Glioblastomlarda BRAF V600E mutasyon ve BRAF VE1 immunekspresyon profili

Zeynep Tosuner1, Melin Özgün Geçer1, Mustafa Aziz Hatiboğlu1, Anas Abdallah1, Seval Turna1

1Bezmialem Vakıf Üniversitesi Hastanesi Patoloji Anabilim Dalı 2Bezmialem Vakıf Üniversitesi Hastanesi Beyin ve Sinir Cerrahisi Anabilim Dalı

AMAÇ

• Pilositik astrositom, optik sinir gliomaları, pleomorfik ksantroastrositom (PXA), anaplastik PXA ve gangliogliomlarda B-Raf (BRAF) geninde anormallikler ve mutasyonların olabileceği bilinmektedir

• Erişkin gliomlarında bu değişiklikler nadir olarak saptanmaktadır

• Glioblastomun yeni tanımlanan bir tipi olan epitelioid

glioblastomlarda (e-GBM) BRAF mutasyonlarının görülebildiği bildirilmiştir

AMAÇ • BRAF mutasyonlarından en sık görülen BRAF V600E mutasyonunun

öngörülebilmesi için geliştirilen BRAF VE1 immunhistokimyasal antikorunun glioblastomlardaki etkinliği ile ilgili literatürde sınırlı sayıda çalışmaya ulaşılabilmektedir

• Çalışmamızda amacımız üç farklı tipte (epitelioid özellikler gösteren, dev hücreli ve konvansiyonel) toplam 21 glioblastom olgusunu BRAF V600E mutasyonu ve BRAF VE1 immunekspresyonu açısından değerlendirmek

GEREÇ VE YÖNTEM

• Üniversitemizde 2015-2017 yılları arasında 21 glioblastoma tanısı alan olgulara ait lamlar arşivden çıkarılarak iki patolog tarafından yeniden değerlendirildi

• Bir konvansiyonel glioblastom olgusunda yeterli tümör alanı izlenmediğinden olgu çalışma kapsamına alınmadı (Toplam n:20)

• Bu olgulardan 8 konvansiyonel, 6 dev hücreli ve 6 epitelioid özellikler

gösteren glioblastom olgusu çalışma kapsamına alındı

GEREÇ VE YÖNTEM

• Yeterli doku içeren bloklar kullanılarak BRAFV600 mutasyonları Cobas 4800 BRAF V600MutasyonTesti (real time PCR) ile değerlendirildi

• Aynı bloklardan alınan kesitlere immunhistokimyasal olarak BRAF VE1 antikoru uygulandı

BULGULAR

Olgu Yaş Cinsiyet Lokalizasyon Morfoloji BRAF İHK

BRAF V600E mutasyonu

Sağkalım süresi (gün)

Sağkalım durumu

1 44 E Parietal Epitelioid - + 304 Hayatta

2 2 E Frontotemporal Epitelioid - - 185 Ex

3 17 K Parietal Epitelioid - - Ulaşılamadı Ulaşılamadı 4 49 E Frontal Epitelioid - - 396 Hayatta 5 17 K Parietal Epitelioid - - 211 Hayatta 6 74 E Temporal Epitelioid - - Ulaşılamadı na 7 73 E Frontoparietal Dev hücreli - - 132 Ex 8 71 E Oksipital Dev hücreli - - 541 Ex 9 62 K Frontal Dev hücreli - - Ulaşılamadı Ulaşılamadı

10 30 K Frontal Dev hücreli - - 710 Hayatta

11 46 K Frontal Dev hücreli - - 827 Hayatta 12 53 K Frontoparietal Dev hücreli - - 13 Ex 13 53 E Frontoparietal Konvansiyonel - - 251 Ex

14 80 E Frontotemporal Konvansiyonel - - 268 Ex

15 71 K Temporal Konvansiyonel + - 536 Hayatta 16 61 E Frontal Konvansiyonel + - 360 Ex 17 13 E Temporal Konvansiyonel + - 276 Hayatta 18 55 E Temporal Konvansiyonel - - 166 Ex 19 65 K Frontal Konvansiyonel - - Ulaşılamadı Ulaşılamadı 20 69 E Frontoparietal Konvansiyonel - - Ulaşılamadı Ulaşılamadı

BULGULAR

• Yaşları 2 ile 80 (med:50,2) arasında değişen 12 erkek, 8 kadın hastaya ait 20 glioblastom olgusu incelendi

