio de la

técnica Método Alimentos Medio

cultivo Temperatura Tiempo Expresión de

resultados

Recuento en placa 7.62 Todos los


count

Recuento directo en

placa 7.63 Todos los


count

Filtración por

membrana 7.71 Todos los


count


alimentos


Aerobic Count


UFC/g o ml

Método Pectin gel 7.73 Redi-gel

Método Membrana hidrofobica

7.74 Aerobic count hgmf

Método placa en espiral

7.75

Productos lácteos

Agar Plate count


UFC/g o ml

Método de asa

calibrada 7.76 Todos los


count

Recuento en placa

por siembra de gotas en superficie con asa

calibrada


Agar Plate count

APHA Capítulo 7

2001

7.78 Todos los alimentos Simplate

25 °C a 35 ºC 48 h ± 2 h

Conteo: 30 - 300 UFC Reportar

como: UFC/g o ml

ICONTEC Recuento Placa

NTC 4519/ISO

4833

Todos los alimentos

Standard Plate Count 35 oC ± 2 oC 48 h ± 2 h

Conteo: 30 - 300 UFC


Agar Plate Count

AACC Recuento Placa AACC 4211 Todos los

alimentos Buffer fosfato

(diluciones)

35 oC ± 2 oC 48 h ± 2 h

Conteo: 30 - 300 UFC



28

Tabla 5. Métodos horizontales para Staphylococcus. Aureus


Entidad oficial Principio de la técnica Método Alimentos

Medio (s) de

cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C


Tiempo y Tempera-

tura °C

Medio (s) de

cultivo




Expresión de

resultados

1. Caldo BHI

35 oC - 37°C/ 18 h -24 h Número Más

Probable 987.09 Todos los alimentos

Caldo tripticasa

soya + 10 % NaCl + 1 % Piruvato Na

35 oC/48 h Agar Baird

Parker

35 ºC - 37 oC/ 48 h

2. Coagulasa*

35 oC - 37 °C/ 4 h -18 h máx 48

h

Reportar el NMP según

Tabla

1. Caldo BHI

35 oC - 37°C/ 18 h - 24 h

AOAC 2000 Capítulo 17.5.02

Aislamiento y enumeración en superficie


Agar Baird

Parker 35 ºC-37 oC/48 h

2. Coagulasa*

35 oC - 37 °C/ 4h -18 h máx 48 h

Contar las cajas que

tengan entre 20 y 200 colonias

STANDARD METHOS

Diary products Cap 5


5.4 (f) Todos los alimentos

Agar Baird

Parker 35 ºC/45 h - 48 h 1. Caldo

BHI 35 oC/18 h - 24 h

Contar cajas entre 20 -

200 colonias

Continúa . . .

* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial


29




Medio (s) de

cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C


Tiempo y Tempera-

tura °C

Medio (s) de

cultivo




°C

Expresión de

resultados

2. Coagulasa* 35 ºC/6 h

3. Catalasa

4. Glucosa 37 ºC/5 d

5. Manitol 37 ºC/5 d

6. Sensibilidad Lisostafina 35 ºC < 2 h

7. Nucleasa Termoestable 35 ºC/4 h

Numero mas probable 5.4 (f.4) Todos los

alimentos

Caldo tripticasa soya +

cloruro de sodio

35 oC/48 h Agar Baird

Parker 35 ºC/48 h

8. Produccion de enterotoxin

35 ºC - 37 ºC/ 18 h -24 h

Número más probable (NMP)


Productos lácteos

Agar Manitol

agar S110

37 oC/24 h Similar al anterior Contar cajas

entre 20 - 200 colonias

STANDARD METHOS

Diary products Cap 5

Número Más Probable

5.4 (f.5)

Leches

Caldo Giolitti cantoni Caldo

Lactosa salado

37 oC/24 h Similar al anterior Número más

probable (NMP)



