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Gram+ Gram-
Coques CoquesBacilles Bacilles
TEST CATALASE TEST OXYDASE
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Cat+ Cat- Cat+ Cat- Oxy+ Oxy- Oxy+ Oxy-
ORIENTATION DE L’IDENTIFICATION
DIAPO4
MACRO-GALERIE
Exploration du:Métabolisme énergétique Métabolisme glucidiqueMétabolisme protidique
Métabolisme énergétique
VFHugh et LeifsonBouillon nitraté
Type respiratoire
Voie d’attaque du glucose
Présence de Nitrate réductase
Différences entre respiration et fermentation
Les bactéries chimiotrophes oxydent des molécules organiques et réduisent des
coenzymes (NAD+, FAD+, NADP+ ...)
Leur réoxydations passent :
- par une chaîne de transporteurs avant de réduire un accepteur final, on parle
de respiration (O2 = respiration aérobie, NO3-, NO2-, SO42-... = respiration anaérobie)
- par une molécule organique interne, on parle de fermentation
Un glucide utilisé prouve que la bactérie peut le faire pénétrer a les enzymes permettant son hydrolyse en ose et possède le métabolisme d'utilisation l'ose.
Mise en évidence : d'un produit ou de l'utilisation du substrat d'une enzyme
Lecture des résultats par acidification ou alcalinisation du milieu et virage d'un indicateur coloré par la mise en évidence d'un produit formé (chromogène) par culture sur un milieu présentant un substrat unique
Métabolisme glucidique
Métabolisme glucidique
Citrate Simmons
Hajna Kligler
Disque ONPG
Mannitol mobilité nitraté
Clark Lubs: VP et RM
Utilisation du citrate comme source unique de C.
Utilisation du glucose, du lactose Production de H2S, de gaz.
Mise en évidence de l’ONPG hydrolase
Utilisation du mannitol +Mobilité.
+ Présence de nitrate réductase.
Type de fermentation:
Acide mixte (RM), Butanediolique (VP).
• On étudie – La capacité d’hydrolyser une protéine– La dégradation de différents acides aminés ou de
dérivés azotés comme l’urée
• Mise en évidence – De produit de réaction enzymatique
• Lecture des résultats– par présence d’un indicateur de pH (LDC,ODC, ADH,
Uréase) – par l’ajout d’un réactif (Tryptophanase)– par l’utilisation d’un produit visible à l’œil nu (TDA)
Métabolisme protidique
Métabolisme protidique
Urée indole
ADH, LDC, ODC
Gélatinase
Présence de l’uréase
Présence de la TDA
Présence d’une tryptophanase ou Production d’indole
Présence de l’arginine dihydrolase
Présence de la lysine décarboxylase
Présence de l’ornithine décarboxylase
Présence d’une protéase
Milieu VF
• OBSOBS: Culture dans tout le tube
• INTINT: Bactéries cultivant en présence et en absence d’O2
• CC°:CC°: Bactéries aéro-anaérobies
Milieu Hugh et Leifson
• OBS:OBS: Virage coloré du vert au jaune en condition aérobie et anaérobie
• INT:INT: Acidification du milieu en condition aérobie et anaérobie
• CC°:CC°: Voie d’attaque du glucose fermentaire sans exclure la voie oxydative
Métabolisme glucidique
Citrate Simmons
Hajna Kligler
Mannitol mobilité nitraté
Clark Lubs: VP et RM
Utilisation du citrate comme source unique de C.
Utilisation du glucose, du lactose Production de H2S, de gaz.
Utilisation du mannitol.
Mobilité.
Présence de nitrate réductase.
Type de fermentation:
Acide mixte (RM), Butanediolique (VP).
Milieu Hajna Kligler : un exempleCulot:Culot:
OBSOBS:Virage du RP du rouge au jaune.
INT:INT: Acidification du milieu donc le Glu a été fermenté en composés acides.
CC°:CC°:Glu+
OBS:OBS:Présence de bulles.
INT:INT: La fermentation du glucose s’accompagne d’une production de gaz provoquant la fragmentation de la gélose.
CC°:CC°: Gaz+
Pente:Pente:
OBS:OBS: Virage du RP du rouge au Jaune.
INT:INT: Acidification du milieu, le glucose est utilisé en 1er mais comme il est en faible quantité la croissance se poursuit grâce à l’utilisation du Lactose.
CC°:CC°: Lac+
Jonction culot-pente:Jonction culot-pente:
Pas de production d’H2S. H2S-
Test ONPG
• OBS:OBS: Apparition d’une coloration jaune
• INT:INT: Hydrolyse de l’ONPG en ONP
• CC°:CC°: Présence de beta galactosidase
Bactérie beta galactosidase +
Citrate Simmons
• OBS:OBS: Absence de culture sur milieu citrate Simmons
• INT:INT: Bactérie ne pouvant pas cultiver avec le citrate comme seule source de C.