• BRAF V600E mutasyonu 20 olgudan sadece bir (1/20) epitelioid özellikler gösteren glioblastom olgusunda saptandı

• Üç konvansiyonel glioblastom (3/5) olgusunda BRAF VE1

immunekspresyonu saptandı. BRAF V600E mutasyonu saptanan olguda immunekspresyon izlenmedi

BULGULAR

• 15 hastada takip verilerine ulaşılabildi, takip süresi 827 gün • Ortalama yaşam süresi 464,03 gün • GBM’lerde mortalite %46,7 • Epitelioid GBM’lerde mortalite %25 • Nonepitelioid GBM’lerde %73,7

Olig2

Fisher’s exact test p: 0.521

BRAF İHK

Toplam Negatif Pozitif Morfoloji Epitelioid n 6 0 6

% %100,0 %0,0 %100,0 Nonepitelioid n 11 3 14

% %78,6 %21,4 %100,0 Toplam n 17 3 20

% %85,0 %15,0 %100,0

BRAF mutasyonu

Toplam Negatif Pozitif Morfoloji Epitelioid n 5 1 6

% %83,3 %16,7 %100,0 Nonepitelioid n 14 0 14

% %100 %0,0 %100,0 Toplam n 19 1 20

% %95,0 %5,0 %100,0

Fisher’s exact test p:0.30

Ortalama ve ortanca sağkalım süreleri

Morfoloji

Ortalamaa Ortanca

Beklenen Std. Hata

%95 Güven aralığı

Beklenen Std. Hata

%95 Güven aralığı

En düşük En yüksek En

düşük En yüksek Nonepitelioid 434,000 90,878 255,879 612,121 360,000 84,336 194,702 525,298

Epitelioid 343,250 45,683 253,712 432,788

Tüm tipler 464,030 82,945 301,459 626,602 360,000 147,092 71,699 648,301

a. Sağkalım süresi bilinmeyenlerde en yüksek sağkalım referans alınır

Ki-kare p Log Rank (Mantel-Cox) 0,468 0,494

SONUÇ

• E-GBM’lerin yalnızca 1 tanesinde mutasyon izlendi • Mutasyon saptanan GBM’de BRAF VE1 immunekspresyon izlenmedi • Üç konvansiyonel GBM’de BRAF VE1 immunekspresyonu izlendi • İmmunhistokimya ve mutasyon ile sağkalım arasında ilişki saptanmadı • Epitelioid ve nonepitelioid morfoloji ile sağkalım arasında ilişki

saptanmadı • Sağkalım süreleri epitelioid morfolojiye sahip olanlarda daha kısa

SONUÇ • Kleinschmidt-DeMasters ve ark. E-GBM’lerde BRAF V600E mutasyonu

% 54 (7/13) • Kleinschmidt-DeMasters ve ark. %46 (11/24) • BRAF VE1 İHK ile BRAF V600E mutasyonu %100 korelasyon Kleinschmidt-DeMasters BK, Aisner DL, Foreman NK: BRAF VE1 immunoreactivity patterns in epithelioid glioblastomas

positive for BRAF V600E mutation. The American Journal of Surgical pathology 2015, 39(4):528-540. Kleinschmidt-DeMasters BK, Aisner DL, Birks DK, Foreman NK: Epithelioid GBMs show a high percentage of BRAF V600E

mutation. The American Journal of Surgical Pathology 2013, 37(5):685-698.

SONUÇ

• BRAF V600E’ye karşı geliştirilen vemurafenibin başta malign melanom olmak üzere bu mutasyonu gösteren diğer tümörlerde kullanılabilmesi nedeniyle özellikle epitelioid özelliklere sahip glioblastomlarda BRAF V600E mutasyonu açısından inceleme yapılması bu hastalara bir tedavi alternatifi sağlayabilir

• Daha çok sayıda olgu ile yapılacak çalışmalar immunhistokimyasal

incelemenin bu mutasyonu öngörmedeki rolünü belirlemede yol gösterici olacaktır

Kaynaklar

1. Davies H, Bignell GR, Cox C, Stephens P, Edkins S, Clegg S, Teague J, Woffendin H, Garnett MJ, Bottomley W et al: Mutations of the BRAF gene in human cancer. Nature 2002, 417(6892):949-954.

2. Cantwell-Dorris ER, O'Leary JJ, Sheils OM: BRAFV600E: implications for carcinogenesis and molecular therapy. Molecular cancer therapeutics 2011, 10(3):385-394.