30




Medio (s) de

cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C



°C





Expresión de

resultados

Caldo BHI 35 oC/18 h -24 h 1 Caldo BHI 35 oC/18 h -

24 h Agar Baid

Parker 35 oC-37 oC/30 h -48 h Coagulasa* 35 ºC/4 h -24 h

2

Agar yema de huevo polimixina

telurito 35 oC-37 oC/24 h

Caldo BHI 35 oC/18 h -24 h

3 Agar Kranep

35 oC-37 oC/30 h -48 h Coagulasa* 35 ºC/4 h -24 h


4

Agar difosfato de fenolftaleina

con polimixina

35 oC-37 oC/24 h -48 h Caldo BHI 35 oC/18 h -24 h


200 colonias/

UFC por g o ml

ICMSF 1984

Numero mas probable 5

Todos los alimentos

Caldo telurito manitol glicina

35 oC - 37 oC/ 24 h -48 h

Agar leche sal 37 oC/24 h Coagulasa* 35 ºC/4 h -24 h

Número más

probable

1. Caldo BHI

35 oC ± 2 oC/18 h -24 h

INVIMA 1998 Capítulo 2 Numeral 8

Todos los alimentos

Agar Baid Parker 35 oC ± 2 oC/48 h

2. Coagulasa*

35 oC ± 2 oC/ 6 h y descartar a

las 24 h


200 colonias.

REPORTAR como UFC por g o ml



31



Entidad oficial Principio

de la técnica

Método Alimentos Medio (s) de cultivo

Tiempo y

Tempe-ratura °C


Tiempo y Tempera-

tura °C





Expresión de

resultados

1. Caldo BHI 35 oC ± 2 oC/ 18 h -24 h

2. Coagulasa* 35 oC ± 2 oC/6 h y descartar a las

24 h

3. Catalasa

4. Glucosa 37 oC/7 d

5. Manitol 37 oC/7 d

6. Sensibilidad Lisostafina

35 ºC/2 h

Recuento

Agar Baid Parker 35 ºC/45 h - 48 h

7. Nucleasa Termoestable 35 ºC/4 h


200 colonias

1. Caldo BHI 35 oC ± 2 oC/ 18 h -24 h

FDA -BAM 2001

NMP

Capítulo 12

Productos en los que se espere un pequeño

numero de S.aureus y alimentos

que contengan una gran

población de especies

competitivas

Caldo Tripticasa

Soya+NaCl+Piruvato de

sodio

35 oC/48 h ± 2 h

Agar Baird Parker 35 ºC/48 h

2. Coagulasa* 35 oC ± 2 oC/6 h y descartar a las

24 h

Reportar el NMP según

Tabla de NMP



32




de cultivo


°C







°C

Expresión de

resultados

1. Caldo BHI

35 ºC - 37 ºC/ 18 h - 24 h Procedimiento

de Enriquecimiento

selectivo

39.51

Alimentos que

contienen una pequeña población de

células injuriadas

Caldo Tripticasa

Soya + NaCl

35 ºC - 37 ºC/ 24 h ± 2 h

Agar Baird Parker

35 ºC - 37 ºC/ 46 h ± 2 h 3.

Coagulasa: plasma +

EDTA

35 oC-37 oC/ 6 h


200 colonias

1. Caldo BHI

35 oC - 37 oC/ 18 h -24 h

Procedimiento de

Enriquecimiento selectivo

39.52

Ingredientes alimenticios

crudos y alimentos no procesado

de los cuales se espera

que contenga grandes

poblaciones de especies competitivas

Caldo Tripticasa

Soya+NaCl+Piruvato de sodio

35 ºC -37 ºC/ 48 h ± 2 h

Caldo Giolitti

Cantoni

35 ºC - 37 ºC/ 24 h - 48 h

Agar Bard Parker

35 oC-37 oC/48 h ± 2 h 3.

