B. Indústr. anim., Nova Odessa, SP, 43(1):33-36,jan./jun. 1986

ATIVIDADE GLUTAMATO PIRUVATO TRANSAMINASE (GPT)EM SEMEN DE BOVINOS DO TIPO MANTIQUEIRA (1 )

(Glutamic pyruvic transaminase activity (GPT) in semen of Mantiqueira bulls)

TEREZINHA APARECIDA MARTINS GOMES DE CASTRO (2), CÂNDIDO EDUARDO PAIVA MACHADO (2) 8. EVALDO FISCHER FERRAZ (3)

RESUMO: Foi determinada a atividade glutamato piruvato transaminase (GP'!) emquarenta amostras de sêmen de oito bovinos do" tipo mantiaueira. O método utilizado foio colorimétrico de REITMAN & FRANKEL (1957), após lise das células espermáticas eliberação da enzima. Os valores médios, expressos em unidades F rankel/ml, foram res-pectivamente, 17.4 e 25,3 para o sêmen total e para espermatozóides. Basendo-se nos re-sultados obtidos, concluiu-se que o método empregado pode ser também recomendadocomo parâmetro na avaliação bioquímica do sêmen de bovinos.

INTRODUÇÃO

Nos últimos anos, o estudo bioqu ímico dosêmen tem apresentado um progresso acentuado.Têm-se procurado determinar os níveis de ativi-dades enzimáticas, tanto nos espermatozóidescomo no plasma seminal de várias espécies animais,com o intuito de estabelecer correlações signifi-cativas entre elas e outras caracterfsticas do sêmen.Assim, têm-se estudado os níveis de atividade deenzimas glicol íticas, proteol íticas, de transarn i-nases e fosfomonoesterases. Dentre as enzimas,as transaminases (glutamato oxaloacetatotransa-minase e glutamato piruvato transaminase) se des-tacam pela sua atividade relativamente alta no sê-men de algumas espécies estudadas e sua presençaexplica a conversão alanina piruvato no metabolis-mo do espermatozóide.

FLlPSE (1960) determinou os níveis de ati-vidades glutamato oxaloacetato transaminase(GOT) e glutamato piruvato transaminase (GPT)em sêmen de bovinos, tanto no espermatozóidecomo no plasma seminal, encontrando correlaçõespositivas entre concentração espermática e níveisde GOT e GPT no plasma seminal. As análises enzi-máticas de GPT feitas em 63 amostras de sêmenpertencentes a 25 touros deram em média 15 ± 1unidades Sigma Frankel/ml.

ROUSSEL & STALLCUP (1966) estuda-ram a relação da enzima GPT no espermatozóide eplasma seminal com outras características do sê-men. A análise enzimática de GPT feita em 149amostras de sêmen de doze touros holstein foram

(1) Projeto IZ-440/1. Recebido para publicação em janeiro de 1986.e) Da Seção de Reprodução e Inseminação Artificial, Divisão de Técnica Básica e Auxiliar.(3) Da Seção de Bacteriologia Animal, Divisão de Biologia Animal, Instituto Biológico, São Paulo, SP.

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25,0 e 18,3 unidades Sigma Frankel/ml para o es-permatozóide e plasma seminal, respectivamente.

ROUSSEL & STALLCUP (1965) determi-naram os níveis de atividades de GPT em sêmen detouros holstein-friesian. A análise enzimática feitadurante sete meses em quinze touros com idades

variando de quinze a 24 meses, deu em média15,72 unidades Sigma Frankel/ml.

No presente trabalho, determinaram-se osníveis de atividade GPT em sêmen de bovinosdo tipo mantiqueira.

MATERIAL E Mt:TODOS

Foram utilizadas qüarenta amostras de sêmende oito touros do tipo mantiqueira, com idadesvariando de 2,5 a 4,5 anos, mantidos em condi-ções normais de manejo e alimentação, perten-centes à Estação Experimental de Zootecnia dePindamonhangaba, SP.

Coleta de sêmen

Os ejaculados foram obtidos por coletaatravés de vagina artificial. Determinaram-se o vo-lume e o pH das amostras, a densidade espermáticae a motilidade dos espermatozóides. O materialCOletado era imediatamente refrigerado, assimpermanecendo até o momento do uso, o qual nãoexcedia a 3 horas, para não ocorrer perda da ati-vidade enzimática.