• CC°:CC°: Bactérie Citrate -
Milieu Mannitol mobilité Nitraté
• OBS:OBS: Virage coloré du rouge au jaune
• INT:INT: Acidification du milieu Utilisation du mannitol
• CC°:CC°: Bactérie Man+
• OBS:OBS: Trouble autour de la piqûre centrale.
• INT:INT: Diffusion de la bactérie dans la gélose
• CC°:CC°: Bactérie Mob+• OBS:OBS: Coloration rouge après ajout de
Réactif de Griess
• CC°:CC°: Bactérie a transformé les nitrates du milieu en nitrites Bactérie NRB+
• INT:INT: Présence de nitrites.
Test RM
Test VP
+RM
+Naphtol+NaOH
Milieu Clark Lubs
Test RM
• OBS:OBS: Coloration rouge
• INT:INT: Acidification du milieu Utilisation du glucose et production d’acides mixtes pH<4.5
• CC°:CC°: Bactérie RM+ réalisant la fermentation acide mixte
Test VP
• OBS:OBS: Absence de Coloration rouge vif en surface
• INT:INT: Présence d’acétoine
• CC°:CC°: Bactérie VP+ réalisant la fermentation butanediolique
Métabolisme protidique
Urée indole
ADH, LDC, ODC
Présence de l’uréase
Présence de la TDA
Production d’indole
Présence de l’arginine dihydrolase
Présence de la lysine décarboxylase
Présence de l’ornithine décarboxylase
Milieu urée-indole
Ensemencé avec la bactérie
TDA -
TDA +
INDOLE -
INDOLE +
Lecture directe de l’uréase
UREASE -
UREASE +
+ FeCl3
+Kovacs
Test uréase Test TDA Test Indole
Milieu Urée Indole
Test uréase
• OBS:OBS: Milieu orangé
• INT:INT: Absence de dégradation de l’urée
• CC°:CC°: Bactérie uréase-
Test TDA
• OBS:OBS: Milieu jaune
• INT:INT: Pas de production d’acide indole pyruvique, la bactérie ne possède pas la tryptophane désaminase.
• CC°:CC°: Bactérie TDA-
Test Indole
• OBS:OBS: Coloration rouge vif en surface
• INT:INT: Production d’indole grâce à la présence chez la bactérie d’une tryptophanase.
• CC°:CC°: Bactérie indole+
ADH LDC ODC
ADH, LDC, ODC
Test ADH
• OBS:OBS: Coloration jaune du milieu
• INT:INT: Les bactéries ont acidifié le milieu à partir du glucose mais ne l’ont pas réalcalinisé en utilisant l’arginine, les bactéries ne possèdent pas d’arginine dihydrolase.
• CC°:CC°: Bactérie ADH-
Test LDC
• OBS:OBS: Coloration violette du milieu
• INT:INT: Les bactéries ont acidifié le milieu à partir du glucose puis réalcalinisé en décarboxylant l’acide aminé la lysine
• CC°:CC°: Bactérie LDC+
Test ODC
• OBS:OBS: Coloration violette du milieu
• INT:INT: Les bactéries ont acidifié le milieu à partir du glucose puis réalcalinisé en décarboxylant l’ornithine.
• CC°:CC°: Bactérie ODC+
• Bactéries: Bacille Gram-, oxydase-, AAF, voie d’attaque fermentative, NR+.
– Enterobactérie
• Glc+, Lac+, H2S-, Gaz+, Man+, Mob +, ODC+, LDC+, ADH-, Ind+ uré-, TDA-, RM+, VP-,.
-- -- +/-+/- -- ++-- -- -- +/-+/- - - HH22SS
-- ++++-- -- -- -- -- -- - - PDAPDA
++-- ++-- -- -- ++-- -- - - UréeUrée
+ *+ *++++-- ++++--++++++Mob.Mob.
-- +++/-+/- -- +/-+/- ++++++++- - CitrCitr
+ *+ *-- -- -- -- ++++++-- - - VP (Acétoïne)VP (Acétoïne)
+/-+/- +++/-+/- +/-+/- -- -- +/-+/- -- -- ++IndoleIndole
++-- -- +/-+/- -- ++++++++++ONPGONPG
-- -- -- -- -- -- ++++++++LactLact
++++++++++++++ ++
++++GlcGlc
Yersin
ia
Providencia
Proteu
s
Shigella
Salm
onella
Serratia
Klebsiella
Entero
bacter
Citro
bacter
Escherichia
Escherichia