Coagulasa: plasma +

EDTA

35 oC - 37 oC/ 6 h

Reportar NMP de

Estafilococos Coag /g

1. Caldo BHI

35 oC - 37 oC/ 18 h - 24 h

Conteo en Superficie

39.53 Alimentos

crudos y no procesados

Agar Baird Parker

sembrar 0,3 ml en 3

cajas 35 ºC-37 ºC/45 h - 48 h

3. Coagulasa: plasma +

EDTA

35 oC - 37 oC/ 6 h


200 colonias

APHA 2000 Capítulo 39

Enumeración directa de S.aureus

Coagulasa Positiva

39.57

Quesos, leche y

postres a base de

leche

Agar Fibrinoge-no Plasma de conejo

35 ºC-37 ºC/48 h

REPORTAR como # de

S.aureus por g o ml de producto


33

Tabla 5. (Final)



de cultivo

Tiempo y Tempera-

tura °C



°C





Expresión de

resultados

Agar Baid Parker sin yema de

huevo

35 oC - 37 oC/ 48 h

APHA 2000

Capítulo 39

Enumeración directa de S.aureus

Coagulasa y Termonucleasa

positiva

39.58 Alimentos crudos y

procesados

Agar Baird Parker + Plasma Telurito

fibrinogeno+piruvato de sodio

35 oC - 37 oC/8 h Agar DNA

Azul de toluidina

35 oC - 37 oC/4 h

Contar entre 10-100

colonias típicas

Agar Baid Parker 35 oC ± 2 oC/24 h

ICONTEC NTC 4779 Todos los alimentos Medio

plasma de conejo

fibrinogeno

35 oC ± 2 oC/18 h - 72 h

Coagulasa: plasma +

EDTA 35 oC/4 h -24 h

Contar entre

20-200 colonias

1. Caldo BHI 35 oC -37 oC/ 18 h - 24 h

AACC Todos los alimentos

Agar Baid Parker

35 oC - 37 oC/48 h

2. Coagulasa: plasma +

EDTA

35 oC-37 oC/18 h - 24 h

Positivo o negativo


34

Tabla 6. Métodos horizontales para Bacillus cereus


Principio de la

técnica Método Alimentos Medio cultivo Tempera-

tura Tiempo


Recuento en placa 980.31 D Todos los

alimentos Agar MYP 30 ºC 24 h a 48 h

Conteo: 15-150 colonias típicas con

halo de lecitinasa

30 ºC 48 h ± 2 h NMP de B

cereus confirmados

AOAC 2000 Capítulo 17 NMP para

alimentos que

contienen 103 UFC/g

980.31 E Todos los alimentos

Caldo tripticasa soya

polimixina/ confirmar en

MYP 30 ºC 24 h a 48 h

ICMSF 1984

Recuento en placa siembra

por estria en

superficie

Todos los alimentos

Agar yema de huevo

polimixina o yema de huevo sal polimixina cloruro de

trifeniltrtrazolio

35 ºC -37 ºC 24 h

Reportar como presuntos de B cereus las

colonias típicas. Hacer confirmación

INVIMA 1998

Recuento en placa siembra

0,1 ml en superficie con varilla de hockey

9 Todos los alimentos

Agar selectivo para Cereus

según Mossel 35 oC ± 2 oC 18 h a 24 h

Reportar como presuntos de B cereus las

colonias típicas. Hacer confirmación

Recuento en placa

siembra de 0,1 ml en superficie

D Todos los alimentos

Agar manitol yema de

huevo polimixina

MYP

30 ºC 24 h

Reportar UFC/g7ml de B cereus las

colonias típicas.