Preparo da amostra e determinação da atividadeenzimática

As amostras foram preparadas de acordocom o processo descrito por CASTRO et alii (19831.

Após a lise das células espermáticas, foideterminada a atividade enzimática, segundo ométodo colori métrico de REITMAN e FRANKEL(1957). O princípio desse método se baseia na se-guinte reação:

Alanina + a cetoglutarato GPl piruvato + glu-tamato.

Em seguida, a quantidade de piruvatoformada em 30 minutos foi determinada colo-rimétricamente, após a formação de uma hidra-zona intensamente colorida. No final, a densidadeóptica da solução foi medida a 505 nm em espec-trofotômetro Colleman Junior.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os volumes dos ejaculados obtidos variaramde 4,5 ml a 11,0 ml, com uma motilidade de 60%.80%, e concentração espermática de 0,75 a 1,01milhão de esperrnatozóide/rnm".

Os valores da atividade enzimática encon-tram-se no quadro 1 e são expressos em unidadesFrankel/ml de amostra.

As médias e os respectivos padrões de ativi-dade enzimática de GPT para o sêmen total eapermatozóide livre de plasma seminal foram,respectivamente, 17,4 ± 1 e 25,3 ± 1,3.

Pelos resultados do quadro 1, observa-se queos valores de atividade enzimática variaram dentrodo limite de normalidades (FLlPSE, 1960; ROUS-SEL & STALLCUP, 1965), sendo que essa varia-ção pode ser devida à raça, idade do animal e con-

o dições de manejo e alimentação.Os coeficientes de correlação entre unidades

de GPT/ml e volume de sêmen por ejaculado fo-ram 0,3886 e 0,3832, respectivamente para o sê-men total e espermatozóides. Os coeficientes decorrelação entre unidades de GPT/ml e densidadeespermática foram 0,4269 e 0,0438, respectiva-mente para o sêmen total e espermatozóides. Ascorrelações em ambos os casos foram negativas.

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Quadro 1. Médias, desvio-padrão, coeficiente de variação e correlações lineares da densidade esperrnática,volume do ejaculado e da atividade glutamato pl ruvato transaminase (GPT) em sêmen total

Densidade esperrnática Volume ejaculado GOT

Touro (x 100/ml') (rnl) Sêmen total Esperrnatozóide

1 0,75 6,9 15,8 23,4

2 0,92 5,5 18,2 24,8

3 0,81 8,1 18,0 26,0

4 1,01 5,1 18,6 24,2

~ 5 0,95 6,0 18,2 26,2

6 0,79 7,2 17,2 27,4

7 0,88 6,7 16,8 24,8

8 0,99 6,4 16,2 25,8

Média 0,89 6,5 17,4 25,3

Desvio-padrão 0,09 0,96 1,0 1,3

Coeficientes devariação 11,24% 14,77 5,7% 5,1%

r volume e GPT sem. tot. = - 0,3886 ns.r GPT sem. tot. e densid. esperm. = 0,4269 ns.r GPT esperm. e denso esperm. = - 0,0438 ns.r GPT espermat. e volume = 0,3832 ns.r volume e densid. espermat. = - 0,762 *(P < 0,05).

CONCLusOes

,...'

Pelos resultados obtidos, traduzidos porbaixos valores do coeficiente de variação, con-cluiu-se que a metodologia utilizada pode serempregada rotineiramente para a determinação

enzimática de GPT em espermatozóides de bovinose na tecnologia destinada ao congelamento desêmen.

SUMMARV: The purpose of this subject was the determination of the activity of glu-tamic pyruvic transaminase, using a colorimetric method to permit to establish standardsof activity of glutamic pyruvic transaminase in spermatozoa for study of their metabolicbehaviour in different physiological and experimental conditions. Thus, the activity ofGPT was determined in forty samples of semen from eight Mantiqueira bulls. The results.showed that the method employed had good reproductibility and the variation coef-ficients within of the normal limits. It was conclued that this method may be recomm-ended for the establishment of the enzimatic standard in spermatozoa of bulls.

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REFER~NCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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