3 . Louis DN, Perry A, Reifenberger G, von Deimling A, Figarella-Branger D, Cavenee WK, Ohgaki H, Wiestler OD, Kleihues P, Ellison DW: The 2016 World Health Organization Classification of Tumors of the Central Nervous System: a summary. Acta neuropathologica 2016, 131(6):803-820.

4. Akimoto J, Namatame H, Haraoka J, Kudo M: Epithelioid glioblastoma: a case report. Brain tumor pathology 2005, 22(1):21-27.

5. Rodriguez FJ, Scheithauer BW, Giannini C, Bryant SC, Jenkins RB: Epithelial and pseudoepithelial differentiation in glioblastoma and gliosarcoma: a comparative morphologic and molecular genetic study. Cancer 2008, 113(10):2779-2789.

6. Gasco J, Franklin B, Fuller GN, Salinas P, Prabhu S: Multifocal epithelioid glioblastoma mimicking cerebral metastasis: case report. Neurocirugia 2009, 20(6):550-554.

7. Tanaka S, Nakada M, Hayashi Y, Nakada S, Sawada-Kitamura S, Furuyama N, Suzuki T, Kamide T, Hayashi Y, Yano S et al: Epithelioid glioblastoma changed to typical glioblastoma: the methylation status of MGMT promoter and 5-ALA fluorescence. Brain tumor pathology 2011, 28(1):59-64.

8. Kleinschmidt-DeMasters BK, Aisner DL, Foreman NK: BRAF VE1 immunoreactivity patterns in epithelioid glioblastomas positive for BRAF V600E mutation. The American journal of surgical pathology 2015, 39(4):528-540.

9. Kleinschmidt-DeMasters BK, Aisner DL, Birks DK, Foreman NK: Epithelioid GBMs show a high percentage of BRAF V600E mutation. The American journal of surgical pathology 2013, 37(5):685-698.

10. Schindler G, Capper D, Meyer J, Janzarik W, Omran H, Herold-Mende C, Schmieder K, Wesseling P, Mawrin C, Hasselblatt M et al: Analysis of BRAF V600E mutation in 1,320 nervous system tumors reveals high mutation frequencies in pleomorphic xanthoastrocytoma, ganglioglioma and extra-cerebellar pilocytic astrocytoma. Acta neuropathologica 2011, 121(3):397-405.

11. Gierke M, Sperveslage J, Schwab D, Beschorner R, Ebinger M, Schuhmann MU, Schittenhelm J: Analysis of IDH1-R132 mutation, BRAF V600 mutation and KIAA1549-BRAF fusion transcript status in central nervous system tumors supports pediatric tumor classification. Journal of cancer research and clinical oncology 2016, 142(1):89-100.

12. Gupta K, Orisme W, Harreld JH, Qaddoumi I, Dalton JD, Punchihewa C, Collins-Underwood R, Robertson T, Tatevossian RG, Ellison DW: Posterior fossa and spinal gangliogliomas form two distinct clinicopathologic and molecular subgroups. Acta neuropathologica communications 2014, 2:18.

13. Qaddoumi I, Orisme W, Wen J, Santiago T, Gupta K, Dalton JD, Tang B, Haupfear K, Punchihewa C, Easton J et al: Genetic alterations in uncommon low-grade neuroepithelial tumors: BRAF, FGFR1, and MYB mutations occur at high frequency and align with morphology. Acta neuropathologica 2016, 131(6):833-845.

14. Ballester LY, Fuller GN, Powell SZ, Sulman EP, Patel KP, Luthra R, Routbort MJ: Retrospective Analysis of Molecular and Immunohistochemical Characterization of 381 Primary Brain Tumors. Journal of neuropathology and experimental neurology 2017, 76(3):179-188.

15. Alexandrescu S, Korshunov A, Lai SH, Dabiri S, Patil S, Li R, Shih CS, Bonnin JM, Baker JA, Du E et al: Epithelioid Glioblastomas and Anaplastic Epithelioid Pleomorphic Xanthoastrocytomas--Same Entity or First Cousins? Brain pathology 2016, 26(2):215-223.

16. Broniscer A, Tatevossian RG, Sabin ND, Klimo P, Jr., Dalton J, Lee R, Gajjar A, Ellison DW: Clinical, radiological, histological and molecular characteristics of paediatric epithelioid glioblastoma. Neuropathology and applied neurobiology 2014, 40(3):327-336.