polimixina 30 ºC 48 h ± 2 h

FDA - BAM 2001 Capítulo

14

NMP E Todos los alimentos

Agar MYP 30 ºC 24 h

Hacer confirmación Hacer lectura

tabla NMP

APHA Capítuloítulo 32

2001


alimentos

Agar MYP y Agar KG (Kin-

Goepfert) 30 oC -32 ºC 20 h a 24 h Conteo: 30-

300

NMP 32.22 Todos los alimentos


polimixina 30 ºC 48 h Hacer lectura

NMP

ICONTEC

Recuento Placa

siembra de 0,1 ml en superficie

NTC 4679 Todos los alimentos Agar MYP 30 ºC ± 2 oC 18 h a 24 h

Conteo entre 15-150

colonias

AACC Recuento Placa Todos los

alimentos

79 oC - 80 ºC 12 min Standard methods Diary

Products Capítulo 8

Esporas de Bacillus 8.9 Leche

cruda

SMA + 0,1 % almidón soluble 30 ºC ± 1 oC 48 ºC

Esporas aerobias

mesófilas/ ml

* Hacer confirmación mediante pruebas bioquímicas


35

Tabla 7. Métodos horizontales para Clostridium

Incubación Incubación Entidad oficial


cultivo Temperatura Tiempo Pruebas

confirmativas TO Tiempo Expresión de

resultados

Medio de tioglicolato

fluido 35 ºC 18 h a 24 h TSC sin

yema de huevo

35 ºC 20 h caldo de

esporulación 35 ºC 24 h

Medio gelatina lactosa y

nitrato motility 35 ºC 24 h


alimentos TSC con yema de

huevo 35 ºC 24 h

Caldo PY para colonias atípicas

35 ºC 24 h

20- 200 UFC/ g o ml

AOAC 2000 Capítulo 17

Número más probable 993.10 Mariscos IMM 45 ºC en baño

de maría 16 h a 18 h Medio

modificado de C. perfringens

45 ºC 24 h NMP Bacterias/g o ml

Agar leche lactosa yema de huevo + antitoxina polivalente

35 oC - 37 ºC en

anaerobiosis 18 h a 24 h

Tipificación serológica

Fermentación de

carbohidratos/ medio de carne

cocida

35 oC - 37 ºC en


ICMSF Recuento en

placa e identificación

1 británico Todos los alimentos

Agar sangre de

caballo

35 oC a 37 ºC en

anaerobiosis y aerobiosis

48 h

caldo peptona + lactosa, glucosa,

sacarosa, maltosa

35 oC - 37 ºC en

anaerobiosis 48 h

30 - 300 UFC/g o ml

Continúa . . .


36




cultivo Temperatura Tiempo

Pruebas confirmativas Temperatura Tiempo


Detección por enriquecimiento*

Todos los alimentos de baja carga

microbiana

Medio de carne cocida

35 oC a 37 ºC 18 h a 24 h Agar sangre de caballo

35 oC - 37 ºC en

anaerobiosis y aerobiosis

24 h Presencia ó ausencia

Número más probable *

Todos los alimentos

Medio de carne cocida

35 oC a 37 ºC en

anaerobiosis 24 h Agar sangre de

caballo

35 oC - 37 ºC en

anaerobiosis 48 h NMP Bacterias/ g o

ml

Recuento en placa

Todos los alimentos

Agar sulfito cicloserina/

Agar triptosa sulfito

cicloserina Agar

perfringens de Shahidi-Ferguson

35 oC a 37 ºC en


Agar movilidad nitrato

suplementado Caldo gelatina lactosa Yema

de huevo Hemólisis

35 oC - 37 ºC 24 h 20 - 200 UFC/ g o ml

ICMSF

Detección por enriquecimiento

2 norteamericano

Todos los alimentos de baja carga

microbiana

medio fluido

tioglicolato

46 ºC ± 0,5 oC 37 ºC ± 0,5 oC

4 h a 6 h 18 h a 24 h

Agar yema de huevo de

McClung y Toabe Agar sangre de

oveja

35 oC - 37 ºC en

anaerobiosis 24 h Presencia ó ausencia

Recuento de esporas No. 10 Todos los

alimentos

Agar SPS Agar sulfito cicloserina

35 ºC ± 2 oC 72 h 5 - 50 colonias

Caldo tioglicolato

Caldo de carne 35 ºC 24 a 48 h

20 - 200 UFC/ g o ml

INVIMA 1998

Recuento en placa No. 11 Todos los

alimentos

Agar SPS Agar

triptosa sulfito

cicloserina

35 ºC ± 2 oC 48 h

Bioquímicas: Catalasa, movilidad nitrato, lactosa y gelatina


37

Tabla 7. (Final)



Temperatura Tiempo

Pruebas confirmativas/ bioquímicas Temperatura Tiempo


medio de carne cocida 24 h a 48 h

Caldo de tioglicolato fluido

35 ºC

18 h a 24 h FDA- BAM 2001

Recuento en placa Capítulo 16 Todos los

alimentos

Agar TSC sin yema de

huevo

35 ºC en anaerobiosis 20 h a 24 h

medio leche-hierro modificado

46 ºC en baño de maría 2 h

20-200 UFC/g o ml


alimentos

Caldo hígado Caldo

peptona-glucosa

extracto de levadura

35 ºC a 37 ºC 20 h a 24 h Agar TSC + yema de huevo 35 ºC 18 h a 24 h UFC/g ó ml APHA

Capítulo 34 2001


alimentos Agar TSC 35 ºC a 37 ºC 18 h a 24 h Agar TSC sin yema de huevo 35 ºC - 37 ºC 18 h a 24 h 20-200 UFC/g ó ml

Medio fluido de tioglicolato

35 ºC ± 2 ºC en


Método A. Medio SL

46 ºC en baño de agua 18 h a 24 h

ICONTEC Recuento en placa NTC 4834 Todos los

alimentos

Agar triptosa sulfito

cicloserina libre de yema de huevo Agar

SPS Agar TSN

35 ºC ± 2 ºC en


Método B. Caldo fluido de

tioglicolato Caldo de carne cocida

46 ºC ± 0,5 ºC 35 ºC

3 h a 4 h 24 h a 48 h

15-150 UFC/g ó ml

* Hacer las pruebas bioquímicas indicadas en el recuento en placa e identificación


38

Tabla 8. Métodos horizontales para Coliformes

Prueba presuntiva Prueba confirmativa



Temperatura Tiempo Medio cultivo Temperatura Tiempo


recuento en gel de pectina 989.11 Productos lácteos VRB redigel 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h 25-250 UFC/g o ml

Película rehidratable Membrana

hidrofóbicas

986,33 989,10

leche y productos lácteos

Placa membrana hidrofóbicas para

recuento de coliformes

32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h 15-150 UFC/ml


hidrofóbicas

996.02 Productos lácteos HSCC 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h > 150 UFC/g o ml


hidrofóbicas


Membrana hidrofóbicas E. coli

count plate 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h 15-150 UFC/ml

Discos 992.30 Todos los alimentos Caldo LST 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Discos SSD

+ MUG 35 ºC 24 h a 48 h Presencia / ausencia E. coli

m-FC 35 ºC TSAM 44,5 ºC ± 0,5 ºC 24 h ± 2 h Coliformes/ ml o g

AOAC 2000

Capítulo 17

Filtración por membrana hidrofóbica

983.25 Todos los alimentos TBA para E. coli 44,5 ºC ± 0,5 ºC

24 h ± 2 h Coliformes fecales/ ml

o g

Recuento en placa 7.8 VRBA 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Caldo BGB 32 ºC ± 1 ºC 48 h ± 3 h >150 UFC/g o ml

Número más probable 7.9 caldo LST 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Caldo BGB 35 ºC ± 1 ºC 48 h ± 3 h NMP/ g ó ml

L- EMB Tubo SMA 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Test Completo

en medio líquido 7.10

Productos lácteos

caldo LST 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h

Tubo LST 35 ºC ± 1 ºC 48 h ± 2 h


Medio rehidratable 7.13 Productos lácteos Membrana

hidrofóbicas VRBA 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h >150 UFC/g o ml

Gel de pectina 7.14 Productos lácteos VRB redigel 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Caldo BGB 32 ºC ± 1 ºC 48 h ± 3 h 25-250 UFC/g o ml

Medio caldo para coliformes 35 ºC 3 h

Standard Methods

Capítulo 7

Impedancia para detección de coliformes

7.15 Leche, materia prima, crema y

mezcla de helado Impedancia 35 ºC 14 h

Caldo BGB 32 ºC 48 h Recuento por impedancia de coliformes/ ml


39





Temperatura Tiempo Medio cultivo

Temperatura Tiempo


Número más probable

1 Nortea-mericano

Todos los alimentos

Caldo lauril sulfato triptosa 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h

Caldo lactosa bilis verde

brillante 2 % ó Agar eosina

azul de metileno ó Agar Endo

35 ºC a 37 ºC 24 h a 48 h NMP Coliformes/ ml o g


2 británico

Todos los alimentos Caldo MacConkey 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h NMP Coliformes/

ml o g

Número más probable 3 Todos los

alimentos Caldo lactosa bilis

verde brillante 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h

Agar bilis lactosa rojo

neutro ó Agar Endo

35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h NMP Coliformes/ ml o g

Recuento en placa 4 Todos los alimentos

Agar bilis lactosa rojo neutro verde

brillante 35 ºC a 37 ºC 24 h < 150 colonias

UFC/ml o g


coliformes fecales

1 norteame

ricano

Todos los alimentos

Caldo lauril sulfato triptosa 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h Caldo EC 44,5 ºC ± 0,2 ºC 24 h y 48 h NMP Coliformes/

ml o g

ICMSF


coliformes fecales

2 Europeo

Todos los alimentos Caldo MacConkey 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h

Caldo lactosa bilis verde

brillante 2% e Indol

44 ºC ± 0,1 ºC 24 h y 48 h NMP Coliformes/ ml o g

Número más probable No. 13 Todos los

alimentos

Caldo lactosado bilis verde brillante

2 % 35 ºC ± 2 ºC 24 h a 48 h

Agar EMB Agar VRBA

Agar Endo 35 ºC ± 2 ºC 24 h y 48 h NMP de

coliformes/ g ó ml INVIMA

1998 Número más probable de

coliformes fecales No. 14 Todos los

alimentos

Caldo lactosado bilis verde brillante

2 % 35 ºC ± 2 ºC 24 h a 48 h

Caldo lactosado bilis verde

brillante 2 % y Caldo triptófano

44,5 ºC ± 0,5 ºC en baño de agua 48 h NMP de coliformes

fecales/g ó ml


40





Medio cultivo To Tiempo

Medio cultivo To Tiempo


Número más probable Caldo lauril triptosa 35 ºC ± 1 ºC 48 h ± 2 h Caldo

BGLB 35 ºC 48 h ± 2 h NMP de coliformes /g ó ml

Recuento en placa

Todos los alimentos

VRBA 35º C 32ºC para prod. lácteos 18 h a 24 h Caldo

BGLB 35 ºC 24 h - 48 ± 2 h 25- 250 UFC/ g ó ml

Caldo EC 45,5 ºC ± 0,2 ºC 48 h ± 2 h

FDA - BAM 2001

Número más probable para

coliformes fecales

Capítulo 4

Mariscos Caldo lauril triptosa 35 ºC 48 h ± 2 h Caldo L-EMB 35 ºC 18 h - 24 ±

2 h

NMP de coliformes fecales /g ó ml

Número más probable 8,71- 8,72 Caldo lauril sulfato

triptosa 35º C ± 0,5 ºC 24 h - 48 h ± 2 h

Caldo bilis verde

brillante 35 ºC ± 0,5 ºC 48 h ± 2 h NMP de coliformes /g

ó ml

Recuento en placa para

microorganis-mos no

estresados

8.73 VRBA 35 ºC 18 h - 24 h

Sugiere Caldo bilis

verde brillante

35 ºC ± 0,5 ºC 48 h ± 2 h 15-150 UFC/g ó ml

TSA Temperatura ambiente 2 h ± 0,5 h Recuento en

placa para microorg

estresados

8.74

VRBA 35º C 32 ºC para productos lácteos 18 h - 24 h

15-150 UFC/g ó ml

Recuento en Membrana

hidrofóbicas 8.75 VRBA 35º C 32 ºC para

productos lácteos 24 h ± 2 h UFC/g ó ml

APHA Capítulo 8

2001

Gel de pectina Redigel 8.76

Todos los alimentos

Medio VRB Redigel 35 ºC 32 ºC para productos

lácteos 24 h ± 2 h

UFC/g ó ml


41

Tabla 8. (Final)




Medio cultivo Temperatura Tiempo

Medio cultivo Temperatura Tiempo


Membrana hidrofóbica 8.77 Agar m-FC 35 ºC 24 h ± 2 h

NMP coliformes/g ó

ml


coliformes fecales 8.81

Caldo lauril sulfato

triptosa 35 ºC ± 0,5 ºC 24 h -48 h ± 2 h Caldo EC 45,5 ºC ± 0,2 ºC 48 h ± 2 h NMP de coliformes

fecales /g ó ml


coliformes y E. coli 8.931 Todos los

alimentos Caldo LST+ MUG 35 ºC 24 h h± 2 h L-EMB 35 ºC 18 h a 24 ± 2 h

NMP de coliformes/g ó ml

Recuento en placa para coliformes y E.

coli 8.933 Todos los

alimentos Agar VRBA+MUG 35 ºC 18 h a 24 h 15-150 UFC/g ó ml

Recuento en placa HGMF+ MUG para coliformes y E. coli

8.934 Todos los alimentos LMG+MUG 35 ºC 24 h ± 2 h NMP de coliformes/g

ó ml

Recuento en Membrana

hidrofóbicas 8.935 Todos los

alimentos

Membrana hidrofóbicas E.coli

count plate 35 ºC 24 h ± 2 h 15-150 UFC/g ó ml

APHA Capítulo 8

2001

Recuento en Colichrome 8.936 Todos los

alimentos Redigel colichrome 35º C 32 ºC

para productos lácteos

24 h - 48 h

15-150 UFC/g ó ml

AACC Número más probable para

coliformes y E. coli 4215 Todos los

alimentos Caldo LST 35 ºC 48 h ± 2 h Caldo BGLB 35 ºC 48 h ± 2 h NMP de coliformes/g ó ml



42

BIBLIOGRAFÍA Official methods of Analysis of AOAC International. 17th Edition. Dr. William Horwitz, Volume I y II. 2000. USA. STANDARD METHODS for the Examination of Dairy Products 16th Edition. Pul. Health Association, INC, Washington, D.C. Mc Gugan, W.A.1992. ICMSF, 1984, Ecología microbiana de los alimentos. Volumen 2. Productos alimenticios. Ed. Acribia, Zaragoza. Ministerio de Salud. INVIMA. Manual de Técnicas de Análisis para Control de Calidad Microbiológico de Alimentos para Consumo Humano. Bogotá Colombia. 1998. Bacteriological Analytical Manual.. U.S. Food and Drug Administration Laboratories for Detection in Food and Cosmetic Products. FDA - BAM 2001 NTC 4132:1997, Microbiología. Guía general para el recuento de mohos y levaduras. técnica de recuento de colonias a 25°C. ISO 7954:1987, Microbiology. General Guidance for Enumeration of Yeasts and Moulds. Colony count technique at 25°C. American Association of Cereal Chemists. AACC 4250. 2004 ISO-GRID. For Detection and Confirmation of Salmonella spp. Method AOAC 991.12. 2000. NTC 4666 - ISO 11290-1: 1999, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Método horizontal para la detección de Listeria monocytogenes. Parte 1. Método de detección. ICMSF, 1986. Ecología microbiana de los alimentos. Volumen 1. Significado y métodos de Recuento. Ed. Acribia, Zaragoza. NTC 4574:1999, Microbiología de alimentos y de alimentos para animales. Guía general sobre métodos para detección de Salmonella. NTC 4491-1:2005, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 1. Reglas generales para la preparación de la suspensión inicial y de diluciones decimales. NTC 4491-2:2004, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras para ensayo. Suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 2. reglas especificas para la preparación de carne y productos carnicos. NTC 4491-3:2004, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 3. Reglas especificas para preparación de muestras de pescado y productos de la pesca. NTC 4491-4:2005, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 4: Reglas especificas para la preparación de productos diferentes de leche, productos lácteos, carne, productos cárnicos, pescados y productos de la pesca.

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GTC125 analiis microbiologicos